高效的液相色谱法

高效的液相色谱法（精选12篇）

高效的液相色谱法 第1篇

目前AMPS作为有效的改性单体已经渗入油田化学品各个领域的聚合物改性, 很好解决了采油聚合物中抗盐性、抗高温性、抗剪切三大棘手问题。中国AMPS最大市场是油田三次采油, 作为钻井液、完井液和压裂液等。目前中原油田等已经将AMPS聚合物作为油田三次采油的化学品立项, 预计仅此一项2005年国内将至少消耗1万吨。

目前全球约1/3的AMPS单体用于水处理工业。AMPS的均聚物或与丙烯酰胺、丙烯酸等单体的共聚物, 可作为污水净化过程中的淤泥脱水剂;在封闭水循环系统中用作铁、锌、铝、铜以及合金的防腐剂;还可用于加热器、冷却塔、空气净化剂和气体净化剂的除垢剂、阻垢剂等。国外大量使用表明, 以AMPS作为处理剂用量少, 效果优于现有聚丙烯酰胺类水处理剂。目前国内一些大中城市污水处理已经开始使用AMPS, 其中华东年消耗约300吨, 华南年消耗约150吨, 京津唐年消耗200吨, 年总消耗量约650吨, 预计2005年将达到1000吨。

目前AMPS已成为国内引人瞩目的热点有机化工原料, 部分科研机构的合成技术也较成熟, 尤其是中国许多油田处于三次采油期, 国内水处理领域用量巨大, 都对AMPS质量和数量提出了更高更多要求。因此, 国内在加快建设AMPS装置的同时, 应加大应用研究力度, 以促进AMPS工业健康快速发展。

AMPS单体的纯度对其后续的加工有着很大的影响, 本文建立了一种快速分析AMPS单体纯度的方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与药品

HP1100高效液相色谱仪 (美国Agilent) , 包括G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器和G1329A自动进样器;Milli-Q超纯水仪 (美国Milli-Pore公司) ;磷酸、磷酸二氢钾均购自北京分析试剂厂, 均为分析纯;甲醇为Fisher试剂公司色谱纯;水为超纯水。

1.2 溶液配制

流动相的配制:以甲醇体积含量为5%的超纯水溶液为溶剂, 配制0.01mol/L KH2PO4磷酸盐缓冲液, 并以5%磷酸调节溶液p H为2.3, 经0.45μm水系滤膜过滤后备用。

1.3 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相:0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节p H为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0m L﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。

1.4 标准曲线的制备

因实验室没有AMPS的标品, 所以使用日本的7号样品作为标准来测定其他样品的相对纯度。

根据前述实验步骤和条件, 按表一将混合标准溶液 (M溶液) 逐级稀释, 得不同浓度的标准溶液, 经0.45μm水系滤膜过滤后, 以进样5μL进行色谱分析, 以对照品浓度 (X) 对峰面积 (Y) 进行线性回归, 得工作曲线:

1.5 样品的测定

将样品按照1.4的方法配制, 以5ul进样量进入色谱分析, 结果见表2。

1.6 讨论

以上分析六种AMPS单体的纯度, 从测定结果 (图1) 可以看出, 样品在色谱柱中的保留时间完全吻合, 具有很高的精确度。在实际的AMPS聚合工作中, 同等条件下2号样合成效果最好, 3号样聚合效果最差, 与色谱分析的纯度结果一致, 说明这种方法是可行的。所建立的分析方法不仅用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。

由于实验室缺少AMPS的标品采用了日本产7号样作为相对标准, 在以后的检测工作中应使用AMPS的标品作为标准物, 以取得准确的数据。

2 结论

本文建立了高效液相色谱法测定AMPS单体的方法, 该方法准确、简便、快速, 不仅适用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。该方法可用于目前市场上一些油田化学原料的检测分析, 便于区分不同批次样品纯度, 方法简便易操作。

摘要：本文建立了分析油田化学常用原料AMPS的高效液相色谱 (紫外检测器) 的方法。色谱柱为ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相采用0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节pH为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0mL﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。采用该方法可以应用该法对不同来源AMPS单体原料进行了成功分析检测, 分析过程简便、结果可靠, 可用于固井水泥外加剂合成原料的纯度分析。

关键词：液相色谱,纯度分析,油田化学品原料

参考文献

[1]刘约权.现代仪器分析.2版[M].高等教育出版社, 2006, 5.

[2]于世林.高效液相色谱方法及应用.2版[M].北京:化学工业出版社, 2005, 6.

[3]张玉奎, 张维冰, 邹汉法.液相色谱分析.2版[M].北京:化学工业出版社, 2000.12.

[4]杨根元.实用仪器分析.3版[M].北京大学出版社, 2006, 2.

[5]谢音, 屈小英, 主编.食品分析[M].科学技术文献出版社.

[6]杨松成.第十届全国有机质谱学学术会议[Z].1999.

[7]S Strohschein, M Putsch, K Albert.J Pharm Biomed Anal, 1999, 21:669[Z].

[8]刘珍.化验员读本《仪器分析》 (下册) .4版[M].北京:化学工业出版社, 2004:4112 426.

[9]李海生, 白海娇.高效液相色谱应用中的若干问题与方法[J].天津药学, 2006 (4) :6.

[10]王俊德, 商振华.高效液相色谱法[M].北京:中国石化出版社, 1992:133.

高效的液相色谱法 第2篇

高效液相色谱法测定糠醛废水中的糠醛含量

采用HPLC方法,以Symmetry 5 μm C18(3.9 mm×150 mm)为色谱柱,在流动相V(甲醇)∶V(水)=70∶30,流速1.0 mL/min下,采用双波长紫外检测器,利用外标法在275 nm下测定糠醛废水中糠醛的含量.此法相对标准偏差RSD＜4.84%(n=6),r=0.999 9,实际样品的平均加标回收率为96.9%～112.5%.

作 者：康春莉 唐晓剑 于宏兵 林学钰 Kang Chunli Tang Xiaojian Yu Hongbing Lin Xueyu  作者单位：吉林大学环境与资源学院,吉林,长春,130012 刊 名：工业水处理  ISTIC PKU英文刊名：INDUSTRIAL WATER TREATMENT 年，卷(期)：2007 27(6) 分类号：O657.7 关键词：糠醛   高效液相色谱   废水处理  

高效的液相色谱法 第3篇

关键词：地西泮 液相色谱 猪肉

中图分类号：S816 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0041-02

地西泮又名安定，是一种具有镇静、抗惊厥作用的药物，常用于治疗成人焦虑、失眠等症状。但据了解，目前有些养猪场在育肥阶段，在饲料中添加地西泮，以达到减少动物运动，促进睡眠，提高长成效率的目的。由于地西泮具有成瘾性，如长期摄入可致耐受与依赖性，且对新生儿、哺乳期妇女、孕妇影响显著，农业部公告235号规定，地西泮只能用作动物疾病治疗应用，不得用作饲料添加剂，在动物性产品中不得检出地西泮药物残留。

2014年1月1日实施的GB 29697-2013标准中，规定了动物性食品中地西泮的国标测定方法为气相色谱-质谱法，该方法对实验室仪器条件要求较高，本文探索一种使用液相色谱对猪肉中地西泮残留检测的方法，该方法适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与装置

