胶体金免疫层析技术

胶体金免疫层析技术（精选7篇）

胶体金免疫层析技术 第1篇

1 胶体金免疫层析技术的简介

1.1 胶体金免疫层析技术的原理

胶体金免疫层析技术(Gold immunochromatography assay GICA)是集金标技术、检测技术和层析技术于一体的固相标记免疫检测技术。基础的晶核(原子金Au,由11个金原子形成的二十面体)和外层的双离子层构成胶体金粒子,而胶体金粒子则是构成胶体金溶液的主要物质。金颗粒在氯金酸(HAu Cl4)还原剂的作用下形成颗粒状,并且以一种疏水的胶状形式存在,在金粒子表面存在着一层阴性电荷,胶体金颗粒互相排斥,在静电作用下形成稳定的胶体状态从而使悬浮液保持稳定[3]。胶体金粒子对蛋白质具有很强的吸附性,可以与多种免疫球蛋白共价结合,并且在金颗粒聚集的地方肉眼可直接观察到粉红色斑点,因而可用于定性或半定量实验。

胶体金免疫层析技术是以固相膜为载体的胶体金技术与层析技术结合起来的一项新的检测技术,将已知的抗原或者抗体吸附于固相膜上,在固相膜的结合释放垫上吸附胶体金颗粒标记物,其两端分别与样品垫和固相膜相连;待检样品在毛细作用下会向前移动,当移动到金标颗粒标记物处时,就能吸附上标记物,继续移动至相应检测线并出现肉眼可见的颜色变化,从而来判断结果。

1.2 胶体金粒子的特性

胶体金粒子具有两大类特性。一类特性是具有很强的吸附作用,尤其是对蛋白质,可以与多种免疫球蛋白、酶、牛血清白蛋白、葡萄球菌蛋白等多肽非共价结合,因而可以作为一种工具用于实验室研究[4]。胶体金颗粒的表面吸附蛋白质即胶体金标记的过程,胶体金颗粒和蛋白质之间的结合过程主要是依靠一些疏水作用力、离子键或者是配位键来实现。其中疏水作用力主要是蛋白质依靠疏水作用力吸附于金颗粒表面;离子键主要是正负电荷之间的反应;配位键是氨基酸的硫残基与金颗粒发生电子层配位[5]。

胶体金颗粒的另一个重要的特性就是在金标蛋白结合处可以肉眼观察到颜色变化,可以用于定性或者半定量的快速检测中[6]。由于标记物在相应配体处大量聚集存在,因而金标颗粒聚集处会出现粉色或者是红色斑点,在显微镜下尤为明显,可以观察到黑褐色颗粒的存在。

1.3 胶体金免疫层析技术反应方法

胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性[7]。胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。常用的胶体金免疫层析技术反应方法包括竞争法、捕获法以及夹心法,根据检测物质的分子量大小来选用不同的技术反应方法,从而达到最好的检测效果。

1.3.1 竞争法

用于检测小分子抗原,具有灵敏度高、反应迅速、不易形成交叉反应等特点。在水产品药物残留检测中主要应用于喹诺酮类的检测[8]。

1.3.2 捕获法

捕获法在水产品药物残留检测中的应用较少,但是可应用于鱼类疾病的诊断,主要检测病原微生物产生的特异性抗体,对于标本较难采集的病原体,也可采用此方法检测[9]。

1.3.3 夹心法

夹心法主要是用于检测大分子抗原物质,有双抗原夹心法和双抗体夹心法两种方式。双抗原夹心法主要用于检测抗体,标记和包被均采用抗原。双抗体夹心法则主要用于检测颗粒性大分子抗原物质。

2 胶体金免疫层析技术在水产品药物残留检测中的优势

目前检测水产品中的药物残留最常见的检测方法是利用仪器进行分析,主要是色谱法,包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)以及色谱质谱(GC-MS)联用技术等[10]。

气相色谱法是定量测定氯霉素较为经典的方法,也是我国商检定量分析氯霉素残留首选方法[11]。但气相色谱法前处理过程复杂,衍生化过程较为繁琐耗时,从而使得该方法具有一定的局限性。色谱质谱联用技术虽然具有较高的灵敏度和准确度,但是不适用于养殖用户、生产加工企业及基层检测单位的推广应用[12]。

相比传统的检测方法,应用胶体金免疫层析技术检测水产品中药物残留,具有以下优势:(1)样品不必进行处理,可直接检测组织液或者血液。(2)不需要操作大型的仪器设备,大大简便了操作,对实验人员的技能要求较低,更适用于野外现场应用。(3)试剂用量少,试纸条体积小,携带方便,无污染,可以用于大批量样品的现场检测。(4)准确度和灵敏度均较高,假阳性率较低,结果判断简单,能够快速准确的反应样品中药物残留的情况。(5)检测时间较短,一般5~10 min就可以目测结果,并且检测结果可以长期保存。

3 胶体金免疫层析技术在水产品药物残留检测中的应用

胶体金免疫层析技术需要免疫学原理才可以检测,这样可以提高对药物的识别性从而对组织细胞内的微型药物都有着非常高的敏感性[13]。胶体金免疫检测技术具有迅速准确的特点,因而其在水产品药物残留检测上的应用非常广。国内许多科研工作者已着手研究胶体金免疫层析法用于水产品中禁限用渔药、激素、重金属、微生物等快速检测技术,为该技术的成果转化做好科研储备[14]。

目前,氯霉素、孔雀石绿和硝基呋喃类药物在水产品中残留最为严重,属于必检项目[15]。这些药物简单且廉价易得,因而在水产品养殖中使用较广,在动物体内代谢时间较长,能够不同程度的在水产品中蓄积,最后通过食物链的作用危害人体健康,主要表现为致癌、致畸、致突变等作用。社会各界研究者建立了诸多方法用于更简便快捷的检测这些药物残留,尤其以胶体金免疫层析技术在这些药物残留检测中的研究进展较多。

3.1 胶体金免疫层析技术在氯霉素检测中的应用

氯霉素作为广谱抗生素,在水产养殖疾病预防和治疗中具有明显的效果。但是氯霉素在水产品体内有明显的残留现象,残留期长,通过食物链进入人体,对人体产生严重危害[16]。因此,国内外均制定了一系列的法律法规禁止氯霉素的使用,我国农业部也规定在动物性食品中不得检出氯霉素。

