体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨

2024-05-19

体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨(精选3篇)

体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨 第1篇

体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨

目的 克隆及表达中国昆明种小鼠的内皮抑素(endostatin)基因.方法 RT-PCR方法扩增鼠内皮抑素基因,构建温敏型表达载体pBV220-endostatin,在大肠杆菌DH5α中诱导表达出鼠内皮抑素蛋白.结果 筛选出pBV220-endostatin阳性克隆菌株,诱导表达外源蛋白内皮抑素,纯化复性后具有一定生物学活性.结论 克隆小鼠内皮抑素基因,重组内皮抑素在大肠杆菌中高效表达,复性后具有抑制血管生长活性.

作 者:栾桂红 李铭新 郑秋月 LUAN Gui-hong LI Ming-xin ZHENG Qiu-yue 作者单位:栾桂红,LUAN Gui-hong(大连市中心医院检验科,116033)

李铭新,LI Ming-xin(沈阳市苏家屯区疾病预防控制中心,110101)

郑秋月,ZHENG Qiu-yue(辽宁出入境检验检疫局,大连,116015)

刊 名:国际检验医学杂志 ISTIC英文刊名:INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE年,卷(期):28(9)分类号:Q78关键词:内皮抑素 基因克隆 基因表达

体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨 第2篇

1 材料与方法

1.1 材料

肝癌H22瘤株, 由中国药品制品鉴定所引进。4~5周龄昆明小鼠, 雄性32只, 平均体重19~22 g/只, 由山西中医院研究所动物室提供。

动物室室温22~24℃, 相对湿度40%~45%, 日光灯12 h人工照明, 专用鼠粮自由进食, 洁净水自由饮用, 动物实验室为清洁级。

1.2 方法

将冷冻保存在-80℃冰箱中的H22肝癌细胞复苏后, 注射入昆明小鼠左腋下, 7 d后, 肿瘤生成明显。在无菌条件下取肿瘤, 以培养液调整其中瘤细胞密度至1×107个细胞/ml, 用注射器吸取肿瘤悬液0.2 ml注入32只4~5周龄的雄性昆明小鼠右腋下的皮下进行接种, 建立动物模型。将32只小鼠按随机分组方法, 分成A、B、C、D组, 每组8只。A组开始给药时间为实验第1天。实验第5天所有小鼠接种肿瘤。恩度3 mg/kg注入腹腔, 1次/d, 直至小鼠被处死或小鼠死亡。实验第18天处死小鼠, 留取肿瘤组织。A组于实验第1天 (接种肿瘤前) 开始给药。B组于实验第5天 (接种肿瘤日) 开始给药。C组于实验第9天 (接种肿瘤日后第4 d) 开始给药。D组对照组, 只造模不给药。眼眶取血后处死小鼠, 解剖出肿瘤称重。将全部标本均经10%中性福尔马林固定, 石蜡包埋切片。免疫组化染色, 抗CD34单克隆抗体标本。实验药物:恩度注射液 (重组人内皮抑制素注射液) 由山东先声麦得津生物制药有限公司生产, 批号20100303。实验试剂:抗CD34单克隆抗体。

1.3 实验数据收集

小鼠肿瘤指标测定:将接种后的昆明小鼠喂养在清洁级动物室内, 每日使用电子天平测量各小鼠体重。从实验第9天开始每日使用游标卡尺测量各小鼠右腋下肿瘤大小 (单位为mm) , 计算肿瘤体积。肿瘤体积=长径×横径2/2。

1.4 染色结果判定及微血管密度的测定

CD34在光镜下将血管内皮细胞标染为棕黄色。采用Weidner等提出的方法对研究结果进行MVD量化分析。首先在40倍光镜视野下扫视整个切片寻找血管高密度集中的区域作为“热点”, 这些区域通常位于肿瘤边缘区域的纤维组织中。然后在100倍光镜视野下计数微血管数目, 各计数5个高倍视野, 取其平均值作为该标本的微血管数。凡单个孤立的或多个紧密排列的内皮细胞团, 只要与邻近肿瘤细胞及周围结缔组织成分分界清楚, 不论有无血管腔, 即可计数为1个微血管数。

1.5 统计学处理

采用SPSS 17.0专用统计软件进行数据统计分析。计量资料以 (±s) 表示, 用单因素方差分析对实验数据结果进行方差齐性检验和统计分析, 进一步采用LSD-t检验对数据进行多组间的两两比较分析与推断。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

实验第18天, 接种肿瘤当天开始给药组 (B组) 与对照组 (D组) 肿瘤体积及微血管密度比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 接种肿瘤前开始给药组 (A组) 和接种肿瘤后开始给药组 (C组) 与对照组 (D组) 肿瘤体积及微血管密度比较差异无统计学意义。见表1。

