论文题目：环维黄杨星D抗心律失常作用及其电生理机制研究
摘要：环维黄杨星D抗心律失常作用及其电生理机制研究心律失常是指心脏搏动的频率、节律以及冲动传导等任何一项的不正常,可分为快速性（如各种性质的早搏和心动过速等）和缓慢性（如各种传导阻滞等）心律失常,除器质性心脏病可引起各种各样心律失常外,其他系统疾病,如甲状腺功能亢进、慢性阻塞性肺病、血液性疾病、神经症等也会出现心律失常的症状。据2018年中国人健康大数据统计,22%的年轻人死于四大慢病之一的心脑血管病,而其中80%的人均有不同程度的心律失常。我国心率失常患者约有2000万,大约50%的患者死于突发性心律失常,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势,严重影响患者的生命和健康。经典的四类抗心律失常药物普遍存在潜在的致心律失常的风险,副作用大,对患者生存率和预后改善作用均不是特别理想。寻找抗心律失常新药,特别是从天然植物或者中草药中筛选安全有效、作用温和、无或低不良反应的有效成分;并对其作用机制进行探索,已成为目前新药研究的热点。环维黄杨星D（Cyclovirobuxine D,CVB-D）,是从黄杨科植物小叶黄杨及其同属植物的茎叶中提取的一种生物碱单体成分,是制剂黄杨宁片的主要有效成分。黄杨宁片已被纳入《中华人民共和国药典（2020版）》,许多临床和实验室证据表明,该药对心血管疾病有广泛的治疗作用,对心律失常、心肌缺血和心衰等均有良好的疗效。CVB-D作为一种活性化合物,在一定程度上代表了小叶黄杨抗心律失常活性的药理作用。由于抗心律失常药物的研发进展缓慢,CVB-D有望成为抗心律失常的候选药物。研究CVB-D的电生理作用特点及抗心律失常作用部位是阐明其抗心律失常作用机制的必要条件。心肌细胞膜上的离子通道是抗心律失常药物的靶点,有研究发现,CVB-D主要通过抑制钾电流,延长心室肌的动作电位,从而达到抗心律失常的目的。单细胞膜片钳在研究CVB-D的综合作用,特别是在心脏电传导方面存在不足。为了开发抗心律失常的候选药物,需要进一步研究CVB-D的详细电生理特性。所以本文拟从动物-器官-细胞三个水平进行研究,明确CVB-D抗心律失常作用以及电生理机制,以期为药物开发和临床用药提供实验依据。第一部分验证环维黄杨星D的抗心律失常作用目的:利用手术及药物诱导的大鼠心律失常模型,明确CVB-D抗心律失常的作用。方法:根据人和动物的体表面积折算系数,获得临床等效给药剂量。采用大鼠冠脉结扎和大鼠乌头碱诱导的经典心律失常模型,通过电生理记录仪,评价药物对室性心动过速出现及持续时间的作用,通过心律失常评分明确CVB-D抗心律失常的作用。结果:1.CVB-D对大鼠冠脉接扎诱导心律失常模型作用与模型组相比,CVB-D组（0.6 mg/kg）可使心律失常的评分由模型组的4±1降低到1±0（P＜0.05）;使室性心动过速的持续时间由258.2±117.7 s降低到0.6±0.1 s（P＜0.05）;室性心动过速的出现时间由644.6±167.8 s延长到1515.0±79.0 s（P＜0.001）。2.CVB-D对大鼠乌头碱诱导心律失常模型作用与模型组相比,CVB-D组（0.6 mg/kg）可显著降低室性心动过速持续时间（P＜0.001）。结论:CVB-D可以明显延长室速出现时间、降低室速持续时间和心律失常评分,明确了CVB-D对室性心律失常有治疗作用。第二部分在离体器官及细胞水平研究环维黄杨星D抗心律失常作用的电生理机制目的:利用离体心脏和心室肌细胞,研究CVB-D抗心律失常作用的电生理机制,探讨其抗心律失常的作用靶点,以期为新药开发和指导临床合理用药提供实验依据。方法:首先拟采用Mapping Lab多通道矩阵式心脏电生理标测系统结合Langendorff离体心脏灌流系统,在离体心脏水平记录电传导信号,然后采用700B单细胞膜片钳系统,在电流钳模式下记录豚鼠心室肌细胞的动作电位,在电压钳模式下记录大鼠心室肌细胞的钾电流和钙电流。结果:1.CVB-D对心脏电传导作用CVB-D（10μM、20μM、30μM）可使大鼠的心率由给药前的305±27bpm分别降低到223±12 bpm（P＜0.05）,197±9 bpm（P＜0.05）和143±42 bpm（P＜0.01）。CVB-D对房室结传导无影响,但能显著延长（20μM、30μM）时的心房传导速度和（30μM）时的心室传导速度（P＜0.05）。2.CVB-D对豚鼠心室肌细胞动作电位时程作用CVB-D（1μM）可以使豚鼠心室肌细胞动作电位时程的90%（APD 90）由647.5±58.5 ms延长到1062.4±112.4 ms（P＜0.001）。3.CVB-D对大鼠心肌细胞钾电流和电流-电压（I-V）关系曲线作用3.1 CVB-D（10μM、20μM、30μM）以浓度依赖性的方式抑制大鼠心肌细胞钾电流（P＜0.001）。3.2 CVB-D（10μM、20μM、30μM）可随浓度增高,使电流-电压（I-V）关系曲线上移,并不影响电流-电压关系。4.CVB-D对大鼠心肌细胞钙电流和电流-电压（I-V）关系曲线作用4.1 CVB-D（1μM、3μM、10μM）以浓度依赖性的方式抑制大鼠心肌细胞钙电流（P＜0.001）。5 m V电压下,CVB-D（1μM、3μM、10μM）标准化的钙电流分别是-0.85±0.06,-0.70±0.07和-0.42±0.06。4.2 CVB-D（1μM、3μM、10μM）可随浓度增高,使电流-电压（I-V）关系曲线上移,并不影响电流-电压关系。结论:离体心脏Mapping结果和膜片钳结果共同表明:CVB-D通过浓度依赖性的抑制心肌细胞钙电流和钾电流,延长心肌细胞动作电位时程;抑制心脏的自律性和传导性、减慢心率、减慢心房和心室传导速度、对心脏起到负性传导的抑制作用;发挥抗心律失常作用。
关键词：环维黄杨星D;抗心律失常;动作电位;膜片钳;离体心脏;电传导
学科专业：中药学（专业学位）
摘要
ABSTRACT
英文缩写
引言
第一部分 验证环维黄杨星D的抗心律失常作用
前言
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
第二部分 在离体器官及细胞水平研究环维黄杨星D抗心律失常作用的电生理机制
前言
材料与方法
结果
附图
讨论
小结
参考文献
结论
综述 CVB—D的药理作用及相关机制研究进展
参考文献
致谢