李余动等[17]在2005年建立了氯霉素胶体金免疫层析试纸条,检测虾肉样品时,灵敏度可达到1ng/m L,无交叉反应。桑丽雅等[18]在2013年研制了氯霉素快速检测胶体金试剂条,该试剂条对水产品中氯霉素的检测限为0.3μg/kg,假阳性率4%,假阴性率为2%,常温保质期在6个月以上。杨挺等[19]根据竞争式胶体金免疫层析试验原理,研制了氯霉素检测免疫试纸条,该金标试纸条对虾肉样品中的氯霉素最低检出限为1.5μg/kg。王玮[20]利用胶体金标记快速检测技术对氯霉素兽药残留快速检测方法进行了系统的研究,建立了以氯霉素与固相膜上的氯霉素-卵清蛋白(CAP-OVA)偶联物(即包被抗原)竞争结合金标记抗氯霉素多克隆抗体的方法,利用胶体金显色的特点最后达到快速检测样品中氯霉素残留的目的。

3.2 胶体金免疫层析技术在孔雀石绿检测中的应用

孔雀石绿属于一种三苯甲烷类杀菌剂,具有高效和价格低廉的特点,因而在水产养殖疾病防治中被广泛应用。然而孔雀石绿及其代谢物都具有高残留性和高毒性,不仅仅造成了水产品的畸变和癌变,也给食用者的健康带来了潜在的风险[21]。

桑丽雅等[22]运用免疫胶体金快速层析技术对水产品中孔雀石绿及其代谢物残留进行快速筛选,最低检出限分别为lμg/kg和3μg/kg,但是检测时间较长,约为30 min。山珊等[23]基于竞争抑制反应原理,制备出了孔雀石绿胶体金免疫层析试纸条,建立孔雀石绿免疫层析定量检测方法,检测灵敏度为3μg/L。

3.3 胶体金免疫层析技术在呋喃唑酮代谢物检测中的应用

硝基呋喃类药物在动物体内代谢形成的代谢物,能够与蛋白质结合形成蛋白结合物,该类结合物在弱酸条件下能够分解并被人体吸收,对人体健康产生极大的影响。对中国渔业产业发展造成巨大影响之一的“多宝鱼事件”便是因硝基呋喃代谢物残留引起的。

2004年,Kevin等首先制备出了呋喃唑酮衍生物的多克隆抗体,为呋喃唑酮代谢物的免疫分析方法奠定了基础。2013年刘欢等[24]基于免疫胶体金技术,建立了水产品中硝基呋喃类代谢物残留快速检测和评价系统。张敏、桑丽雅等[25]研制了用于检测水产品中硝基呋喃代谢物的胶体金快速检测试剂板,该试剂板为四合一试剂板,对水产品中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃它酮代谢物和呋喃妥因代谢物的检出限分别为1.0、1.0、1.0、2.0μg/kg。结果表明该试剂板具有快速、准确、灵敏度高的特点,适用于大批量水产样品中硝基呋喃代谢物的检测。

在中国,水产品养殖的模式主要以个体养殖为主,养殖户多又分散,就造成了个别养殖户在生产过程中使用违禁药物。水产品质量检测是水产品质量管理、衡量水产品质量安全水平的首要手段,具有非常重要的现实意义[26]。近年来,随着食品安全体系的健全和发展,面对多而散的庞大监管对象,如何实现安全、快速、高效的检测,成为食品检测中的热点问题。尤其针对中国水产品胶体金免疫层析技术作为一种新兴技术,具有实验室传统检测方法所不具有的优势,能够缩短实验室检测时间、成本低廉、及时准确并且可用于大批量的现场检测等特点,从而在生物医学、临床检测、微生物检测以及药物残留检测中有广泛的应用。

4 小结

胶体金免疫层析技术 第2篇

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 虫株

刚地弓形虫速殖子RH株, 华中农业大学农业微生物国家重点实验室寄生虫研究室馈赠, 华中农业大学临床兽医学实验室液氮保种。

1.1.2 试验动物

SPF级昆明小鼠, 雌雄各半, 体重 (20±2) g, 购自武汉大学实验动物中心;健康犬, 购于华中农业大学动物房。

1.1.3 主要试剂

氯金酸、柠檬酸三钠, 购于上海化学试剂一厂;亲和纯化的羊抗兔IgG 及兔抗犬IgG, 购于武汉贝尔生物有限公司;弗氏佐剂、牛血清白蛋白 (BSA) , 购于Sigma公司;硝酸纤维素膜, Sartorius公司产品;J-B8PVC底板、GF-06玻璃纤维膜、H-8吸水材料、样品垫、P-03MAX线标贴, 均购于上海金标有限公司;弓形虫IHA 试剂诊断抗原 (批号为070911) 、标准阳性血清 (批号为070315) 、标准阴性血清 (批号为070310) 和稀释液 (批号为070618) , 均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.1.4 血清样本

96份血清, 按随机采样法采集于武汉明星宠物医院和华星宠物医院就诊犬;4份人工感染犬血清和犬弓形虫标准阴性、阳性血清, 自制;犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒与犬冠状病毒的阳性血清, 自行收集或购于军事医学科学院军事兽医研究所。

1.2 方法

1.2.1 弓形虫可溶性抗原的制备

复壮液氮保种的RH株弓形虫速殖子, 大量接种昆明小鼠, 3 d后拉颈处死小鼠, 每只用4 mL灭菌PBS冲洗腹腔, 收集腹水;经4 ℃过夜后, 500 r/min离心去除自凝物, 再经3 000 r/min离心15 min;弃上清液, 取沉淀用PBS洗2次, 加入沉淀湿重20~30倍的0.25%胰蛋白酶, 混匀, 37 ℃水浴消化30 min;3 000 r/min 离心15 min;弃上清液, 取沉淀用PBS洗涤3次, 镜检观察速殖子纯度;调整速殖子浓度后经-20 ℃及37 ℃反复冻融5次, 经细胞超声破碎仪超声破碎15 min;4 ℃、12 000 r/min离心30 min;取上清液即为弓形虫可溶性抗原[2], 用紫外分光光度计测定蛋白浓度。

