高效液相色谱仪范文第1篇
1 色谱柱档案建立以及领用管理
1.1 色谱柱档案建立
在实验室内的色谱柱应该进行统一标号, 收纳进仓库中, 然后关于色谱柱的建立纸质版以及电子版档案, 档案中色谱柱的信息一定要添加完整, 为以后积累色谱柱的适用信息提供参考, 这其中应该包括:色谱柱的编号、品牌、填充材料、型号、正在运输中的溶剂、最大耐压值及流速、最佳使用温度范围、PH值范围、需要注意的事项、产品序列号以及备注信息等。色谱柱的使用信息可以参考使用说明书以及官方网站的相关信息。
1.2 色谱柱的领用管理
在领用色谱柱时需要填写色谱柱领用申请单, 色谱柱管理工作人员还需要在计算机电子档案中对领用人、领用日期和归还日期进行登记, 为以后的追溯工作提供信息参考。信息登记完毕后, 实验人员使用色谱柱时, 还应该在相关纸质版档案上登记相关信息。对于在实验进行的过程中, 实验人员发现色谱柱柱效下降或失效、以及色谱柱压升高的情况, 仍然需要对色谱柱效进行评价, 并分析其出现状况的原因, 然后按照色谱柱的管理规定对其进行处理, 将处理的过程、结果在档案中如实记录。实验完成后及时归还色谱柱。
1.3 色谱柱柱效评价
实验室新采购回来的色谱柱中都带有该色谱柱的柱效, 一般情况下会使用邻苯二甲酸二甲酯、二苯胺、尿嘧啶、硝基苯以及萘和芴等化合物的混合品作为标准品, 对这几种物质的分离度、理论塔板数进行考察。色谱柱经过使用后, 要对其柱效进行及时评价。评价的方法有两种, 一是利用上述几种物质的混合标准品评价;二是通过检验的品种评价, 将色谱图和色谱信息进行记录, 其中记录的信息中应该包括:色谱柱的序列号、制作的品种名称、使用时的色谱柱条件、色谱柱效、色谱柱使用人的签名、日期、备注信息等。
2 色谱柱的维护管理
2.1 色谱柱适用信息积累
色谱柱管理人员应该定期更新色谱柱的适用信息以及其适用范围, 并且按照其品牌、型号条件进行分类并整理, 按照其类型、填充材料以及其使用的流动分析物品的种类进行归纳, 还要将色谱柱无法适用的品种上标注, 分析无法适用的原因, 将其进行整合总结。色谱柱的适用范围、以及适用信息的积累能够帮助实验人员正确的选择色谱柱, 有效的提升开发具体品种的质量以及分析效率。
2.2 色谱柱的保养、维护、报废
2.2.1 轻拿轻放
实验人员使用色谱柱时应该轻拿轻放, 禁止随意振动使用;放置色谱柱以及归还色谱柱时相关实验人员应该确认已经将色谱柱保存在正确的溶剂中, 色谱柱上方的堵头已经拧紧。
2.2.2 柱压升高的处理
当发现色谱柱的柱压出现非正常升高情况时, 实验人员可以采取以下三种方法进行处理, 第一, 换用一种新的色谱柱清洗试剂, 新试剂的要求是应该比现在溶解能力更强的流动相对样品试剂, 对色谱柱进行清洗;第二, 将色谱柱按照相反方向进行连接、冲洗;第三, 将色谱柱头上的筛板拆卸下来进行清洗, 清洗过后再进行安装。
2.2.3 色谱柱再生
当色谱柱出现其峰高降低并且峰宽加大或者是出现肩峰、柱效下降的情况时, 应该根据相关规定对其进行再生操作, 值得注意的是再生操作的过程以及结果应该寄住在档案中。正相柱再生程序是, 顺次使用20至30倍的色谱柱体积量的正已烷, 异丙醇, 二氯甲烷, 以及甲醇作为流动相对色谱柱进行冲洗, 再用相反的顺序对色谱柱进行冲洗;反相柱再生程序是, 将甲醇和水的采用比例为95:5, 纯甲醇, 以及二氯甲烷等溶剂作为流动相, 依次进行冲洗, 其中每一种流动相经过色谱柱的用量应该为20至30倍的色谱柱体积, 再用相反顺序的试剂对色谱柱进行冲洗。试剂要严格脱水。
3 结语
在药物分析中高效色谱柱的管理具有重要作用, 能够有效的提升色谱柱的利用率, 减少药物的分析时间, 降低相关单位的分析成本。通过及时积累色谱柱的适用信息以及色谱柱的适用范围, 建立了积累信息库, 有效的提升了色谱分析方法的开发速度和质量, 保证了色谱柱管理工作的质量。
摘要：高效液相色谱柱被广泛应用于化学药品的分析方面。本文针对色谱柱的规范性使用和维护、提升高效液相色谱分析工作的水平作为研究的出发点, 通过建立色谱柱的档案、领用、管理、保养等多个方面, 探讨其管理方式。
关键词：实验室,高效液相,色谱柱,管理
参考文献
[1] 吕虎, 汪红.高效液相色谱法测试乙氧氟草醚含量方法的改进[J].化工管理, 2015 (02) .