Agilent1100高效液相色谱仪；Grace Smart RP18 （250×4.6mm，5μm）色谱住；分析天平；冷冻离心机；高速匀浆机；旋转蒸发仪；氮气吹干仪；固相萃取装置。

1.2 主要材料与试剂

乙腈、甲醇：色谱纯；无水硫酸钠、乙酸铵、异丙醇、冰醋酸、高氯酸、三乙胺：分析纯；地西泮：标准品；1%高氯酸溶液；C18固相萃取小柱（500mg，3ml），含碳量为17%；微孔针筒式滤膜：0.2μm。

标准溶液的制备：称取50.0mg地西泮，用乙腈溶解并于50ml容量瓶定容，取此标准贮备液，用1%高氯酸水溶液稀释成浓度为0.05，0.10，0.20，0.50和1.00μg/ml的标准工作液，进样测定。

1.3 试验条件

色谱柱：Grace Smart RPC18 （250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.02M乙酸铵水溶液（60：40，v/v）；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样量：50μl。

1.4 样品的提取与净化

称取5g（准确至0.01g）匀浆试样，加无水硫酸钠5g，用20ml乙腈提取，经超声、离心后，取上清液，重复一次，收集两次提取液于鸡心瓶中，加5-10ml异丙醇，旋蒸至近干，用5ml甲醇-水（2：8，v/v）溶解。C18固相萃取柱平衡后，将上述复溶液上样；再用5ml甲醇-水-三乙胺（35：65：0.1，v/v）洗滌小柱；最后用5ml甲醇-乙酸（95：5，v/v）洗脱样品残留，收集洗脱液。洗脱液经氮气吹干，用1%高氯酸水溶液1ml，正己烷2ml复溶，取下层水相过0.2μm滤膜，供HPLC分析。

2 结果与讨论

2.1 方法的线性

本方法采用浓度为0.05，0.10，0.25，0.5，1.0ug/ml的标准样品，作标准曲线，地西泮的线性相关系数分别为0.9997，标准曲线见图1。

2.2 方法最低检出限的确定

检出限由添加的最低浓度得出，按照3倍信噪比设定地西泮检出限，本方法的最低检测限为0.01mg/kg。

2.3 准确度与精密度实验

以空白猪肌肉样品做3个浓度的加标回收实验，每个浓度做6个平行样，具体实验结果如下：

（A）空白猪肉样品（B）添加浓度为0.01mg/kg猪肉（C）0.05ug/ml标准溶液。

经测定，猪肉的平均回收率分别为89.1-92.3%，本方法的精密度好，准确度高，操作简便，适合推广应用。

3 结语

本研究提供了一种液相色谱法检测猪肉中地西泮含量的方法，是对气质联用的国标测定方法的有效补充，本方法回收率、精密度均理想，采用实验室常规的仪器设备和试剂，适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

参考文献

[1]中国农业部公告235号 （2003）.

[2]中华人民共和国药典，国家药典委员会编.化学工业出版社，2005年版，二部.

[3]M.L. Olmos-Carmona， M. Hernandez-Carrasquilla， J. Chromatogr. B. 734 （1999） 113.

[4]T. Edeki， D.W. Robin， C. Prakash， I.A. Blair， A.J.J. Wood， J. Chromatogr. 577 （1992） 190.

高效的液相色谱法 第4篇

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪,美国Agilent公司生产,二极管阵列检测器,配有自动进样器;试管、旋涡混合器、针头式过滤器、微孔滤膜(孔径0.45 μm)等实验室常规设备。

1.2 试剂

1.2.1 尼古丁

纯度为98%(比重1.012),乙醚、氢氧化钠为分析纯。

1.2.2 尼古丁标准溶液配制

取8.0 μl尼古丁,用0.025 mol/L H2SO4溶液稀释至100 ml,配成80 μg/ml尼古丁标准液。

1.3 实验步骤

1.3.1 尿样的采集

用聚乙烯塑料瓶,采集吸烟者尿样,4 ℃冰箱贮存,1周内分析。

1.3.2 尿样的处理

于10 ml具塞磨口试管中加入4 ml尿液和0.8 ml 13 mol/L的NaOH溶液,充分混匀后,加入1 ml尼古丁提取液乙醚,在旋涡混合器上振动2 min,3000/min(离心半径=15 cm)离心5 min。取上层有机相,针头式过滤器过滤(滤膜孔径0.45 μm),滤液放入自动进样器小瓶,待分析用。

1.3.3 色谱分析条件

见表1。

1.3.4 尿肌酐的测定

取1 ml尿样子小试管中,测定尿肌酐含量[3]。

1.3.5 计算

按下式计算尿中尼古丁的浓度。

undefined

式中:C—尿中尼古丁的浓度,μg/g肌酐;C0—由标准曲线查得的尼古丁的浓度,μg/L;C肌酐—尿样肌酐浓度,g/L。

1.3.6 空白实验

取4 ml非接触者混合尿于试管中,与样品同时进行测定。

1.3.7 标准曲线绘制

取6支试管,以尼古丁标准溶液配制0、20、80、160、320、800 ng/ml标准液。标准系列按尿样处理步骤操作,取待测液100 μl,进高效液相色谱仪测定,每个浓度重复进样6次,以被测物含量为横坐标,被测物峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。

1.3.8 样品测定

取样品待测液100 μl,进高效液相色谱仪测定,同时测定样品空白,以保留时间定性,峰面积定量。

2 结果与分析

2.1 流动相的选择

通过参考相关文献查到检测尼古丁的色谱条件[2],并通过调整各实验条件,最终确定了检测尿中尼古丁的最佳条件,得到高效液相色谱检测尿中尼古丁含量的色谱图,图1表明,尿中尼古丁的标准峰(5.630 min)与尿样杂质峰之间有效分离。

2.2 样品的处理方法

如尿样较浑浊,尿中蛋白含量较高,影响分析效果,需将尿样过滤。

2.3 标准曲线、检出限

标准曲线的测定点包括6个浓度,每个浓度测定6次,以6次测定值的平均值与相应的浓度绘制标准曲线。以3倍信噪比作为检出限,结果见表2。

2.4 尿样加标回收率及精密度试验

取尿样6份,测定本底值,相互调配混合,配制成高中低3种浓度的混合尿,分别加入不同浓度的尼古丁,按上述步骤分析,结果见表3。

由上表可以看出,高、中、低3种浓度加标回收率大于91.5%,变异系数小于6.0%。

2.5 尿样保存时间试验

取尿样6份混合,配制成混合尿。将混合尿分成4组,每组6份。普通冰箱(4 ℃)保存。分别在当天、第3天、第7天、第14天各分析1组,以当天测定均值为100%,其余各组均值与其相比,计算相对偏差,结果见表4。

由表4数据可以看出,尿样在普通冰箱中4 ℃保存,1周之内相对偏差小于9.03%。

2.6 干扰试验

尿中肌酐及有机酸如SCN-等对尼古丁无干扰。

3 小结

本法测定尿样中的尼古丁的含量,在0～800 mg/L范围内呈线性关系,最低检测限为0.35 ng,加标回收率大于91.5%,相对标准差<6.0%。上述各项指标均符合分析要求。方法灵敏,快速,样品处理简单,干扰因素少。分析结果可反映人群暴露于环境烟草烟雾中的水平,可为流行病学研究提供实验室定量依据。

参考文献

[1]胡俊峰,陈自强.卷烟生产女工尿中尼古丁排泄的动态研究.卫生毒理学杂志,1994,8(2):69-71.