*与D组比较, P<0.05

3 讨论

恩度 (重组人血管内皮抑制) 是我国第1个上市的血管生成抑制剂类抗肿瘤药物 (恩度) , 在针对非小细胞肺癌 (NSCLC) 联合化疗的临床试验中显示出良好的疗效[1]。也有文献报道, 单独用恩度治疗仅3%有效, 而此3%患者与其他肿瘤患者究竟是什么问题导致其治疗效果的显著差异, 目前没有解决。

在研究实验中发现, 如果抗肿瘤血管生成的治疗方案确实有效, 除了表现为肿瘤体积较小, 生存时间延长外, 在肿瘤的组织切片中也表现为血管密度明显减少[2,3]。用CD34血管内皮细胞标记物检测肿瘤新生血管的微血管密度 (microvessel density, MVD) , 标记肿瘤微血管内皮细胞计算微血管密度 (MVD) 可以间接定量肿瘤血管发生情况[4]。因此本研究以此为研究方向, 选用抗小鼠肝癌H22细胞株移植的肿瘤模型, 在肿瘤接种的不同时间采用恩度治疗, 通过观察肿瘤体积和肿瘤组织的血管密度, 评价不同给药时间恩度对肿瘤的作用, 探索单用恩度疗效差的原因, 研究分4个组, 其中观察组3个, 对照组1个, 观察组恩度用量一致, 其中A组于接种肿瘤前4 d采用恩度治疗, B组于接种肿瘤当日采用恩度治疗, C组与接种肿瘤后4 d用恩度, 三个观察组中肿瘤体积和肿瘤组织血管密度与对照组比较, 表1的研究结果表明:恩度治疗后从肿瘤体积和血管密度观察, 恩度于肿瘤接种当天应用显示出恩度的治疗效果, 与对照组相比二者均P<0.05, 而恩度在肿瘤接种前和肿瘤接种后应用与对照组相比都不能使肿瘤血管密度和瘤体积发生变化 (P>0.05) 。基础研究认为:恩度作用于新生血管内皮的“爬行”, 即肿瘤新生血管生成的“结果”阶段, 而肿瘤的生长需经两个阶段, 即无血管期和血管产生后的快速增殖期[5], 因此本研究的结论可以认为恩度与接种同时进行, 有可能抑制了血管内皮的爬行而遏制了肿瘤血管的快速增殖, 而其他两种情况就无此作用, 显然恩度对肿瘤的作用是有限的, 这种限制与肿瘤接种生长有直接关系, 而对预防性用药和肿瘤已开始生长无关。

因此, 恩度用药时机有高度选择性, 作用于肿瘤生长的初期, 其预防性用药和肿瘤生长后用药本研究未能看到确切的疗效。本实验研究恩度抗小鼠肝癌H22细胞株移植肿瘤的作用, 选择接种肿瘤前、接种肿瘤当天、接种肿瘤之后3个给药时间。希望通过本实验研究发现恩度抗肿瘤的最佳给药时机。动态观察恩度应用后肿瘤生长情况, 反映恩度与血管生成的相关性。结果表明在实验第18天, 接种肿瘤当天开始给药组 (B组) 与对照组 (D组) 相比肿瘤体积和微血管密度比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 而接种肿瘤前开始给药组 (A组) 和接种肿瘤后开始给药组 (C组) 与对照组 (D组) 肿瘤体积和微血管密度没有统计学差异。说明腹腔注射恩度有抗肿瘤作用, 与之前的报道相符;用药时机体现恩度抗肿瘤效果。本实验提示接种肿瘤当日开始给药能体现恩度抗肿瘤作用;而接种肿瘤前和肿瘤开始生长后给药不能体现恩度抗肿瘤效果。由此可见, 恩度有可能只作用于新生血管, 提前给药对肿瘤血管着床以及已形成的肿瘤血管生长均无效, 肿瘤生长后给药对已形成的肿瘤血管生长也无效。肿瘤接种以后, 接种和生长几乎同时, 有可能接种以后刺激机体产生血管内皮生长因子, 刺激肿瘤固有血管增生, 恩度正是对此产生作用。接种肿瘤后开始给药无效是符合理论的, 接种肿瘤前开始给药无效与理论不符, 其机制有待进一步研究。为进一步研究恩度的抗肿瘤血管机制可对本实验所留取肿瘤标本, 比较不同时间、不同组别小鼠肿瘤体积和微血管密度之间的差别。

