侵袭与转移是恶性肿瘤的特征性生物学行为。研究表明, 某些蛋白和基因的异常表达在肿瘤的侵袭转移过程中起重要作用, KISS-1基因是新近发现且最受关注的肿瘤转移抑制基因之一, KISS-1基因的突变、缺失或表达降低与多种肿瘤的发生和转移潜能有关[1];Ezrin蛋白 (又称为cytovillin、p81或villin-2) 是一种膜—细胞骨架连接蛋白, 具有维持细胞形态和运动、连接黏附分子及调节信号转导等功能, 其在肿瘤的侵袭、转移机制中发挥重要作用[2]。为探讨胃癌发生发展过程中KISS-1、Ezrin蛋白的表达及作用, 本研究对正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、及胃癌组织中的E KISS-1和zrin蛋白表达进行了检测, 以探讨其与在胃癌发生发展中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集郑州市第六人民医院2008年9月至2010年5月45例胃癌患者的存档蜡块, 每例标本分别在癌灶、癌旁、正常组织三处取材。癌旁组织距癌灶边缘3cm以内, 正常组织取自手术残端, 距癌组织3cm以上。病理证实45例均为胃腺癌, 癌旁黏膜中有23例呈重度非典型增生改变, 45例手术残端组织中21例为正常胃黏膜。以上3组作为本实验的观察对象。45例胃癌患者, 术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。其中男性34例, 女性11例, 年龄在36～78岁之间, 平均年龄为 (58.38±10.96) 岁。
1.2 方法
(1) 免疫组化法检测KISS-1、Ezrin蛋白的表达:将标本均经10%甲醛固定, 石蜡包埋, 经4μm厚连续切片, 一份做HE染色以确定病理性质, 另两份供免疫组化染色用。切片常规脱蜡至水, 高温高压热抗原修复, 严格按照免疫组化SP试剂盒 (北京中杉金桥生物技术有限公司) 操作步骤进行;用DAB显色试剂盒 (北京中杉金桥生物技术有限公司) 进行显色, 苏木精衬染。分别以已知KISS-1、Ezrin蛋白阳性的结肠癌为阳性对照, 用PBS代替一抗作为空白对照。免疫组化所选用的一抗包括浓缩型羊抗人KISS-1单克隆抗体、鼠抗人Ezrin单克隆抗体 (购自美国Leica公司及上海长岛生物技术有限公司) , 2种一抗稀释度分别为1∶200与1∶100。 (2) 判断标准:KISS-1蛋白免疫组化染色阳性信号定位于胞质, 呈棕黄色颗粒, 显色强时为棕褐色。Ezrin蛋白以在胞质内出现棕黄色颗粒为阳性表达。按染色强度和阳性细胞表达细胞数, 参考Mathew等[3]分级标准: (-) :无表达; (+) :<50%细胞阳性表达或染色较浅; (++) :≥50%阳性表达或深染。
注:r=-0.531, P=0.000<0.01
1.3 统计学方法
所有数据均采用SPSS 15.0统计学软件进行统计学处理, 阳性率之间的比较采用χ2检验, 两变量之间的关系分析采用spearman等级相关分析表示, 检验标准以α=0.05为显著性检验水准。
2 结果
(1) 正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中KISS-1蛋白的阳性表达率分别为85.71% (18/21) 、56.52% (13/23) 和35.56% (16/45) ;癌组织KISS-1蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常胃黏膜组织两两相比, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。 (2) 正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达率分别为9.52% (2/21) 、34.78% (8/23) 和60.00% (27/45) ;癌组织Ezrin蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常胃黏膜组织两两相比, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。 (3) KISS-1蛋白与Ezrin蛋白表达的相关性分析, 见表1。
3 讨论
KISS-1是近年发现的肿瘤转移抑制基因, 在正常组织和非转移性肿瘤细胞株中高表达, 而在伴有转移的肿瘤组织中表达缺失。大量研究表明, KISS-1可通过诱导肿瘤细胞粘附、降低其移行能力、抑制基质金属蛋白酶对细胞外基质的水解等, 进而实现对肿瘤浸润转移的抑制作用。而Ezrin蛋白表达水平在许多肿瘤组织中都显著高于正常组织, 一些转移能力较强的肿瘤细胞中, Ezrin蛋白呈过表达, 且肿瘤细胞中往往存在Ezrin蛋白亚细胞定位的改变, 提示其亚细胞定位的改变对于肿瘤的浸润及转移均具有重要作用。
本研究发现, 正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中KISS-1蛋白的阳性表达率依次递减, 胃癌组织与相应的癌旁非典型增生组织及正常胃黏膜组织两两相比, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达率依次递增;癌组织Ezrin蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常胃黏膜组织两两相比差异均有统计学意义 (P<0.05) 。表明Ezrin蛋白的高表达促进了胃癌的发生发展与浸润转移。其机制可能是Ezrin蛋白通过调节细胞黏附、肿瘤细胞信号转导、细胞凋亡和肿瘤细胞吞噬进而参与到肿瘤转移的各个环节, 影响肿瘤的浸润和转移。本实验结果显示KISS-1、Ezrin蛋白在胃癌中的表达具有显著的负相关性 (r=-0.537, P<0.01) 。KISS-1、Ezrin蛋白在胃癌的发生发展中发挥重要作用。深入研究KISS-1、Ezrin蛋白及与胃癌相关性对于进一步揭示胃癌的浸润和转移机制, 为靶向治疗胃癌提供新的思路。
摘要：目的 探讨KISS-1、Ezrin蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化法分别对21例正常胃黏膜组织、23例癌旁不典型增生组织、45例胃癌组织中KISS-1、Ezrin蛋白的表达进行检测。结果 正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中KISS-1蛋白的阳性表达率依次递减, 经两两相比, 差异均有统计学意义 (P<0.05) ;正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达率依次递增, 且两两相比, 差异均有统计学意义 (P<0.05) ;相关性分析发现KISS-1、Ezrin蛋白在胃癌中的表达具有显著的负相关性 (r=-0.537, P<0.01) 。结论 KISS-1、Ezrin蛋白参与胃癌的发生发展过程, 且可能起协同作用。
关键词：KISS-1,Ezrin,胃癌,浸润
参考文献
[1] Lee JH, Welch DR.Suppression of metastasis in human breast car-cinoma MDA-MB-435cells after transfection with the metastasis suppressor gene, KISS-1[J].Cancer Res, 1997, 57 (12) :2384～2387.
[2] Moilanen J, Lassus H, Leminen A, et al.Ezrin immunoreactivity in relation to survival in serous ovarian carcinoma patients[J].Gynecol Oncol, 2003, 90 (2) :273～281.
[3] Mathew J, Hines J E, Obafunwa JO, et al.CD44is exp ressed in heap to cellular carcinomas showing vascular invasion[J].AM J Pathol, 1996, 179 (10) :74～79.