新生代型范文（精选8篇）
新生代型 第1篇
温和型猪瘟一般临床表现不明显, 发病率和死亡率均较低。有时出现怀孕母猪流产、胎儿木乃伊化、死胎及畸形。新生仔猪一旦感染, 死亡率较高, 成年猪一般能耐过。笔者就一起新生仔猪温和型猪瘟引发腹泻的诊治情况介绍如下:
1 发病情况及临床症状
2011年10月初, 上饶罗桥某养殖户有一初产母猪产了13头仔猪, 初生重在1.8 kg左右。6日龄时一头患有八字腿的仔猪开始出现水样拉稀, 第2d死亡。8日龄时又有3头仔猪拉稀, 死亡1头, 其余仔猪食欲差、萎靡不振。常规抗生素进行治疗无效, 9日龄再死亡1头。此时病猪全部拉稀, 主要表现消瘦、贫血、全身衰弱、步态缓慢无力、嗜睡、腹股沟淋巴结肿大、眼睑粘连, 眼睛潮红, 身上一股恶臭味。一头濒临死亡的仔猪, 被毛粗乱、消瘦、倒地不起、全身颤抖、肛门不断有黄色液体流出。
2 解剖病变
解剖无典型病变, 主要特征性病变是淋巴结肿胀、水肿, 肠系膜淋巴结肿大、出血, 肠黏膜脱落、出血, 肾脏表面有散在的小点出血, 膀胱积尿涨大, 脾脏及肺无明显病变。
3 病因分析及诊断
3.1 病因分析
经畜主介绍, 该初产母猪购自当地一种猪场, 购进时体重在100kg左右, 疫苗免疫情况不详。仔猪发病前一天有对产床进行过冲洗, 结果第2d就出现仔猪拉稀。可见管理措施不当是此次发病的诱因。
3.2 初步诊断
根据临床症状、解剖病变及病因分析等, 笔者初步诊断为温和型猪瘟继发细菌性腹泻。
4 治疗措施
4.1 隔离处理
一头病情严重、无治疗价值的仔猪淘汰。
4.2 紧急接种
每头仔猪紧急接种2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。
4.3 控制继发感染
针对腹泻, 使用穿心莲、头孢配黄芪多糖, 耳根后肌肉注射, 左右各一针, 连续用药3 d, 每头仔猪口服1粒西洋参含片。
4.4 加强饲养管理
做好栏舍的保温和通风工作, 保持栏舍干燥。在饮水中添加用口服补液盐和多维, 另外加少量的教槽料以备仔猪采食。
加强消毒, 特别是对仔猪拉稀的粪便和母猪粪便, 采用沸石粉覆盖法处理, 并用敏感消毒剂对周围环境进行消毒。
新生代作文教材 第2篇
简介
小荷作文1028作文狗教材，又称“新生代教材”，共分为两类，一类是课件；一类是“课品”，即教具、学具、玩具等。课件，指上课用的课本，小荷作文叫“小荷教本”。分上、下两册！其如此安排，是基于儿童本位的角度考虑，即让“课堂有神秘，让学员有期待”。
同时，每位学员另有《荷练本》一册。配套校园作文，与常用作文接轨，传授常用知识。《荷练本》在课外使用，每学期皆有。
《荷练本》介于“教本”和“家庭作业”之间，宗旨是“用小荷作文的方式，解决校园作文问题”，将其趋化、易化和美化。其中所设栏目富有创意和实效，比如“傻大哥趣味选择题”栏目——将小学生作文知识的“必知必会”，采用趣味的方式呈现，学员哈哈一乐之间，即学有所得；比如“小荷小先生/作文最最最”栏目——采用极具创意而科学的方式，让“学员做老师，家长做学生”，把小荷课堂延展至家庭之中，使亲子共享作文之乐、生活之趣。
课品，又称教具或学具、玩具，是辅助教学所用的课堂用品。教具为老师专用；学具、玩具为学员专用，每人一份，用于课堂练习，或课后赠送。基本上每节课都有相对应的教具或学具。在每学期的《课历》、《分课品表》、《课品总明细表》及《教案》、《课堂实录》上都有具体的说明。
