第一篇：伪狂犬病病毒范文
猪细小病毒论文：猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立及应用
猪细小病毒论文：猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立及应用
【中文摘要】猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是当前影响养猪业发展的3种重要的病原。由于PPV、PRV、PCV-2单独感染或混合感染均能引起猪发病,造成母猪的繁殖障碍或(和)感染猪的免疫抑制,为其他病原的继发感染提供了便利,甚至会造成猪群中疫病的流行,使养殖效益蒙受损失。聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)具有快速、敏感、特异等优点,自发明以来在病原的特异性检测方面表现出明显的优势,在动物疫病诊断和病原检测上也得到广泛地应用,对疫病防控起到了重要的作用。由于当前养猪业中猪群中多种病原混合感染病例的增多,单一病原PCR检测方法也表现出自身的不足,需要对一种病料进行多次PCR检测,使得检测时间延长,耗费人力,成本也高。多重PCR不仅保持了普通PCR敏感性高和特异性强的优点,而且还具有一个PCR反应就同时检测多种病原,具有简便、快捷、灵敏等优点,能满足生产上同时对多种疾病进行快速诊断的要求。本研究基于前期对陕西省部分养殖企业猪群中病毒性病原的调查检测,发现常有PPV、PRV和PCV-2的单纯或混合感染,为此我们拟建立PPV、PRV和PCV-2检测的多重PCR方法,以期为生产中这3种病原的快速检测提供可用方法。本研究获得了以下结果:(1)根据GenBank中已经发表的PPV、PRV和PCV-
2的全基因序列,利用DNAStar和Oligo6.0软件,针对病毒的保守性基因序列,分别设计了检测引物,通过对引物浓度、退火温度、PCR组分等条件的优化建立起鉴别PPV、PRV和PCV-2多重PCR方法,方法敏感性试验表明,PRV、PCV-2在多重PCR反应中的敏感性到达pg级,而PRV在多重PCR反应中的敏感性少了一个数量级,其最低检测量也达到了10pg级。以PCV-
1、牛病毒性腹泻病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、大肠埃希菌、PPV、PRV、PCV-2为模板分别进行多重PCR检测,结果表明只有PPV、PRV和PCV-2多重PCR及单个病毒的PCR均扩增出各自的特异性条带。(2)用建立的方法对采自陕西省部分猪场的286份病料及血样进行病毒检测,从临床健康猪全血样品中PPV、PRV和PCV-2的检测结果来看,PCV-2在正常猪群中有一定比例的存在,同时在个别猪场也存在PRV和PCV-2双重感染的现象;从临床患病猪病料中进行检测发现,PRV和PCV-2混合感染较严重,并有PPV+PRV+PCV-2三重感染发生;多重PCR检测结果与单项PCR检测结果的符合率达99%以上,说明建立的多重PCR检测方法可用于临床样品的检测,为这3种疫病的诊断提供依据。
【英文摘要】Porcine parvovirus , porcine pseudorabies and porcine circovirus are three main threat to the development of swine-breeding industry.Beacause sigle or mixed infection of the three virus both can cause diseases which can give rise to reproductive failure or(and) immunosuppression, it provides a convenient chance for secondary infection by other pathogens
and enven causes epidemic diseases in pigs wich can lead to tremendous economic losses ,and may arise public health problems. PCR with rapid,specific and sensitive advantages exhibits obvious preponderance in specificit detection of infectious agents in animals since it was invent.And it is applied widely in animal disease diagnosis and pathogen detection which has made important contributions to disease prevention and control. At present,the cases