[2] 关瑾, 任丽艳, 王慧泽等.高效液相手性固定相法分离分析几个质子泵抑制剂对映体[J].光谱实验室, 2012 (03) .
高效液相色谱仪范文第2篇
1 高效液相色谱法在药物分析中的应用
1.1 1HPLC在天然药物分析中的应用
天然药物主要来源于植物, 此外, 动物和矿物也是药物来源的重要组成部分。天然药物化学成分复杂, 因此其药效可能有一种, 也可能有多种, 这就给药物质量控制提出了严格的要求。HPLC法的利用可对天然药物的成分进行准确分析, 并能对其含量进行精确测定。以西洋参为例:西洋参是五加科植物, 味苦、性凉、入心、肺、肾经, 具有显著的补益功能。西洋参的主要成分是皂苷类, 尤其是Rb1、Rb2、Rc、Rd等7种皂苷质量分数达到90%以上, 成为评价西洋参药性的重要指标。2005年, 陈军辉等[2]利用HPLC法对12种西洋参的7种人参皂苷进行测定, 测定条件如下:梯度洗脱, Alltima Cu色谱柱, 流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液;流速控制在1.2m L/min, 温度设定为35℃。实验仪器采用上海声源超声波仪器设备有限公司的高效液相色谱仪。在最佳色谱条件下, 各种成分在一定浓度范围内呈现较好的线性关联性, 7种人参皂苷的回收率达到94.%~97.9%, 结果令人满意。表1为实验结果记录数据。
1.2 HPLC在抗生素类药物分析中的应用
抗生素是通过微生物或其他方法产生的化学物质, 该物质在高度稀释的情况下, 仍然有很强的抑制或灭杀微生物的性能, 因此在临床得到了广泛应用。传统的分析方法分析时间长、专一性较差, 而高效液相色谱法在抗生素类药物检测中发挥了巨大的作用。Raphael Denooz等[3]利用高效液相色谱和紫外检测器对人体血浆中的5中β-内酰胺类抗生素进行了检测, 流动相采用乙腈-磷酸盐缓冲溶液 (p H7.4) , 梯度洗脱;血浆样品经过固相萃取柱净化后进入HPLC进行分析, 血浆样品回收率达到93.2%以上, 结果令人满意。
1.3 HPLC在毒物分析中的应用
甲基苯丙胺 (MA) 的主要活性代谢物苯丙胺 (PA) 与MA具有类似的药理作用, 但其毒性较强, 成人一次用量达到PA30mg就会出现中毒反应, 达到200mg就会使人中毒致死;MA和PA是滥用药物“摇头丸”的常见成分。杨小红等[4]利用HPLC法对临床中毒患者血浆中的MA和PA含量进行了测定。测定方法如下:先将血浆样品碱化, 然后通过固相萃取柱净化, 再用盐酸 (0.3%) 溶液洗脱;色谱柱选用岛津CLCC18柱, 流动相选用乙腈-甲醇-磷酸二氢钾 (25mmol/L) 缓冲溶液, 检测波长定为210nm, 检测时间为60min, 为临床的快速诊断和抢救提供了可靠的依据。
1.4 HPLC在药代动力学中的应用
HPLC法除可对药物成分和含量进行分析外, 还能对药物在肌体内的浓度进行测定, 然后结合相关的数据分析技术, 对药物代谢动力学进行分析。Gholamreza Bahramin等[5]利用高效液相色谱法对人血清中的阿奇霉素进行了分析, 方法如下:利用己烷对血清样品进行处理后用FMOC-Cl进行衍生, 然后荧光检测;色谱柱选用苯基柱;流动相选用磷酸盐缓冲-甲醇, 定量方法为内标法。血药浓度在10-500ng/m L范围内呈现较好的线性关系, 检测灵敏度可达到10ng/m L。HPLC法在药代动力学上的研究可为药代动力学软件提供数据, 经过专业的数据分析后可获得吸收半衰期、消除半衰期、达峰时间、最大血药浓度一系列动力学参数, 为药物的深入分析和研制提供了参考。
2 结语
随着科学技术的不断发展, HPLC技术将与其他的先进技术联合使用, 进一步提高药物分析的速度、质量和灵敏度, 为我国医学水平的提高和医疗事业的发展提供重要保障。
摘要：高效液相色谱法具有测量速度快、灵敏度高、回收率好等多项优点, 已经在多个领域得到广泛应用, 本文将对该法在药物分析中的应用进行简要介绍。
关键词：高效液相色谱法,药物分析,应用
参考文献
[1] 刘丽敏.高效液相色谱在中草药和抗生素类药物分析中的应用[D].西南大学, 2008.