举例说明：比如，小荷常规课《600秒快写课》，这节课用到：《小荷教本》（作文狗活页教材），内容为《600秒快写课》的具体练习内容及要求。学具为《小荷快写卡》，学生每人一张，用于快写比赛写作；教具为“快写王”、“神笔手”奖章、小荷“迷你奖”等，用于快写第一名和前十名奖励之用。这些课品的使用，使课堂更完整、教学更完善、操作更便易，从而该课程达到最佳之教学成效。
设计总纲
一、千课实验，百余成品；精中选精，便于师训。
二、新品三五，每期推出；学员新老，每年不同。
三、创新形式，忘我作文；游戏氛围，儿童吸引。
四、说写结合，语感培养；现代作文，大写课堂。
五、寒暑同体，春秋呼应；应变市场，与时俱进！
小荷教材五大特性，即：“新颖性、精致性、开放性、持效性和可操作性”。
小荷教材以“儿童母语写作”为核心产品，另将逐步推出“儿童母语文化”教材或产品共五大类，即：
一、识字类；
二、阅读类；
三、口才类；
四、小记者类；
五、其他类。
课程分类
针对小学生“作文八大难题”（“写不出”“写不快”“写不长”“写不了”“写不详”“写不活”“写不美”“写不对”）的问题，小荷已经研发并设计出一系列教材，并独创性地配以课品，即作文的学具、教具和玩具。这在全中国，甚至在世界汉语推广中，都是“独一家“的，这就是小荷人“做中国最先锋的母语文化”的实践和行动。目前，小荷共有十二种常规课、三十余种教学法、百余种产品。在课程设置中，主要分为：常规课和概念课。常规课，就是每学期必上或寒暑春秋四季轮上的课程。
常规课的设置，遵循“春秋同体，寒暑相同”的设置概念，使得老师易学好教，所谓“简简单单用教材，轻轻松松教小荷”。同时，错位教学，也让每期学员感到课堂不枯燥，方式不单调。
四期各级的常规课，形式相同，但内容不同。
概念课，亦是针对解决“作文八大难”所设计，四期各级的形式、内容皆不相同。与校园课本的衔接
针对课本作文的训练和校园写作要求，帮助“困难生”，强化“接地气”，小荷特专门设计了与课标、课本相配套的《荷练本》——从校园课本中，选取难度较大的常用作文题，教方法、授知识；给范文、讲技巧，专门解决学员校园作文中的常见疑难或问题。
《荷练本》与校园作文接轨或联系，与《小荷教本》互为映衬——课内《荷教本》，课外《荷练本》，此“两本”，被师生们誉为“作文的两条腿，小荷的双面绣”。但小荷作文的教学，旨在教“活”的作文，解决孩子害怕作文和语言成长，即“作文怕”和“作文差”的两大根本性和迫切性问题。
儿童作文的学习，主要分为三个阶段：入门、养趣、提高。学员在小荷作文轻松自由的课堂氛围中，没有对作文的惧怕心理；写作时，没有框框和方法的束缚。在逐步的学习中，学员会注意和尝试作文的多种形式。高年级学员可以掌握应试中关于审题、题材和立意的傻瓜方式，训练和强化“自我表达、趣味写作、意境描述、故事创编、语用应对”五大能力。如此，小荷作文的学员，不仅能轻松应对课本作文，在遇到其他作文时，亦能轻松应对。更重要的，是学员在小荷培养起了写作的兴趣，在高效课堂上，达到持效学习。解决了作文学习的根本问题。相反，“头疼医头、脚疼医脚”式的教学，这一篇得高分下一篇不会写，这样的教学只是一种“短命”的教学，应付的教学，解决不了根本问题，心里还是“怕”，作文还是“差”。
作文与阅读紧密结合