of mixed infection of pathogen are increasing,and common分子molecular detection of pathogen has show its own shortage of time consuming ,high cost and labour power when we need detect one specimen repeatedly.Mutiplex PCR not only preserve advantages of routine PCR,but also owns advantages of convenience shortcut and sensitiveness which meet the need of fast diagonosis for multiple diseases in production.We found that sigle or mixed infection of PPV、PRV and PCV-2 is common in the course for the survey of viral pathogen in some breeding enterprises in this research.So we plan to establish the mutiplex PCR for detection of PPV、PRV and PCV-2,in purpose for providing fast detection of the three pathogens an available method .(1)Specific primers for DNA viruses, namely, porcine parvovirus (PPV), pseudorabies virus (PRV), porcine circovirus type 2
(PCV-2),were synthesized according to the published virus conserved gene sequence of PPV, PRV and PCV-2 in GenBank and used by DNAStar and Oligo 6.0 software . We establish a mutiplex PCR method for the detection of PPV, PRV and PCV-2 by optimizing concentration of primers,annealing temperature and component of PCR.Sensibility test shows that the susceptibility of PRV and PCV-2 reach the level of pg.With PCV-1, bovine viral diarrhea virus, classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine transmissible gastroenteritis virus, Escherichia coli, PPV, PRV, PCV-2 as a template for multiple PCR were detected,the results show that the only PPV, PRV and PCV-2 virus in a single or multiplex PCR were amplified by their specific band.(2)The blood samples collected from 286 pig farms in Shaanxi Province were viral detection by this method. Clinically healthy pigs from a blood sample PPV, PRV and PCV-2 test results indict that PCV-2 in normal pigs have a certain percentage of presence, meanwhile several farms also exist the phenomenon of the PRV and PCV-2 dual infection.Swine from the clinical illness were detected compound, It was serous of PRV+PCV-2 combined infection in diseased pigs,and PPV+PRV+PCV-2 combined infection also were detected in diseased pigs. The coincidence