高效液相色谱仪范文第3篇
白芍为茅根科多年生草本芍药的干燥根。味苦酸, 性凉;入肝、脾经, 对胸腹胁肋疼痛, 泻痢腹痛, 自汗盗汗, 阴虚发热, 月经不调等症有较好治疗效果[1]。白芍的主要成分是芍药苷, 然而芍药苷的药用开发目前还有很多工作要做, 如改进分离、提取工艺, 以获得更多的有效成分。本试验通过改变芍药苷前处理方法, 简化实验步骤, 并通过改变洗脱溶剂, 尽可能多的除去杂质, 以减小试验系统误差、增加实验的准确度、同样使样品得到更好的分离, 并延长色谱柱使用寿命, 为白芍提取物的含量测定提供简便可行的方法。
1 超高效液相色谱 (UPLC)
超高效液相色谱 (Ultra Performance Liquid Chromatography/UPLC) 是分离科学中的一个全新类别, 其原理与高效液相色谱法基本相同。UPLC借助于HPLC (高效液相色法) 的理论及原理, 涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术, 增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。目前, 超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。主要应用于药物分析 (如天然产物中复杂组分的分析) [2]、生化分析 (如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品) 、食品分析 (如食品中农药残留的检测) [3]和环境分析 (如水中微囊藻毒素的检测) [4], 此外, 还用于化妆品中违禁品的检测。
超高效液相色谱仪尤其对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂, 分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。
2 实验部分
2.1 仪器与药品
实验仪器:万分之一电子天平;超高效液相色谱仪;Waters UPLC;Waters T3。
实验药品:芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供) ;甲醇 (分析纯) ;甲醇 (色谱纯) 。
2.2 实验方法
(1) 色谱条件与系统适用性试验
实验是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;以甲醇-异丙醇-柠檬酸水溶液 (5mol/L) (18∶2∶80) 为流动相;检测波长240nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000。配制流动相用甲醇及异丙醇采用色谱纯, 其余试药及溶剂采用分析纯。
(2) 对照品溶液的制备
精密称定芍药苷对照品10mg, 置50ml容量瓶中, 加80%甲醇溶解, 定容, 摇匀, 精密量取5ml于50ml的容量瓶中, 加80%甲醇制成每1ml含芍药苷20μg的溶液, 摇匀即得。
(3) 供试品溶液的制备
取本品0.08g (天平:万分之一) , 精密称定于25ml容量瓶中, 加入80%甲醇适量, 超声处理使充分溶散, 用80%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取2ml至25ml量瓶中, 加80%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 过0.22um滤膜, 即得。
(4) 测定法
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μL, 依次注入超高效液相色谱仪, 测定, 根据色谱图的积分值按公式进行计算, 即得。
3 实验结果与讨论
3.1 线性和范围
以峰面积为纵坐标, 以对照品进样浓度 (mg/ml) 为横坐标, 绘制标准曲线, 得线性方程相关系数r, r≥0.999。
3.2 重复性