小荷针对“春暑秋寒”四期教学特点，特地在暑假班安排了《100小时限时阅读课》，要求学员在100小时（四天四小时）内，完成一部文学名著的阅读，并完成一份《阅读报告》。跟暑假班《100小时限时阅读课》相对应，寒假班安排了《100小时限时体验课》，将社会实践与亲子活动有机结合，将书本阅读扩大到社会大阅读和生活多元体验。此外，小荷特别注重引导学员的阅读习惯，在小荷教材中，许多课件素材，都是最时尚、最文学、最适合儿童的阅读材料。其中，〈图文赏析〉和〈主题剪报〉的常规作业，就是日常阅读的最好体验和推动。
儿童的阅读始终贯穿于小荷四期的教学之中。
各级教材教学目标
小荷冰心二级班（简称“冰二级”）练习本名称《小荷自由图话本》 ◆教学目标
◎以“作文养趣”、“字句启蒙”为主要教学目标
◎培养以“自由意识”、“勇敢精神”为基点的写作意识，敢于表达对生活的初步感受和想法 ◎培养“作文即字”的意识，建造读写之间的联系，初步体会汉字、汉语的妙趣
◎培养和强化“自由表达、绘本读写、口语写话、事物想象、身边发现和作业过关”的六大意识和能力
◎了解并学习日常礼仪，接触民族节庆的仪式和世界文化的象征符号；注意自然的灾害和自我保护
◎懂得写作是语言的学习。语言就是表达自己、记录想象的符号之一。◎懂得作文就是说话，说经过整理的、明确的话
◎懂得写作可以与更多的人进行交流；懂得尊重别人的表达
小荷圣陶三级班（简称“圣三级”）练习本名称《小荷娱乐字句段》 ◆教学目标
◎以“作文养趣”、“词句明确”为主要教学目标
◎培养以“自由意识”、“娱乐精神”为基点的写作技能，乐于表达对生活的感受和想法 ◎培养学员“作文即字、作文即语感”的意识，勇敢写作、真实写作和趣味写作
◎培养和强化“自我表达、趣味语用、敬语写作、事物素描、中心围绕和作业过关”的六大意识和能力
◎能体验抒发、交流和被欣赏的乐趣；没有对作文的畏惧心理；写作时没有框框和方法的束缚
◎知道语言的学习，需要主动性。写作，能够帮助我们进行更有效的交流
◎了解民族节庆的过程和世界文化的象征符号；了解和辨别人类的危机和无良言行，并注意自我保护和进德向善
◎学习和掌握文章的基本规范和标准，知道文章的构造过程、优劣要点 ◎培养与文学的接近和兴趣
小荷巴金四级班（简称“巴四级”）练习本名称《小荷创想工作簿》 ◆教学目标
◎以“作文入门”、“句文生动”为主要教学目标
◎培养以“自我意识”、“创造精神”为基点的写作技能，乐于表达对生活的感受和想法 ◎培养学员“作文即语感、作文即故事”的意识，勇敢写作、趣味写作和创想写作；大力推广“产量写作”的实践
◎培养和强化“自我表达、语言敏感、虚实区分、事件推想、物品描述和考试提分”的六大意识和能力
◎体验抒发、交流和被欣赏的乐趣；学会与人商讨的方式和态度
◎了解民族节庆、世界文化的表现形式和象征意义；了解多元文化样式的最新信息；了解人类的危机和不同职业者的社会生活
◎懂得写作，能帮助我们成为一个有创造性的思想者；帮助我们更好地理解艺文的多样性和生动性的作用
◎培养文学的兴趣和理想
小荷茅盾五级班（简称“茅五级”）练习本名称《小荷审美读写绘》 ◆教学目标
◎以“作文提高”、“句文优美”为主要教学目标
◎培养以“自我意识”、“审美素养”为基点的写作技能，善于表达对生活的感受和想法 ◎培养学员“作文即语感、作文即故事”的意识，勇敢写作、趣味写作、创想写作和审美写作 ◎培养和强化“自我表达、语用应对、细微发现、意境描述、故事创编和考分提升”的六大意识和能力