rate of multiplex PCR test and single PCR test is more than 99%, illutstrating that The developed novel multiplex PCR will be a tool used for the detection of clinical samples for diagnosis reference. 【关键词】猪细小病毒 伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 多重PCR 【英文关键词】Porcine parvovirus(PPV) Pseudorabies virus(PRV) Porcine circovirus type 2 multiplex PCR(mPCR) 【目录】猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立及应用综述12-
31摘要6-8
ABSTRACT8-9
文献
第一章 猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒
12-26
1.1 猪细小病毒
1.1.2 猪细小病毒的特性
1.1.4 PPV
1.2.1 2型检测方法研究进展12-1913-141.1.1 概述12-131.1.3 猪细小病毒病流行情况14-1
51.2 伪狂犬病病毒19-22的检测方法研究15-19概述191.2.2 伪狂犬病病毒的特性19-20
1.2.4 伪狂犬病病毒检测方法
1.3.1 概述
1.2.3 伪狂犬病流行情况2020-2222-231.3 猪圆环病毒22-261.3.2 猪圆环病毒的特性231.3.3 猪圆环病毒检测方法23-26检测上的应用26-31PCR 技术26
第二章 聚合酶链反应(PCR)技术在动物病原
2.1 PCR 技术概述26-27
2.1.1 2.2 主要的
2.1.2 PCR 技术的发展26-27
PCR 技术27-31PCR(nested PCR)
27
2.2.1 常规PCR272.2.2 套式
2.2.4 反
2.2.3 二温式PCR27-28转录PCR (RT PCR)2828
2.2.5 反转录一复合套式聚合酶链反应
2.2.7 竞争PCR (compete
2.2.9 定量2.2.11 多
第三章 2.2.6 反向PCR28PCR)28-29PCR29
2.2.8 标记PCR (LP-PCR)292.2.10 玻片PCR (Slide-PCR29-30
30-
31试验研究31-45重PCR(Multiplex PCR)猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2 型 PCR 检测方法的建立31-38313232-333.1 材料与方法31-3
33.1.1 主要试剂
3.1.3 引物设计3.1.5 PCR 反应33
3.1.7 PCR 产物3.1.2 毒株、菌株和细胞31-323.1.4 病毒DNA 的提取323.1.6 PCR 反应条件的优化的测序分析333333-343434-3636
3.1.8 PCR 反应的敏感性和特异性分析
3.2.1 最佳PCR 退火温度的确定3.2 结果33-363.2.2 PCR 反应最佳引物体浓度的确定3.2.3 PCR 产物的鉴定3
43.2.4 PCR 反应的敏感性3.2.5 PCR 反应的特异性试验和重复性试验3.3 讨论36-38
第四章 PPV , PRV和PCV 2多重PCR
38-4
54.1 材料与方法检测方法的建立与临床样品检测分析38-39384.1.1 主要试剂38
4.1.2 毒株、菌株、细胞38
4.1.4 多重PCR
4.2 结果4.1.3 临床样品及病料的采集反应条件的优化384.1.5 样品检测38-39
39-424.2.1 两重PCR 反应条件的优化39-40
4.2.3 样品检测41-42
参考文献46-56
4.2.2 4.3 讨致谢多重PCR 的建立40-41论42-4556-57结论
45-46作者简介57
第二篇：狂犬病,伪狂犬病
狂犬病
俗称疯狗病，是由病毒引起的一种急性接触性传染病。临诊特征是极度的神经兴奋而致狂暴和意识障碍，最后局部或全身麻痹而死。
病原
狂犬病病毒属于弹状病毒科、狂犬病病毒属。宽75-80nm，长180nm，呈短粗的弹状或试管状。病毒粒子是由三个同心层构成的囊膜和被囊膜包围着的呈螺旋对称的核蛋白壳构成。最外层囊膜包含有由糖蛋白构成的纤突，这种纤突具有抗原性，能刺激机体产生中和抗体并使病毒吸附在宿生细胞上，故与病毒的感染和免疫有关。
病毒在动物体内主要存在于中枢神经组织、唾液腺和唾液内。在唾液腺和中枢神经(尤其在脑海马角、大脑皮层、小脑)细胞的胞浆内形成狂犬病特异的包涵体，叫内基氏小体，呈圆形或卵圆形，染色后呈嗜酸性反应。
