抗生素残留检测方法（精选8篇）
抗生素残留检测方法 第1篇
食品中抗生素残留危害及检测方法
随着人们生活质量的提高，食品安全问题越来越为广大消费者所关注，特别是农药和抗生素等药物残留问题更是广大消费者所关注的焦点问题。在食品安全这个全球关注的热点问题上，如何快速、准确地检测食品安全的问题已成为重中之重。要检测抗生素在食品中的残留，必须选择特异性强、灵敏度高、高效快速的检测方法。因此，研究各种抗生素类残留检测的方法，提高其灵敏度与选择性具有十分重要的意义。
抗生素具有哪些危害
人们吃了有抗生素残留的肉、蛋、奶等食物后，会造成抗生素在人体内蓄积，使人产生对抗生素的抗性，引起各种组织器官病变，甚至癌变。
对人类健康的危害
对人体肠道菌群的影响
人体肠道菌群是一个平衡的生态系统，对保持人体健康起着非常重要的作用。如果人们长期摄入含有抗生素的食品后，会使敏感菌群被杀灭或抑制，而耐药菌群却大量繁殖，从而打破原来的平衡状态造成菌群失调，这就可能会导致长期腹泻或营养不良，严重时还可造成耐药菌感染，给临床治疗带来困难。
引起过敏和变态反应 青霉素、四环素、磺胺类及某些氨基糖苷类抗生素能使部分人群发生过敏反应和变态反应，氯霉素可破坏机体造血功能，诱发再生障碍性贫血。经常食用含抗生素的动物性食品，轻者出现皮肤瘙痒、荨麻疹、关节肿痛，重者导致血管性水肿、休克、甚至死亡。
导致细菌耐药性增加
目前，由于抗生素的广泛使用，使得细菌的耐药性不断增加，食用含抗生素残留的动物性食品后，人体内细菌的耐药性增加。同时，动物体内的耐药性菌株的耐药性也可能转移到人体细菌中，从而对人类产生极大的危害。
其他毒害作用
动物性食品中残留的链霉素进入人体后可引起肾损害和听神经受损。长期摄入氨基糖苷类抗生素残留严重超标的动物性食品，可损害第8 对脑神经，出现头晕、头痛、耳鸣、耳聋、恶心、呕吐等症状。四环素会引起肝损伤，与骨骼或牙齿中的钙质结合后，使骨骼及牙齿黄染，还可影响儿童的生长发育。邻氯青霉素、头孢菌素等可引起人类免疫性疾病；氯霉素会损害人的造血功能，抑制蛋白质
摘要：文章综述了抗生素残留的来源与途径, 介绍了抗生素残留对人类健康、乳制品生产、环境及其他方面造成的危害，分析了检测抗生素残留的方法，包括微生物检测法、仪器检验法、免疫学分析法等，并指出了这些检测方法的研究现状与发展前景。
对乳制品生产工艺的危害
由于含有抗生素的奶无法制成酸奶、奶酪等一些高质量牛奶产品，容易造成大量原料奶的浪费，给乳品企业造成经济损失。另一方面，一些不法奶户在高温季节为防止鲜乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，从而造成乳中抗生素残留，对人体也造成了很大的危害。
对环境的危害
一些性质稳定的药物被排泄到环境中仍能稳定存在很长时间，从而造成环境中的药物残留。链霉素、土霉素在环境中不易降解；螺旋霉素低浓度降解很快，但浓度高时需6 个月才能降解完；杆菌肽锌在有氧的条件下完全降解需3～4个月，在无氧环境中降解所需要的时间更长。据报道，动物养殖场污水处理池中红霉素、复红霉素、磺胺甲唑质量浓度可达69g/L，这些药物的排放污染了环境，破坏了生态平衡。
抗生素残留量的检测方法
随着社会的进步和人们对抗生素残留的日益重视，在客观上就要求改进传统的检测方法。引进先进的检测仪器，寻求一种快速、精确的检测方法，使得检测结果更加准确、可靠。
微生物检测方法
微生物检测方法的主要原理是根据抗微生物药对特异微生物的抑制作用，来定性或定量检测受检样品中残留的抗微生物药。微生物检测法应用较为广泛，是抗生素残留检测的传统方法，但测定时间长，结果误差较大，操作复杂。其优点是费用低，一般实验室都能操作。
氯化三苯四氮唑法（TTC）
这是目前我国食品卫生标准中用来检查牛乳中抗生素残留的检测方法。如果牛乳中有抗生素存在，当乳中加入菌种（嗜热链球菌）经培养后，菌种不增殖。此时，加入的TTC 指示剂不发生还原反应，所以仍呈无色状态。如果没有抗生素存在，则加入菌种就可增殖，TTC 还原变成红色，使样品染成红色。
棉拭法或纸片法
这是检测胴体内可疑抗生素残留的现场试验方法，简便而又有一定准确性，被世界普遍采用，具有广域的灵敏性。它是用棉拭插入待检部位浸润20min取出，放入有枯草杆菌的培养基中培养18h～24 h，或用圆滤纸从肾脏或乳取样，与含有枯草杆菌等细菌的营养琼脂贴合培养，通过观察棉拭周围有无抑菌圈或根据其大小判定有无抗菌物质存在。该法的特点是能够确定抗生素的种类，提高检出率和准确率。如，氯霉素最低检出限量为0.01mg/kg、土霉素为0.05mg/kg等。
杯蝶法
样品经处理后，注入牛津杯中，与含菌液的检定平板贴合。培养后，根据抑菌圈的有无及大小判定结果。采用不同的试验菌种，可检测不同的抗生素。如检测肉中四环素类抗生素用蜡样芽孢杆菌；检测青霉素用金黄色葡萄球菌；检测链霉素或双氢链霉素用枯草杆菌。
电泳生物检测法
该法灵敏度较高。Fusac（1989）应用电泳和微生物自显影技术测定动物组织中残留的氨基糖苷类抗生素（如，双氢链霉素、卡那霉素等），取得了满意的结果。
琼脂扩散法
Korkela 以猪肾为样品采用琼脂扩散法对几种抗生素残留检测进行了比较。能检测出土霉素和链霉素的残留。Untermann（1986）报道，采用枯草杆菌进行琼脂扩散法检测出了牛、猪及山羊的肌肉中和肾脏内抗生素的残留。