[2]Tyrpien K,Wielkoszynski T,Janoszka B,et al.Application of liqUid separation techniques to the determination of the main utinary nicotine metabolites.J Chromatogr,2000,870:29-38.

高效的液相色谱法 第5篇

对织物涂层整理剂中微量甲醛的高效液相色谱分析方法进行了系统研究,对衍生条件和色谱分离方法进行了探讨,实现了对涂层整理剂中微量甲醛的准确定量.该方法线性关系良好,回归方程为y=3.892 9x+10.123(r=0.999 93),线性范围为8.0～400 mg/kg,加标回收率在93.2%～106.6%范围,不同浓度样品相对标准偏差在1.6%～6.8%之间.

作 者：赵婷 赵梅 温正如 许伟 ZHAO Ting ZHAO Mei WEN Zheng-ru XU Wei 作者单位：赵婷,赵梅,温正如,ZHAO Ting,ZHAO Mei,WEN Zheng-ru(浙江传化股份有限公司,浙江,杭州,311215)

许伟,XU Wei(陕西科技大学资源与环境学院,陕西,西安,710021)

高效液相色谱法测定格列吡嗪片含量 第6篇

【关键词】格列吡嗪片；格列吡嗪；测定

格列吡嗪为格列吡嗪片主要成分[1-5]。格列吡嗪化学名称为：1-环己基-3-{4-[2-（5-甲基吡嗪-2-酰胺）-乙基]苯磺酰}脲[6-9]。格列吡嗪片适用于经饮食控制及体育锻炼2-3个月疗效不满意的轻、中度2型糖尿病患者，且无急性并发症（如感染、创伤、酮症酸中毒、高渗性昏迷等）[10-13]。目前主要生产格列吡嗪片的厂家有潍坊中狮制药有限公司、山东仁和堂药业有限公司、北京优华药业有限公司、北京京丰制药有限公司、贵州圣济堂制药有限公司、海口奇力制药股份有限公司、黑龙江瑞格制药有限公司、北京天衡药物研究院南阳天衡制药厂、哈药集团制药总厂等。本文用高效液相法对格列吡嗪片中的格列吡嗪的进行了含量测定。

1.仪器与试药

DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）； FA114电子分析天平（成都市科恒达仪器设备有限责任公司）；TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘順源科技有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；LC-600高效液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）。盐酸（常州市弘裕化工有限公司）、甲醇（上海谱振生物科技有限公司）、冰乙酸（上海跃胜贸易有限公司）、乙腈（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸（湖北巨胜科技有限公司）。

2.含量测定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相；检测波长为225nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按格列吡嗪峰计算应不得低于2000。

2.2供试品溶液的制备

取格列吡嗪片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加流动相适量超声溶解，放凉，流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.3对照品溶液的制备

精密称取格列吡嗪对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含格列吡嗪10μg）。

2.4阴性干扰试验

按方中比例取格列吡嗪片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与格列吡嗪相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备

制备浓度为4、8、16、20、24、28、32μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，格列吡嗪对照品在4～32μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6精密度试验

精密吸取格列吡嗪对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.59%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7重现性试验

分别称取同批格列吡嗪片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.61%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品格列吡嗪峰面积积分值的RSD为0.53%。结果表明格列吡嗪至少在4h内稳定。

2.9回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的格列吡嗪对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.2%，RSD为0.73%。

2.10样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定格列吡嗪片三批样品中格列吡嗪的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.5%、101.1%、100.6%。

3.讨论

分别考察乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46），乙腈-甲醇-水（20∶10：70），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），磷酸盐缓冲液（ 0.01mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值6.0）-乙腈（ 50：50）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相。格列吡嗪片原有质量标准为分光广度法，没有采用高效液相法。本实验采用高效液相法对格列吡嗪片中格列吡嗪的含量进行测定，为今后对格列吡嗪片的质量标准修订提供依据。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定格列吡嗪片含量的方法。格列吡嗪片中格列吡嗪的含量为标示量的95-105%。

【参考文献】

[1]刘晓平，郭祖峰，汪长生，王娟，崔海鞠，杨解人，宋建国.大鼠血糖的昼夜节律及格列吡嗪对糖尿病大鼠的时间治疗学[J].中国临床药理学与治疗学，2002（03）.

[2]王宪，高孝斗，许华强，马香稳，戴淑玲.格列吡嗪缓释片治疗35例2型糖尿病的临床观察[J].哈尔滨医药，2001（04）.

[3]郭秋慧.甘精胰岛素联合那格列奈治疗老年2型糖尿病疗效观察[J].中国医院药学杂志，2009（14）.

[4]毛玉山，李福军，周丽诺，叶红英，杜娟，陈长喜，申定国，黄童，洪中立.格列吡嗪控释片对2型糖尿病患者血管内皮功能的影响[J].心脑血管病防治，2005（02）.

[5]姬克.格列吡嗪控释片治疗2型糖尿病疗效和安全性观察[J].中国医院用药评价与分析，2003（04）.

[6]吴飞飞，张栋.二甲双胍与格列吡嗪降低2型糖尿病患者胰岛素抵抗的临床观察[J].长治医学院学报，2001（02）.

[7]张鹤凤，祁剑海.格列吡嗪控释片治疗2型糖尿病的临床疗效及安全性[J].中国实用医药，2011（05）.

[8]许白桦.格列吡嗪治疗2型糖尿病57例临床观察[J].中国校医，2003（04）.

[9]张祥捷.控释格列吡嗪治疗2型糖尿病的疗效观察[J].福建医药杂志，2000（03）.

[10]马铼枫，董露霖，魏军平，倪青.格列吡嗪控释片和格列美脲治疗2型糖尿病的对比研究[J].基层医学论坛，2009（01）.

[11]陈广原，张彤，张洁红，段敏虹，彭妙官.那格列奈用于老年2型糖尿病患者的临床优势[J].中国老年学杂志，2011（05）.

[12]刘述川，卫丽，马洪.格列吡嗪和格列苯脲治疗非胰岛素依赖型糖尿病的疗效分析[J].宜春医专学报，2000（04）.