病毒可在各种哺乳动物(小鼠、大鼠、仓鼠、乳兔、羔羊、仔猪等)等的肾原代细胞、鸡胚成纤维细胞和人的二倍体细胞(WI-38)上培养。自然界存在的狂犬病强毒称为街毒，病毒通过家兔脑内继代，能减弱其对人畜的毒力，成为固定毒，可用来制备弱毒疫苗。病毒对过氧化氢、高锰酸钾、新洁尔灭、来苏儿等消毒药敏感。1-2%肥皂水、43-70%酒精、0.01%碘液、丙酮、乙醚都能使之灭活。病毒不耐湿热;50℃加热15分钟，60℃数分钟，100℃2分钟以及紫外线照射均能灭活，但在冷冻或冻干状态下可长期保存病毒。在50%甘油缓冲溶液中或4℃下存活数月到一年。
流行病学、
人和各种畜禽对本病都有易感性。在自然界中，肉食目的犬科和猫科中的很多动物都可以感染，尤以犬科动物(犬、狐、狼等)在世界分布甚广，常成为人畜狂犬病的传染源和病毒的贮存宿主。另外，西印度群岛和中南美各地发现蝙蝠(食肉蝙蝠、吸血蝙蝠和食果蝙蝠)的唾液腺带狂犬病病毒，据认为在传播本病方面起着重要的作用。
无症状和顿挫型感染的动物可长期通过唾液排毒，可成为人畜的传染源。
本病的传播方式系由患病(或带毒)动物咬伤而感染。当健康动物皮肤粘膜有损伤时，接触病畜的唾液感染也有可能。通过直肠使仓鼠感染或在蝙蝠洞中通过气源途径使多种野生动物感染成功。
发病机理
唾液中的病毒通过咬伤进入易感动物的皮下组织，沿感觉神经纤维或血液由外周进入神经中枢。病毒在中枢神经组织增殖，按离心方向由中枢沿神经向外周扩散抵唾液腺进入唾液，同时损害中枢神经细胞和血管壁，引起兴奋症状，如神志扰乱和反射兴奋性增强，后期神经细胞变性，逐渐引起麻痹症状，最终呼吸中枢麻痹，造成死亡。
症状
潜伏期与动物的易感性，伤口距中枢的距离，侵入病毒的毒力和数量有关，变动范围很大，一般为2-8周，最短8天，长者可达数月或一年以上。犬、猫、狼、羊及猪平均为20-60天，牛、马30-90天，人2-3周。
各种动物的临诊表现皆相似，一般分为两种类型;即狂暴型和麻痹型。
犬：
典型的病例按病程发展大致有前驱期，兴奋期和麻痹期三个阶段。
1.前驱期或沉郁期此期约为半天到两天。病犬精神沉郁，常躲在暗处，不愿和人接近或不听使唤，强迫牵引则咬畜主，性情与平时不大相同。病犬食欲反常，喜吃异物，喉头轻度麻痹，咽物时颈部伸展。瞳孔散大，反射机能亢进。性欲亢进，嗅舔自己或其他犬的性器官，唾液分泌逐渐增多，后躯软弱，
2.兴奋期或狂暴期此期约2-4天。病犬高度兴奋，表现狂暴并常攻击人畜。狂暴的发作往往和沉郁交替出现，病犬常表现一种特殊的斜视和惶恐表情，狂乱攻击，自咬四肢、尾及阴部。病犬常在野外游荡，甚至可游荡到数十公里以外的地方，且多半不归，咬伤人畜，随着病势发展，陷于意识障碍，反射紊乱，狂咬。动物显著消瘦，吠声嘶哑，眼球凹陷，散瞳或缩瞳，下颌麻痹，流诞和夹尾等。
3.麻痹期约1-2天，麻痹急剧发展，下颌下垂，舌脱出口外，流诞显著，不久四肢及后躯麻痹，卧地不起，最后因呼吸中枢麻痹或衰竭而死。
整个病程为6-8天，少数病例可延长到10天。
牛病初见精神沉郁，反刍食欲降低，不久后表现起卧不安，前肢搔地，有阵发性兴奋和冲击动作，如试图挣脱绳索，冲撞墙壁，跃踏饲槽，磨牙，性欲亢进，流诞等。一般少有攻击人畜现象。当兴奋发作后，往往有暂短停歇，以后再次发作，并逐渐出现麻痹症状，如吞咽麻痹，伸颈，臌气，里急后重等，最后倒地不起，衰竭而死。
马：病初往往见咬伤局部奇痒，以至摩擦出血，性欲亢进。兴奋时亦冲击其他动物或人，有时将自体咬伤，异食木片和粪便等。最后发生麻痹，口角流诞，不能欲食，衰竭而死。猪：兴奋不安，横冲直撞，叫声嘶哑，流涎，反复用鼻掘地等。攻击人畜。在发作间歇期常钻入垫草中，稍有音响即一跃而起，无目的地乱跑，最后发生麻痹症状，约经2-4天死亡。
猫：一般呈狂暴型，症状与犬相似，但病程较短，出现症状后2-4天死亡。在疾病发作时攻击其他猫、动物和人，因其动作迅速又常接近人，故对人危险性较大。
病变
尸体无特异性变化。尸体消瘦，有咬伤，裂伤，常见口腔和咽喉粘膜充血或糜烂，胃内空虚或有异物，胃肠粘膜充血和出血，中枢神经实质和脑膜肿胀、充血和出血。
诊断
临诊比较困难。如果患病动物出现典型的病程，则结合病史可作出初步诊断，但是因为患狂犬病的犬，早在出现症状前1-2周内即已从唾液中排出病毒，所以当动物或人被可疑病犬咬伤后，应及早对可疑病犬作出确诊，以便对被咬伤的人或动物进行必要的治疗，否则将延误时间，影响疗效，为此应将可疑的病犬拘禁观察或扑杀，进行实验室诊断。实验室诊断包括下列内容：
1.病理组织学检查脑触片法是迅速而经济的方法，将出现脑炎症状的患病动物捕杀，取大脑海马角或小脑作触片，用含碱性复红加美兰的Seller氏染液染色、镜检，内基氏小体呈淡紫色。
2.荧光抗体法是一种迅速而特异性很强的诊断方法。联合国世界卫生组织曾推荐，许多国家业已广泛应用。取可疑病脑组织或唾液腺制成冰冻切片或触片，用荧光抗体染色，在荧光显微镜下观察，胞浆内出现黄绿色荧光颗粒者即为阳性。
3.小鼠接种法是准确可靠的方法，但耗时较长，需观察3周才能作出诊断结果，方法是取脑病料制成乳剂，用30日龄的小鼠(3日龄以内的乳鼠更敏感)经脑内接种，如有狂犬病病毒，则在接种后1-2周内小鼠出现麻痹症状与脑膜脑炎变化，或者于接种后3天捕杀小鼠，取脑制触片，用荧光抗体法检查，如此可以缩短诊断时间。