仪器检验方法
仪器检验方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，进行定性定量
和药剂鉴定。其敏感性较高，但有的检测程序较复杂或检测费用较高。
液相色谱法（LC）
德国Russel 报道了液相色谱法检测氯霉素残留，检测限为10μg/kg，回收率为63%～79%。Jefery等（1994）报道了用LC法测定沙拉沙星在海峡鲇鱼肌肉中的残留，沙拉沙星的检测限为1.4ng/g，回收率为85.4％～104％。
气相色谱法（GC）
该法有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用。Plomp和Maes报道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速气相色谱检测方法，检测限为0.1μg/mL，甲砜霉素血清的回收率为91.3％，羊水的回收率为90.3％。
薄层色谱法（TLC）
该法经常作为样品筛选方法。其优点是速度快，有利于现场应用，且已在饲料、组织和体液等的分析中得到了广泛的应用。Bossuyt 等（1976）报道用TLC 法测定牛奶中新霉素的残留。但新霉素的检测限为15μg/g，远高于牛奶中的新霉素残留限量。
高效薄层色谱法（HPTLC）
该法现已成为仅次于HPLC的残留分析法。HPTLC在兽药残留的快速筛选检测方面应用广泛。测定组织样品时需在样品展开后喷以硫酸-高氯酸试液，灵敏度可提高10倍，检测限达10μg/kg。
高效液相色谱法（HPLC）
这是目前广泛应用的一种理化检测方法。该法对抗生素残留的检测具有较高的灵敏性。Anadan等（1995）报道了用HPLC法测定鸡脂肪、肝脏、肾脏、肺脏及皮肤中恩诺沙星及代谢产物环丙沙星浓度，检测限为0.003 μg/g，在各种组织中提取回收率均大于70％。Rolinski 等（1997）用HPLC 法检测了肉鸡组织和鸡蛋中诺氟沙星残留，检测限为0.0025μg/g。
超临界流体色谱法（SFC）
该法可弥补GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC 最大优点是可以方便地连接各种灵敏的检测器。Pensabene 等将鸡蛋样品进行超临界流体萃取后进行磺胺类药物的残留分析，检测限为25 μg/kg，回收率为81％~101%。
毛细管电泳法（CE）Ackermans 等将猪肉样品加乙腈提取，离心后上清液过滤膜后直接进行毛细管区带电泳分析。测出肉样中15 种磺胺类药物的检测限在2 mg/kg~9mg/kg 的范围内。
联用技术
联用技术可扬长避短，一般兼分离、定量和定性（分子结构信息）于一体，因而特别适用于确证性分析。常见的联用技术有薄层色谱-质谱（TLC-MS）、气相色谱-质谱（GC-MS）、液相色谱-质谱（LC-MS）等。色谱和质谱联用由于实现了高效层析分离和检测联机，可用微电脑控制层析条件、程序和数据处理，其特异性、灵敏度和重复性均好，并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物的检测。
免疫分析法
免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）。与常规的理化分析技术相比，免疫分析技术最突出的优点是操作简单、容量大、速度快、仪器化程度低且分析成本低，分析效率则为HPLC 或GC 的几十倍以上。免疫分析法能与其他技术联用。
放射免疫分析（RIA）
Mahon 等曾将卡那霉素与人血清白蛋白直接连接制备结合抗原，并建立了血清样品的放射免疫测定法，检测限为10 ng/mL。1984 年Arnold 等即建立了氯霉素的放射免疫测定法，其检测限为0.21μg/kg。酶联免疫吸附法（ELISA）
Prithipal Singh 等（1989）建立了检测猪血中磺胺二甲嘧啶的ELISA 方法，其检测范围为10ng/mL~1 000 ng/mL。国内刘智宏等（1998）建立了检测血清中磺胺二甲基嘧啶的ELISA 方法，其检测限为50 ng/mL。杨红（1999）建立了测定牛奶、猪血浆等样本的ELISA 检测方法，其检测限约0.025 ng/mL。
抗生素残留检测方法 第2篇
自组装成环荧光显微成像技术在抗生素残留量检测中的应用
摘要：提出了一种基于溶剂毛细流效应的微波加热自组装成环荧光显微成像技术,并应用于内蒙古乳都乳中抗生素残留量检测.在六氢吡啶反应介质和聚乙烯醇-124(PVA-124)存在下,将米诺环素液滴滴在疏水性玻璃表面上,当液滴受热挥发时,形成直径约为1.54 mm,环带宽为22.6μm的自组装环.当点样体积为0.30μL时,线性范围为4.2×10-12～1.8×10-11 mol・ring-1(1.4×10-6～0.60×10-5 mol・L-1),方法的.检测限(3σ)为4.2×10-13.mol・ring-1(1.4×10-7 mol・L-1).应用于内蒙古乳都乳中残留米诺环素和米诺环素胶囊中米诺环素含量的检测,回收率分别为97.2%～103%和99.4%～102%,相对标准偏差(RSD)小于1.2%.