取同一批号样品, 平行制备6份供试品溶液, 并按其色谱条件进行测定, 计算6份样品测定结果的RSD值。经测定白芍提取物中芍药苷的平均含量为75.4mg/g, RSD%=0.61%, 重复性良好。
3.3 稳定性
制备对照品溶液, 进行对照品溶液稳定性实验。分别在0、2、4、8、16、24小时进样测定, 计算峰面积的RSD值。经计算芍药苷对照品溶液在24小时内进样峰面积的RSD分别为1.8%, 24小时内稳定。
供试品溶液稳定性实验方法同上, 经计算芍药苷供试品溶液在24小时内进样峰面积的RSD分别为1.2%, 24小时内稳定。
3.4 回收率
采用加入50%量的对照品, 以同一批6份样品测定结果进行评价。
取同一批白芍浸膏约0.04g, 精密称定, 再分别精密加入浓度为32.02mg/ml的对照品溶液10ml, 相当于加入芍药苷对照品3.202mg。按照供试品制备方法制备供试品溶液, 并进行测定。结果如下表1。
结论:平均回收率为98.2%, RSD为1.4%, 准确度良好。
3.5 耐用性
按照上述实验方法和条件, 分别用2种色谱柱 (色谱柱 (1) Waters T3;色谱柱 (2) Waters BEHC18) 对一批样品芍药苷含量进行测定, 观察不同色谱柱对含量测定的影响。经观察两种色谱柱测得芍药苷含量的相对平均偏差为0.53%, 耐用性良好。
取3批样品, 按同样方法及色谱条件进行检测, 结果见表2。结果显示样品测定中两份平行相对样品的相对平均偏差均小于2.0, 耐用性良好。
4 结语
本文通过超高效液相色谱法对白芍浸膏芍药苷含量测定方法进行验证, 包括线性与范围、精密度、重复性、溶液稳定性、准确性 (即回收率) 、耐用性及样品含量测定。实验结果显示利用UPLC方法测定芍药苷的含量有很多优点, 如可以提高实验效率, 简化实验步骤, 减小实验系统误差、增加实验的准确度, 使样品得到更好的分离, 提高分离度, 为白芍提取物含量测定提供了简便可行的方法。
摘要：本实验采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱, 以甲醇-异丙醇-柠檬酸水溶液 (5mol/L) (18:2:80) 为流动相, 在流速为1.0ml/min, 柱温为35℃, 检测波长为240nm的条件下, 通过建立UPLC (超高效液相) 法测定白芍提取物中芍药苷的含量。
关键词：白芍提取物,芍药苷,含量测定,超高效液相色谱法
参考文献
[1] 黄兆胜, 中药学[M].人民卫生出版社, 2011, 452.
[2] 王芸.复杂天然产物特征组分HPLC筛选方法的研究[M].华东理工大学, 2011.
[3] Chen L.G., Lan D., Jin H.Y.et al.T h e determination of organochlorine pesticides based on dymanic microwave-assisted extraction coupled with on-line solid-phase extraction of highperformance liquid chromatography[J].Analytic Chimica Acta, 2007, 589:239-246.
高效液相色谱仪范文第4篇
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
岛津公司生产的LC-20AT高效液相色谱分析仪,LCsolution数据采集和处理软件。
乙腈为HPLC纯,异丙醇为HPLC纯,氯仿为优级纯,丙酮为优级纯,乙醇为优级纯,SBS样品和抗氧化剂TNPP全为独山子石化公司提供。
1.2 实验条件
色谱柱:VP-ODS 150×4.6 mm I.D.流动相:乙腈/异丙醇;检测器:紫外λ=210 nm;流速:1.0 m L/min;柱温:25℃;进样量为10μL。
1.3 分离条件选择
通过在样品中加入TNPP标样,对二元相乙腈和异丙醇调节比例来分离抗氧化剂TNPP,可以发现,在乙腈/异丙醇(50/50)能达到分离要求。