◎懂得写作在社会中的存在，能帮助我们将来走进真实的世界做准备；懂得写作，须与其他艺术和不同领域，进行有机结合
◎了解和研究民族节庆、文化象征和艺文行为的过程、符号和意义。了解人生的危难、生命的美好和爱的伟大
◎珍视个人的独特感受。认识自我意识的觉醒，是一切文化创造和文明自觉的基点。懂得写作是个人化的行为
6例巨大型脐膨出新生儿的护理 第3篇
1 临床资料
2012年4月—2013年11月收治6例巨大型脐膨出患儿, 其中男4例, 女2例;出生25min至4d;其中早产儿4例, 足月产2例, 均为剖宫产;出生体重1.96kg~2.75kg, 患儿出生后均可发现脐部有一黄棕色透明状物突出, 外有一层极薄的透明膜包裹, 脐带连接在腹壁缺损5cm~8cm, 缺损大小均在6cm以上的巨型脐膨出。合并有先天性心脏病1例, 肺炎5例, 腹腔间隙综合征5例, 中度贫血3例, 电解质紊乱4例, 低蛋白血症4例, 新生儿硬肿症2例。
2 护理
2.1 囊膜悬吊
给予患儿镇静剂后, 收紧囊膜顶部, 用绷带予以结扎悬吊于新生儿辐射抢救台上方, 由血管钳钳夹固定绷带。在悬吊过程中应注意开始时悬吊力量不要过大, 在血管钳钳夹固定绷带前, 使用便携弹簧秤测量牵拉力量, 牵拉力量初始为0.5kg, 同时利用重力作用使腹腔脏器自然回缩, 从悬吊第2天起逐渐增加悬吊的牵托力量, 与囊膜相连之皮肤在生物应力作用下逐渐延展[2,3]。同时开始由顶端向下结扎收紧囊膜同时向膨出的腹腔脏器施压, 使其尽快还纳至腹腔。
2.2 局部保湿
患儿置辐射抢救台保暖, 囊膜暴露在恒温的环境中容易失去部分水分, 脆性逐渐增大, 容易在回纳的过程中破裂、出血[4]。所以囊膜的保湿和抗感染非常重要。囊膜予无菌方纱包裹后用0.1%安多福湿敷, 每小时外滴0.1%安多福在包裹囊膜的方纱上, 包裹囊膜的方纱保持黄色 (碘的原色) 为宜, 一直保持湿敷状态。主要防止水分丢失以及肠管肝脏肿胀、感染、破裂及坏死。
2.3 做好消毒隔离措施
各项护理操作前中后均注意手卫生, 保护囊膜完整, 防止发生感染[5]。保持病房空气清新, 每天室内通风2次, 温度保持在24℃~26℃, 湿度55%~65%。每日空气消毒、口腔护理和会阴抹洗各2次, 保持患儿肛周皮肤清洁、干燥, 使用透气性良好的一次性纸尿裤, 并勤更换, 避免尿液污染到脐部敷料。
2.4 保暖
持续开放式辐射抢救台保暖, 使患儿的中性温度保持在36.5℃~36.8℃, 提供“鸟巢式”护理, 让患儿达到保暖、舒适和有安全感。
2.5 营养支持
因为肠管长期外突或在羊水中浸泡, 肠系膜多半会产生水肿、增厚, 加之腹内压增高, 患儿较长时间内不能进食, 在此期间, 予留置中心静脉导管并进行静脉高营养及抗炎对症治疗, 防止电解质紊乱及水肿发生。合理补液期间, 营养液予微量泵控制滴速, 同时监测肝肾功能、血生化等检查。开始进食时, 每3h给予1∶1稀释的早产儿奶粉逐渐过渡到配方奶, 严密观察患儿吃奶情况, 有无呕吐、腹胀等情况。肠内营养期间, 根据消化是否良好, 排便有无不畅以及大便的性质、颜色、量, 是否存在消化道畸形, 从而判断营养需求的供给情况。
2.6 密切监测病情变化