该方法建立了高灵敏、高选择性的痕量药物污染物分析新方法,为内蒙古地方优势资源产品--乳品中抗生素类药物残留量的定量检测提供理论依据,同时时不同地区乳品中抗生素的来源、残留情况的系统动态研究及对乳品行业的管理、监督等具有重要的现实意义和更广泛的应用前景. 作者： 刘颖[1]冯金朝[2]李丹[2]崔箭[3]徐斯凡[3]申刚义[3] Author： LIU Ying[1]FENG Jin-chao[2]LI Dan[2]CUI Jian[3]XU Si-fan[3]SHEN Gang-yi[3] 作者单位： 中央民族大学生命与环境科学学院,北京,100081;内蒙古师范大学化学与环境科学学院,内蒙古,呼和浩特,010022中央民族大学生命与环境科学学院,北京,100081中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京,100081 期 刊： 光谱学与光谱分析 ISTICEISCIPKU Journal： SPECTROSCOPY AND SPECTRAL ANALYSIS 年，卷(期)： ,29(8) 分类号： X832 关键词： 米诺环素 内蒙古乳都乳 自组装成环(SOR)技术 荧光显微分析 机标分类号： O65 TB3 机标关键词： 自组装环荧光显微成像技术抗生素类残留量检测DetectionFluorescence米诺环素胶囊内蒙古相对标准偏差乳品行业方法建立药物残留量污染物分析优势资源应用前景液滴线性范围现实意义微波加热 基金项目： 国家自然科学基金，中央民族大学面向21世纪教育振兴行动计划(985计划)，中央民族大学211工程项目，内蒙古自治区自然科学基金重点项目，内蒙古自治区高等学校科学研究项目
牛奶抗生素残留检测方法研究进展 第3篇
1 检测方法
1.1 微生物检测法
微生物检测法是较为广泛应用的最经典方法,测定原理是根据抗生素对微生物生理机能、代谢的抑制作用来定性确定样品中抗微生物药物残留[6]。其优点是操作简单、可靠、费用低、无需高级实验设备,一般实验室及养殖场都能使用。因为牵涉到微生物的培养,所以检测时间相对较长,不能实现定量检测,不能满足某些抗生素最低限的检测。微生物检测法主要包括纸片法、TTC法、管蝶法、试剂盒法等[7]。
试剂盒为抗生素残留的检测提供了更为便捷高效的手段。试剂盒一般是一种微孔板,每个微孔中包含营养琼脂培养基、对抗生素敏感的菌株、pH值指示剂。其原理为:微孔板在65℃温浴时,孢子受热萌发生长繁殖产酸,使培养基的pH值降低,培养基的颜色由紫色变为草绿色或黄色。如果牛奶中含有高于检测线的抗生素,微生物孢子萌发受到抑制,则不产酸,培养基保持原来的颜色。用肉眼观察颜色变化即可判断抗生素残留情况[8]。
对该类常用的试剂盒的研究报道较多,Comunian et al[9]对delvotest accelerator试剂盒进行评估,低于欧盟最大残留量浓度的青霉素G和磺胺嘧啶很容易检测出来,假阳性率低至95%,但对四环素和庆大霉素的检测能力则较弱。检测有时会出现假阳性的结果,这与牛乳本身成分复杂及外部环境影响有关。牛乳pH值、牛乳是否热处理、乳中大肠杆菌量、成品乳中防腐剂杀菌剂以及检测者经验等都会不同程度地使检测结果呈假阳性。Chung et al[10]用微生物方法和HPLC检测牛奶中磺胺类抗生素残留量试验,在269份奶样中21份为阳性,而HPLC方法仅出现4份阳性。微生物检测法阳性率偏高,往往要配合其他方法一起对牛奶进行评估。它虽然具有一定的局限性,但因其方便快捷、不需要大型仪器和专业操作人员即可完成,为广大奶农所接受。
1.2 酶联免疫法
酶联免疫法(Elisa)的特点在于敏感性高、特异性强、重复性好、处理量大。因其操作简便、结果判断较客观等因素,已广泛应用于免疫学检验的各领域中。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记,主要以竞争ELISA为主。
国外学者用合成的强力霉素半抗原,有对-氨基苯甲酸(PABA)臂,通过重氮偶合反应和混合酸酐的方法连接到牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)。酶联免疫吸附试验(ELISA)中,DOX-PABA-OVA偶联物作为包被抗原,而DOX-PABA-BSA用作免疫原,以产生多克隆抗体。优化主要参数后,得出检测限为1.96μg/kg。交叉反应(CR)较弱,与其他抗生素的交叉反应均低于0.1%[11]。
国占宝等[12]采用杂交瘤技术,制备抗四环素单克隆抗体。检测灵敏度较高,检测限较低;平均批内和批间变异系数均小于15%;四环素与金霉素等同类抗生素的交叉反应率大于60%,与其他类抗生素无交叉反应。
张慧丽等[13]根据恩诺沙星与标记有碱性磷酸酶的恩诺沙星同时与限量的特异性固相恩诺沙星抗体进行竞争结合反应,通过分离未结合的标记抗原,测定标记抗原与抗体复合物化学发光强度,经相应的数学函数计算出待测抗原的含量的原理,利用金刚烷类体系作为化学发光底物,快速地测定牛奶中恩诺沙星残留量。检出限可达239.9 pg/mL,检测范围为350~1 000 pg/mL,批内与批间相对标准偏差均小于15%。