1.4 标准曲线的制作
准确称取抗氧化剂TNPP标准样品0.015±0.001g,以10m L氯仿为溶剂将其溶解,然后以异丙醇为溶剂,逐级稀释,配制一系列5个浓度的标准溶液,按上述色谱条件分别进行测定,以浓度和峰面积做标准曲线,浓度范围0mg/L-300mg/L,每个浓度的样品平行测定三次,相关系数r=0.9999。
1.5 样品分析
称量0.5±0.001g的橡胶样品,放于含10mL氯仿(CHCl3)的50m L容量瓶内,然后将容量瓶放在摇床摇至完全溶解,慢慢加入异丙醇使橡胶沉淀,抗氧剂TNPP留在液相,再用乙醇定容;取容量瓶中液相样品,用0.45μm的有机过滤膜过滤,放入自动进样器的样品瓶内分析。
2 结果与讨论
2.1 样品中TNPP重复性验证[1]
对三个牌号的SBS橡胶样品分别重复检测4次,计算相对标准偏差,见表1,从下表可以看出,相对偏差都小于5%,重复性很好。
2.2 样品中TNPP准确性验证
本方法中采用乙腈和异丙醇作为流动相,针对不同配比的乙腈和异丙醇,通过实验发现乙腈/异丙醇(50/50)(V/V)时分离效果最好,需要30分钟就能完成分析。分离效果见图1。
(3.386 min:溶剂峰,13.208 min:TNPP)
2.3 样品回收率测定
移取25.0ml T171样品溶液到50ml容量瓶中,用30mg/L的标准样品定容,分析加标后样品中TNPP含量。计算样品回收率均在90%以上,准确性好。加标回收率见表2。
2.4 流动相对分析的影响
2.4.1 气体对分析的影响
本实验所用流动相在使用前必须进行脱气处理,除去其中溶解的气体。在装入贮液瓶之前必须经过0.45μm滤膜过滤。使用过程贮液瓶应密闭,以防溶剂蒸发引起流动相组成的改变及空气中的O2、CO2重新溶解于已脱气的流动相中。在洗脱过程中如存在气泡会增加基线噪音,严重时使分析灵敏度降低。溶解在流动相中的氧气,会造成荧光猝灭[2] ,影响荧光检测器的检测,还可能导致样品中某些组分被氧化或使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。
2.4.2 固体颗粒物对分析的影响
尘埃或其它任何杂质微粒的存在都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀,为防止任何固体微粒进入泵体,须预先除去流动相中的任何固体微粒。常用的方法是过滤,采用Millipore滤膜(0.45μm),连接真空泵抽滤。色谱纯试剂也不例外。
2.5 噪声和漂移对压力的影响
柱压稳定是指压力波动范围在345k Pa以内。在使用梯度洗脱时,柱压平稳、缓慢的变化是允许的。压力过高、过低都属于柱压问题,缩短色谱柱的使用寿命。
对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。氘灯接近寿命期(约1000h)时,会使基线噪音明显增加,应及时更换氘灯。除光源外,流路中的气泡也会产生噪音。对于判断基线噪声增大是由于光源灯的老化还是来自流路中的气泡的问题,可将泵关上,继续走基线,如果噪声立即停止,基线呈一条直线,说明基线噪声,应设法排气;若停泵后仍有来自流动相中的气泡噪音出现,应考虑是灯的问题[3] 。
3 结语
本文通过对流动相乙腈和异丙醇的调节,建立了能精确分析SBS橡胶中抗氧化剂TNPP浓度的高效液相色谱法,对橡胶装置生产SBS提供了很好的参数,也利于后续橡胶的加工生产。
摘要：高效液相色谱法分析橡胶SBS中抗氧化剂TNPP的含量,采用氯仿、异丙醇对橡胶样品进行处理以适合液相色谱分析;流动相乙腈/异丙醇(50/50)比例,能将抗氧化剂TNPP从样品中很好的分离出来,用紫外检测器210nm波长能很好检测其结果,该方法分析速度快,准确度高,重复性好。
关键词：高效液相色谱法,氯仿,抗氧化剂TNPP,SBS橡胶
参考文献
[1] 中国实验室认可委员会,化学分析中不确定度的评估指南.中国计量出版社,2002,(23).
[2] 王宇成.最新色谱分析检测方法及应用技术实用手册[M].吉林省出版发行集团,2004:11.