1.2.2 犬抗弓形虫抗体的制备

用制备的弓形虫抗原以弗氏佐剂免疫法多次免疫健康犬, 当琼脂扩散试验的抗体效价达1∶64以上时采集免疫犬血清 (作为阳性血清) , 分装, -20 ℃冻存, 备用。

1.2.3 胶体金的制备

采用柠檬酸三钠还原法[3]。将1.0 g氯金酸 (HAuC14) 一次性溶解于三蒸水中, 定容至100.0 mL, 配成1%的水溶液;取上述溶液1 mL加入到99 mL三蒸水中, 制成终浓度为0.01%的氯金酸溶液;将其置于磁力加热搅拌器上煮沸, 快速加入经微孔滤膜过滤的柠檬酸三钠2.8 mL, 继续加热, 溶液由黄色变灰再变黑色最后变为酒红色, 继续加热搅拌15 min;冷却到室温后定容到100.0 mL, 4 ℃保存。采用肉眼观察法及紫外-可见光测定所制备的胶体金的最大吸收峰波长以鉴定质量[3]。

1.2.4 胶体金标记兔抗犬IgG金标垫的制备

待所制备的胶体金冷却后用0.2 mol/L K2CO3调pH值至9.0;在10.0 mL胶体金溶液中缓慢加入120 μg已稀释好的兔抗犬IgG (5 min左右加完) , 之后磁力搅拌15 min;缓慢加入5% BSA 2.5 mL至终浓度为1%, 继续搅拌30 min;放于4 ℃冰箱中静置2 h;之后4 ℃、2 000 r/min离心10 min;弃沉淀, 4 ℃、10 000 r/min离心30 min;弃上清液, 用TBS轻轻悬起较疏松的红色沉积物, 加TBS溶解疏松的红色沉积物至原体积, 4 ℃、10 000 r/min离心30 min;弃上清液, 用TBS溶解疏松的红色沉积物至原体积的1/10, 即为纯化的胶体金标记兔抗犬IgG复合物, 4 ℃保存。采用浸泡法标金, 即用0.05 mol/L的TBS (pH值为8.5) 稀释金标记抗体, 充分混匀后将处理后的玻璃纤维膜裁成2.5 cm×3 mm大小, 浸入金标蛋白溶液中, 5 min后取出, 37 ℃干燥3 h;4 ℃密封干燥保存。

1.2.5 试纸条最佳检测条件的建立

试纸条检测线——T线条件的确定:用0.05 mol/L的TBS (pH值为8.5) 将制备的弓形虫可溶性抗原稀释为0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 mg/mL, 划线于硝酸纤维素膜T线上, 制成试纸条, 同时将弓形虫阳性血清稀释为不同浓度进行方阵试验, 以阳性血清稀释倍数高、抗原用量小且T线颜色仍明显的浓度为最佳T线包被浓度, 确定为检测线的最适印迹量。

试纸条质控线——C线条件的确定:用上面确定好的弓形虫可溶性抗原浓度划线于硝酸纤维素膜T线上作为检测线, 同时把羊抗兔IgG稀释成0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5 mg/mL, 划线于硝酸纤维素膜的C线上。作上标记进行试验, 根据反应结果确定羊抗兔IgG最适印迹量, 以此为质控线的最适印迹量。

免疫胶体金复合物稀释度的确定:将纯化的胶体金标记兔抗犬IgG复合物溶液做1∶1, 1∶1.5, 1∶2, 1∶2.5, 1∶3 5个不同稀释度后制成试纸条。在确定的C线和T线条件下, 将试纸条相对于一系列稀释的犬阳性血清进行方阵试验。根据反应结果, 以显色快且颜色鲜明的为最适金标记抗体稀释度。

1.2.6 试纸条组装及结果判定

试纸条由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和样品吸水垫组成。上段为手持部位 (吸水垫, 可吸收检测样品中的多余液体) ;中段为试验反应区 (硝酸纤维素膜, 包括判读结果的检测带T、包被弓形虫可溶性抗原和指示试纸条质量的质控带C、包被羊抗兔IgG) , 在中下段之间放置吸附有胶体金标记兔抗犬IgG复合物的金标垫;下段为样品区 (玻璃纤维素膜, 接触待检样品) , 黏附标有MAX指示线的胶带。将整个试纸条贴附于双面胶白色塑料背板上, 切成4 mm宽的条形带, 密封干燥保存, 备用。

检测时, 从密封袋中取出试纸条, 按MAX线标示将试纸条浸入样本溶液中, 液面不超过MAX线, 20 s后取出, 平放于操作台上, 15 min内判断结果。检测线、质控线均出现红色条带者为阳性结果;检测线无条带、质控线出现红色条带者为阴性结果;检测线、质控线均未出现红色条带者为无效结果。

1.2.7 试纸条各项性能的测定

特异性试验:用试纸条检测犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒与犬冠状病毒的阳性血清, 观察结果。

敏感性试验:将阳性血清做一系列倍比稀释, 分别将试纸条插入不同稀释度的阳性血清中, 与琼脂扩散试验确定的结果作对比, 确定其最高检测稀释倍数。

重复性试验:用不同批次的试纸条检测相同的阳性血清和阴性血清, 每个样品重复检测5次, 看其重复性是否良好。

稳定性试验:将不同批次的试纸条于室温和4 ℃干燥密封保存。保存于室温的试纸条每周取出4条检测阳性、阴性血清, 共观察8周;保存于4 ℃的试纸条每月取出4条检测阳性、阴性血清, 观察8个月。

1.2.8 犬血清样本的检测

根据上述试验建立的最佳检测条件, 用胶体金试纸条与弓形虫间接血凝 (IHA) 试剂盒平行对比检测所采集的100份临床血清样本 (其中人工感染犬血清4份、宠物医院就诊患犬血清96份) 。IHA试剂盒的操作严格按照说明书进行。

2 结果与分析

2.1 弓形虫可溶性抗原的制备

纯化的弓形虫速殖子的纯度在96%以上, 弓形虫可溶性抗原的浓度为3.8 mg/mL。

2.2 试纸条最佳检测条件的建立

试验结果表明, 试纸条最佳检测条件为弓形虫可溶性抗原点膜浓度为2.5 mg/mL, 羊抗兔IgG点膜浓度为0.75 mg/mL, 金标记抗体作1∶2倍稀释检测线清晰且背景较浅。