近年来又研究开发出ELISA检测抗原或抗体的技术，是狂犬病免疫诊断中很有前途的检测方法。应用基因探针位点杂交技术检测实验感染小鼠中枢神经系统中的狂犬病病毒的RNA，也取得了进展。琼扩法亦在试用，尚未推广。
防制
目前我国采取的是：“管、免、灭”的综合防制措施。
“管”即市区，城镇禁养，乡镇控养或圈养。实践证明，此管养的办法必须有关部门互
相配合，严加执行，否则收效不大。
“免”即免疫，有计划地对家犬实施发放免疫证。现采用从国外引进的Flury株狂犬病弱毒冻干疫苗。一次肌肉注射，免疫期一年以上，既安全，又有效。近年来中国兽医药品监察所自国外获得狂犬病ERA弱毒株，通过BHK-21细胞系和猪肾原代细胞复制病毒，注射狗、牛、羊等动物均无不良反应。国外曾将ERA弱毒疫苗混入诱饵，引诱野生动物(主要是狐狸)采食而获得免疫，如此可以减少传染源，从而降低了人畜的感染率。
当前狂犬病疫苗研究的新动向主要是发展基因工程疫苗，美国Wistar研究所与法国Transgene公司合作应用DNA重组技术以痘苗病毒载体来表达狂犬病病毒糖蛋白，培育出一种新的狂犬病疫苗，一旦成功，产量容易扩大，成本低，更有发展前途。
“灭”即消灭野犬，不使无免疫证的野犬到处游荡，以免感染伤害人畜。
紧急防制措施：患狂犬病的动物或可疑动物咬伤，应及时对伤口彻底消毒处理，最好先让伤口局部出血，后用肥皂水、酒精、碘酊等消毒防腐剂处理，并迅速用狂犬病疫苗进行紧急接种，使被咬动物在病的潜伏期内就产生主动免疫，可免于发病。
公共卫生
人患本病大都是由于被狂犬病动物咬伤所致。病初表现头痛，乏力，食欲不振，恶心和呕吐等，被咬伤部位有发热，发痒，蚁走等感觉、脉速、瞳孔散大、多泪、流诞、出汗。有时见呼吸肌和咽部痉挛，出现呼吸困难。见到水即表现恐惧，故名“恐水症”。在发作的间歇中，表现恐怖和忧虑，有时出现狂燥，失去自制。通常在发病3-4天后因全身麻痹而死亡。故接触感染狂犬病机会多的人员，如操作此病毒的实验室工作人员、兽医、养狗人员等须进行疫苗接种。未接种过疫苗的人，一旦被犬咬伤，应迅速用20%软肥皂水冲洗伤口，并用3-5%碘酊处理伤口，并及早接种狂犬病疫苗，能免于发病。
伪狂犬病(Pseudorabies; Morbus aujeszky)
伪狂犬病是由病毒引起的家畜及野生动物的急性传染病。其特征为发热、奇痒及脑脊髓炎。但成年猪常为隐性感染，可有流产、死胎及呼吸系症状，新生仔猪除神经症状外还可侵害消化系。
本病广泛分布于世界各国。据近年来国外报道，猪、牛及绵羊发生本病逐年增加。我国不少省区也有本病发生，尤其是猪的发病有扩大蔓延趋势。
病原病原是伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus)，属于疱疹病毒。病毒能于鸡胚上生长，当它适应鸡胚后容易连续继代;能于多种哺乳动物细胞上生长繁殖，产生核内包涵体。于猪肾、兔肾及鸡胚细胞上能形成蚀斑。
病毒对外界环境抵抗力很强，于8℃存活46日，24℃为30日，在0.5%石灰乳或0.5%苏打中1分钟，0.5%盐酸或硫酸中3分钟被破坏、在胃蛋白酶、胰蛋白酶于PH7.6时，90分钟被破坏。在0.5%石炭酸中可抵抗10日之久。
流行病学本病自然发生于猪、牛、绵羊、犬、猫、野生动物中，鼠可自然发病，其他如水貂等亦可发生。实验动物中兔最敏感，小鼠、大鼠、豚鼠等亦均能感染。未证实人可发生本病，但土耳其及我国台湾曾报道有血清反应阳性者。欧洲也曾报告数例，因皮肤伤口接触病组织而感染，局部有痒觉，未报告有死亡。
病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源。不少学者认为，其他动物感染本病与接触猪、鼠有关。
健猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病。猪、犬、猫常因吃病鼠、病猪内脏经消化道感染。鼠可因吃进病猪肉而感染。本病亦可经皮肤伤口传染，如猪感染本病后其鼻分泌物中有病毒，此时如用病猪鼻盘摩擦兔皮肤伤面即可使之感染而发病。猪配种时可传染本病。母猪感染本病后6-7天乳中有病毒，持续3-5天，乳猪可因吃奶而感染本病。妊娠母猪感染本
病时，常可侵及子宫内的胎儿。牛常接触猪、鼠而得病。感染发病后几乎100%死亡，以往认为病牛本身不传染给其他牛，现在认为牛也可传染给牛和猪。
发病机理猪自然感染本病的传播途径是经鼻道与口腔。病毒侵入体内18小时后，便在扁桃体、咽粘膜增殖，再经嗅神经、三叉神经和吞咽神经的神经鞘淋巴到达脊髓和脑。病毒亦可由鼻耳咽粘膜经呼吸道侵入肺泡。血液中病毒呈间歇性出现，滴度低，难于测出，但病毒可经血液到达全身各部位。
病畜在病毒血症之后，常发生中枢神经系统的炎症，呈现各种不同程度的神经综合症状，主要表现为皮肤的感觉过敏(特别是牛、羊)，发生不可耐受的发痒。脑脊髓发炎后，可引起神经(特别是舌、咽神经)的麻痹。如病程较长，则可能继发呼吸、消化器官的病变。症状潜伏期一般为3-6天，少数达10天。