高效液相色谱仪范文第5篇
1 HPLC法在测定药品含量中的应用
在测定实验原料中各组分、各杂质的含量时, 可应用HPLC法进行测定, 获取更加可靠、准确、快速的检验结果。如, 在吡罗昔康含量的测定中, 由于该药物是一种酰胺类化合物, 容易被氧化和水解, 导致其水溶液的化学性质不稳定, 所以可应用HPLC法进行测定。在实际操作中, 溶剂选用0.01mol/L的盐酸甲醇溶液, 既可以增强溶剂的溶解性, 又可以增加吡罗昔康溶液的稳定性, 保证了检测结果质量;在四环素类抗生素的测定中, 可应用HPLC法对四环素类抗生素及其立体异构体进行分离测定;在螺旋霉素发酵液中有机酸含量的测定中, 可应用HPLC法测定有机酸的种类, 为分析螺旋霉素代谢机制奠定基础;在测定盐酸萘甲唑啉鼻用剂型凝胶中的盐酸萘甲唑啉含量中, 应用HPLC法进行测定, 采用乙腈将高分子物质从凝胶基质中析出, 可有效解决高分子物质堵塞液相柱的问题, 减少测定的干扰因素[1]。由此可见, 利用HPLC法对药品进行样品抽检, 能够准确检测到原料药、中间体、各组分、各杂质的含量, 杜绝假冒伪劣药品的流通, 从而保证药品质量和安全。
2 HPLC法在检测有关物质中的应用
药物在制备、贮备、运输、使用过程中可能会产生有关物质, 对药品质量和安全产生影响, 如药物制备中可能带入副产物、异构体、中间体;药品运输中可能产生聚合物、降解物等[2]。为此, 必须加强对影响药物稳定性、毒性较大的有关物质进行控制。由于有关物质的含量十分微小, 所以采用常规检测方法难以得到准确的检测结果。如, 在盐酸特拉唑嗪片的有关物质检测中, 采用常规检测法薄层色谱法 (TLC) 测定的盐酸特拉唑嗪最小检出限为0.025mg/mL, 检测灵敏度偏低。但是, 应用HPLC法进行测定, 其最小检出限可精确到0.05 μg/mL。由此可见, 应用HPLC法进行有关物质检测可大幅度提升检测灵敏度和准确性。
3 HPLC法在药物鉴别中的应用
不同的药物具备不同的药用价值, 所以必须做好药物的鉴别工作, 确保物尽其用。运用HPLC法鉴别药物, 可通过保留时间与组分结构和性质, 将其作为药物定性的参数。如, 在南北五味子的鉴别中, 运用HPLC法对两种五味子中组分含量进行测定, 采用C18柱, 流动相为配比是65:35 的甲醇-水, 流速控制在每分钟1.0m L, 检测波长控制在250nm, 能够快速鉴别出南北五味子的组分含量。由此可以看出, 将HPLC法应用在药物鉴别中, 能够开辟药物鉴别的新方法和新思路。
4 HPLC法在检验抗生素药品中的应用
在临床使用抗生素类药品的过程中, 患者经常会出现不良反应, 造成这一现象的主要原因在于药品中含有中间体、聚合物、降解产物等杂质, 所以必须加强对抗生素类药品中各项杂质的限量控制。如, 在氨苄西林丙磺舒分散片中的杂质定量分析中, 可应用HPLC法进行测定, 在短时间内将药品主成分与降解产物和有关物质进行分离, 为该制剂的限度控制奠定基础。由此可见, HPLC法在抗生素药品检验中的应用, 能够有效控制药品中的杂质含量, 保证抗生素的药效。
5 HPLC法在检测中药质量中的应用
中药的成分复杂, 质量检测难度大, 常规的检测方法很难取得准确的检测结果, 而运用HPLC法能够有效解决中药成分多样性、分离难度大的问题, 已经成为测定中药有效成分含量的有效方法之一[3]。HPLC法能够快速分离中药的待测成分与其他杂质, 为中药质量检查、成分鉴别以及含量测定奠定基础。如, 在丹岑滴丸中对隐丹参酮、黄芩苷的含量测定中应用HPLC法, 达到了分离度高、定量准确的效果, 弥补了定性检测的不足。因此, HPLC法在中药质量检测中的应用, 转变了传统看、摸、闻、尝的中药性状特征鉴别方法, 使得中药有效成分得以定量控制, 从而有利于促使中药质量检测向现代化、标准化、规范化的方向发展。
6 结语
总而言之, 高效液相色谱法是一种有效的分离分析技术方法, 在药品检验领域中显现出了极强的应用优势。随着检测器自动化程度的不断提高, 分离模式的日益增多以及联用技术的出现, 势必会推动高效液相色谱法的快速发展, 使其成为药品检验中的主流色谱分析方法, 从而提高药品检测结果的可靠性, 为加强药品质量控制提供有力依据。
摘要：高效液相色谱法是以经典液相色谱为基础发展起来的色谱方法, 具备传质阻力小、分离效率高、分离周期短、检测灵敏度高等特点, 已经成为药品检验的重要手段, 对提高药物质量控制效果起着重要作用。本文对高效液相色谱法在药品含量测定、相关物质检测、药物鉴别、抗生素类药品检验、中药质量检测等药品检验领域中的具体应用及应用效果进行论述。
关键词：高效液相色谱法,药品检验,药品含量,应用
参考文献
[1] 顾柏红.药品检验中应用高效液相色谱法进行检测的探讨[J].中国医药指南, 2012 (12) :59-60.
[2] 王鹏军.如何以常规高效液相色谱法检验中药中遇到的常见问题[J].求医问药 (下半月) , 2013 (8) :96-97.