2.3 试纸条各项性能的测定

用试纸条检测犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒与犬冠状病毒的阳性血清均只在质控线C处出现1条红色条带 (为阴性) , 说明该试纸条特异性较好。

将阳性血清做1∶2, 1∶4, 1∶8, 1∶16, 1∶32, 1∶64倍稀释, 分别将试纸条插入到不同稀释度的阳性血清中, 结果表明其最高检测稀释度为1∶32, 表明其敏感性良好。

用不同批次的试纸条检测相同的阳性血清和阴性血清, 每个样品重复检测 5 次, 结果均一致, 表明重复性良好。

室温保存的试纸条第4周检测结果与第1天的检测结果相同, 检测线和质控线的颜色无明显变化;从第5周起, 检测线和质控线的颜色均变浅, 金标垫上的胶体金颗粒释放不完全, 故室温条件下可保存4周。4 ℃保存的试纸条从冰箱中取出后先在室温平衡30 min后再进行检测, 保存至第6个月时试纸条的敏感度和其他性能均无明显改变, 第7个月金标垫上的胶体金颗粒释放不完全, 故4 ℃条件下可保存6个月。

2.4 血清样本的检测结果 (见表1)

由表1可知:胶体金试纸条法共检出7份阳性样本和93份阴性样本, IHA试剂盒检出8份阳性样本和92份阴性样本, 胶体金试纸条法与IHA试剂盒的总符合率为99.0 % (99/100) , 其中阳性和阴性符合率分别为87.5% (7/8) 和98.9% (92/93) ;胶体金试纸条法与IHA试剂盒对4份人工感染弓形虫犬血清检测结果均为阳性, 两者的符合率为100%。

3 讨论

研究建立的犬血清弓形虫IgG抗体快速胶体金免疫层析试纸条保持了快速、操作简便等优点, 同时价格低, 具有很好的重复性和特异性, 与IHA试剂盒总体符合率为99.0%, 其中人工感染犬样本的符合率为100%, 表明所研制的试纸条可替代IHA试剂盒专用于犬血清学诊断及流行病学调查, 具有较大的临床应用价值和较好的临床推广前景, 适宜在基层兽医门诊中推广应用。

参考文献

[1]于恩庶.弓形虫病学[M].福州:福建科学技术出版社, 1992:125-127.

[2]刘佩林, 吴增强, 武苏平.弓形虫速殖子纯化方法的比较[J].天津医科大学学报, 1996, 2 (1) :59-60.

胶体金免疫层析技术 第3篇

黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层层析法、微柱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱串接质谱法等, 其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分[2,3,4,5]。这些新方法、新手段的快速使用, 为黄曲霉毒素的检测提供了更广泛的选择余地, 适应了不同的检测目的和要求。

免疫胶体金技术是20世纪80年代继三大标记技术 (荧光素、放射性同位素和酶) 后发展起来的固相标记免疫测定技术。目前已在微生物检测、兽医快速检测以及食品安全检测等方面得到了日益广泛的应用。该方法最大特点是单份测定、简单快速、特异敏感[6]。本研究旨在建立快速检测巴旦木中的黄曲霉毒素B1 (AFB1) 的胶体金免疫层析方法, 适合现场对AFB1的检测和监控等工作, 可作为一种快速定性筛查手段, 具有重要的经济价值和社会价值。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

黄曲霉毒素B1标准品 (批号:AF025B) 100μg/m L, 北京华安麦科生物技术有限公司;开心果标准样品 (BRM003021, 黄曲霉毒素B1 (27.8±3.3) μg/kg) , Romer Labs公司;黄曲霉毒素B1胶体金免疫层析试纸条:北京华安麦科生物技术有限公司;黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒:Romer Labs公司;三氯甲烷 (分析纯) , 天津市富宇精细化工有限公司;甲醇 (分析纯) , 天津市富宇精细化工有限公司;无水硫酸钠 (分析纯) , 天津市富宇精细化工有限公司。

1.2 仪器与设备

XS204电子天平, 梅特勒-托利多中国;KQ-500VDE双频数控超声波清洗器, 昆山市超声有限公司;VOS-60A真空干燥箱, 施都凯仪器设备有限公司;3K15离心机, SIGMA公司;DC-12氮吹仪, 上海安谱学仪器公司;DNX-9620电脑洗板机, 北京普朗新科技有限公司;DNM-9606酶标仪, 北京普朗新科技有限公司。

2 试验方法

2.1 胶体金免疫试纸卡检测

2.1.1 样品制备

巴旦木样品共5个批次各500 g, 用粉碎机粉碎后, 过20目筛。

2.1.2 样品提取

在50 m L离心管中称取制备好的巴旦木样品5.00 g, 加入15 m L 80%的甲醇溶液 (甲醇∶水=8∶2, V/V) 超声提取10 min, 在10000 rpm下离心5 min, 取得上清液, 吸取上清液2.0 m L于离心管中, 氮吹蒸干 (50℃) 。蒸干后加入0.4 m L样品缓冲溶液, 彻底溶解吹干后的固体, 此溶液为样品提取液, 待测。

2.1.3 检测卡检测

拆开包装, 取出检测卡, 在1 h内使用。用滴管吸取待测样品溶液, 垂直滴加5~8滴 (100~150μL) 于加样孔中, 加样同时开始计时, 5 min后读取结果, 10 min后结果无效。

阴性:CT线均出现, 表示样品中不含黄曲霉毒素B1或其浓度低于检测限。

阳性:检测T线不出现, 表示样品中黄曲霉毒素B1的浓度高于检测限。

无效:未出现C线, 表明操作不正确或检测卡已经失效。

2.2 酶标仪法检测

2.2.1 样品前处理

称取制备好的巴旦木样品5.00 g, 加入70%的甲醇溶液, 振摇3 min, 在10000 rpm下离心5 min, 取上清液1 m L, 再加入1 m L水, 待测。

2.2.2 测定吸光度

配制0、1、5、10、20、50 ng/m L的黄曲霉毒素B1标准溶液加到酶标板的孔中, 测定吸光度值。

2.2.3 检测步骤

(1) 将足够标准品和样品所用数量的孔条插入微孔架, 标准及样品做平行, 并记录标准及样品的位置;

(2) 100μL的标准品或处理好的样品加入到各自的微孔中, 轻轻震板混合, 在室温 (20~25℃) 暗处孵育30 min;