猪：猪的临诊表现随着年龄不同而有很大差异。成年猪一般为隐性感染，若有症状也很轻微，易于恢复。发热，精神沉郁，有些病猪呕吐、咳嗽，一般于4-8天内完全恢复。怀孕母猪可发生流产、木乃伊胎儿、死胎。据近年来的报道，奇痒症状以往在猪罕见，但目前则常可见到。
新生仔猪及4周龄以内的仔猪感染本病者，病情极严重，常可发生大批死亡。仔猪突然发病，体温上升达41℃以上，精神极度萎顿，发抖，运动不协调，痉挛，呕吐，腹泻，极少康复。3-4周龄猪损失可达40-60%。
牛：牛对本病高度敏感，发病后常于48小时内死亡。症状亦很特殊而明显，主要表现为某部皮肤的强烈痒觉。身体的任何部位均可发生。在初期一般症状后不久，即出现痒觉异常。无休止地租舔患部，使皮肤变红、擦伤。疯狂的病畜，用力制止亦无效果。体温达40℃以上。当病情进展到侵害延髓时，表现咽麻痹、流诞、用力呼吸、心跳不规则、磨牙、吼叫、痉挛而死。一直到死前仍有知觉。有时病牛病后数小时即死亡，未表现痒觉。
羊发病后也有奇痒症状，多呈急性死亡。
犬猫感染后的病状与牛相似。
病变牛病患部变化剧烈，皮肤撕裂。皮下水肿，肺常充血水肿，心外膜出血，心包积水。猪的病变差异很大，常见不同程度的卡他性胃炎和肠炎，中枢神经系统症状明同时，脑膜明显充血，脑脊髓液量过多，肝脾等实质脏器常可见1-2mm直径的灰白色坏死病灶，肺充血、水肿。
组织学病变主要是中枢神经系统的弥散性非化脓性脑膜脑炎及神经节炎，管套及弥散性局部胶质细胞反应，同时有广泛的神经节细胞及胶质细胞坏死。在脑神经细胞内，鼻咽粘膜、脾及淋巴结的淋巴细胞内可见核内嗜酸性包涵体。
诊断根据病毒临诊症状，以及流行病学资料分析，可初步诊断为本病。确诊本病必须进行实验室检查。可采取病患部水肿液、侵入部的神经干、脊髓以及脑组织，接种兔以分离病毒，接种兔常出现典型奇痒症状后死亡。亦可接种小鼠，但小鼠不如兔敏感。病料亦可直接接种猪肾或鸡胚细胞，可产生典型的病变。分离出的病毒再用已知血清作病毒中中和试验以确诊本病。
另外，取自然病例的病料如脑或扁桃体的压片或冰冻切片，用直接免疫荧光检查，常可于神经节细胞的胞浆及核内产生荧光，几小时即可获得可靠结果。
猪感染本病经常呈隐性经过，因此诊断要依靠血清学方法，包括血清中和试验、琼脂扩散试验、补体结合试验、荧光抗体试验及酶联免疫测定等。其中血清中和试验最灵敏，假阳性少。
本病应与李氏杆菌病、猪脑炎髓炎、狂犬病等相区别。
防制本病尚无药物治疗方法，紧急情况下，用高免血清治疗，可降低死亡率。
消灭牧场中的鼠类、对预防本病有重要的意义。现在公认猪为重要的带毒者，因此要严
格将牛猪分开饲养。
在疫区可用疫苗注射。东欧国家曾用毒力低，遗传稳定的“K”毒株组织培养苗，应用于曾发生过或受威胁的猪群。欧洲曾应用弱毒苗及死苗多年。美国目前不用苗，从为用苗不能消灭本病，只能减少疾病的出现。我国已试制牛羊伪狂犬病氢氧化铝甲醛灭活苗，经反复试验，证明疫苗免疫效果可靠。
根除猪的伪狂犬病可采用血清学及淘汰的办法，即把所有的成年猪作血清中和试验，阳性者取出隔离，以后淘汰。以3-4周之间隔，反复进行，一直到两次试验全部阴性为止。另外一种方式是培育健康猪群，母猪产仔断乳后，尽快分开，隔离饲养，每窝小猪菌须与其他窝小猪隔离饲养。到16周龄时，作血清型检查(此时母猪抗体转为阳性)，所有阳性猪淘汰，30日后再作血清学检查，把阴性猪舍合成较大群，最终建立新无病猪群。
第三篇：例伪狂犬病的诊治[模版]
目录
1、 发病情况
2、 临床症状
3、 剖检变化
4、 实验室诊断
5、 防治措施
6、 讨论
一例猪伪狂犬病的诊治
摘要:青县某猪场存栏200多头,二月份一批新生仔猪出现嗜睡流涎高烧排黄稀粪全身震颤现象,使用喹诺酮类药物后效果不明显,来我院就诊后经流行病学调查、临床症状、剖检变化的分析及实验室诊断，确诊为猪伪狂犬病.,通过使用干扰素治疗和伪狂
犬疫苗强免使病情得到控制.
关键字:猪伪狂犬病实验室诊断
1、发病情况
某猪场存栏225头,包括头35母猪2头公猪和188头育肥猪。其中一头母猪于2012年3月13日晚上分娩产出14头仔猪。乳猪产下后都很健壮，膘情极好。第二天就发现有两头乳猪眼眶发红，闭目晕睡，接着乳猪体温升高。口角有大量泡沫或流出唾液，趴在地上，全身震颤,拉黄色稀粪，站立不稳.当地兽医诊断为仔猪黄白痢,并进行了喹诺酮类等药物肌肉注射,均效果不明显,相继死亡,到第五天又有同群的4头乳猪也出现相同症状,于2012年3月18日到青县兽医院就诊.
2、临床症状
发病仔猪精神沉郁，可见两耳后竖。病初期遇到声音刺激，发生兴奋和鸣叫,后期任何强度疼痛刺激，都叫不出声音或声音嘶哑，只能看到肌肉震颤。仔猪排黄色粥状稀粪，头、颈部皮肤发红，眼睑嘴角水肿，腹部几乎都有粟粒大小的紫色斑点，有一头全身发紫，呼吸困难，流鼻液、咳嗽、磨牙，食欲减少或废绝，耳尖发紫。有两头仔猪出现运动失调、间歇性抽搐、四肢呈游泳状划动，(其中有一头后肢麻痹，只能向后运动)。病程后期均四肢麻痹,卧伏,昏迷以至衰竭死亡。病初体温升高到40°C--41°C，持续12小时后体温开始恢复，濒死期体温降至38°C以下。病程最快的几小时即死亡,大多数病程不超过三天,死亡率可达到90%以上.