持续性机械通气和心电血氧饱和度监测, 密切观察生命体征变化, 撤机后应特别注意呼吸频率、节律, 是否出现呼吸暂停[6]。撤机前应密切观察呼吸机各种参数是否合适, 气管插管是否固定通畅, 及时清除气管插管内及口鼻腔内分泌物, 气管插管内吸痰时应严格执行无菌操作, 避免交叉感染。密切观察心率、血氧饱和度、自主呼吸及血气分析情况, 根据自主呼吸和血气分析结果医生予调整呼吸机的氧浓度及机械通气的频率;密切监控腹内压情况, 由于膨出物肿大将严重压迫腹腔而留置导尿管并予每6h监测膀胱压, 通过监测膀胱内压力间接测量腹内压, 正常腹内压平均压力小于1 0cmH2O (1cmH2O=0.098kPa) , 腹内压10cmH2O~14cmH2O为Ⅰ级腹内压增高, 15cmH2O~24cmH2O为Ⅱ级腹内压增高, 25cmH2O~35cmH2O为Ⅲ级腹内压增高, >35cmH2O为Ⅳ级腹内压增高[7]。为降低腹腔压力, 遵医嘱予每6h开塞露纳肛和肛管排气。腹内压若高则膨出物张力大, 为避免膨出物破裂, 应减少腹压的各种诱因, 保持环境和患儿安静, 床头抬高30°, 若患儿烦躁时按医嘱予镇静;密切观察下肢循环变化, 每8h触摸下肢皮肤温度并予抬高双下肢, 避免及减少双下肢发生水肿。
2.7 心理护理
大多数家长刚过来时表现为紧张、焦虑。对于这种疾病最关心的就是一个存活率, 希望能够通过医务人员的努力尽量挽救这孩子, 但还有个别因经济困难又不想放弃者, 特意为其申请慈善基金, 提供帮助。每天提供1h的探视时间, 有专人指导按照6步洗手法洗手, 穿好隔离衣, 去到床头也有快速消毒液再次消毒才能接触患儿。在探视期间, 有专门的值班护士和管床医生与病人家属进行有效的沟通, 解决他们提出的疑惑和困难, 消除他们心理的恐惧感, 做到解释耐心, 工作细心, 服务热心, 对病人进行全方位的护理, 为治疗和护理创造条件。
3 小结
脐膨出属新生儿外科急症, 若延误病情, 将导致肠坏死、肠穿孔, 甚至威胁患儿生命, 因此及早手术治疗及精心的护理是挽救患儿生命的关键。患儿出生后即刻行脐膨出修补术后, 仍需经过长期适当的手法还纳加压和良好的护理将膨出物回纳到腹腔, 因此有5例患儿成功进行了第二次手术, 并在我们细心的照料下逐渐好转出院。1例未行手术, 而是经过住院治疗及护理使脐部膨出物缩小至3cm×4cm, 无破裂、感染等, 住院期间撤除了机械辅助通气并停掉吸氧和静脉营养补液, 通过鼻饲和口服奶, 胃纳佳, 消化良好, 没有出现肠梗阻现象同时也顺利出院。通过多次将膨出物回纳到腹腔以及护理人员精心的护理下从而为病人减少了住院费用同时也为进一步手术提供了积极优越的条件。
摘要：[目的]探讨巨大型脐膨出术前回纳膨出物期间的护理方法。[方法]经囊膜悬吊防止囊膜破裂、局部保湿、严格的消毒隔离、保暖、良好的营养支持、密切的病情观察以及家属的心理护理。[结论]通过精心护理使患儿腹壁膨出物明显减小, 为病人减少了住院费用同时也为手术提供了积极的条件。
关键词：巨大型,脐膨出,护理
参考文献
[1]王世平, 章文琼, 向波.小儿外科护理手册[M].北京:科学出版社, 2011:119.
[2]Jed G.Nuchtern, Richard Baxter[J].Journal of Pediatric Surgery, 1995.
[3]Delphine Mitanchez.Elizabeth Walter-Nicolet[J].Journal of Pediatric Surgery, 2010, 9:111.
[4]纪红丽.8例经囊膜悬吊顺序还纳脏器治疗新生儿巨型脐膨出的护理[J].天津护理, 2011, 19 (1) :20.
