微生物发酵法范文

2024-05-11

微生物发酵法范文（精选12篇）

微生物发酵法第1篇

色氨酸又名氨基吲哚丙酸, 分子式:C11H12N2O2, 分子量:204.23, 为白色或微黄色的叶片状结晶或粉末, 无臭或微臭。有L-型 (左旋) 、D-型 (右旋) 和D L-型 (消旋) 三种旋光异构体, 其中L-型稍有苦味、D L-型和D-型味稍甜, 能被人类和动物吸收利用的只有L-型。在水中微溶, 溶解度为1.14g (25℃) , 可溶于热吡啶、稀酸或稀碱, 微溶于乙醇;若长时间光照则着色, 迅速加热至210℃时发黄, 289℃分解;与水共热时可产生少量吲哚, 如与氢氧化钠、硫酸铜共存时加热, 可产生大量吲哚;与酸在暗处加热较稳定, 与其他氨基酸、糖类、醛类共存时极易分解。

2 L-色氨酸的应用及市场前景

L-色氨酸对人和动物的生长发育、新陈代谢起重要的作用, 为第二必需氨基酸。

因其只能由微生物或植物合成, 人和动物易缺乏且只能从食物中摄取, 因此潜在需求量很大, 目前被广泛应用于医药、食品及饲料等领域, 其主要用途:

1) 用于氨基酸输液, 综合氨基酸制剂;

2) 用于孕妇营养补剂和婴幼儿特殊奶粉;

3) 用于治疗烟酸缺乏症 (糙皮病) 、烟瘾毒瘾;

4) 作为安神药, 可调节精神节律、改善睡眠;

5) 作为食品和饲料添加剂;

6) 作为合成5-羟基色氨酸的前体物。

近年来, 随着各行业对L-色氨酸的广泛应用, 使得L-色氨酸的市场需求量进一步增加。

目前世界L-色氨酸年总需求量在5万吨以上, 市场增长率超过10%, 而全世界只有1万多吨的产量。

由于L-色氨酸是工业化中最难生产的氨基酸之一, 且该产品的生产技术和市场主要被日本、美国和德国等发达国家的跨国公司所垄断, 导致市场价格偏高, 良好的市场前景使其生产技术成为研究热点。但色氨酸的生产一直都存在着成本偏高、工艺复杂等问题, 国内对其研究开展得较晚, 产率较低, 我国的技术水平同国外生产厂家相比, 还有比较大的差距, 尚无法进行大规模工业化生产。

由于产量太低, 仅有少数厂家能够少量生产, 且生产成本较高。我国每年需大量进口, 过高的价格严重制约了它的广泛应用, 尤其是饲料添加剂行业的应用受到限制, 只在仔猪饲料中添加。

因此, 提高L-色氨酸工业化生产的产量、降低生产成本, 是消除国外企业垄断、提高我国产品竞争力的唯一办法。

3 微生物发酵法生产L-色氨酸的研究进展

早期主要采用化学合成法及蛋白质水解法生产L-色氨酸, 但因原料获取困难、生产周期长、污染严重、工艺复杂等缺点, 在工业上生产应用并不广泛, 已逐渐被淘汰。

随着对微生物法生产各类氨基酸的研究不断深入, 微生物法已占主流, 此法又可分为直接发酵法、酶法和微生物转化法三大类。其中, 酶法和微生物转化法虽已实现了工业化, 但仍存在原料昂贵、转化率低等问题, 未得到大规模、低成本的推广。

以葡萄糖、甘蔗糖蜜等廉价物质为原料的直接发酵法具有产酸高、成本低和质量好的优势, 且所产色氨酸都是为生物所能利用的L-型, 因而是大规模生产L-色氨酸的首选技术。

微生物发酵法的发展进步以优良菌种的选育为重点, 其关键在于改进育种技术。

近年来, 随着重组D N A技术在微生物育种中的应用, 特别是代谢工程育种方式的兴起, 为优良的L-色氨酸生产菌株的筛选和产酸水平的提高提供了可靠的技术保障, 生产效率大幅提高, 使微生物直接发酵法生产L-色氨酸已经成为—种低成本的工业化生产方法。