高效的液相色谱法 第7篇

1 材料与方法

1.1 材料、仪器和试剂

材料:样品UV-1164由杭州瑞旭科技有限公司提供。

高效液相色谱仪:美国安捷伦科技有限公司agilent1100,配QuatPump(G1311A)四元梯度输液泵,VWD(G1314A)可变波长紫外检测器,自动进样器。

水为二次蒸馏水;乙腈、四氢呋喃为色谱纯;UV-1164标准品为进口品。

1.2 分析方法:

1.2.1 色谱条件

色谱柱:Venusil MP C18,5 μm,4.6 mm×250 mm;柱温:30℃;流速:1.2 ml·min-1;进样量:10 μL;检测波长:310 nm;流动相:A:四氢呋喃;B:乙腈;流动相的洗脱见表1

1.2.2 标准溶液的制备

精密称取干燥至恒重的UV-1164标准品50 mg,置50 mL容量瓶中,加流动相配制成质量浓度为1000 mg·L-1的标准溶液。精密量取标准溶液25 mL、12.5 mL、5 mL、2.5 mL,分别置于50 mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,备用。

1.2.3 标准曲线与线性范围

分别进样50 mg·L-1、100 mg·L-1、250 mg·L-1、500 mg·L-1、1000 mg·L-1的UV-1164标准溶液,记录峰面积。以峰面积对UV-1164的浓度进行线性回归,得标准曲线方程:

y=76.08x-20.19, r=0.999。

1.2.4 专属性试验

分别进样标准品溶液、样品溶液和流动相空白溶液10 μL,按照以上色谱条件分别测定。结果UV-1164标准品保留时间在5.9 min左右,空白溶液在该时间无吸收,样品溶液在该时间有吸收峰。当在样品溶液中加入标准品后测定,仅是峰值增大,未发生峰分裂,表明该峰为UV-1164的特征峰。

1.2.5 稳定性试验

分别进样样品溶液10 μL,每隔一定时间进样一次,共5次,测定UV-1164的峰面积,RSD=0.45%,表明24 h内测定结果稳定。

1.2.6 精密度试验

取同一批UV-1164样品溶液,按上述色谱条件,连续进样6次,测定峰面积,结果RSD=0.52%

1.2.7 重复性试验

对同一批样品重复平行测定5次,RSD=0.61%

1.2.8 回收率试验

取相同量的同一批UV-1164样品6份,分别加入精密称量的UV-1164标准品适量,进行测定,测的UV-1164回收率在97%～102%之间。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

将样品溶液通过紫外分光光度计进行波长扫描发现,UV-1164在波长310 nm处有特征峰,遂选检测波长为310 nm。

2.2 流动相的选择与方法优化

UV-1164的溶解性较差,笔者的经验是先用乙腈溶解再水浴加热超声至溶液澄清,放置时间一长,溶液里即有沉淀析出,所以柱温必不可少且进样宜早。刚开始以100%乙腈为流动相进行实验,发现出峰较晚(出峰时间在20多分钟,整个实验过程需60分钟),且峰型前伸,如图1所示:

加入四氢呋喃后出峰明显,峰型尖锐,对称性好,保留时间在6 min左右。通过试验,最后确定以30%四氢呋喃起始设置梯度既使得相关杂质、溶剂洗脱下来,又能保证分离度,且主峰的出峰时间比较合适,整个实验周期也缩短不少(因四氢呋喃对管路阀件等有腐蚀性,实验结束后应立即替换掉四氢呋喃),如图2:

3 结论

建立了UV-1164的高效液相色谱含量测定方法,确定了以乙腈:四氢呋喃体积比70:30为流动相的起始比例,检测波长310 nm,用外标法定量。本方法样品用量少,操作简便、快速、结果可靠而且重复性好,可以有效地配合生产。

摘要：建立了用高效液相色谱法测定UV-1164含量的方法,用标准品建立工作曲线,采用外标法定量。UV-1164在50mg.L-11000 mg.L-1范围内呈良好线性关系,r=0.999,方法的RSD是2.0%,平均回收率是99.8%。

关键词：高效液相色谱法,UV1164,外标法

参考文献

[1]于世林.高效液相色谱方法及应用.[M]北京:化学工业出版社,2000.

[2]卢佩章,张玉奎,梁鑫淼.高效液相色谱法及其专家系统.[[M]沈阳:辽宁科学技术出版社,1992.

[3]朱彭龄,云自厚,谢光华.现代液相色谱.[M]兰州:兰州大学出版社,1989.

高效的液相色谱法 第8篇

关键词：氨苄西林胶囊,高效液相色谱法,含量测定

本品对多种革兰阳性菌与革兰阴性菌有效, 阳性菌包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌 (包括耐西林与一些耐甲氧苯西林株) 、肺炎球菌、粪链球菌以及其他链球菌属等;阴性菌包括大肠埃希菌、流感嗜血杆菌、布蓝汉卡他菌、埃希杆菌、克雷伯轩菌、奇变形杆菌等;厌氧菌包括脆弱杆菌。氨苄西林钠为本品中的杀菌成分, 作用于细菌活性繁殖阶段, 通过对细胞壁粘肽生物合成的抑制而起杀菌作用。

1 仪器与试药

Agilent1200型高效液相色谱仪;乙腈为色谱纯;其它试剂均为分析纯。氨苄西林对照品购自中国药品生物制品检定所, 批号为130410-200706 (含量为85.7%) , 供含量测定用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Diamond ODS C18 (150×4.6mm, 5um) 色谱柱;流动相A为12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水 (0.5:50:50:900) , 流动相B为12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水 (0.5:50:400:550) , 以流动相A-流动相B (85:15) 为流动相;流速1.0ml/min;检测波长254nm;柱温40℃。

2.2 对照品溶液制备

精密称取氨苄西林对照品约58mg, 置于50ml量瓶中, 加稀释液 (取1mol/L磷酸二氢钠溶液10ml与1mol/L错酸溶液1ml, 置100ml量瓶中, 摇匀, 加水至刻度) 适量, 超声处理使氨苄西林溶解, 再加稀释液至刻度, 摇匀, 精密量取5ml置50ml量瓶中, 加稀释液稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品贮备液。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容物, 混合均匀, 精密称取适量 (约相当于氨苄西林100mg) , 置1000ml量瓶中, 加稀释液 (取1mol/L磷酸二氢钠溶液10ml与1mol/L错酸溶液1ml, 置100ml量瓶中, 摇匀, 加水至刻度) 适量, 超声处理使氨苄西林溶解, 再加稀释液至刻度, 混匀, 滤过, 精密量取续滤液20ul, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。

2.4 线性关系的考察

分别精密量取对照品贮备液0.2、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml, 置10ml量瓶中, 加稀释液稀释至刻度, 摇匀, 在上述色谱条件, 进样20ul, 测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 氨苄西林的浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程:Y=2.68X+11.029, R=0.9996, 表明氨苄西林的浓度在4.0μg/ml~200.4μg/ml范围内具有良好线性关系。

2.5 重复性试验

精密称取同一批号的样品6份, 分别按供试溶液制备方法制成供试品溶液, 测定氨苄西林的含量, 其RSD为0.56%, 说明此方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液, 按上述色谱条件分别于0、2、4、8、16、32、48h分别进样20ul, 测得其平均峰面积值的RSD为1.56%, 表明供试品溶液中的氨苄西林在48h小时内是稳定的。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量氨苄西林胶囊, 精密添加不同量的氨苄西林对照品, 按供试溶液制备方法及上述色谱条件分别进20ul, 记录色谱图, 计算回收率为98.74%, RSD=0.6%, 结果表明本法回收率好, 方法可行。

2.8 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl, 按上述色谱条件测定, 记录色谱图, 按外标法计算氨苄西林胶囊的含量。