高效液相色谱仪范文第6篇
4-氯苯氧乙酸钠(CPA-Na)俗称促生灵、番茄灵、防落素,是一种植物生长调节剂。在豆芽生产中,它能使豆芽细胞快速分裂,促进下胚轴粗大,减少根部萌发从而达到加速豆芽生长的目的[2] 。据研究,如果超量摄入4-氯苯氧乙酸钠会使儿童发育早熟、女性生理发生改变、老年人骨质疏松,甚至诱发致癌、致畸的严重后果[3,4] 。鉴于4-氯苯氧乙酸钠对人体的危害,国家食品药品监督管理局、农业部、卫计委三部委于2015年4月13日联合发布豆芽生产经营中禁止使用4-氯苯氧乙酸钠的公告。
目前文献报道4-氯苯氧乙酸钠残留量的检测方法[5,6,7] 在样品预处理上操作步骤繁琐、条件难以控制,重现性较差,耗时较长不利于实验室推广。本研究通过简化前处理方法,旨在建立一种快速、准确、高效测定豆芽中4-氯苯氧乙酸钠残留量的方法。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
4-氯苯氧乙酸钠标准品(≥98%),购于Adamas Reagent公司;甲醇(色谱醇)、氯化钠、乙醚、盐酸、磷酸二氢钠等均为国产分析纯;超纯水由milli-Q水纯化设备自制;豆芽,来自于市售;酸性氯化钠溶液:于100mL氯化钠溶液(40 g/L)中加入1.0 mL盐酸酸化。
1.2 仪器与设备
高效液相色谱仪(U3000),配二极管阵列检测器,Thermo公司;高速冷冻离心机,Sartorius公司;氮吹仪,Biotage公司。
1.3 实验方法
1.3.1 样品的前处理
4-氯苯氧乙酸钠极易溶于水,性质稳定。酸化后生成对氯苯氧乙酸,是一种弱有机酸,在水中溶解度低,但易溶于乙醚、乙醇等有机溶剂。利用其化学性质,实验通过向空白样品添加相同浓度4-氯苯氧乙酸浓度,设计了以下3种不同的前处理方法。
方法一[8] :取均质后的样品5 g,加入30.0 m L氢氧化钠溶液(0.01 mol/L),用均质机均质(10000 r/min)混匀3 min,8000 r/min离心10 min,上清液转入50 m L容量瓶中。样品再用少量氢氧化钠溶液重复提取1次,离心后合并上清液,并用氢氧化钠溶液定容至刻度,摇匀。取此液10.0 m L于150 m L分液漏斗中,加盐酸溶液(1∶1)2.0 m L,共用50.0 m L乙醚分3次萃取,每次振摇1 min,合并乙醚层。用5.0 m L氯化钠酸性溶液洗涤,弃去水层,乙醚层用旋转蒸发仪在30℃蒸至近干,用甲醇溶解并定容至1.00 m L,经0.45μm滤膜后,供液相色谱分析。
方法二[9] :取均质后的样品5 g,加入30.0 mL氢氧化钠溶液,用均质机均质(10000 r/min)混匀3 min,8000 r/min离心10 min,上清液转入50 m L容量瓶中。样品再用少量氢氧化钠溶液重复提取1次,离心后合并上清液定容至刻度。取25 m L此溶液,加50%磷酸溶液2.0 m L。慢速过已活化的HLB小柱,用酸性水洗去杂质,再用2.0 m L甲醇洗脱,并定容至2.00 m L。经0.45μm滤膜后,供液相色谱分析。
方法三:取均质后的样品5 g,置于50 m L的离心管中。加入15 m L酸性氯化钠溶液涡旋3 min,并超声提取5 min。再加乙醚15 m L涡旋萃取5 min,然后于8000 r/min离心8 min。取乙醚层。将离心后的样品重复提取1次,合并乙醚层。将乙醚层用氮吹仪吹近干,用甲醇溶解并定容至1.00 m L,经0.45μm微孔滤膜过滤,供液相色谱分析。
1.3.2 色谱条件
色谱柱:Waters Symmetry Shield C18(4.6 mm×250mm,5μm)。流动相:甲醇,0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(35∶75);流速,1.0 m L/min。柱温,30℃。进样量:10μL。波长:228 nm;PDA采集波长光谱检测范围为200~400 nm。
1.3.3 标准系列溶液的配制