3.1 L-色氨酸高产菌株的选育

直接发酵法利用微生物的某些营养缺陷型菌株, 通过代谢控制发酵, 人为地改变和控制微生物的代谢途径来实现L-色氨酸的生产。

此法的核心问题在于选育优良的菌株, 其优点是原料来源十分广泛易得、价格便宜, 是最早开发的色氨酸生产方法, 但在相当长的一段时间内达不到工业化生产的要求。主要原因是早期的研究仅依靠单一的化学或物理诱变手段选育色氨酸生产菌株, 但是色氨酸的生物合成途径调控机制极为复杂, 仅通过诱变方式无法根除所有的代谢调控作用, 因而无法获得优良的菌株用于生产L-色氨酸。

随着多种基因操作技术的发展, 在分析微生物代谢途径的基础上, 对基因水平上的代谢流进行合理调控, 成为微生物法生产色氨酸研究的热门方向。

利用基因工程方法进行选育是通过分子水平上最小限度的、最明确的基因突变来优化菌株。研究重点为构建高产色氨酸基因工程菌, 即运用代谢工程和基因工程手段, 通过抗反馈抑制突变体构建和阻遏蛋白敲除等方法获得高产色氨酸基因工程菌。

实践中多以大肠杆菌、黄色短杆菌和谷氨酸棒杆菌等作为选育色氨酸生产菌的出发菌株, 通过基因操作定向改造生物合成途径来获得高产菌株。比较常用的是大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌, 大肠杆菌具有遗传背景清晰、易于改造、容易培养、发酵周期较短等优势, 在微生物发酵中被广泛使用。谷氨酸棒杆菌是传统生产氨基酸的菌种, 其安全性已经受了长期的生产实践证明。

高产菌株的选育原则为:选择关键酶不再受到反馈抑制的突变子, 并破坏分解色氨酸的酶系。目前关于色氨酸的代谢工程研究大多集中在共同途径和色氨酸分支途径的改造上。

研究者还发现, 将携带有色氨酸操纵子的质粒导入细胞, 也可以成倍提高色氨酸产量。

A zum a等通过这些思路进行的菌株改造已经获得了较好的结果, 再经过多轮化学诱变, 并在发酵中期添加适量表面活性剂, 使色氨酸的产量大幅提高至54.5g/l, 是文献报道中大肠杆菌产色氨酸的最高产量。Ikeda等将转酮酶基因插入含有其它色氨酸关键酶基因的低拷贝质粒中, 并转化到谷氨酸棒杆菌中进行表达, 使色氨酸产量比对照组提高了15%, 达到58g/l, 是以谷氨酸棒杆菌为出发菌株的最好产酸水平。

3.2 生产L-色氨酸发酵条件优化

基因工程菌的发酵生产水平不仅和菌株的遗传特性有关, 也和发酵工艺控制 (即重组菌的培养条件及过程控制) 密切相关。我国对L-色氨酸生产技术的研究虽然开展得较晚, 但近年来各地研究者充分发挥发酵大国的优势, 不断努力地筛选高产菌株, 积极探索将基因工程的技术成果转化为生产力的各种途径。

通过对培养基组成、接种量、溶氧量、补料方式、比生长速率和无机盐等发酵控制的关键因素进行优化, 提高糖酸转化率和发酵液中色氨酸累积浓度, 缩短发酵时间, 进展迅速。

邹纯等以大肠杆菌为出发菌株的研究成果显著, 该项研究以大肠杆菌FB-04/p SV-04为研究对象, 通过一系列发酵优化:培养基的无机盐浓度为200%、通过指数流加策略控制葡萄糖流加速率, 将细菌在对数生长期的比生产速率控制在0.2h-1, 发酵效果较好。在3L罐上发酵53h, L-色氨酸的产量达53.4g/L, 与国外报道的最高水平接近。在此基础上进行30L发酵罐初步放大, 发酵55h, L-色氨酸的产量可达53.6g/L, 且发酵结果稳定, 具有工业化应用前景。