3 讨论

上述结果表明, 采用HPLC法测定氨苄西林的含量, 方法简便, 结果准确可靠, 重现性良好, 适用于氨苄西林的含量的检验。

参考文献

油脂中柠檬酸的高效液相色谱测定法 第9篇

关键词：高效液相色谱法,油脂,柠檬酸

柠檬酸是一种重要的有机酸,又名枸杞酸,无色半透明晶体或白色结晶性粉末,无臭,有强烈的令人愉快的酸味,具有良好的抗氧化性,广泛用于食品工业,关系到人们身体健康和生命安全,所以对柠檬酸的质量要求都有严格的规定。而食品中脂类的氧化会导致酸败,蛋白质破坏和色素氧化,添加食品抗氧化剂可以延迟氧化[1],柠檬酸是一种安全、有效抗氧化剂,抗氧化效果良好,是油脂行业常用的添加剂。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

高效液相色谱,具有紫外检测器,二极管阵列检测器,分析天平,涡旋混合器,高速离心机,恒温振荡器,具塞三角瓶:125 ml,容量瓶:100 ml,50 ml,一次性注射器:1 ml等。

1.1.2 试剂与溶液

所用试剂除注明外均为分析纯,水为超纯水,异辛烷、磷酸二氢钾、磷酸(标准品)、柠檬酸(AR,含一分子结晶水),纯度≥99.5%。

1.2 色谱条件

色谱柱为Aglient TC-C18柱(4.6 mm×250 mm×5 μm),柱温为35 ℃,流动相为:0.05 mol/L磷酸二氢钾(pH=2.40),检测器:紫外检测器,检测波长210 nm,进样量: 20 μL,流速:1.5 ml/min,外标法定量。

1.3 溶液配制

柠檬酸标准储备液:精密称取50 mg(精确到0.1 mg)标准品于100 ml容量瓶中,水溶液超声溶解并定容至刻度,配成标准储备溶液浓度为500 mg/L。置于4 ℃冰箱中避光保存,保存期6个月。流动相的配制:0.05 mol/L磷酸二氢钾(pH=2.40):称取6.8 g磷酸二氢钾,以水溶解并稀释至1 L,以磷酸调整pH为2.40,过0.45 μm滤膜备用。

1.4 样品制备及分析步骤

1.4.1 试样制备

固体油脂样品,应将其用水浴加热溶解成液态进行检测。

1.4.2 分析步骤

样品前处理:称取25.0 g样品于125 ml具塞三角瓶中,加入25.0 ml异辛烷,在旋涡混合器上混匀1 min,以至全部溶解,再加入25.0 ml磷酸二氢钾溶液(1.3),将三角瓶放置于恒温振荡器内,恒温60 ℃,200次/min振荡0.5 h,静置,吸取下层水相于8000 r/min离心5 min(21 475 g),下层溶液过0.45 μm滤膜供上机测定。

1.4.3 工作曲线

按表1分别吸取适量的浓度为500 mg/L的柠檬酸标准储备液(1.3)、流动相(1.3)至液相色谱进样瓶中,混匀备用。临用前配制。

2 结 果

2.1 定性标准

根据标准样品的保留时间和二极管阵列检测器光谱图来定性,对二极管阵列检测器而言,波长误差在±2 nm之内,标准溶液的光谱图见图1、图2。

2.2 定量方法

用外标法,峰面积定量。

2.3 结果计算

计算公式

X-试样中柠檬酸含量,mg/kg;C—从标准工作曲线得到的样液中柠檬酸浓度,mg/L;V—最终样液的定容体积,ml;m—最终样液所代表试样量,g。

2.4 方法的测定低限、线性范围、回收率和精密度

柠檬酸的测定低限为10.0 mg/kg,添加浓度在10.0～100 mg/kg,变异系数小于10%;样品添加回收率为91.1～105.0%,本方法线性范围为1.0～20.0 mg/L;工作曲线的相关系数的最低值为0.999 8,结果见表2。

2.5 分析

①样品提取时需恒温振荡,温度不要超过60 ℃,因有机试剂易燃。②柠檬酸的最大吸收波长为190 nm,经实验验证在210 nm处吸收较好,峰形稳定,而在其他波长处测定时效果较差。③柠檬酸为含有羧基和邻二酚羟基的极性有机酸,本实验选用0.05 mol/L的磷酸二氢钾溶液为流动相,将其pH调为2.40后,柠檬酸在酸性环境下能较好的游离出来,与其他物质能很好地分离,出峰效果好。

3 讨 论

采用高效液相法测定油脂中柠檬酸的含量,具有灵敏度高、操作简单、重现性好、分析周期短、安全的优点。以外标定量分析,在1.0～20.0 mg/L 有良好的线性范围,方法的精密度好。回收率为91.1%～105.0%,18次检验的变异系数为1.7%～5.4%。

参考文献

高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素 第10篇

目前我国对食品中甜蜜素的测定方法主要有气相色谱法[4,5,6]、比色法[7,8]和薄层层析法[9]等。操作繁琐、干扰因素多、不易控制,本文所述方法采用高效液相色谱法[10,11,12]成功地检测了饮料中的甜蜜素,方法简单、快速、检出限低,能满足检测要求。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(LC-20 A型),日本岛津;紫外检测器;离心机(TGL-16 G),湖南星科科学仪器公司;电子天平T-214,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;0.45 μm微孔滤膜;Milli-Q超纯水系统;120 D超声波清洗机,宁波新芝生物科技股份有限公司。

甜蜜素标准溶液(1000 μg/mL):准确称取甜蜜素标准物质0.1001 g,置于100 mL容量瓶,加少量超纯水溶解,稀释、定容,配成浓度为1.00 mg/mL的标准溶液。使用时,用超纯水稀释成所需要浓度的标准使用液 (0.22 μm滤膜过滤)。

乙腈、甲醇、正己烷均为色谱纯,硫酸,次氯酸钠,碳酸氢钠等均为分析纯,实验用水为Milli-Q超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱:Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm);流动相:乙腈:超纯水= 97:3;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;紫外检测器波长:314 nm;进样量:20 μL。

1.3 样品处理

1.3.1 样品预处理

含二氧化碳的液体饮品(饮料,凉茶,酒类等):移取10.00 mL样品溶液,温热除去二氧化碳气体以后定容。不含二氧化碳的液体饮品(如酱油等):直接从样品中量取10.00 mL样品溶液于100 mL容量瓶中,用超纯水稀释,定容,混合均匀备用。

1.3.2 衍生化

准确吸取预处理的样品溶液10 mL置于125 mL分液漏斗中,加入2 mL 1:1的硫酸溶液,振荡,使溶液混合均匀,加入5 mL正己烷溶液,再加入2 mL次氯酸钠溶液(有效氯≥10%),剧烈振荡1 min后,将分液漏斗置于铁架台上静置分层,除去下层水相;加入5 mL 0.5 moL/L的氢氧化钠溶液,再次剧烈振荡1 min,静置分层后除去下层溶液;向上层溶液再加入5 mL超纯水,水洗1 min后用一次性滤膜(0.22 μm)过滤,以供高效液相色谱分析用。

甜蜜素标准溶液的处理同样品溶液。

2 结果与讨论

2.1 测定波长

对环己基胺基磺酸钠的衍生物N, N-二氯环己胺进行波长扫描,在210 nm、314 nm处有两个吸收峰,但210 nm处会产生溶剂和流动相的吸收干扰,而314 nm处的干扰少,基线稳定,实验选择314 nm为检测波长。