[5]许月眷, 张群, 赵晓燕.11例先天性脐膨出患儿的围术期护理[J].中华护理杂志, 2010, 45 (8) :746.
[6]刘根生, 吴曰杰, 支凌翔.手法还纳压迫包扎疗法治疗脐膨出12例[J].实用儿科临床杂志, 2005, 12 (20) :1256.
经管新生代班体会 第4篇
2012年9月14日，我校全体2012级新生踏上了他们军训之旅。“立正，稍息，向右看齐”，一声嘹亮的军训口令一出，全体新生立即认真投入到训练当中。在他们训练的另一边，是那些辛苦为他们服务的代班们。
烈日炎炎，盛暑难耐，我校经管新生代班依然坚持顶着烈日，不辞辛苦的来到操场，陪着大一经管院的新生一起接受着烈日灼晒的考验。尽管很热，但是却没听到一句抱怨的话语。所以今天，作为代班的我，在此想谈一下我们作为代班的感受。
作为代班，如果说不累的话那绝对是假的。我想一开始其他人竞选代班是和我一样的想法，以为很好玩，也以为工作很轻松，更以为自己可以很容易带好自己的学弟学妹。可是，等真的做了代班后，才发现，原来我们的那些想法实在是太幼稚了。做代班的第一天，我们就要统计学生的军训服情况，整出他们的寝室安排表格，看似很简单的事，可是所有的代班还是犯了同样的错误，因考虑的不周到，军训服有问题的统计不详细，结果第二天全都重新整，即使在上课，也要赶到办公室去，而且还受了批评，再加上吕老师又给我们代班提出的要求，那时才发现，做代班没那么容易，更没那么轻松，有的只是巨大的压力和挑战，而且，还要做到让每个新生都对我们满意，这是很具有挑战性的工作。
接下来的工作更不用说，用一个字表达，那就是“忙”。学生各种各样信息表格，都要一一的给做好。除此之外，我们作为代班还要去学生宿舍区看望他们，了解他们在生活、学习、心理上遇到的问题，并尽力帮助他们解决。看望的过程中，除了爬楼梯累外，喉咙也是很痛的，因为要回答他们提出的很多问题，说的话自然就要多了。接着就是给他们安排班会，也可以说是新生见面会。开展班会也并不是那么容易。班会举办的是否真正成功不仅要看学生是否到齐，还要看学生们是否配合你，是否愿意上台做自我介绍，是否能带动并且融入到班会的气氛当中。这不仅是对我们自身组织能力的挑战，也是对我们是否有号召力的挑战。所以，一切看似简单的事情，等你真正做起来，其实并没想象中的容易。
军训是他们的必修课，当然，他们军训时我们并不是闲着的。除了上课外，所有的空闲时间我们这些代班们几乎都是在训练场上度过的，因为担心会有学生身体会出状况，担心他们会中暑，担心他们会晕倒等等。太阳很高，天气很热，但没有一个代班会轻易离开。
做了近一个星期的代班，累虽然是肯定的，但这一个星期里，开心并不是没有的。刚进大一的他们，很多都还很天真、很单纯。在他们身上，我们看到了当初我们大一时的影子，在他们身上，我们找到了大一时的回忆，和他们在一起，让我们感觉好像我们现在也是刚进大一的新生。有些搞笑的或相对活泼的学生会在我们不经意时给我们带来很多的欢乐，让我们感受到了他们的热情。见了我们，一口一个“学姐”，一口一个“代班”，喊得那么的亲热，有时候都让我们感觉不好意思。
除了累和开心外，我们在做这个代班的过程中自身是得到了很多的锻炼的。开展活动锻炼了我们的组织能力，和不同性格的学生交流，锻炼了我们的沟通能力。除此之外，在他们遇到的问题上我们帮助他们解决问题的能力也有很大的提升。更重要的是，我们的责任心以及如何引领他们增强他们之间的凝聚力、团结力、向心力等等这些都给了我们一个锻炼提升自己的舞台。
新生代型 第5篇
关键词：新生儿筛检系统,采样器,控温器,光电比色计
美国API公司生产的RFA-300新生儿筛检系统可对新生儿苯丙酮尿毒症、半乳糖血症、蚕豆病等先天性疾病进行早期诊断, 他对新生儿保健、预防、避免先天性缺陷具有现实意义。