(3) 倒出孔中的液体, 将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中液体。每孔注入250μL洗涤缓冲液, 重复洗涤步骤两次以上;

(4) 加入100μL稀释后的酶标记物到微孔底部, 轻轻震板混合, 在室温 (20~25℃) 暗处孵育60min;

(5) 倒出孔中的液体, 将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中液体。每孔注人250μL洗涤缓冲液, 重复洗涤步骤两次以上;

(6) 加100μL底物/发色剂到微孔中, 混合后在室温 (20~25℃) 暗处孵育15 min;

(7) 加入100μL反应停止液到微孔中, 充分混合, 在450 nm处测量吸光度值, 15 min内读取光度值。

2.2.4 绘制标准曲线

以黄曲霉毒素B1的浓度为横坐标, 对应的吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线。

3 结果与分析

3.1 快速检测试纸卡检测结果

3.1.1 黄曲霉毒素B1标准溶液检测结果

配制0.0、0.05、0.15、0.3、0.9、2.0、5.0、10.0 ng/m L的黄曲霉毒素B1的标准溶液, 用滴管吸取标准溶液, 垂直滴加5~8滴 (100~150μL) 于加样孔中, 加样同时开始计时, 5 min后读取结果, 结果如图1所示。

结果分析:0.9 ng/m L的标准溶液T线不明显, 而2.0 ng/m L的标准溶液未出现T线, 证明检测卡的灵敏度在0.9 ng/m L和2.0 ng/m L之间。国标《GB/T 18979-2003食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》中黄曲霉毒素B1及黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量检出限为1μg/kg。免疫亲和层析净化-荧光光度法测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量检出限为1μg/kg[7]。《GB 2761-2011食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定坚果中黄曲霉毒素B1的限量指标为5μg/kg, 说明此方法可满足检测要求。

3.1.2 样品检测结果

用滴管吸取经2.1.1和2.1.2处理过的样品溶液, 垂直滴加5~8滴 (100~150μL) 于加样孔中, 加样同时开始计时, 5 min后读取结果, 如图2所示。

样品1:椒盐薄皮巴旦木;样品2:椒盐薄皮巴旦木;样品3:椒盐厚皮巴旦木;样品4:薄皮巴旦木;样品5:厚皮巴旦木;样品6:开心果标准样。

样品1~5号出现C、T线, 呈阴性, 证明其中不含黄曲霉毒素B1或是低于其检测限;6号样品呈阳性, 证明其中含有黄曲霉毒素B1。

结果分析:市售的五种巴旦木样品中未检测出黄曲霉毒素B1, 呈阴性;样品6号是已知含有27.8μg/kg黄曲霉毒素B1的开心果标准品, 所以呈现阳性。

3.2 酶标仪检测结果

3.2.1 标准曲线

黄曲霉毒素B1标准溶液检测结果, 吸光度值对浓度作图, 见图3。

3.2.2 样品检测结果

(1) 已知含量的开心果样品中黄曲霉毒素B1检测结果见表2。

(2) 巴旦木样品中黄曲霉毒素B1检测结果见表3。

检测结果表明巴旦木样品中未检测出黄曲霉毒素B1, 而已知含有 (27.8±3.3) μg/kg黄曲霉毒素B1的开心果的检测数据30.9和30.7, 平均值为30.8μg/kg, 在误差允许范围内。

4 结论

(1) 利用免疫胶体金检测卡检测、酶联免疫法检测得出市售五种巴旦木样品中不含黄曲霉毒素B1, 检测时间约为30~40 min。

(2) 利用酶联免疫法检测出开心果标准样品中含有31.3μg/kg的黄曲霉毒素B1, 检测结果在允许误差范围内。说明免疫胶体金检测卡检测黄曲霉毒素B1定性准确;酶联免疫法检测黄曲霉毒素B1定量结果准确。

(3) 用酶联免疫法测定了巴旦木中的黄曲霉毒素B1, 具有高特异性和灵敏度, 属于超微量分析技术, 结果准确, 可满足检测要求, 无AFB的污染, 但是其操作时间较长。免疫胶体金检测卡检测法, 灵敏度高, 检测速度快, 选择性好, 操作简便, 检测成本较低, 适用于小批量食品样品的检测, 可以提高工作效率。通过对比得出免疫胶体金快速检测试纸卡可以应用于现场快速检测, 在检测机构可以得到推广与试用。

摘要：采用胶体金免疫层析法快速检测巴旦木中的黄曲霉毒素B1。巴旦木样品粉碎后, 经提取, 以胶体金免疫层析法对其进行黄曲霉毒素B1测定, 并与酶联免疫吸附法进行比较。结果表明, 当巴旦木中黄曲霉毒素含量超过国家限量标准 (5μg/kg) , 胶体金免疫层析法检测结果为阳性, 说明该方法能够满足干果样品中黄曲霉毒素B1快速检测的要求。

关键词：黄曲霉毒素B1,酶联免疫法,胶体金免疫层析法

参考文献

[1]黄曲霉毒素产生的原因、危害及控制措施[J].饲料博览, 2012 (8) :53.

[2]刘艳丽, 陈建华, 王芳, 等.黄曲霉毒素的检测技术[J].新农村 (黑龙江) , 2010 (9) :27.

[3]廖妍俨, 黄家岭.酶联免疫法检测牛奶中黄曲霉毒素M1的应用[J].贵州化工, 2012, 37 (4) :33-34.

[4]刘作新, 高军侠.黄曲霉毒素的检测方法研究进展[J].安徽农业大学学报, 2004, 31 (2) :223-226.

[5]GB/T 18979-2003食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法[S].

[6]许艳丽, 鲍蕾, 吴振兴, 等.免疫胶体金技术及其在真菌毒素检测中的应用[J].中国酿造, 2010 (7) :13-16.