2.2 色谱图

图1~图4分别为甜蜜素、安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸的标准物质色谱图,图5为酱油样品的色谱图,图6为菊花茶样品色谱图。在色谱条件下,甜蜜素的保留时间约为6.551 min,食品中常见的添加剂安赛蜜,苯甲酸钠,山梨酸等对甜蜜素测定均不产生干扰。安赛蜜的保留时间约为1.998 min,苯甲酸钠的保留时间约为2.354 min,山梨酸的保留时间约为2.498 min。三种添加剂的保留时间均在2.5 min以内,对甜蜜素的测量不会造成影响。

2.3 标准曲线

准确吸取1.00 mg/mL甜蜜素标准储备液0.20 mL,0.50 mL,1.00 mL,5.00 mL,20.00 mL,60.00 mL,分别置于100 mL容量瓶中,用超纯水逐级稀释配制成浓度为2 μg/mL,5 μg/mL,10 μg/mL,50 μg/mL,200 μg/mL,600 μg/mL的一系列标准溶液。将上述标准溶液按1.3.2的方法处理后进样分析,以峰面积对质量浓度作图,得到标准曲Y=23340x-163207,相关系数R2=0.9979,环己基胺基磺酸钠(甜蜜素)在2~600 μg/mL范围内线性良好。

2.4 流动相

分别以不同比例的乙腈-水、甲醇-水、乙腈-磷酸二氢钠、甲醇-乙酸铵、乙腈-乙酸铵、等作流动相进行测定,发现当乙腈-水体系中体积比为97:3时,分离度和色谱峰形好,测量的稳定性和重现性也较好,故选择乙腈-水(体积比为97:3)作为流动相。乙腈-磷酸二氢钠体系无法将安赛蜜,苯甲酸钠,山梨酸和甜蜜素相互分离开来;甲醇-乙酸铵体系中安赛蜜,苯甲酸钠和山梨酸三者能够相互分开,但山梨酸与甜蜜素保留时间几乎一样。在乙腈-乙酸铵体系中,安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸与甜蜜素保留时间均相近,无法分离。

2.5 检出限

以3倍信噪比求得甜蜜素的检出限为1 μg/mL。

2.6 精密度试验

准确吸取菊花茶10.00 mL置于125 mL分液漏斗中,按照1.3.2的方法进行处理后,平行测定6次,计算测得值的相对标准偏差;按照同样方法测定海天酱油的相对标准偏差,结果同样列于表1。由表1可知,本法测得的结果精密度良好。

2.7 回收试验

根据甜蜜素的标准曲线,由测量结果可知,每毫升的菊花茶中大约含有甜蜜素10 μg。准确吸取10.00 mL的菊花茶样品溶液置于125 mL的分液漏斗中,再准确吸取10.00 mL 50 μg/mL的甜蜜素标准溶液与之混合均匀,稀释至25 mL定容,仍然按照1.3.2的方法进行衍生化处理。将最终得到的上层有机相经0.22 μm滤膜过滤,按以上色谱条件测定后,以测得值计算回收率,结果列于表2。由表2可知,甜蜜素的回收率为97.24%~104.09%,实验结果表明该法测量的准确度较高。

3 结 论

由于甜蜜素(环己基胺基磺酸钠)本身在紫外波长范围内没有吸收,所以本实验利用次氯酸钠溶液将食品中的甜蜜素在硫酸酸性环境中衍生为N,N-二氯环己胺,经正己烷萃取,在30 ℃,97:3的乙腈-超纯水做流动相的条件下进行分析测定,流速控制在1 mL/min,紫外检测波长为314 nm,10.00 min内获得快速、高效测定。安赛蜜、山梨酸、苯甲酸钠等食品中常见添加剂不干扰测定,检出限低,线性范围宽,灵敏度高,准确度及精密度均能满足国家标准对甜蜜素的测定要求。

摘要：建立了快速测定饮料中甜蜜素的高效液相色谱方法。甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)在强酸性环境中与次氯酸钠反应,生成N,N-二氯环己胺,后者在紫外区具有较大吸收,用正己烷进行萃取后经过高效液相色谱分离,314 nm检测定量。结果表明:Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm);流动相为乙腈∶超纯水97∶3;流速1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长314 nm;进样量20μL,食品中的安赛蜜、苯甲酸钠、山梨酸等不影响测定。甜蜜素含量在2～600μg/mL之间时,呈现良好的线性关系,相关系数为0.9979,加标回收率为97.24%～104.09%。

高效的液相色谱法 第11篇

关键词： 厚朴树叶；厚朴酚；含量；高效液相色谱法；测定

中图分类号： O657 7+2；R284 2 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0311-03

厚朴（Magnolia officinalia）是木兰科木兰属的一种高大落叶植物 [1]，别名川朴、紫油厚朴，树高15～20 m，广泛地分布于湖北西部、四川西南部、陕西南部、甘肃南部、江西、安徽、浙江、福建、湖南等地 [2]，厚朴树皮是我国传统中药材，称为中药厚朴，始载于《神农本草经》，列为中品，其后历代本草均有记载，厚朴的树皮、根皮、花、籽及嫩芽均能入药 [3]，有燥湿消痰、化湿导滞、消除腹胀便秘、治疗痰饮喘咳、驱风镇痛等功效，还具有抗菌、抗病毒、抗过敏、影响胃肠活动、松弛肌肉和中枢抑制等作用，以厚朴树皮为主，将其作为中药材或深加工的原料使用。厚朴酚是厚朴中的活性物质之一 [4]，有抗菌、镇静中枢神经、松弛肌肉、抗溃疡、抗氧化、预防龋齿等药理作用 [5]，最近研究表明厚朴酚还有抑制癌细胞的作用 [6]，厚朴酚应用广泛，是一些中成药如保和丸、藿香正气水等的主要成分。目前，厚朴酚主要是从厚朴树皮提取，厚朴树皮资源有限，厚朴树一般要生长15年才能符合药用需要，挖根剥皮，一次性使用，而厚朴树叶资源却非常丰富 [7]。人们对厚朴树叶的开发利用研究报道较多 [8]，不同产地和不同季节厚朴叶中厚朴酚以及和厚朴酚含量存在差异 [9-11]，用高效液相色谱法检测厚朴树叶中厚朴酚的含量，不同提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚含量不同 [12-13]，厚朴树叶提取物对植物病原真菌有抑菌活性 [14]，厚朴树叶中含有和厚朴树皮中相同的成分，可用厚朴树叶提取厚朴酚，厚朴树叶的利用前景广阔。陕西南部秦巴山区有丰富的厚朴资源，本研究采用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，进行定性鉴定，用反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量 [15]，可为开发利用厚朴树叶资源提供技术支撑。

1 材料与方法

1 1 材料、试剂和仪器

1 1 1 试验材料 厚朴树叶于2012年11月上旬收集于陕西南部秦巴山区，经陕西理工学院植物学专家赵桦教授分析和辨认，为木兰科木兰属植物厚朴的叶子。置于烘箱50 ℃烘干至恒质量，用中草药粉碎机粉碎过60目筛，密封保存备用。