王东阳等以大肠杆菌TR JH 0709为供试菌株, 通过单因素和正交试验研究得出L-色氨酸合成的最佳发酵培养基为葡萄糖50g/L、硫酸铵15 g/L、酵母粉1.5 g/L和柠檬酸20 g/L, 其中葡萄糖含量对试验效果影响最大。在此最优条件下, 摇瓶产量可达19 g/L。在100L发酵罐上, 将残糖浓度、补料方式、柠檬酸钠添加质量分数、接种量及溶氧量分别控制在5g/L、溶氧控制脉冲补料、2 g/L、5%及10%~15%时, 发酵效果最好。在1吨发酵罐进行中试放大验证, L-色氨酸产量稳定在40g/l左右, 为目前国内中试放大的最好水平。尚未见国外有中试放大的研究成果报道。

黄静等通过对不同压力、培养温度、溶氧浓度、酵母抽提物和葡萄糖浓度的分析, 优化了大肠杆菌 (E.coli TR JH) 生产L-色氨酸分批补料发酵工艺, 选择在种子培养基中加入50ug/m l四环素, 在发酵培养基中添加4g/L酵母浸出物、控制温度在32℃、溶氧水平在20%~40%、葡萄糖浓度为5 g/L, 能显著提高生产菌的质粒稳定性和L-色氨酸产量。

并通过外源添加试验, 利用30L发酵罐进行分批补料试验, 得出结论:高浓度的N H 4+会导致菌体生长提前结束, 耗糖速率降低, 产酸受阻, 将N H 4+浓度控制在120m m ol/L以下, 可解除N H 4+对菌体生长和产物生成的抑制, 使菌体生物量和L-色氨酸产量大幅提高, 达到高密度发酵的目的。

杨海军等在10L自动发酵罐上研究了溶氧情况对谷氨酸棒杆菌产L-色氨酸的影响, 运用正交试验设计, 得到了最佳的分时段控制溶氧模式, 试验结果表明采用分段控制溶氧的方法, 比固定搅拌速度或固定溶氧浓度更有利于提高色氨酸产量。

郑辉在5L发酵罐上对谷氨酸棒杆菌JZ3356的接种量、发酵温度和溶氧浓度等发酵条件进行了研究, 优选出最佳培养基组成, 流加质量体积比为70%的葡萄糖, 最佳发酵条件为PH值6.8、温度35℃、接种量10%、溶氧浓度控制在20%~30%。

4 展望

随着人们对色氨酸的认识及研究的不断深入, 色氨酸的应用领域将越来越广泛, 但其工业生产规模却远未跟上市场需求。研究者们致力于基因工程技术、定向进化技术、代谢工程技术及基因组学、代谢组学等微生物育种方法的发展和应用, 将加速研究了解色氨酸的生物合成途径和代谢调节机制, 微生物育种方法将更加先进及多样化。

微生物发酵制药的研究论文第2篇

在上个世纪四十年代开始，发酵技术在生产方面得到了非常广泛的应用。到了现在，微生物发酵技术应用在制药领域当中，成为制药生产非常重要的一种技术手段，并且在制药领域的得到了大力推广。本文将对微生物发酵制药进行探讨。

1微生物药物的类别

借助一些科学原理和方法，制造出一些专门用于治疗或者预防的药物，这些药物就可以叫做微生物药物。这些药物是借助对发酵环境温度的控制，还有某些特定剂量的营养成分，从而制造某些药物的微生物。大部分的抗生素药物，都可以利用微生物制造出来。

2微生物发酵制药

微生物制药的技术有许多种，可以借助两个标准来判定应用的是哪一种微生物制药技术。这两个标准分别是：微生物的发酵环境，还有就是微生物发酵存放的设备。并且还可以根据微生物发酵环境的分别，将微生物发酵技术的分成下面几种类别：一种是好氧型;一种是厌氧型，还有一种是兼性厌氧型。对于这三种类型的微生物发酵技术，主要判定的依据就在于，微生物的发酵环境是否需要氧气的参与。好氧型发酵技术需要在有氧气的环境下进行，厌氧型微生物发酵技术对环境的需求是，不能有氧气的参与。对于兼性厌氧发酵技术则对环境有无氧气并没有多大的要求。依据微生物发酵存放设备的不同，可以将微生物发酵技术分为四种类型：一种是敞口发酵;一种是密闭发酵;一种是浅盘发酵;还有一种是深层发酵。对于敞口发酵，不需要太复杂的操作，并且使用的器具也较为简单。深层发酵的要求就更多也更为复杂。目前，在发酵工艺中，可用于发酵的微生物种类非常多。许多非人工合成的要素也可直接当做发酵的催化物。可以选用非人工的变异株进行发酵，这样可以降低成本，对原料的获取也较为便利。