该仪器的故障有70%来自管路系统, 只有30%来自电子元件。管路系统在初期故障率较高, 这主要因为使用者不熟练的缘故。例如:气泡不均匀或破裂或图谱不清楚, 不成比例等。产生这种现象的原因大致有:管路在使用前未清洗干净, 管道或连接件尺寸不符合要求, 泵管使用时间过长或污染而失去弹性, 这只要逐步检查即可排除, 而电子部件的故障虽不常见, 也偶有发生。笔者将积累的故障实例总结成文, 供维修中参考。
1 采样器
采样器常见的故障是采样杆上下或左右乱跳、不复位, 蜂鸣器不停地叫, 分析大致是以下几方面的原因。其内部结构如图1。
(1) 首先检查各插件连接是否牢固可靠, 各线排是否接触良好, 应该注意的是线排与插头之间的连接不是采用焊接方式, 而是挤压连接, 靠插头上的金属针刺破塑料导线之外皮而接触, 可能由于仪器搬运时有松动。
(2) 控制采样杆动作的两个光电传感器沟槽内有油污或灰尘 (图1中的Sl、S2) , 可用软布轻轻擦去。
(3) 用万用表测量上述传感器各引线间之直流电压 (图2) , 桔、绿线两端为传器器的发光部分, 正常时约为1.2 V, 如大于4.5 V, 则表示损坏。兰、白线两端在中间沟槽不发光时, 其电压应为4.5 V左右, 沟槽透光时应为0.1 V以下 (此为受光部分) 。如以上各部分均正常, 则故障来自I/O板或CPU板。笔者仅更换过一次I/O板上集成块IC8212。
另一个故障是样品杯放置不转动或不前进、后退。为了检修方便, 控制此盘的电路板右侧备有检查按钮, 参见图1。按①, 马达应左右转;按②, 马达控制上下动作;③、④同按, 马达前进或后退:按⑤, 马达转动。在正常情况下。每按一个按钮, 马达将带动挡光板移动, 使之进入或退出左侧之光电传感器沟槽, 相应之指示灯会明暗变化, 若无变化, 则表示光电传感器已坏。亦可仿效上述方法用万用表测量各引出线间的电压, 光电传感器之内部电路如图3。
2 控温器
本仪器有三个完全相同的控温器, 如发现某一有温度失控或不升温等现象, 应首先确定是控温部件还是加热器本身的问题。一般先检查加热器, 测量220V输人电阻, 电阻值为1.16 k左右, 再测量温度传感器电阻, 正常值为107Ψ左右, 否则为加热器已坏。笔者曾遇到因操作人员不慎, 水从120/240V切换开关处渗进加热器, 导致加热器短路烧坏。此时千万不能将加热器插入另一个正常的控温部件, 否则将由于已烧坏短路的加热器导致控温器烧坏, 故障范围将扩大。如果控温器有问题, 先测量其输出插座l、2孔间的电压, 应为交流117V, 再检查其前面固态继电器的四个脚, 第3、4脚为117V之输出, 4脚上有一个二极管, 1脚为+5V电源, 2脚是信号输入端, 调节侧电路板上相应的绿色、黄色电位器可观测信号相应变化。这里采用的主要集成块是四运放LM324。
如果是控温部件坏了, 一般来说, 操作者无法修理, 只能更换整个部件, 因为集成化程度太高, 元件无法拆下更换。
3光电比色计
新生代型 第6篇
1 对象与方法
1.1 对象
采用多阶段整群抽样方法,首先在山东省高校招收人数最多的济南、烟台2市随机抽取4所综合性大学,在抽中的学校中按照整群抽样原则,在2014年9月入校的班级中随机抽取10%,抽取班级所有学生均为调查对象。参照有关文献资料[3],将大学新生来源地划分为东部、中部、西部地区。本调查方案已通过山东省疾病预防控制中心预防医学伦理委员会审批,所有调查对象均签订了知情同意书。
共抽取4所大学60个班2 240名新生进行调查,实际调查2 127名,调查率为94.96%。其中男生1 091名,女生1 036名;年龄为17~21岁,平均年龄(18.70±0.84)岁;生源地为我国东、中、西部地区者分别占76.54%,13.73%和9.73%;山东本地生源和外地生源分别占72.40%和27.60%;自述既往曾感染过甲肝、乙肝和丙肝者分别为7,9和2人,无人自述感染过戊肝。
1.2 方法
由经过培训的县级疾病预防控制机构专业人员,按照统一的调查表,通过询问方式对所有研究对象进行问卷调查,调查内容包括:(1)基本情况,姓名、性别、出生日期、就读班级、生源地、现居住地等;(2)甲肝、乙肝、丙肝、戊肝等各型病毒性肝炎既往病史;(3)戊肝防治相关知识、态度和行为。调查同时对每名调查对象采集静脉血标本5 m L,分离血清后-20℃保存待检。