3、剖检变化
剖检死亡猪两头，濒死猪三头，其症状主要是肾脏布满针尖样出血点，有部分坏死，脑膜表面充血、出血。鼻腔都有不同程度的卡他性或出血性炎症，扁桃体充血水肿呈红紫色，喉头黏膜充血、水肿。
有一头仔猪可见肺水肿、上呼吸道大量泡沫样分泌液，喉头粘膜点状或斑状出血。胃底腺区大面积出血，小肠粘膜充血，水肿，肠系膜间有胶冻样渗出。盲肠有斑块状出血。淋巴结特别是肠系膜淋巴结和下颌淋巴结充血肿大。
4、实验室诊断
1、取病死猪心血涂片和肝、脑组织触片，革兰氏和瑞氏染色、显微镜检查，均未发现细菌。
2、无菌采取具有典型症状仔猪的脑、脾组织，接种普通琼脂、鲜血琼脂、普通肉汤，置37℃温箱培养24h，均无细菌生长。
3、平板凝集实验：采动物血离心血清后，取20ul伪狂犬平板凝集实验抗原于载玻片上,再取20ul猪血清,充分混匀后,观察有明显的凝集颗粒.(经畜主介绍发病仔猪和母猪从未做过任何伪狂犬疫苗)，可以诊断为猪伪狂犬病.
4、采三头病猪血清作为病料，应用PCR技术检测伪狂犬病毒：提取病猪DNA作为模板，高温使模板的一条双链DNA变性后形成两条单链，低温使引物与互补的模板形成双链，中温时，在TaqDNA聚合酶作用下，以dNTP为原料，以引物为复制的起点，沿模板合成一条新链。每个循环包括：高温变性，低温退火，适温延伸三个过程。每一次循环使扩增的DNA片段拷贝数放大一倍，经过35个循环，使扩增的DNA片断放大了数百万倍。将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色后，在紫外线灯照射下，肉眼可见到DNA片段的扩增带。结果被检的三份血清样品都出现217bp扩增带。因此诊断为该猪场的猪患伪狂犬病。
根据流行病学调查、临床症状、病理变化及实验室诊断，确诊为猪伪狂犬病。
5、防治措施
5.1、 免疫防制：对6头未出现神经症状的病猪，注射(大连三仪药业有限公司生产的)猪干扰素和猪排疫肽,(按每套打200斤体重用药)。同时配合仔猪活元素(江西派尼药业有限公司生产)进行注射来缓解病情，72小时后使用哈尔滨兽医研究所生产的猪伪狂犬活疫苗紧急接种。并建议该猪场为了防止猪伪狂犬病的发生，初产母猪在配种前14天接种伪狂犬活疫苗2ml/头,母猪临产前20—30天加强接种一次。所产仔猪在7日齡弱毒苗滴鼻或注射0.5头份，50日龄再加强免疫一次，注射1ml/头。用药时一定要尽可能的避免耐药性的发生。
5.2、综合防制：加强饲养管理，隔离或淘汰病猪，净化猪群，做好消毒工作。被污染的猪舍，用具，外界环境等用1：500天王星(清绿健康科技有限公司生产)消毒，每日一次，连续消毒1周。消灭养猪场及环境中的鼠类。
6、讨论
6.1、仔猪伪狂犬病的临床症状和病理变化与仔猪猪瘟相似，临床上极易发生误诊，因此，要综合临床症状，剖检变化，实验室诊断来确诊。
6.2、慢性暴发的猪伪狂犬病的猪场，应该先用干扰素或植物血凝素等生物制品缓解一下病情后，再作紧急接种，这样相对来说猪的死亡率要降低。对于急性暴发的猪怕刺激，采用加倍剂量和重复注射接种猪伪狂犬病弱毒疫苗是必要的。
6.3、本病的传染源主要是病猪和带毒动物，带毒怀孕母猪能直接传染给仔猪，仔猪出生后即表现为大量发病死亡。病猪也可以通过分泌物排出病毒污染猪舍，使健康猪群感染。另外鼠类被认为是此病的病毒携带者和主要传染源。防治本病时，不仅要做好预防接种，还要做好猪舍消毒和开展灭鼠工作。
参考文献
[1] 王书梅 猪伪狂犬的诊治[J] . 北方牧业, 2006, (13) .
[2] 张新我，王保全. 猪伪狂犬的诊治[J] . 北方牧业, 2006, (20) .
[3] 王玉萍，洪琼林. 论药物耐药性[J] . 福建农业，2000，(11) .