3精简的发酵工艺过程

3.1提前制造菌种对于发酵工艺，在进行发酵工艺之前，先要进行菌种的选用以及纯化，保证菌种的制备。同时，在进行发酵时，还需要定期对菌种进行选育以及优化。

3.2对种子的培育对于种子的培育，就是指激活培养设备中休眠的菌种。将保存菌种的设备打开，把设备中存放的生产菌种放到试管斜面的培养基中，然后，激活试管斜面培养基中的菌种，并且让种子罐中的一些微生物进行繁殖，同时还要对微生物进行提纯。从而得到种子，这种种子，就是由菌种提纯而来。菌种的相关能力，还有制备的方式，提纯的纯度等，都会对发酵物产生直接的影响。有非常多的方式可以对种子进行培养。比如，用菌丝进罐培养的方法，利用摇瓶培养，把摇瓶种的液体直接接入到种子罐，然后直接在种子罐中让菌种繁殖。还有一种方法是孢子进罐培养。这种培养方式就是直接利用种子罐对孢子进行培养。要依据菌种不同的性质，选择何种培养的方式。

3.3菌种对发酵物的发酵在发酵工艺中，有一个非常重要的菌种培养环节，就是在无菌的状态下，培养纯种的微生物。菌种培养需要在严格的无菌环境下进行，因此，在进行菌种培养之前，对菌种培养所需要用到的设备，以及所需处在的环境进行消毒处理。对培养设备进行消毒可以选用饱和蒸汽，只需要将120摄氏度的饱和蒸汽维持三十分钟就可以。

3.4游处理在处理完上述的整个微生物发酵的工艺中，需要进行最后一步游处理。游处理需要先将发酵液中的微生物细胞提取出来，得出的就是发酵的产物，利用发酵工艺得出的产物，可以用作生物药物的制作生产。

4结论

秸秆的微生物发酵处理与饲喂技术第3篇

一、微生物发酵秸秆的利用效能

秸秆的主要成分是粗纤维、木质素、粗蛋白、胶质物和抗营养物质，其中蛋白质含量仅3%～6%，中性洗涤纤维及酸性洗涤纤维占干物质很大比重，这些物质很难被牛、羊等直接消化利用。在秸秆微生物发酵处理过程中，微生物会大量繁殖，分泌木质素酶、纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶等来降解和转化木质素、纤维素等，并提高蛋白质含量。麦秸经微生物发酵处理后，蛋白质含量能增加16%～18%，纤维分解率为31%，消化率为50%;稻草经微生物发酵处理后，消化率能提高至58%;玉米秸经微生物发酵处理后，消化率能提高至61%。

用微生物发酵秸秆喂养牛、羊，日增重能提高30%以上，具体益处如下：一是促进动物体内微生物平衡，促进消化吸收，抑制或消灭有害微生物等，增强抗病力;二是激发动物体产生抗体，可提高免疫力;三是有益微生物在动物肠道内新陈代谢会产生氨基酸、消化酶、维生素和有机酸等并合成菌体蛋白，可加快动物生长;四是会降低动物肉中脂肪和胆固醇含量10%～40%，使肉质更鲜嫩，烹制后风味更香浓;五是可大大降低动物粪便的臭味。

二、秸秆的选择和微生物发酵的条件

秸秆要新鲜、干湿度适宜、无霉变、无腐烂且无泥土等杂物。一般要求秸秆含水量为60%～70%，即用手紧握，指缝间有水滴但不滴下。进行微生物发酵处理前，秸秆要切成长4～6厘米的小段或粗粉碎，以利操作、处理和饲喂。

秸秆微生物发酵处理可选用的盛器有水泥池、大缸或特制增厚塑料袋等，事前要清洗2～3次，用医用酒精等喷洒消毒。装料时要压紧实，尽量排除空气，最后用较厚塑料薄膜等封盖严实，以防漏气。发酵的适温为10～40℃，在此温度范围内，温度越高，发酵速度越快。