Wang S et al[14]首先建立提取新霉素简便有效的方法,回收率为75%~105%,再用Elisa法来检测新霉素残留量。高效液相色谱法验证Elisa法的有效性,结果显示了良好的相关性,R2大于0.9。
用于检测牛奶中抗生素残留的酶联免疫法利用抗原抗体的特异性反应,故灵敏度较高[15]。但是一种方法只能检测一种或一大类抗生素,检测范围较小。酶联免疫法的关键在于制备特异性强且高效的抗体,重点在于半抗原的设计与合成、与载体蛋白的连接、抗体的制备,费用一般较高。
1.3 理化检测法
理化检测法是依据抗生素分子具有的性质,借助实验仪器对其分离检测的一种方法。分离应用的实验技术包括色谱和电泳等,检测应用的实验技术包括紫外、荧光、质谱、化学发光等。由于分离效率高、检测灵敏、结果稳定、重复性好、精确可靠,理化检测法是一种检测抗生素残留的精确方法。
Tang Q et al[16]用高效液相色谱法与串联质谱联用来同时测定牛奶中诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、芦氟沙星5种氟喹诺酮类药物残留。可以检测诺氟沙星含量为0.5 ng/g的牛奶,远低于国内规定的100 ng/g的最大残留限量(MRL)。
张尹等[17]采用乙腈沉淀蛋白,磷酸盐缓冲溶液为提取液,采用超声辅助萃取,固相萃取小柱净化,通过高效液相色谱进行分析检测,完全适用于牛奶中9种β-内酰胺类抗生素残留量检测。利用超声辅助萃取,增强溶剂的穿透力,加速目标成分进入溶剂,促进萃取的进行,极大地提高了抗生素的萃取率[18]。
田春秋等[19]利用高效毛细管电泳(HPCE)同时检测牛奶中青霉素类抗生素中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)以及3种青霉素类药物的方法。在采用40 mmoL/L磷酸二氢钾、20mmoL/L硼酸缓冲体系(pH值7.8)、分离电压为28 kV、分离温度为30℃的电泳条件下,4.5 min内可以实现对4种青霉素类药物的快速分离检测。Wang L et al[20]利用微流控芯片电泳激光诱导荧光检测牛奶样品中磺胺类药物残留量,体系中磺胺类药物用含5 mmoL/L硼酸和1%(W/V)聚乙烯醇的缓冲液提取。pH值、聚乙烯醇含量、硼酸浓度对磺胺类药物的分离有很大影响。检测限达到0.2~2.3μg/L。
理化性质检测法要借助实验室的精密仪器,对样品要进行一定的处理后才能测定,虽具有很高的精确性,但前处理技术大都操作时间长,有机溶剂使用量大,对人体和环境安全同样存在着一定危险。
1.4 免疫传感器法
20世纪90年代以来,以生物传感器为基础的各种生物检测技术蓬勃兴起,不少技术也应用于牛奶中抗生素残留的检测领域,其中应用最为广泛的就是基于免疫分析原理的生物传感器。用于牛奶抗生素残留检测的免疫传感器主要有光学免疫传感器、磁性微球免疫传感器、电化学免疫传感器等类型。
1.4.1 光学免疫传感器。
光学免疫传感器研究最多的是表面等离子体共振(SPR)传感器,它主要包括光波导器件、金属薄膜、生物敏感膜3个部分。SPR技术是针对免疫传感器检测牛奶中抗生素残留报道最多的一种。Fernandez et al[21]介绍了自主研发的一种价格低廉的便携式表面等离子体共振(SPR)传感器。SPReeta评估套件SPR3,已用于开发检测分析牛奶中残留的喹诺酮类抗生素(FQS)的生物传感器[22]。王彩云等[23]研究了利用近红外透射技术和偏最小二乘法(PLS)快速测定牛奶中氯霉素残留含量,氯霉素残留的预测值与真实值的相关系数达0.989 3,预示集的平均回收率为99.77%。该方法可快速测定牛奶中氯霉素残留含量。
1.4.2 磁性微球免疫传感器。
磁性微球免疫传感器是免疫学与磁性微球技术及传感技术相结合的一种检测方法,实质上是将抗体(或抗原)固定于磁性微球(IMMS)表面,形成固相抗体/抗原的复合物,经外磁场作用后,复合物被滞留,磁性微球载抗原/抗体复合物与其他组分分离,从而提高了传感器的检测精度。但最终还要通过信号转换器,将抗原抗体的特异性结合反应转换为光、电等其他信号来进行检测。
刘爽等[24]把合成的卡那霉素和氯霉素全抗原包被在聚苯乙烯微球表面,构成捕获抗原。利用捕获抗原、单克隆抗体及检测物三者来构建间接竞争免疫检测体系,并用荧光标记的二抗作为荧光探针标记与捕获抗原结合的单克隆抗体,从而得到悬液芯片系统的检测物。悬液芯片系统的激光激发不同型号的微球,并可以使其呈现出不同的侧向散射荧光(side scatter,ssc)和前向散射荧光(forward scatter FSC)。因此,悬液芯片系统能够根据不同的荧光区分不同的微球,从而达到分辨不同检测物的目的。悬液芯片系统上的另外一套检测系统能够对每个微球表面荧光探针的荧光强度进行检测以实现定量分析,双检测系统同时工作实现了高通量检测的目的。
刘天龙等[25]利用碳二亚胺法将抗生素合成抗原与表面具有羧基的聚苯乙烯微球通过酰胺键偶联成捕获抗原。通过对头孢氨苄和莱克多巴胺合成抗原包被微球的条件进行优化得到包被100μL的微球所需两者合成抗原的量分别是8.4μg和87.73μg;在牛奶中,对头孢氨苄和莱克多巴胺的检测限分别是20.59 ng/mL和23.51 ng/mg,标准添加回收率在70%~110%。
1.4.3 电化学免疫传感器法。