第四篇：猪伪狂犬病的诊断与防治
近几年来，伪狂犬发病已无明显季节性，发病率升高，已成为除蓝耳病以外危害母猪繁殖性能的第二大传染病。该病引起母猪繁殖障碍易被临床诊断忽略，延误治疗，严重影响猪场的经济效益。因此，做好伪狂犬病的诊断与防治对提高猪场母猪生产性能和仔猪成活率来说意义重大。笔者在查阅诸多资料后整理出以下关于猪伪狂犬病的诊断要点和防治措施，希望能为广大养殖户提供相关技术参考。
一、 临床诊断要点：
1、母猪：临床症状不明显。
(1)引起母猪顽固性不发情。
(2)引起母猪流产。伪狂犬病引起的流产在母猪妊娠各期均会发生，但以妊娠前期和妊娠中期最易发，且多为木乃伊胎和死胎。
2、仔猪：主要危害3-7日龄新生仔猪，可谓“九死一生”。病者多呈现出体温升高，出现神经症状，如头后仰、口吐沫、四肢泳动。四肢软而无力，多见于后肢，眼睑肿大，拉黄色稀粪(用抗生素类药物无效)。
3、保育猪：少数发生，死亡率低。主要表现的神经症状，猪歪头。
二、剖检病变：
发病仔猪的解剖病理变化有：
(1)肝脾出现黄白色针尖大小的坏死点。
(2)脑膜出血。
(3)肾脏小点状出血，其外形无明显变化。猪瘟表现为新生仔猪肾脏不仅有小点状出血，且肾脏凹凸不平。鉴别诊断于猪瘟。
(4)、扁桃体出血坏死。猪瘟也会引起扁桃体出血坏死，但出血坏死面积明显要比伪狂犬患猪的大。
三、防治：
根据我实验室实施的猪场伪狂犬净化系统方案，结合临床实际应用效果，我们推荐使用基因工程苗防控伪狂犬危害，并逐步实现猪场伪狂犬病净化。
1、公猪：每年免疫3-4次。剂量是：进口苗 1头份;国产苗2头份;对于冻干疫苗要用专用的稀释液进行稀释。
2、母猪：配种前一次和产前20-30天各免疫一次。剂量同公猪。
3、仔猪：首免1-3日龄用活苗滴鼻，且滴两个鼻孔，剂量是0.5-1头份。二免时间5-7周龄，肌注1头份。
若发现伪狂犬病，可以用疫苗紧急免疫。仔猪有一头发病则全窝用活苗紧急免疫，剂量是1-1.5头份。母猪是2头份。再结合猪只发病情况，采取相应的对症疗法。
规模化猪场要做好伪狂犬疫苗的免疫，借助诊断室有利条件，可以逐步实现猪场伪狂犬疾病净化。此外需要抓好猪场灭鼠工作，消灭伪狂犬病毒的储存、传播。应每隔2-3个月对猪场进行药物灭鼠。杀鼠药可以选择对猪危害较小的杀鼠迷，忌用毒性大的氟乙酰胺或者氟乙酸钠。
第五篇：伪狂犬病活疫苗质量标准
本品系用伪狂犬病弱毒株接种鸡胚成纤维细胞培养 ,收获细胞培养物 ,加适当稳定剂 ,经冷冻真空干燥制成 ,用于预防猪、牛及绵羊伪狂犬病。
【物理性状】本品为微黄色海绵状疏松团块。加P B S液后迅速 溶解呈均匀的混悬液。
【无菌检验】按9 2版兽用生物制品规程附录2页进行 ,应无菌 生长。
【支原体检验】按9 2版兽用生物制品规程附录4页进行 ,应无 支原体生长。
【外源病毒检验】按9 2版兽用生物制品规程附录6页第2. 2进 行 ,应符合规定。
【病毒含量测定】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释测毒价 ,每头份不低于5000个T C I D _ ( 50)(半数细胞感染量 )。
【安全检验】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释 ,肌肉接种6～ 18月龄无伪狂犬病毒中和抗体的绵羊2头,每头5m l (含10头剂 ) ,观察14天 ,应无临床反应。
【效力检验】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释成每毫升含1/50头剂 ,肌肉接种6～ 18月龄绵羊4头,每头1m l , 14天 1
后连同条件相同的无伪狂犬病毒中和抗体对照羊3头 ,每头肌肉注射强毒1m l (含1000L D_ ( 50) )观察14天 ,免疫羊应4/4保护 ,对照羊至少2/3发病死亡 ,为合格。
【剩余水分测定】按9 2版曾用生物制品规程附录12页进行 , 应符合规定。
【真空度测定】按9 2版兽用生物制品规程附录13页进行 ,应符 合规定。
【作用与用途】用于预防猪、牛和绵羊伪狂犬病。注苗后第6天产生免疫力 ,免疫期为1年。
【作法与用量】按瓶签注明的头剂 ,用PB S稀释 ,每一头剂为 1m l ,肌肉注射。
猪 :妊娠母猪及成年猪注2头剂。3月龄以上仔猪及架子猪注1头剂。乳猪每一次注1/2头剂 ,断乳后再注1头剂。
牛1岁以上牛3头剂
5～ 12月龄牛2头剂
2～ 4月龄犊牛第1次1头剂 ,断乳后再注2头剂。
绵羊4月龄以上者1头剂。
【注意事项】
1.本疫苗用于疫区及受到疫病威胁的地区。在疫区点内 ,除已发 2
病的家畜外 ,对无临床表现的家畜亦可进行紧急预防注射。
2.妊娠母猪于分娩前3～ 4周注苗为宜。其所生仔猪的母原抗体可持续3～ 4周 ,此后的乳猪或断乳猪仍需注射疫苗 ;未用本疫苗免疫的母猪 ,其所生仔猪 ,可在生后1周内注苗 ,并在断乳后再注苗1次。
3.稀释后的疫苗须当日用完。
【贮藏】在 - 20℃以下保存 ,有效期为18个月 ;在2～为9个月 ;在10～ 30℃阴暗处 ,应不超过1个月。’
【规格】 70头份 /瓶
3 ℃ , 8