三、秸秆微生物发酵处理方法

一般250千克秸秆，用水60～80千克（视情况适量增减用量），白（红）糖500克，发酵菌液500克（具体用量参见相关产品说明书）。糖先用30～40℃水溶解，加入水和发酵菌液配制成稀释液，与秸秆充分混拌均匀，装填后加以密闭。在气温5～40℃情况下，南方夏天发酵4～5天、冬天发酵8～10天即可饲用，北方夏天发酵8～10天、冬天发酵10～15天即可饲用。

秸秆不同发酵处理的配方也略有差异：玉米秸秆1000千克，微贮宝50毫升（具体用量参见相关产品说明书），食盐7.5千克，水分含量控制为60%～65%;稻草1000千克，微贮宝50毫升，食盐8.5千克，水分含量控制为60%～65%;麦秸1000千克，微贮宝50毫升，食盐8千克，水分含量控制为60%～65%。先将每袋50毫升微贮宝倒入水温40℃、含白糖1%的2000毫升水中，放常温下活化1～2小时，再将此混合液倒入0.7%～1%的食盐溶液中混匀，以备用。装料时，每铺20～30厘米厚的秸秆就均匀喷洒1遍菌液，如此反复，至料高出池面20～30厘米止，此时最好按每平方米250克的量均匀撒上食盐（不撒亦可），再用厚塑料薄膜盖好密封。

四、饲喂方法

用微生物发酵秸秆饲喂牛、羊，日粮配方为：微生物发酵秸秆40%（据情可变动10%～20%），青干草25%（据情可变动10%），饼（粕）料15%（据情可变动5%），玉米或麦麸等20%（据情可变动5%），磷酸氢钙1%，碳酸氢钠0.6%，微量元素按产品使用说明添加。微生物发酵秸秆用量要缓慢增加，一般要经5～10天过渡才能达到标准用量。

微生物发酵秸秆松软可口，有酸香味，能增加牛、羊等采食量20%～30%，经实践，如每天添加2.5千克精料，每头肉牛日增重能超过1.5千克;若饲喂奶牛，在适当增加青草料供给的情况下，每头每天可多产奶2～3千克。

（作者联系地址：江西省奉新县畜牧水产局邮编：330700）

微生物发酵法第4篇

1实验材料

1.1仪器

T9系列双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) 。

1.2试剂

面粉、安琪酵母购于市场, 其他相关试剂均购于国药集团化学试剂有限公司。

1.3样品

本实验所用原料药材刺玫果购于辽宁省西丰县, 芦丁对照品购于中国食品药品检定研究院, 批号为:100080-201409。

2实验方法与结果

2.1发酵原液的制备

取面粉100g, 加水1000ml, 再加10安琪酵母, 35℃水浴保温2h, 活化酵母液备用。

2.2刺玫果发酵液的制备

将刺玫果粉碎成细粉, 过100目筛, 取细粉100g, 加入上述发酵原液, 拌匀, 调p H 8.5, 35℃保温间歇搅拌条件下发酵72h, 滤取上清液, 调p H 6.5, 减压浓缩, 75℃干燥后粉碎, 即得样品1。

2.3刺玫果醇提液的制备

取刺玫果100g, 加稀乙醇回流提取5小时, 滤过, 滤液备用;残渣加水煎煮二次, 第一次4小时, 第二次2小时, 滤过, 合并滤液, 回收乙醇, 浓缩, 干燥后粉碎, 即得样品2。

2.4刺玫果原粉的制备

取2.2的刺玫果细粉, 即得样品3。

2.5对照品溶液的制备[3]

取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量, 精密称定, 加60%乙醇制成每1ml含0.2mg溶液, 即得。

2.6标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.5ml, 1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml, 分别置10ml量瓶中, 各精密加亚硝酸钠溶液 (1→20) 0.3ml, 硝酸铝溶液 (1→10) 0.3ml, 加氢氧化钠试液4ml, 用60%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 放置15分钟。照紫外分光光度法测定检验标准操作规程 (BXT02-J01-10) 试验, 在505nm波长处测定吸收度, 以吸收度为纵坐标, 浓度为横坐标, 绘制标准曲线。

2.7测定法

精密量取相应样品1g, 置100ml量瓶中, 加60%乙醇至刻度, 摇匀, 精密量取2ml, 置10ml量瓶中, 照标准曲线的制备项下的方法, 自加“亚硝酸钠溶液”起, 依法操作;另精密量取本品1ml置100ml量瓶中, 加60%乙醇稀释至刻度, 精密量取2ml, 置10ml量瓶中, 加60%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 作为空白校正;依法测定吸收度, 减去空白校正。从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量, 计算, 即得。