1 1 2 试剂 厚朴酚标准品（中国药品生物制品检验所），色谱甲醇（色谱纯，进口分装），乙腈（色谱纯TEDIA，进口分装）。乙醇、甲醇、三氯化铁、间苯三酚、苯、香草醛、硫酸、盐酸、羧甲基纤维素钠均为国产分析纯，由天津市天力化学试剂有限公司生产。薄层层析硅胶GF254（分析纯，青岛海洋化工厂）。 1%香草醛硫酸显色剂配制：100 mL无水乙醇、1 g香草醛和10 mL浓硫酸，混合均匀。5%的三氯化铁甲醇水溶液配制：甲醇和水体积比1 ∶ 1混合，按质量百分数称取三氯化铁，混合均匀。间苯三酚盐酸溶液：称取间苯三酚0 1 g，加无水乙醇1 mL，再加盐酸9 mL，混匀，用时新配。水为二次蒸馏水。

1 1 3 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），SL二极管阵列检测器（美国安捷伦公司），Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm，重庆中谱科技有限公司）。超声清洗机（浙江省宁波新芝生物股份有限公司），中草药粉碎机（F117型，天津市泰斯特仪器有限公司），电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司），循环式真空泵（SHZ-Ⅲ型，河南省巩义市予华仪器有限责任公司），电子分析天平（GR-200，日本），薄层色谱扫描仪（北京化学科技有限公司），旋转蒸发仪（河南巩义仪器厂），Soxhelt提取器。

1 2 试验方法

1 2 1 从厚朴树叶中提取厚朴酚 （1）超声辅助提取法：准确称取0 200 0 g粉碎好的厚朴树叶粉末置于带塞锥形瓶中，加入25 mL甲醇，超声30 min，浸渍24 h。提取液呈深棕色浑浊液体，用真空泵减压抽滤，滤液呈透亮棕色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到25 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液 2 5 mL 于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为超声提取待测样品溶液。（2）索氏回流提取法：准确称取厚朴树叶细粉2 000 0 g，用滤纸包好放置于Soxhelt提取器的提取管中，加入250 mL甲醇回流提取48 h，至回流液澄清。提取液呈棕黑色，用活性炭脱色，减压回收甲醇，真空干燥提取物。用色谱甲醇溶解，定容到250 mL的容量瓶中，供定性鉴定和含量测试。精确吸取定容液2 5 mL于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇稀释到刻度，摇匀，为索氏提取待测样品溶液。

1 2 2 厚朴酚定性鉴定 （1）厚朴酚定性检测：分别取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体2 mL各2份于小试管中，再分别加入三氯化铁甲醇水溶液3滴和间苯三酚盐酸溶液3滴，摇匀，进行显色反应。（2）厚朴酚的薄层色谱法检测：取超声提取物和索氏提取物脱色之后的定容液体，另取厚朴酚标准品储备液，按照《中国药典》2010年版一部附录中薄层色谱法，用毛细管吸取3种溶液，分别点于同一个硅胶薄层板上，以苯 ∶ 甲醇=27 ∶ 1为展开剂，展距8 cm，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸溶液后，在100 ℃下烘烤2～3 min，取出冷却，在日光下和薄层色谱扫描仪下分别观察。

nlc202309011509

1 2 3 厚朴树叶中厚朴酚含量的测定 标准品溶液的制备：准确称取厚朴酚标准品1 500 mg，以色谱甲醇为溶剂，定容于10 mL棕色容量瓶中，配制成含厚朴酚0 150 mg/mL的标准品储备液。用厚朴酚标准品储备液精确配5个浓度梯度的标准品待测溶液，厚朴酚含量分别是0 012 5、0 025 0、0 037 5、0 050 0、0 062 5 mg/mL，在色谱条件下进样检测，确定线性标准工作曲线。色谱条件：用Kromasil C18色谱柱，分别以乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22为流动相进行分析测试，流速为1 mL/min，检测波长294 nm，进样量20 μL，保留时间8 min，柱温30 ℃。将超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液与测试标准品待测溶液在同样色谱条件下测试。

2 结果与分析

2 1 提取方法选择

用超声辅助提取法和索氏回流提取法从厚朴树叶中提取厚朴酚，索氏回流提取法需要48 h才能提取完全，提取时间长，且长时间加热回流容易引起有效成分的氧化变质，使得提取液呈棕黑色，对实际操作中的提纯和含量测定都会带来很大的影响。超声辅助提取法温度低，一般控制在 50 ℃ 以下，所需时间短，约30 min，操作简单，由于提取温度低，有效成分不易损失，能耗低，一般可选用超声辅助提取法。

2 2 厚朴酚的定性分析

超声提取物和索氏提取物分别加三氯化铁甲醇水溶液，均呈现蓝黑色，是厚朴酚的酚羟基反应，发生了显色反应；超声提取物和索氏提取物分别加间苯三酚盐酸溶液，出现红色沉淀，是厚朴酚的丙烯基反应，说明有厚朴酚被提取出来。厚朴酚的薄层色谱板在日光下和薄层色谱扫描仪下，超声提取物和索氏提取物的色谱图和标准品相应的位置上，均显棕红色斑点，如图1所示的薄层板分析图谱，说明厚朴树叶提取液中含有厚朴酚，还有其他有机物被提取出来。

2 3 工作曲线的制作

检测浓度梯度的不同标准品待测溶液，以含量（mg/mL）为纵坐标、色谱峰面积为横坐标来绘制工作曲线图（图2）。当厚朴酚浓度为 0 012 5 mg/mL时，峰面积为421 489 90；浓度为0 025 0 mg/mL时，峰面积为822 312 62；浓度为 0 037 5 mg/mL 时，峰面积为1 264 469 70；浓度为 0 050 0 mg/mL 时，峰面积为1 665 953 74；浓度为 0 062 5 mg/mL 时，峰面积为2 055 781 55。由此可见，峰面积与厚朴酚含量建立了良好的线性关系。厚朴酚含量（y）与峰面积（x）的回归方程为：y=3 006×10 -5x+1 449 1×10 -5（r=0 999 9），线性范围在0 012 5 ～0 062 50 mg/mL。

2 4 厚朴树叶中厚朴酚的含量

在高效液相色谱（HPLC）测定过程中，流动相分别用乙腈 ∶ 水体积比65 ∶ 35和甲醇 ∶ 水体积比78 ∶ 22进行比较，测[CM（25]定结果如图3所示是以乙腈 ∶ 水体积比为65 ∶ 35作流动

相得到的图谱，图4是以甲醇 ∶ 水体积比为78 ∶ 22作为流动相得到的图谱。从图3中可以看到，以乙腈和水为流动相时出峰时间较早，厚朴酚的保留时间为3 935 min，各组分不能有效分离，分离度差，干扰严重，峰形不规则。从图4中可以看到以甲醇和水为流动相时出峰时间合理，厚朴酚的保留时间为4 528 min，各组分分离度好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差会减小，在测定厚朴树叶中厚朴酚的含量时使用甲醇和水（体积比78 ∶ 22）为流动相较好。利用HPLC测定超声提取待测样品溶液和索氏提取待测样品溶液，归一化法得到峰面积，经过转化，表明超声提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，索氏提取法进行提取厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 725%，可见，不同的提取方法测得厚朴树叶中厚朴酚的含量是存在差异的。和按照《中国药典》2010年版中的方法测定厚朴树叶中厚朴酚的最高含量为0 32%相比较，高出了1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法能显著提高厚朴酚的得率，超声提取法相对更好一些。