胶体金免疫层析技术 第4篇

在临床实践或健康体检中, 应用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 法检测乙型肝炎病毒血清标志物 (HBV-M) 的缺陷表现在过程较为繁琐、检测所需要的时间相对较长, 应用胶体金免疫层析技术检测病原的优点表现在快速、简单易行、特异性较高、试剂稳定、无需检测仪器等方面[1], 可用于HBV-M的检测。笔者以酶联免疫吸附试验定性测定HBV-M结果为标准, 应用基于功效系数的可信区间法评价胶体金免疫层析法测定结果, 以判断应用胶体金免疫层析法更适合于哪 (些) 项目乙型肝炎病毒标志物的检测, 以便更好地更准确地对结果进行判定。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料来源[1]

以ELISA法检测的400份新鲜血清作为研究标本, 其中定性检测结果全为阴性、“大三阳”、“小三阳”和HBsAb阳性的标本数量各为100份。采用ELISA法检测后, 立即盲法用胶体金免疫层析法判定酶标五项定性结果。综合2种方法的定性检测结果, 计算评价诊断试验的真实性、可靠性和预测值指标, 结果见表1[1,2]。

1.2 统计方法

按照文献[3]介绍的方法分别计算各评价指标的功效系数di, 按照均数法计算各项HBV-M的总功效系数Di (将其按从大到小进行排序) , 之后按照参数统计要求计算其平方根反正弦代换值, 再按照公式y±u0.005sy[sy= (820.7/mn) 0.5]计算其代换值y的95%可信区间 (CI) , 进行两两比较以判定结果。y的95%CI计算公式中所以用u0.005, 是为了避免增加I类错误的概率。按照文献介绍的方法, 由于α为0.05, 则调整后的检验水准α′=2×0.05/n (n-1) , n为HBV-M的数量。由于n=5, 所以α′=0.005, 查表得u0.005=2.807。

2 结果

2.1 功效系数的计算与排序

误诊率和漏诊率为低优指标, 其余为高优指标。低优指标以最小值和最大值分别作为满意值 (xih) 和不允许值 (xis) , 高优指标与此相反, 见表1最后两行。以公式di= (xi-xis) / (xih-xis) 计算各指标功效系数di (见表1观测值后括号内的数字) , 用平均数法计算各项HBV-M的总功效系数Di, 将其按按大小排序结果为HBeAg>HBsAg>H BsAb>HBeAb>HBcAb (表1) 。

2.2 y95%CI的计算并进行两两比较

代入公式分别计算Di的代换值y及其95%CI, 见表3。比较各HBV-M两两之间y的95%CI可知, 两两之间的差异均有统计学意义 (均P<0.05) 。

注:sy=4.84

3 讨论

对于本例来说, 各HBV-M的总功效系数是评价以酶联免疫吸附试验法为金标准, 胶体金免疫层析法检测HBV-M定性检测结果及其诊断价值的一个综合指数, 且计算得到的数值越大越好。以上述7个评价指标来看, 由表1和表2可知, 胶体金免疫层析法检测HBV-M定性判定的排序为HBeAg>HBsAg>HBsAb>HBeAb>HbcAb加之酶标五项两两之间的差异均有统计学意义 (均P<0.05) , 所以, 应用胶体金免疫层析法首选HbeAg之定性检测, 其次是HBsAg和HBsAb, 最好不用于HBeAb和HbcAb定性检测。

本文对表1资料的分析与文献[2]的分析有异曲同工之功能均为利用文献[1]中的数据, 综合评价7个用于反映诊断试验的真实性、可靠性和预测值指标, 来决定以ELISA法为金标准, 胶体金免疫层析法定性检测何项HBV-M更好。功效系数与秩和比所得排序完全相同, 但是两两比较所得结论不同, 后者的结论为: (1) 和 (2) 、 (2) 与丝、 (4) 和 (5) 两两之间的差异无统计学意义 (P>0.05) , 其他两两之间的差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论不同的原因在于秩和比法在编秩时仅仅考虑了数值的相对大小, 没有充分利用原始数据提供的信息。

参考文献

[1]陈瀑, 康红.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎的评价[J].临床输血与检验, 2003, 5 (1) :30-31.

[2]牛波, 孙爱峰.秩和比法在胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒血清标志物综合评价中的应用[J].中国医药指南, 2011, 9 (13) :340-341.

鸡新城疫免疫胶体金诊断技术 第5篇

胶体金是一种依靠静电排斥作用来维持自身稳定的胶体体系, 吸附作用强, 其颗粒是单个存在的带负电荷的疏水胶, 必须被大分子包裹起来才能在电解质中稳定存在, 而且它可以同糖蛋白、毒素、抗生素、酶及激素等物质的非蛋白质进行结合, 因而可以作为免疫反应的标记。用蛋白质标记胶体金, 方法简便快捷, 试剂性能好, 反应时间短, 结果用肉眼即可鉴定。

1 材料

疫苗为新城疫Ι系疫苗和新城疫Lasota毒株;实验动物为病鸡 (非免疫) 、土鸡和家兔 (健康) ;药品为氯化金、葡萄糖凝胶、硝酸纤维素膜、去离子水、牛血清蛋白、玻璃纤维、柠檬酸钠、聚乙二醇和透析袋。

2 方法

(1) Ig G的分离与提纯。Ig G的提取采用盐析法, 将50m L鸡血清与50m L生理盐水混合, 缓慢加入到100m L35%硫酸铵溶液, 并不断搅拌, 在4℃冰箱中过夜, 然后离心弃去上清液。将沉淀物再次进行悬浮与离心洗涤。沉淀物在缓冲液中透析、除盐, 直到将硫酸除尽, 获得粗提纯。将泡好的葡萄糖凝胶与缓冲液进行平衡, 然后将其装在长25cm、半径1cm的层析柱中。1小时后待多余液体流出来再加样, 用少量缓冲液清洗管壁内侧, 流出大约20m L的洗脱液时用20%磺基水杨酸进行检测, 收集所需蛋白质并用蔗糖浓缩。

(2) 抗体制备。将2月龄以上的鸡用鸡新城疫Ι系疫苗进行免疫, 2周以后再次免疫。10天后进行试血, 如果达到理想标准则进行心脏采血与血清分离, 采集到的即为鸡新城疫抗体。用盐析法进行初步提纯, 然后用离子交换柱法进一步提纯。将提纯后的抗体在PEG-20000透析袋内浓缩, 并对蛋白质浓度进行测试且调为1mg/m L, 检测抗体效价并进行冷冻保存。

将制得的鸡新城疫抗体制成弗氏完全佐剂对家兔进行初次免疫, 1个月以后再用弗氏不完全佐剂进行免疫, 10天后进行试血, 达到预期的效果后对其进行心脏采血与血清分离。用盐析法进行初步提纯, 然后用离子交换柱法进一步提纯, 将提纯后的抗体在PEG-20000透析袋内浓缩, 并对蛋白质浓度进行测试且调为1mg/m L, 检测抗体的效价并进行冷冻保存。