3结果与讨论

3.1实验结果

对上述样品1、2、3, 分别按上述方法进行检测, 做平行样, 含量测定结果见表1。

3.2讨论

刺玫果粉碎后经酵母35℃发酵3天后, 所得酵母发酵品比传统的提取方法总黄酮浸出量明显提高, 说明微生物发酵法有利于保存刺玫果里的总黄酮成分, 发酵法优于传统的提取方法。

本文在检测其主要成分总黄酮时也是以无水芦丁计, 而不是以具体的某个黄酮来计算, 所得结果只是总黄酮一种替代表现形式, 刺玫果成分复杂, 黄酮类成分是其主要的有效成分之一, 就黄酮类成分而言, 微生物发酵法可作为一种有效成分的提取方法。对其它成分及药理作用的影响, 还有待进一步的研究。

参考文献

[1]张远.刺玫果提取物对心血管系统的作用, 1985 (1) .

[2]韩慧民.刺玫果总黄酮对心血管系统的药理作用, 1987 (1) .

微生物发酵法第5篇

随着社会的发展与进步,历史悠久的传统主食发酵剂逐渐被面包酵母所代替.面包酵母在为人类带来极大方浇便的同时,也存在一定的劣势.如今人们对主食提出了更高的要求,消费趋势也随之改变,传统主食发酵剂能够满足消费者的口味,因而再度受到极大关注.国外已开展多年酸面团的研究,其微生物,尤其是乳酸菌的`研究已取得较大成就.我国有着丰富的传统主食发酵剂资源,但应用及研究仍停留在初级阶段,因而筛选出代表性菌种并应用于工业化生产是首要任务.

作者：苏东海胡丽花苏东民 Su Donghai Hu Lihua Su Dongmin 作者单位：苏东海,Su Donghai(北京电子科技职业学院生物技术系,北京,100029)

胡丽花,苏东民,Hu Lihua,Su Dongmin(河南工业大学粮油食品学院,河南,郑州,450052)

生物发酵饲料的制备及其应用第6篇

一、生物发酵饲料的作用机理

生物发酵饲料含有较多的纤维分解菌、半纤维分解菌、微生物酶等有益微生物，在动物体内发酵，不但能将畜禽难以消化吸收的粗蛋白质、淀粉中的大分子物质加工分解成易消化吸收的葡萄糖、氨基酸和维生素等小分子营养物质，而且能大大降解粗纤维，产生大量的生物活性物质，从而提高饲料的消化吸收率和营养价值。

另外，生物发酵饲料中的有益微生物还能杀死病原菌，维持动物体内微生态平衡，增强机体的免疫力，因此还具有一定的防病治病的作用。

二、生物发酵饲料的制备

1. 生物发酵饲料的配方

统糠或草粉55％、麦麸15％、饼粕9%～11％、玉米15％、蜂蜜或红糖2%～4％、有益微生物制剂2％（主要有纤维素分解菌类、芽孢杆菌类、乳酸菌类、双歧杆菌类、酵母菌类等菌落）。

2. 生物发酵饲料的制备

有益微生物制剂分为固体型和液体型两种，固体型制剂可直接使用，而液体型需先将其倒入无漂白粉的自来水或深井水中溶解，再加入红糖或蜂蜜制成均一的含糖菌水备用。

①使用固体型有益微生物制剂制备生物发酵饲料流程：称取原料→粉碎后过筛（筛孔直径约1毫米）→加入固体型有益微生物制剂→加入糖水→搅拌均匀。

②使用液体型有益微生物制剂制备生物发酵饲料流程：称取原料→粉碎后过筛（筛孔直径约1毫米）→加入含菌糖水→搅拌均匀将搅拌好的饲料置于挖好的发酵池或密闭容器中，轻轻用力压实后，用一直径约2厘米左右的木棒在饲料中打孔到容器底部，孔距为5～10厘米，最后以塑料薄膜紧贴饲料盖好让其自然发酵。发酵时间视当时气温而定，一般气温25℃以下时4～5天，气温25℃以上时2～3天。