电化学免疫传感器法是利用抗原抗体高度特异性结合的性质,将免疫测试方法与生物传感技术联合起来,既有免疫反应的高特异性又有电化学方法的高灵敏性,在医疗卫生、环境等领域得到广泛应用。
武海等[26]利用共价键合法,将新亚甲蓝(NMB)与辣根过氧化酶(HRP)标记的青霉素多克隆抗体(Ab)修饰于玻碳电极表面,制成电流型免疫传感器,NMB作为介体能有效地传递电子,传感器对H2O2具有很好的催化作用。用此传感器对牛奶中的青霉素进行检测,其线性范围为0.25~3.00ng/mL(R=0.984),检出限为0.298 ng/mL。Tsekenis et al[27]采用交流阻抗无标记免疫传感器检测牛奶中的环丙沙星含量,用电沉积法将聚苯胺沉积到丝网印刷电极上,用于固定环丙沙星抗体,带有抗体的电极接触到牛奶中的抗原物质,电极的阻抗感应值随着抗原浓度的增加而增加。
免疫传感器是将高灵敏的传感器技术与抗原、抗体特异性反应相结合的一种检测方法,易于实现抗生素残留检测仪器的便携化、微型化和自动化,应用于抗生素残留物的分析极具现实意义。
2 展望
鉴于牛奶安全问题几乎牵涉到每一个人,事关人类公共卫生安全,作为牛奶安全问题中比较突出的抗生素残留问题不容小觑。防控牛奶抗生素残留应从以下几点出发,首先在奶牛饲养过程中要严控抗生素使用种类、剂量和时期,增强奶农防范意识,由于奶农知道生产过程中抗生素使用的种类、剂量等,可以有针对性地采用检测方法,在源头管控有抗生素残留的奶制品进入市场;其次严防生产环节抗生素流入,生产加工企业要有强烈的社会责任感;在防控奶制品抗生素残留过程中,食品安全监督关口同样要严把商品准入市场关,严格食品质量报备制度[28]。
浅谈乳制品抗生素残留检测 第4篇
关键词：抗生素残留 乳制品抗生素 检测
1 抗生素的来源
中国乳制品行业起步晚，起点低，但发展迅速，特别是改革开放以来，奶类生产量以每年两位数的增长幅度迅速增加，与此同时，畜牧业也发展迅速，众多的抗生素在乳牛饲养中得到了广泛的应用，其中以β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类等为主，造成乳制品中大量的抗生素残留。
从目前我国乳制品中残留的抗生素近况来看，抗生素作为一种治疗用药，目前已被广泛用于乳牛疾病的治疗，无论是通过口服还是肌肉注射，进入牛体中的抗生素都可以通过乳牛自身的代谢排出体外，而牛乳就是牛体将抗生素排出体外的一个重要途经。我国乳制品标准中有明确规定，注射过抗生素的乳牛5天内所产的牛乳不允许出售和食用，然而，有些奶户没有按要求处理含抗生素牛乳，为了谋取利益，向乳品企业出售含抗生素的牛乳；有些奶户定期给健康乳牛的饲料中添加抗生素或注射抗生素药物；有些奶户为了防止牛乳酸败而非法在乳中掺入抗生素，以上种种都造成了牛乳中出现抗生素的残留。
2 抗生素残留的危害
牛乳中残留抗生素，对于乳品生产厂来说，会造成对原料乳质量的误判，给企业生产酸奶或奶酪造成失败，给企业的产品带来潜在的消费危害，给企业造成经济损失。对于消费者来说，长期食用含抗生素的牛乳，无疑是等于长期服用了小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素牛乳会发生过敏反应，即使正常饮用者如果长期服用含抗生素的牛乳，可使体内致病细菌产生耐药性，给临床治疗带来很大麻烦。
生产无抗生素的乳制品是每个乳品生产企业必须做的一项工作，同时也是食品国家安全标准中明确规定的。严格控制牛乳中抗生素残留，用必要的检测手段对生鲜牛乳中抗生素进行检测，是保证乳制品无抗生素的先行条件。
3 牛乳中抗生素残留检测
3.1 目前牛乳中抗生素残留的检测方法大致分为三类：微生物法、理化分析法、免疫法。
3.2 微生物检测法
3.2.1 嗜热链球菌法也称TTC检测法 嗜热链球菌法也称TTC检测法，是我国鲜牛乳中抗生素残留量检验标准GB/T4789.27-2008中第一法，此方法测定原理是基于抗生素对微生物的抑制作用，样品经过80℃杀菌后，添加嗜热链球菌液，培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖，这时候加入代谢物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），嗜热链球菌将继续增殖，还原TTC成红色物质，相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受到抑制，因此指示剂TTC不还原，保持原色。此方法的优点是费用低、易开展，对抗生素具有广谱性。缺点是耗时长，要求操作人员需有一定专业知识，且实验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程，否则易出现假阳性。
3.2.2 嗜热脂肪芽胞杆菌抑制方法 嗜热脂肪芽胞杆菌抑制方法，是我国鲜牛乳中抗生素残留量检验标准GB/T4789.27-2008中第二方法，此方主要是培养基预先混合嗜热脂肪芽胞杆菌，并含有pH指示剂（溴甲本分紫），加入样品并孵育后，若样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽胞将在培养基中生长并利用乳糖产酸，pH指示剂的紫色变为黄色。相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽胞不会生长，pH批示剂的颜色保持不变，仍为紫色。此法优点是目前均有商用专用试剂，如荷兰戴尔沃检测（Delvotest SP）法，西班牙利普斯E50法；检验时无需特殊设备，操作方法简单，容易判断，结果可靠，费用较低，对抗生素具有广谱性；缺点是结果偶尔会出现假阳性，检验时间长。