3 结论

用超声辅助提取法和索氏回流提取法提取秦巴山区野生厚朴树叶中的厚朴酚，能显著提高得率，比按照《中国药典》2010年版中的方法提取和检测厚朴酚的含量高出1 4倍，超声辅助提取法和索氏回流提取法均能提高厚朴酚的得率，前者比后者会更适合工业化生产，超声法提取天然产物中的有效成分已得到广泛应用，可加快浸取速度，提取率高，操作简单方便。用显色法和薄层色谱法对提取的厚朴酚进行定性鉴定，厚朴树叶中含有厚朴酚，可从厚朴树叶中提取厚朴酚。反相高效液相色谱法测定厚朴树叶中厚朴酚的含量，以 Kromasil C18色谱柱（15 cm × 0 46 cm，5 μm）为固定相，以甲醇和水体积比78 ∶ 22为流动相，检测波长294 nm，流速为 1 mL/min，进样量20 μL，测得厚朴酚的保留时间为 4 528 min，厚朴树叶中厚朴酚的含量为0 768%，分离效果好，干扰小，峰形规则，含量检测时误差小，结果满意，适合于厚朴树叶中厚朴酚含量的测定。本试验仅是对厚朴树叶中的厚朴酚进行定性和定量检测，厚朴树叶中的其他酚性物质检测和分析还需要进一步深入研究。

参考文献：

[1] 邓 芬，张芳芹，王 烨，等 厚朴叶子中多糖的超声法提取及抗氧化活性研究[J] 食品科技，2011，36（8）：173-175，178

[2]Tong Z K，Zong Y R，Si J P Variation，heredity and selection of effective ingredients in Magnolis officinalis of different provenances[J] Journal of Forestry Research，2002，13（1）：7-11

nlc202309011509

[3]李阳春，高家鉴，张伟敏，等 厚朴姜制前后所含厚朴酚及和厚朴酚总量的变化[J] 中成药，2001，23（6）：415-417

[4]Tian Y L，Chen G H Determination of magnolol and honokiol by non-aqueous capillary electrophoresis1[J] Chemical Research in Chinese Universities，2006，22（3）：335-338

[5]赵纯森，黄俊斌，周茂繁 厚朴叶中抑菌活性成分鉴别及其防病效果[J] 华中农业大学学报，1994，13（4）：373-377

[6]Lee Y K，Yuk D Y，Kim T I，et al Protective effect of the ethanol extract of Magnolia officinalis and 4-O-methylhonokiol on scopolamine-induced memory impairment and the inhibition of acetylcholinesterase activity[J] Journal of Natural Medicines，2009，63（3）：274-282

[7]权婧婧，房艺丹，雷 迎，等 厚朴叶的开发利用研究进展[J] 安徽农业科学，2011，39（33）：20396-20397，20423

[8]龙 飞，卫莹芳，刘 永，等 厚朴叶化学成分的初步研究[J] 华西药学杂志，2010，25（4）：387-388

[9] 李弘弢，黄念桃，王 蓉 薄层扫描法考察不同产地厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J] 时珍国医国药，2004，15（3）：141-142

[10] 何慧娟，王 烨，蒋 翔，等 秦巴山区不同季节厚朴叶中厚朴酚含量的测定[J] 安徽农业科学，2010，38（32）：18148-18149

[11]黄晓燕，卫莹芳，张盈娇，等 高效液相色谱法测定厚朴叶不同采收期中厚朴酚、和厚朴酚的含量[J] 中国中药杂志，2005，30（9）：717-718

[12]刘晓鹏，姜 宁，向东山，等 厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚的提取与测定[J] 中国医院药学杂志，2007，27（5）：694-696

[13]叶锦霞，林 珊，曾建伟，等 闽产厚朴叶中厚朴酚、和厚朴酚提取工艺研究[J] 福建中医学院学报，2010，20（4）：23-26

[14] 姜 宁，刘晓鹏，滕建勋，等 紫油厚朴叶提取物对马铃薯青枯病菌的抑制作用及防病效果[J] 植物保护，2008，34（2）：58-60

[15]田光辉，刘存芳，王 晓 反相高效液相色谱法测定香茶菜籽中游离的亚麻酸含量[J] 陕西理工学院学报：自然科学版，2007，23（3）：87-90

高效液相色谱法测定茶叶中多酚 第12篇

云南文山地区发现一种野生茶树,为探明其利用价值,本文取8种云南不同产地的茶叶与其对比实验测定其中茶多酚含量。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

Agilent 1100液相色谱包括:紫外二极管阵列检测器色谱工作站自动进样器,四元梯度泵,Milli-Q 50高纯水处理器(美国Millipore公司)。儿茶素(C)、表没食子酸儿茶素(EGC)、表儿茶素(EC)、表没食子基儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、绿原酸(Chlorogenicacid)、芸香苷(Rutin)标准品均购自Sigma和Fluka公司,纯度高于99%。甲醇、乙酸均为色谱纯试剂,实验用水为高纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱:AgilentZORBAX SB-C 18液相色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)。流动相为甲醇(B),0.5%醋酸(D)水溶液,按0min(B 18%+D 82%),4min(B 18%+D 82%),15min(B 30%+D70%),20min(B 80%+D 20%),28min(B 80%+D 20%),30min(B 20%+D 80%)梯度条件(均为体积分数),流速为1mL/min,进样体积为20μL,上述色谱条件下选择的检测波长为278nm。

1.3 实验方法

本实验采用了两种前处理方法进行比较。

1.3.1 索氏提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,于80℃水浴条件下蒸馏1h,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

1.3.2 超声提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,保持30℃恒温提取24h,分别在0h,6h和24h时间点上超声20min,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线、相关系数及检测限

分别配制质量浓度为100.0、50.0、25.0、5.0、1.0mg/L标准溶液,进样后根据浓度和峰面积,计算出回归方程。根据信噪比S/N=3,测得各组分的检出限,结果见表1。

注:A为峰面积(peakarea);C为质量浓度(concentration),mg/L

2.2 回收率实验及精密度

准确称取文山野生茶2份,其中1份加入已知量的多酚标样。将两份样品在相同条件下测定5次,通过加入多酚的测出量计算回收率,并计算其RSD,结果见表2。

2.3 样品分析结果

茶叶样品按以上中的样品前处理过程处理进样分析,索式提取结果见表3,超声提取结果见表4。

%

注:“-”指在该样品中未检出

%

注:“-”指在该样品中未检出

3 结论

采用索氏提取法及超声提取法两种方法对茶叶中多酚进行提取,结果表明,超声提取法对绿原酸、EGCG、EC、ECG等的提取率比索氏提取法要高。在比较9种茶叶样品的多酚含量时得出如下结论,七子青饼中茶多酚总的含量相对较高,逸神越陈越香中茶多酚总的含量相对较低。文山野生茶中绿原酸的含量相对较高。

参考文献

[1]魏泱,丁明玉.茶多酚的色谱分析法[J].色谱,2001,18(1):35-38.

[2]姚林,王广增.茶多酚的抗肿瘤研究[J].肿瘤防治研究,1995,22:123-126.