注意事项：①发酵前的饲料料水重量比应为1∶0.5左右（即饲料手捏成团、落地即散）。②装料时需要轻轻用力压实，切忌太实太满，注意四角不要落空以防霉变。③使用木棒打孔时一定要打到底部，以利散热。

发酵完成后，饲料pH值达到4～5，并伴有浓郁的酒香味，即发酵成功。如果饲料变硬、结块、甚至伴有难闻的气味，则多由密封不严造成，这种饲料不可用。此外，原料脏、密封慢也会造成饲料变质。

三、生物发酵饲料的应用

1. 参考配方

①小猪配合饲料。配方A：生物发酵料20％，玉米52％，豆粕或豆饼22％，鱼粉或复合蛋粉2％，预混料4％。配方B：生物发酵料15％，玉米44％，豆粕或豆饼24％，糠麸杂粮10％，鱼粉或复合蛋粉3％，预混料4％。

②中猪配合饲料。配方A：生物发酵料25％，玉米50％，豆粕或豆饼21％，预混料4％。配方B：生物发酵料21％，玉米38％，豆粕或豆饼24％，糠麸杂粮10％，鱼粉或复合蛋粉3％，预混料4％。

③大猪配合饲料。配方A：生物发酵料30％，玉米38％，豆粕或豆饼16％，糠麸杂粮12％，预混料4％。配方B：生物发酵料35％，玉米33％，豆粕或豆饼16％，糠麸杂粮12％，预混料4％。

以上各配方分A、B两种，两者从营养价值和能量的角度并无多少差别，可以根据当地原料行情，因时因地选择应用。

2. 饲喂方法

使用生物发酵饲料配合料饲喂猪只，一般不需再添加其他添加剂，投喂前也不需蒸煮，可在饲喂前用水拌湿（以手握不出水为宜）后直接饲喂。饲喂时，小猪可定时多餐，中、大猪可自由采食不定量，每次投料量以在半小时内吃完，槽内不剩料、不舔槽为宜。

市面出售的生物发酵料多为干燥产品，购回后应置于阴凉、干燥、通风处保存，以免发生霉败变质，引起猪只中毒，同时应注意防止鼠害、虫害等。

微生物发酵法第7篇

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择2头安装有永久性瘤胃瘘管的健康成年延边黄牛(来自延边大学农学院动物科学系实验牧场),每日饲喂2次(07:00和17:30),自由饮水。

1.2 试验设计

基础日粮精粗比为6∶4。体外培养底物精饲料(玉米-豆粕型)、粗饲料(苜蓿草和未发酵花生壳)比例为7∶3。人工唾液的配制参考E.I.Mc Dougal[3]的方法。

试验采用单因素试验设计,根据培养底物中饲粮精粗比不同分为4组,每组3个重复,A组为高精料组,玉米、苜蓿草粉比例为7∶3;B组为低精料组,玉米、苜蓿草粉比例为3∶7;C组为高精料组,玉米、未发酵花生壳比例为7∶3;D组为低精料组,玉米、未发酵花生壳比例为3∶7。在培养12 h内各时间点分别测定瘤胃产气量、p H值及NH3-N、挥发性脂肪酸、二氧化碳、氢气、甲烷含量。

1.3 测定项目

在发酵1,3,6,12小时时采集瘤胃液,用雷磁p HS-3C p H计测定p H值。在培养1,3,6,12小时时分别取体外培养液1 m L,用靛酚比色法测定NH3-N含量[4]。用安捷伦(GC-7890A)气相色谱仪采用外标法测定挥发性脂肪酸(VFA)含量,用火焰离子检测器(FID)进行检测[进样温度为170℃,柱温为120℃,检测器温度为200℃,色谱柱型号为Agilent 19091F-112(25 m×320μm×0.5μm)]。在培养1,3,6,9,12小时时得到的样品产气压分别转化成产气体积,依照空白试验校正并计算累计产气量。用岛津GC-20140气相色谱仪采用外标法测定CO2、H2、CH4含量[用TCD检测器进行检测(色谱柱型号为HS7 VPCPⅡ)m×4 mm]。

1.4 数据的统计分析

试验数据采用Excel 2007软件进行初步处理后,采用SPSS 17.0中的one-way ANOVA程序进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 未发酵花生壳对瘤胃微生物体外发酵p H值的影响

见表1。