以上两种检测方法是我国鲜牛乳抗生素检验标准方法，由于检验时间在2.5-3小时，无法满足目前乳品企业对原料乳验收的检验要求。
3.3 理化检测方法 在牛乳中抗生素残留检测方面，最常用的理化检测方法是高效液相色谱和色谱质谱联用技术。
3.3.1 高效液相色谱（HPLC）检测法 高效液相色谱（HPLC）检测法，是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，几乎所有的化合物包括高极性/离子型待测物和大分子物质均可用HPLC进行测定。样品经过提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤提取牛奶中抗生素分子。处理样品和流动相经过色谱柱，样品中的成分在色谱柱中反复分配，使各组分分离，然后由检测器检测各组分含量。HPLC的特点是灵敏度高、检测限低、方法稳定，因此广泛应用于青霉素类、四环素类等抗生素及呋喃类药物、磺胺类药物的残留检测，但检测程序复杂，费用较高，需购买液相色谱仪等检测设备。
3.3.2 色谱质谱联用技术 色谱质谱联用技术，是现代兽药残留分析发展特点，联用技术实现了高效层析分离和检测联机，可用微电脑控制层析条件、程序并且可以进行数据处理，其特异性、灵敏度和重复性均较好，并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物检测。对于分析牛奶中青霉素类抗生素，质谱作为一种专一检测器已获得广泛应用。常见的联用技术有薄层色谱-质谱（TLC-MS）、气相色谱一质谱（GC-MS）、液相色谱-质谱（LC-MS）、超临界流体色谱-质谱（SFC-MS）等。特点是能方便地对ng级的兽药残留组分进行检测与结构确定，但检测程序复杂，费用较高，需要昂贵的仪器设备，适合于质量检验部门的监督检验和科研机构的研究检验。
3.4 免疫分析法 以免疫分析方法为基础发展而来的免疫受体方法、酶联免疫方法和快速检测试剂条方法，以快速、灵敏、稳定、高效，在牛乳抗生素残留检测中得到了广泛的应用。
3.4.1 酶联免疫法 酶联免疫法（ELISA）对牛乳抗生素残留检验，是基于抗原抗体反应的特异性和等比例性，使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。当抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体即保留其免疫活性，又保留酶活性。在测定时，样品和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面抗或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与样品中受检物质量直接相关，故可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。目前酶联免疫测定法（ELISA）在抗生素残留检测得到了广泛的应用，结果重现性高，整个检测过程简单方便；但需购置专用仪器和试剂，成本较高，时间較长。
3.4.2 快速检测试剂条 抗生素检测试剂条方法，是目前企业检测牛奶中抗生素残留使用比较多一种，其原理为试剂条上的金标为微生物受体-金标复合物，受体与配体之间以特异性的高亲和力结合，而受体与非配体之间不结合的原理，将待检测药物残留作为配体，筛选该配体高特异性的受体，通过样品中待测物质与配体竞争性结合受体表面结合点，以检测样品中的药物残留，例如美国charm公司生产的charm ROS抗生素检测条，可以在8分钟内定性检验出牛奶中抗生素残留。快速检测试剂条，具有高特异性、高灵敏雅、稳定性强、抗干扰能力强，检测时间短，出结果速度快等特点，适用于样品的初筛。在操作上，无需任何专业的技术，操作简单，没有检测环境的需求，不管是奶农还是奶站工作人员，还是专业的检测人员都可以方便使用，抗生素检测限均达到国家标准中牛奶抗生素检测限要求，但检测只能是对牛乳中抗生素定性检验，不能定量检验。
4 牛乳中抗生素检测途经
综上所述，奶源的安全则是乳品企业的命脉，要使生鲜牛乳在没有进入牛奶加工厂前就能检测出抗生素残留，需要快速，操作简单，而且价格低廉的方法。传统的抗生素检测方法不少，有的操作烦琐，有的实验条件要求高，有的检验时间太长。近几年，国内外免疫检测技术发展迅速，应用广泛，酶联免疫试剂盒，免疫层析检测技术，目已成为中国快速牛乳抗生素残留诊断试剂产业服务商的第一品牌。今后，为了保证乳品企业与守法奶户的利益，保证奶源的质量安全，保证消费者的利益，还需要有关科研人员认真进行抗生素检验方法筛选工作，努力研发一些简便、快速、经济、实用的牛乳抗生素残留分析技术和方法，以提高我国乳制品抗生素的检测水平。
参考文献：
[1]马双青.消毒乳中抗生素残留的调查.中国乳牛，2001.6：47-48.
