1 增菌
(1) 当样品中有多种细菌混杂时, 容易影响目标菌增菌效果。如检测志贺氏菌时, 由于其对酸性环境较敏感, 产酸的菌株可使其在数小时内死亡[1]。当用GN增菌志贺氏菌时, 若同时存在其它致病性或非致病性细菌且志贺氏菌含量较少时, 应尤其注意增菌时间。 (2) 延长增菌时间有时可以提高阳性检出率[2], 如增菌副溶血性弧菌。 (3) 增菌时也可多选择一种增菌液。
2 分离
(1) 如果条件允许, 一种致病性细菌可选择2种及以上选择性培养基。如:当志贺氏菌和沙门氏菌混杂在一起, 且志贺氏菌含量相对较少, 有时在SS上较难挑出志贺氏菌, 如果同时接种在山梨醇麦康凯选择平板上, 沙门氏菌分解山梨醇而呈红色, 多数志贺氏菌不分解山梨醇无色, 从而增加分离出志贺氏菌的机会。若样品为大便, 用SS平板更有利于分离出志贺氏菌。另外, 单核细胞增生李斯特氏菌在含有亚碲酸钾的平板上形成黑色的菌落 (BP平板内含有亚碲酸钾) 。 (2) 同一种选择性培养基, 不同生产厂家, 甚至同一生产厂家不同生产批号, 菌落生长情况亦不同。在一次质量控制中, 把副溶血性弧菌用同种方法同时接种于2个厂家生产的TCBS平板上, 其中一块TCBS平板上菌落生长较多, 而另一块TCBS平板上仅在初始接种处有少许蓝绿色菌苔生长。 (3) 在直接接种平板时, 均可接种于普通营养琼脂平板、血平板, 便于菌落形态及溶血情况的观察。单核细胞增生李斯特菌溶血情况尤其值得注意。
3 涂片、染色
(1) 样品有时可直接涂片染色。 (2) KOH拉丝试验[3]:若革兰氏染色效果不理想, 可辅以此试验, 革兰氏阴性菌此试验阳性;革兰氏阳性菌此试验阴性。 (3) 区分杆菌、弧菌时可做氧化酶试验。
4 生化试验
(1) 接种生化反应管时应挑取三糖铁 (或双糖铁) 斜面上的纯培养物, 亦可用普通营养琼脂斜面上的纯培养物。 (2) 可多挑取几个可疑菌落接种三糖铁琼脂斜面, 以防遗漏。 (3) 接种三糖铁琼脂斜面产气不明显时, 可用带小倒管的单糖复核[4]。 (4) 若三糖铁 (或双糖铁) 斜面为黄色 (酸性) , 不宜做氧化酶试验, 会出现假阴性, 可挑取不含糖培养基上的纯培养物再做氧化酶试验[4]。 (5) 做ONPG试验时:黄色变化不太明显时, 一定要与阴性对照仔细对比观察。 (6) 尿素试验时:仅上层颜色变红应判为阴性, 这可能是细菌在有氧条件下分解蛋白胨产碱变色。 (7) 微量生化管有时结果不可靠, 产生疑问时可再辅以自配生化反应管。 (8) API 20E的生化反应结果有时与接种量相关, 在一次质量控制中, 小肠结肠炎耶尔森氏菌的API 20E试验结果中尿素试验就有不同:若按说明书上要求挑取一个菌落制成接种液, 尿素试验阴性;若挑取多个菌落制成微混的接种液, 尿素试验阳性。 (9) SIM动力试验效果不明显时, 可同时接种普通半固体。
5 血清凝集
(1) 挑取斜面上的纯培养物做凝集, 更易观察结果。 (2) 要做盐水对照。 (3) 注意诊断血清的有效性, 有时会出现有效期内的诊断血清失效。如果生化、菌落形态均符合而血清不凝集, 可用其它批号或生产厂家的诊断血清试试, 不能轻易否定。 (4) 做凝集试验时, 若凝集效价低或不凝集, 除考虑诊断血清的因素外, 还可能是因菌株的变异引起, 这时可以多传几代, 有时还须诱导。
6 讨论
(1) 在食物中毒或病人标本检测中, 增菌的同时, 可直接接种选择性平板; (2) 同一种致病性细菌可同时接种2种及以上选择性平板; (3) 同一种致病性细菌接种同一种平板可多种几块, 接种时, 接种量要有一定的梯度变化; (4) 平板当天观察后, 可以在室温下多存放2d或培养箱内多培养1d, 再观察, 菌落形态会更典型; (5) 使用显色培养基更易于检出致病性细菌。
摘要：为了更好的交流经验、共同提高、给疾病预防和控制提供及时准确的检验报告, 我们积极参加了扬州镇江徐州南通泰州五市实验室间比对工作, 根据几年来的检测情况, 下面就细菌质量控制浅谈几点体会。样品来源于扬州镇江徐州南通泰州五市市疾控检验科;样品为混有2～3种致病性细菌 (有时含有非致病性细菌) 的豆奶粉或半固体。
关键词：质量控制,致病性细菌
参考文献
[1] 李影林.临床微生物学及检验[M].吉林:吉林科学技术出版社, 1991:189.
[2] 何晓青.卫生防疫检验[M].江西:江西省卫生防疫站, 1980:16.
[3] 李仲兴, 郑家齐, 李家宏.诊断细菌学[M].香港:黄河文化出版社, 1992:96.
[4] 齐小秋.病原生物学检验-细菌[M].北京:卫生部病原生物学检验教材编写组, 2009:301.