精确称取0.1000 g 4-氯苯氧乙酸钠的标准品,置于100 m L棕色容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀。配制成浓度为1.00 mg/m L的标准储备液;取1.00 m L标准储备液置于10 m L棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,配制成100μg/mL标准工作液,分别取0.20,0.50,1.00,2.00,4.00 m L标准工作液置于10 m L棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,配制成0.20,0.50,1.00,2.00,4.00μg/m L的标准品溶液,经0.45μm微孔滤膜过滤,置于样品瓶中。按照上述色谱条件进行测定,作峰面积对浓度的标准曲线,求出直线回归方程。
2结果与分析
2.1 样品前处理方法
3种不同的实验方法结果(见表1)表明:
方法一通过碱化生成易溶于水4-氯苯氧乙酸钠,然后再酸化生成4-氯苯氧乙酸,利用其易溶于乙醚的性质进取萃取达到富集4-氯苯氧乙酸的目的。该方法步骤较为繁杂,条件难以控制,重现性较差,耗时最长。
方法二通过固相萃取达到净化浓缩的目的。该方法提取液中杂质明显减少,但提取过程不稳定,提取繁琐、耗时较长,且成本高。
方法三通过直接酸化,有机萃取4-氯苯氧乙酸钠。该方法提取相对完全,而且方便快捷,重现性好;使得在样品量较多的情况下检测更准确、及时。
因此认为,方法三最适合实验室大量豆芽样品中4-氯苯氧乙酸钠的测定。
2.2 色谱分离
在确定的色谱条件下,4-氯苯氧乙酸钠保留时间为13.447 min,其标准品、豆芽空白样品及豆芽空白样品添加标准品色谱图见图1。
2.3 检测器的选择
豆芽成分复杂,因此仅依靠保留时间定性将影响结果的准确性。利用二极管阵列检测器可以采集被测组分的光谱图(图2),从而弥补利用单一紫外波长吸收进行色谱分析过程中色谱峰保留时间定性的不足,增强高效液相色谱法定性分析能力,避免假阳性发生。
2.4 标准曲线与检出限
在本文“1.3.2”色谱条件下,对配制的一系列浓度的4-氯苯氧乙酸钠进行色谱检测。以浓度为横坐标(x)、其相应的峰面积为纵坐标(y)做线性回归,得到的标准曲线方程为y=0.5374x+0.0018,R2=0.9997(见图3)。结果表明,4-氯苯氧乙酸钠的浓度在0.20~10.00μg/m L范围内线性相关性良好。根据实际添加实验测得,该方法最低检出限(S/N=3)为0.02 mg/kg。
2.5 方法的回收率与精密度
称取5.00 g豆芽空白样品,分别向其中添加浓度为1.00μg/m L的4-氯苯氧乙酸钠标准溶液0.50,1.50,3.00 m L。每个添加量做6个平行。“按1.3.1”前处理方法处理过后进行HPLC测定,试验结果及图谱(见表2)。结果显示精密度良好,回收率87.6%~95.2%。因此,证明该处理方法所测得的结果准确可靠,重现性良好。
2.6 样品测定
按建立的方法对菜市场销售豆芽进行检测,总共测定了40份样品。结果有7.5%豆芽样品检出4-氯苯氧乙酸钠,残留量在0.08~0.30 mg/kg。此次监测发现菜市场中销售的豆芽中使用4-氯苯氧乙酸钠较为普遍,应加强监督管理。
3 结论
本研究建立测定豆芽中4-氯苯氧乙酸钠残留的高效液相色谱法。通过简化前处理方法,同时采用光谱图与保留时间共同定性,使结果更加准确可靠。本方法操作简单、方便快捷,适用于大量豆芽样品中4-氯苯氧乙酸钠的测定。
摘要：建立一种快速测定豆芽中4-氯苯氧乙酸钠残留量的高效液相色谱法。以市售的豆芽作为供试样品,用酸性氯化钠溶液提取,经乙醚萃取净化,氮吹浓缩。采用Waters Symmetry Shield C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇和0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(35∶75)为流动相,色谱检测波长为228 nm,并用二极管阵列检测器记录色谱峰的紫外吸收光谱。结果表明,该方法标准曲线线性关系良好,线性范围为0.20~4.00μg/m L,相关系数0.9997;加标回收率在87.6%~95.2%,最低检出限为0.02 mg/kg。该方法操作简便、快捷、准确可靠。
关键词：豆芽,4-氯苯氧乙酸钠,残留量,高效液相色谱法
参考文献
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