磺胺类药物兽药残留检测方法概述 第5篇
磺胺类药物兽药残留检测方法概述
本文主要介绍了磺胺类药物的特点及磺胺类药物残留的危害.概述了目前针对动物源性食品中的磺胺类药物残留检测的检测方法,包括微生物法、理化法、免疫法等方法以及一些联用技术.
作 者：戚凤霞 朱燕丽 裴兆柱 Qi Fengxia Zhu Yanli Pei Zhaozhu 作者单位：北京市崇文区动物卫生监督所,北京,100050刊 名：北京农业英文刊名：BEIJING AGRICULTURE年，卷(期)：“”(24)分类号：S859.79关键词：磺胺 兽药残留 检测方法
乳品中抗生素的检测方法 第6篇
乳品中抗生素的检测方法
乳品中抗生素的检测方法经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。因此，FAO及WHO早在1969年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，WHO于1979年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（Antibiotic-FreeMilk）的生产和消费已成为大势所趋。但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。我国关于奶制品中抗生素检测的国家标准方法最早出现在《牛乳检验方法——GB5409—85》中，采用TTC法。1994年制订的《食品卫生微生物学检验？鲜乳中抗生素残留量检验——GB/T？4789.27—1994》，也采用TTC法。2001年9月，农业部发布的《无公害食品生鲜牛乳》行业标准中，检测方法同《GB5409—85》，并不得检出。《绿色食品消毒牛乳标准》也做了类似规定。可看出，我国还未将抗生素纳入常规检测，作为必检项目；所采用的TTC法精确性和时效性都比较差。
展望新世纪的乳制品工业，为了保障人体健康，适应WTO的要求，增强国内乳制品业的国际竞争力，必须将抗生素的检测纳入议事日程。
首先是要制定相应的法规和检测程序，将乳制品中抗生素的检测、报告、处罚和管理等纳入法制化轨道，适应市场经济就是法制经济的要求。
其次是要修订、制订乳制品标准，将抗生素的检测纳入国标体系。解决国内标准混乱，与国际标准冲突的问题，加大采用国际标准的比例，同国际标准接轨。
抗生素残留检测方法 第7篇
便携式农药残留速测仪是根据国家标准方法GB/T5009.199 — 2003）速测卡法（纸片法）而专门设计的仪器。主要用于果、蔬、茶、粮食、水及土壤中有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测，特别适用于农产品质量检测站的快速检测，果蔬生产基地和专业户采摘前田间地头检测，农贸批发销售市场现场检测，酒楼、食堂、家庭果蔬茶加工前安全检测。检测原理：
仪器的检测原理是利用速测卡中的胆碱酯酶（卡②）可催化靛酚乙酸酯（卡①）水解为乙酸和靛酚，由于有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有强烈的抑制作用，因此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。①②使用方法：
（1）开机按住面板上的“开 / 关”键约2秒钟，仪器开机（开机后再次按次键可关机）：按［模式］键切换至“温度”，当温达到40℃时，仪器发出一声提示音，预热完成，可以开始测试。
（2）装片将速测卡撕去上盖膜对折后再展开，插入压纸条下的各通道加热板上（注意卡①一端在上方，卡②一端在下方），检查速测卡放置位置是否正确，速测卡中间的虚线应与压条对齐，不要歪斜。
（3）取样选择有代表性的蔬菜或瓜果皮，擦去表面泥土，剪成一平方厘米左右碎片，取5克放入带盖瓶中，加入10毫升纯净水或缓冲溶液震荡50次（有条件拥护可配备超声波清洗器搅拌），静置2分钟以上，每批最好做9个检样，同时做一个纯净水或缓冲液的空白对照，每剪完一个样品，尖刀要洗净后方可处.理另一个样品，以免交驻污染。用移液抢取80微升样品液加到白色药片上。如果检测是在采样现场或条件简陋的情况下进行，可直接在待检蔬菜叶尖部位滴2-3滴洗脱液，用另一片菜叶尖部在滴液处轻轻摩擦，使蔬菜表面的残留农药充分溶入洗液中。然后滴一滴在（卡②）上。
抗生素残留检测方法 第8篇
1 抗生素残留的来源
对泌乳期奶牛用抗生素治疗;抗生素作为奶牛饲料添加剂使用;受到抗生素污染的挤奶工具和贮奶用具;在牛奶中加入抗生素防止牛奶腐败。
2 牛奶中抗生素残留几种常见的检测方法
2.1 TTC法
TTC法是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准 (GB 468927—94) 检测法。操作步骤: (1) 菌液制备:单菌种 (嗜热链球菌, 以脱脂乳为培养基, 在 (36±1) ℃的培养箱中培养15h后, 再用脱脂乳稀释至1∶1待用; (2) 取待检样液9mL, 在80℃水浴加热5min后冷却到37℃以下, 加活菌液1mL, (36±1) ℃水浴2h, 加入4%TTC指示剂0.3mL, (36±1) ℃水浴30min; (3) 如果样液颜色不变为阳性, 呈红色为阴性, 阳性的样液再置于水浴中培养30min, 不显色为阳性, 呈红色为阴性。