(3) 胶体金的制备。胶体金的制备采用柠檬酸钠还原法。首先用去离子水配置氯化金溶液, 配置的比例为0.01%。取100m L配置好的氯化金溶液进行加热, 加热至沸腾时快速搅拌, 在搅拌剧烈的情况下将配置好的柠檬酸钠溶液迅速加入, 继续加热至沸腾, 5~8分钟后溶液变为酒红色。用去离子水将溶液调为直径约20nm的胶体金颗粒溶液, 并在4℃下保存。

(4) 胶体金标记物的制备。取20m L胶体金颗粒溶液, 用碳酸钾溶液将p H调至9.0~9.2, 在磁力的搅拌下慢慢加入0.4m L纯化的一抗, 搅拌20分钟以后加入0.8m L聚乙二醇溶液, 再加入0.4m L稳定剂以防止发生非特异性凝聚。搅拌均匀后高速离心弃去上清液, 将得到的沉淀物-胶体金蛋白质结合物放入PBS中, 制成包裹着蛋白质的胶体金溶液, 冷藏保存[2]。

(5) 胶体金试纸条的制备。将配置好的胶体金标记均匀涂在玻璃纤维上, 干燥后冷冻保存。

将一抗和二抗用p H7.5的PBS溶液稀释, 包裹在硝酸纤维素膜上, 线的宽度保持在1nm左右, 两条线之间的距离控制在0.5cm。鸡新城疫抗体线作为检测线, 兔抗鸡抗体线作为质控线, 干燥以后用含1%BSA的PBS进行封闭, 保存备用。

3 结语

胶体金诊断技术作为一种检测鸡新城疫的手段, 具有可推广性强及操作简便快捷的优点。胶体金的制备方法有很多, 但是单一粒度胶体金颗粒的制备通常采用柠檬酸钠还原法, 使用这种方法制备效果更好。

摘要：鸡新城疫是由新城疫病毒引起的、具有高度感染性和致死性的疾病。这种病毒主要通过病鸡的脑、血液、粪便、内脏和口鼻传播, 侵害鸡的呼吸道、胃肠道和中枢神经系统。目前国内外对鸡新城疫不能很好地控制病毒的传播和蔓延。胶体金诊断技术是用于对鸡新城疫的检测技术, 本文主要从胶体金诊断技术的材料与方法、结果与诊断等方面进行阐述。

关键词：鸡新城疫,免疫,胶体金,诊断技术

参考文献

[1]刘升宝, 姜开海.鸡新城疫免疫胶体金诊断技术.科技信息:农林论坛, 2009 (7) :65-66.

胶体金免疫层析技术 第6篇

1 概述

1.1 基本原理

免疫胶体金快速诊断技术主要是以微孔滤膜为固相载体, 包被已知抗原或抗体, 将待测样本加入之后, 通过微孔膜的渗滤作用促进标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原结合, 再发生一系列化学反应产生红色, 并以此判定结果。目前, 临床上应用的主要包括免疫渗滤试验和免疫层析试验[3]。

1.2 优势

免疫胶体金快速诊断技术整个试验过程只需要试剂盒或试纸条, 而不需要任何实验仪器, 大大提高操作的方便性, 反应结果非常明显, 可通过肉眼直接判别, 反应时间也非常短, 一般情况下, 5~10 min便可获得检测结果;同时, 免疫胶体金快速诊断技术具有很高的灵敏度和特异性。

2 应用

免疫胶体金快速诊断试剂主要应用于兽医诊断基层单位, 尤其是对于专业人员和专业设备比较缺乏的基层单位。目前, 市面上已出现了很多已经免疫胶体金快速诊断家禽家畜及宠物用金标诊断试剂, 用于检测猪口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟、猪旋毛虫、鸡传染性法氏囊病、鸡新城疫、禽流感、犬瘟热、犬细小病毒及宠物用旋毛虫病等疾病的快速诊断试剂。归纳起来, 其应用主要包括2个方面。

2.1 抗体的检测

这种方法主要是应用于检测NC膜上包, 具体方法为:用胶体金标记相应抗原, 也可以标记SPA, 如果检测样品为阳性, 则可以在标记物中看到红色斑点。我国著名农学研究者张书永[4]等应用该方法对猪瘟抗体进行了检测, 选择100份猪血清进行猪瘟抗体检测比较, 研究结果显示仅有一例出现不符, 符合率达99.0%。另外, 一名研究者陈剑阁[5]等建立的猪瘟金标免疫层析试纸测试60份标准阳性血清和36份标准阴性血清, 试验结果显示器符合率达百分之百。曹三杰等建立了斑点免疫金染色法能有效对PPV抗体进行检测, 并通过对猪细小病毒病抗体进行了检出试验, 试验结果显示器检出量为1.008×10-10 g/m L, 不同的试验标本混合可出现交叉反应, 比如猪布鲁氏菌病、猪衣原体病、猪伪狂犬病等等。方莹等通过试验提出了的RRRS抗体免疫金标试纸, 并对60份猪血清及血液样品进行抗体水平检测, 检测结果显示其符合率达百分之百。王春仁等研究出的斑点免疫金渗滤试验能有效对绵羊脑多头蚴病进行检测及诊断, 具有很高的符合率;另外一些临床研究者还建立了EDS-76病毒抗体的斑点免疫金测定法、猪伪狂犬病抗体水平免疫胶体金快速检测试纸法、特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法等方法, 并提出共同的结论, 采用免疫胶体金快速诊断在多种动物疾病抗体的检测中具有很高的符合率、灵敏度和特异性。

2.2 病原的检测

病原检测方法有很多, 常见的比如双抗体夹心法, 该方法主要是以2种抗该病原的抗体分别用来包被NC膜和标记胶体金, 阳性样品的病原会与金标抗体和NC膜上的抗体相结合, 从而对病原进行检测。我国著名医学研究者等建立了检测犬细小病毒的胶体金免疫层析法。并用该方法对60份犬粪便样品进行了检测, 检测结果显示与HA结果相比可获得40倍以上的效价, 还有一些研究者也纷纷建立了检测PRRSV的斑点免疫金渗滤法、快速诊断鸡新城疫的免疫层析测试条等多种方法和试剂, 并得出共同的结论, 免疫胶体金快速诊断在多种病原的检测中具有较高效价, 可获得较高检出率, 值得在临床上推广应用。