综上所述, 接种肿瘤当天开始腹腔注射恩度组 (B组) 小鼠肿瘤比单纯造模组 (D组) 小鼠肿瘤小、肿瘤血管密度低, 接种肿瘤前、后开始给药组小鼠肿瘤体积与空白对照组小鼠肿瘤体积无统计学差异。接种肿瘤当天开始腹腔注射恩度有抗肿瘤作用, 具体机制有待进一步研究。希望随着恩度抗肿瘤机制研究的进一步深入, 恩度成为癌症治疗的必不可少的重要药物之一。

摘要:目的:观察重组人血管内皮抑制素 (Endostar, 恩度) 对小鼠肝癌H22的抗血管生成作用, 并对其机制进行初步探讨。方法:建立肝癌H22小鼠模型, 共32只小鼠, 随机分为A、B、C、D组, 每组8只。在不同时间分别对各组给药。观察实验第18天小鼠肿瘤体积和微血管密度的情况。结果:实验第18天, 接种肿瘤当天开始腹腔给药组 (B组) 与对照组 (D组) 肿瘤体积和微血管密度比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。接种肿瘤前开始给药组 (A组) 和接种肿瘤后开始给药组 (C组) 与对照组 (D组) 肿瘤体积和微血管密度比较差异无统计学意义。结论:单独应用恩度 (重组人血管内皮抑制素) 有抗肿瘤作用, 接种肿瘤时用药为最佳给药时机。

关键词:肝癌,治疗,恩度,重组人血管内皮抑制素,小鼠,H22肝癌细胞株

参考文献

[1]王金万, 孙燕, 刘永煜, 等.重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志, 2005, 8 (4) :283-290.

[2]Tan G H, Wei Y Q, Tian L, et al.Active immunotherapy of tumors with a recombinant xenogeneic endoglin as a model antigen[J].Eur J Immunol, 2004, 34 (7) :2012-2021.

[3]Tan G H, Tian L, Wei Y Q, et al.Combination of low-dose cisplatin and recombinant xenogeneic endoglin as a accine induces synergistic antitumor activities[J].Int J Cancer, 2004, 112 (4) :701-706.

[4]Wozney J M.Overview of bone morphogenetic proteins[J].Spine, 2002, 27 (16Suppl1) :S2-S8.

体外重组内皮抑素及其抑制肿瘤血管生成机制探讨 第3篇

关键词:重组人血管内皮抑素,化疗,肺外晚期恶性肿瘤

恩度是我国近些年研制的新型重组人血管内皮抑素, 其上市年份是在2005年。根据资料记载, 国内许多著名的医学人员都对其进行过大量的研究, 并证实恩度能抑制血管内皮细胞增殖恶性肿瘤细胞的生长[1]。笔者所在医院选取2014年12月-2016年1月收治的56例肺外晚期恶性肿瘤患者, 将其分为对照组和观察组, 其中观察组患者进行重组人血管内皮抑素与化疗联合治疗, 取得了不错的治疗成果[2]。具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年12月-2016年1月笔者所在医院已经确诊的56例肺外晚期恶性肿瘤患者, 将其平均分成观察组和对照组。观察组患者28例, 男17例, 女11例, 年龄32~75岁, 平均 (52.1±3.3) 岁, 采用重组人血管内皮抑素与化疗联合方式共同诊治;对照组患者28例, 男15例, 女13例, 年龄34~75岁, 平均 (52.3±4.5) 岁, 采用常规化疗方式治疗。以上所有入选的患者, 在其同意的基础上, 采取统计学软件对其进行分析, 其临床资料比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 方法

观察组患者采用恩度 (重组人血管内皮抑素) 15 mg, 加入到500 ml的生理盐水当中滴注, 滴注时间为4 h, 持续滴注14 d后, 患者休息1周然后继续滴注, 同时联合化疗共同诊治肺外晚期恶性肿瘤患者。对照组患者则采用单纯的化疗治疗, 不采用任何交叉药物化疗方案。21 d为1个治疗周期, 治疗2个疗程后, 对患者的治疗效果进行对比。

1.3 疗效判定标准

根据RECIST评分决定治疗效果, 分为完全缓解 (CR) 、部分缓解 (PR) 、稳定 (SD) 和疾病进展 (PD) , 其中治疗有效率= (完全缓解+部分缓解) 例数/总例数×100%, 临床受益率= (完全缓解+部分缓解+稳定) 例数/总例数×100%[3]。患者的生活质量评价主要取决于患者体力状况的评分, 以患者治疗后的体力评分为基准。若KPS (体力状况评分) 增加≥10分为改善, 增加≤10分为稳定, 减少≥10分则为降低[4], 生活质量总有效率= (改善+稳定) 例数/总例数×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS 16.0系统软件进行数据处理, 计量资料以 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料以率 (%) 表示, 采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗效果比较

观察组患者临床收益率为85.71%, 高于对照组的71.42%, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。