TTC法测定各种抗生素的灵敏度:青霉素4μg/kg, 链霉素500μg/kg, 庆大霉素400μg/kg, 卡那霉素5 000μg/kg。它具有费用低、易开展的优点。缺点是耗时长, 要求操作人员有一定专业知识且试验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程, 否则易出现假阳性, 以致出现检验结果的不稳定性。
2.2 Delvotestsp法
Delvotestsp法的使用是基于20世纪80年代初香港要求广东出口的生奶必须无抗且要求采用Delvotestsp法检测。该方法也是生物测定法, 其试剂是由荷兰DSM公司生产并由AOAC认证。操作步骤: (1) 以无菌操作将1片营养药片 (葡萄糖基) 放入小试管内, 用微量移液管将0.1mL牛奶样品注入含菌的营养琼脂试管中; (2) 把小试管放入已预热至64℃的水浴箱或恒温器中培养3.0h; (3) 取出观察颜色变化, 如果底部2/3的固体介质是黄色则为阴性, 如果底部2/3的固体介质是紫色则为阳性。
Delvotestsp法具有广谱性, 可检测到包括β-内酰胺类抗生素在内的抗生素, 如磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖类、氯霉素等, 其对青霉素和磺胺类抗生素特别灵敏。灵敏度:青霉素3μg/kg, 链霉素300μg/kg, 庆大霉素400μg/kg, 卡那霉素2 500μg/kg。Delvotestsp法操作方便, 灵敏度高, 结果精确, 费用适中, 但易出现假阳性。研究证明, 当牛奶样品中添加微生物防腐剂 (如乳酸链球菌素-Nisn) 或样品中有足够的洗涤剂残留时, 便可影响嗜热芽孢菌生长而使试验呈现阳性。
2.3 ELISA法
酶联免疫吸附测定 (ELISA) 是基于抗原/抗体反应、以酶催化底物作为检测信号的一种免疫技术。随着该技术的日益成熟, 针对各种抗生素的免疫学检测方法相继建立成功, 并发挥着重要的作用。
MoonsunJ采用竞争性ELISA检测牛奶中的四环素, 首先用链接了四环素的卵清蛋白 (OVA) 包被酶联检测板, 然后加入抗四环素特异性抗体和四环素, 再加入生物素标记的二抗, 利用生物素-亲和素的免疫放大技术检测牛奶中的四环素, 检测范围为0.151～151μg/L, 检测灵敏度为0.048μg/L, 低于欧盟规定的最高残留限量100μg/L, 该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强的特点。
2.4 SnapTM法
该方法是酶联免疫法, 采用美国IDEXX公司生产的检测分析仪及试剂盒, 均获得AOAC认证, 它利用了竞争酶联免疫技术。
操作步骤: (1) 加乳样于样品管中摇匀, 加热样品和检测板5min; (2) 加乳样于样品孔中, 当激活圆环开始退却时, 按Snap键; (3) 反应4min, 由Snap读数仪读取并打印结果检测读数小于时判为阴性, 大于1.05时判为阳性。
SnapTM法是一种将酶化学反应的敏感性和抗原抗体免疫反应的特异性相结合的方法, 其敏感性和特异性好, 检测的灵敏度以普遍使用的β-内酰胺类计:青霉素5μg/kg, 阿莫西林10μg/kg, 氨苄西林10μg/kg, 头孢西林8μg/kg。其他抗生素如四环素等的检测则需购买相应的试剂来检测。SnapTM法检测结果快速、准确, 9min内即可检测出牛奶中β-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量, 且有半定量的读数, 可监控牧场用药的情况;检测仪器稳定性良好, 结果重现性高, 整个检测过程简单方便;但需购置专用仪器和试剂, 成本较高。
2.5 HPLC法
高效液相色谱 (HPLC) 是用高压流动相的驱动使样品通过高性能层析柱, 样品中的抗生素得到高效率分离, 高性能的检测设备和先进的操作控制系统确保了该方法具备很高的灵敏度, 自动化程度高, 结果重复性好, 是目前抗生素残留检测中广泛应用的一种方法另外高效液相色谱还能够进行多残留检测
2.6 LC-MS联用技术
液相-质谱 (LC-MS) 联用技术先通过LC对样品进行有效分离, 提供与定性分析有关的保留时间等信息, 然后用质谱仪对不同的液相洗脱成分进行分析, 确定其分子质量和化学结构信息, 该技术具有重复性好、信息量大、应用范围广等优点。
CherletM等用液相色谱-电喷雾串联质谱法检测牛奶中链霉素, 将样品用磷酸缓冲液 (PB) 液相萃取后再用阳离子交换柱净化, 以五氟丙酸和乙腈为流动相, 采用反相C18柱, 最后用电喷雾串联质谱检测, 检测灵敏度为0.6ng/mL, 远低于欧盟规定的最高残留限量200ng/mL。