3 结语

免疫胶体金快速诊断技术是随着医疗技术水平的发展提高而研究的一项新型的独特的诊断技术, 该技术与免疫酶标技术、放射免疫技术、免疫荧光技术并列为四大免疫标记技术, 具有非常重要的临床价值, 在未来也具有广阔的发展空间。目前, 该技术在兽医诊断上得到了逐步推广, 但还需进一步研究。

摘要：免疫胶体金标记技术是近年来随着医疗技术水平的发展提高而研究的一项新型免疫标记技术, 该技术主要以胶体金作为示踪标志物, 在抗原抗体反应中具有良好应用效果。鉴于此, 就免疫胶体金快速诊断技术在兽医诊断上的应用进行了简单的分析。

关键词：免疫胶体金快速诊断技术,兽医,诊断,应用

参考文献

[1]艾嘉亮, 邓国华, 王君伟.胶体金免疫层析技术及其在兽医诊断上的应用[J].黑龙江畜牧兽医, 2009, 5:88-89.

[2]杨雪林, 张福官, 杨卫华, 等.胶体金快速诊断技术在兽医临床诊断中的应用[J].安徽农学通报, 2010, 2:36-37.

[3]庄金秋, 梅建国, 沈志强.胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[J].中国动物检疫, 2012, 9:70-75.

[4]张书永.免疫胶体金快速诊断技术的临床应用与质量控制[J].中国医学装备, 2013, 5:37-39.

胶体金免疫层析技术 第7篇

旋毛虫病, 是一种较为常见的人畜共患寄生虫病。若是患有旋毛虫病的人得不到及时治疗, 会造成死亡。随着医疗技术的不断发展和进步, 对于猪旋毛虫病提出了经由免疫胶体金技术的诊断方式。所以, 我院为了探究免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用, 对其进行了相关实验研究。现将报告如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料

以我我院2015年01月01日至2015年09月01日收集的猪旋毛虫标本进行讨论和分析。

1.2 方法

在实验过程中需要使用的器械有79-1加热磁力搅拌器和SIGMA-3K30超速离心机, 生产公司分别为江苏中大仪器厂和上海天呈医流科技股份有限公司。在实验过程中需要使用的试剂有柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、氯金酸、碳酸钾, 其生产公司分别为北京鼎国生物技术有限公司、大连宝生物生物技术有限公司、洛阳市化学试剂厂。

1.2.1 制备试剂

首先需要制备胶体金和处理旋毛虫排泄抗原。在制备胶体金时, 将浓度为0.01%的100m L氯金酸进行加热到沸腾。加入2m L的柠檬酸三钠水溶液, 浓度为1%, 加热30min后进行冷却。最后, 加入0.5m L的碳酸钾。处理旋毛虫排泄抗原时, 首先需要进行样本的标记, 并将其放置在氯化钠中。其次, 将其冰箱中进行透析。最后, 放置在离心机中进行离心, 并调整蛋白浓度。

1.2.2 胶体金于旋毛虫排泄抗原比例确定实验

在10支试管中均装入1m L p H为9的胶体溶液, 并将旋毛虫排泄抗原使用p H为9的硼酸钠缓冲液, 并将蛋白浓度分别稀释为50μg/m L、45μg/m L、40μg/m L、35μg/m L、30μg/m L、25μg/m L、20μg/m L、15μg/m L、10μg/m L、5μg/m L, 并将其分别置入于10支试管内于胶体金溶液混合。同时在使用一支空试管将胶体金溶液于1m LPBS进行混合。在静置10min后, 在11支试管中分别置入100μL的氯化钠溶液, 其浓度为10%。观察11支试管在静置2h后的化学反应变化情况。

1.3 观察指标

观察胶体金与旋毛虫排泄抗原比例确定实验后的液体颜色变化以及聚沉的现象。

1.4 统计学方法

应用SPSS l5.0软件分析, 计量数据采用均数±标准差 (X±S) 表示, 组间比较采用t检验;计数资料采用百分比表示, 数据对比采取X2校验, P>0.05, 差异无统计学意义, P<0.05, 差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 实验结果分析

经过数据对比分析后发现, 对于胶体金与旋毛虫排泄抗原的混合, 其实验结果显示p H为9的结合效果最佳。在实验中发现, 1~6试管的旋毛虫排泄抗原量不足, 因此颜色由红色转变为蓝色。在第7支试管内的旋毛虫排泄抗原量为稳定胶体金的最低含量。而7~10试管中的旋毛虫排泄抗原量以达到了标准或是超出不, 因此试管内的颜色不变。

对于胶体金与蛋白用量比例情况。详见表1。

3 讨论

随着医学的不断发展和进步, 在免疫诊断中提出了经由免疫胶体金技术的诊断方式。胶体金在弱碱中, 其能够有效的于蛋白分子进行结合。现今, 免疫胶体金技术的诊断方式已经得到了广泛的应用。在实施胶体金于旋毛虫排泄抗原比例确定实验时, 将胶体金于旋毛虫排泄抗原的p H值调节到到稳定值, 两者的正负电荷就能够有效的结合到一起。从上述实验研究结果中可知, 加入少量的猪旋毛虫排泄分泌抗原或是不加入猪旋毛虫排泄分泌抗原, 那么液体颜色就会由红色逐渐变为蓝色。若是加入最低稳定量的猪旋毛虫排泄分泌抗原或是过量的猪旋毛虫排泄分泌抗原, 那么液体颜色则会保持不变, 但是会出现聚沉的现象。在实验中1m L的胶体金中最少需要35μg的猪旋毛虫排泄分泌抗原蛋白才能够保持稳定。由此可见, 在免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用效果较为显著, 值得在临床诊断中大力推广和应用。

参考文献

[1]陈俊彦, 等.免疫胶体金技术的应用与展望[J].化学分析计量, 2014, 23 (1) :101-103.

[2]王建科, 等.胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用[J].动物医学进展, 2011, 32 (1) :93-98.

[3]刘明远, 等.我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展[J].中国兽医学报, 2014, 34 (7) :1205-1206.