2.2 两组患者生活质量比较

观察组患者体力状况较对照组患者明显提高, 观察组生活质量总有效率为92.85%, 高于对照组的75.00%, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表2。

2.3 两组患者毒副反应比较

56例患者共接受8个周期的治疗, 观察组和对照组接受诊断周期数为3周期和5周期, 患者的毒副反应主要表现为Ⅰ、Ⅱ度, 血液学毒性主要表现在白细胞下降, 肺外晚期恶性肿瘤患者出现恶心呕吐现象, 见表3。

例 (%)

3 讨论

肺外晚期恶性肿瘤是一种非常可怕的癌症, 一旦患者得了肺外晚期恶性肿瘤, 肿瘤细胞会疯狂地生长, 吸收人体绝大部分的营养, 造成其他器官组织的营养不良, 肺外晚期恶性肿瘤患者开始食欲不振、人体消瘦、内脏受损, 长此以往, 若不对其实施有效的临床诊治, 肺外晚期恶性肿瘤很可能夺去人类宝贵生命。肺外晚期恶性肿瘤是一种非常严重的临床病症, 而且治愈率不高, 患者的死亡率较高。肺外晚期恶性肿瘤患者的病症原因是肿瘤细胞和宿主组织细胞相互作用的一个过程, 对于肺外晚期恶性肿瘤患者而言, 其体内的恶性肿瘤细胞已经蔓延至肺部的各个组织, 加之肿瘤细胞具有较强的附着、运动和增值能力, 因此在肺外晚期恶性肿瘤诊治上多数采用化疗对患者的病症进行控制, 抑制患者体内的肿瘤细胞增长[5]。但是, 化疗对肺外晚期恶性肿瘤的诊治成效并不是十分显著, 一般情况下, 它只能暂时稳定肺外晚期恶性肿瘤患者的病症, 对于肺外晚期恶性肿瘤病症的缓解则是微乎其微。

恩度是我国近些年研制新型重组人血管内皮抑素, 其上市年份是在2005年。根据资料记载, 国内许多著名的医学人员都对其进行过大量的研究, 并证实恩度能抑制血管内皮细胞增殖及恶性肿瘤细胞的生长。从客观角度上讲, 恩度 (重组人血管内皮抑素) 联合化疗能降低人体血液毒素, 而且恩度 (重组人血管内皮抑素) 本身的毒性低, 具有很好的安全性能, 通过本试验也可以证明重组人血管内皮抑素联合化疗诊治肺外晚期恶性肿瘤患者的临床收益率较高, 其临床收益率为85.71%, 相比于常规化学治疗的71.42%, 高出14.29%, 两组相比, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;且观察组患者体力状况较对照组患者明显提高, 观察组生活质量总有效率为92.85%, 高于对照组的75.00%, 差异有统计学意义 (P<0.05) [6]。这与颜鹏等[7]及黄俊平等[8]研究结果高度一致。

综上所述, 重组人血管内皮抑素与化疗联合治疗肺外晚期恶性肿瘤, 相比于常规治疗方式, 患者的病症改善情况更佳, 因此在今后肺外晚期恶心肿瘤的临床治疗中推广应用。

参考文献

[1]Chen H R, Huang X W, Wang S T, et al.Nab-paclitaxel (abraxane) -based chemotherapy to treat elderly patients with advanced non-small-cell lung cancer:a single center, randomized and open-label clinical trial[J].中国癌症研究 (英文版) , 2015, 27 (2) :190-196.

[2]付蕾, 樊青霞, 王留兴, 等.重组人血管内皮抑制素联合含铂方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察[J].肿瘤, 2012, 32 (1) :60-64.

[3]Roman N O, Shepherd W, Mukhopadhyay N, et al.Interfractional positional variability of fiducial markers and primary tumors in locally advanced non-small-cell lung cancer during audiovisual biofeedback radiotherapy[J].International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics, 2012, 83 (5) :1566-1572.

[4]杨剑, 卢伟, 蒋富强, 等.重组人血管内皮抑制素联合血管介入治疗难治性晚期肺癌的临床研究[J].现代仪器与医疗, 2015, 21 (3) :27-29.

[5]吴磊, 韩颖明, 王思, 等.重组人血管内皮抑制素联合VP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效研究[J].实用心脑肺血管病杂志, 2015, 23 (12) :31-35.

[6]袁葆琳, 陈素琼, 师卫华, 等.重组人血管内皮抑素联合化疗治疗肺外中晚期恶性肿瘤的临床研究[J].宁夏医学杂志, 2012, 34 (5) :426-428.

[7]颜鹏, 方志勇, 向华, 等.奥沙利铂及重组人血管内皮抑素经肝动脉灌注联合TACE治疗原发性肝癌[J].介入放射学杂志, 2013, 22 (2) :121-124.

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