1.3 实验室检测
采用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)测定血清HEV Ig M抗体(抗-HEV Ig M)和Ig G抗体(抗-HEV Ig G);检测试剂均为北京万泰生物药业股份有限公司生产,批号分别为EM20141106和EG20141106;检测仪器为深圳爱康生物科技有限公司生产的AE120型全自动酶免工作站,具体操作按照试剂说明书进行。所有检测委托有资质的第三方医学检测公司完成。
1.4 统计学分析
采用Epi Data 3.1数据库进行数据双录入和比对,双录入不符者对照原始调查表进行核对和修订。所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析。计数资料不同组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法;计量资料不同组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 抗-HEV Ig G和抗-HEV Ig M阳性率
大学新生抗-HEV Ig G总阳性率为2.68%(95%CI=2.04%~3.46%);不同性别、年龄段抗-HEV Ig G阳性率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。东、中、西部生源抗-HEV Ig G阳性率分别为1.97%,3.77%和6.76%,差异有统计学意义(P<0.01);山东省内生源和省外生源抗-HEV Ig G阳性率分别为1.75%(27/1 540)和5.11%(30/587),差异有统计学意义(χ2=18.37,P<0.01)。山东省内生源中,来自沿海地区者抗-HEV Ig G阳性率(2.95%,12/407)高于来自内陆地区者(1.32%,15/1 133),差异有统计学意义(χ2=4.56,P=0.03);非山东省生源中,来自沿海地区者抗-HEV Ig G阳性率(5.66%,3/53)高于来自内陆地区者(5.06%,27/534),差异无统计学意义(P=0.75)。
大学新生抗-HEV Ig M总阳性率为0.14%,不同性别、年龄、生源地大学新生间抗-HEV Ig M阳性率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。见表1。
注:*为Fisher确切概率法。
2.2 戊肝防治知识、态度和行为
12.32%的新生(262/2 127)听说过戊肝,在听说过戊肝的新生中,64.50%(169/262)知道戊肝具有传染性,46.18%(121/262)知道同时感染戊肝和乙肝比仅感染乙肝临床预后更严重,47.71%(125/262)知道戊肝可以通过接种疫苗预防,63.74%(167/262)认为戊肝是一种严重的传染病;42.75%(112/262)不愿意接种戊肝疫苗,其中39.29%(44/112)认为没有必要,56.25%(63/112)认为疫苗价格太高。所有调查对象中,11.04%(234/2 119)经常喝生水,25.07%(531/2 118)经常在外面吃饭。男大学生经常喝生水和经常在外面吃饭的行为发生率分别为13.65%和27.24%,均高于女大学生的8.31%和22.80%(χ2值分别为15.39,5.55,P值均<0.05)。除此之外,不同性别、年龄、生源地以及抗-HEV Ig G阳性与阴性调查对象间戊肝防治知识知晓率、相关态度正确率和相关行为发生率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。见表2~4。
注:()内数字为知晓率/%。
注:()内数字为报告率/%。
注:()内数字为行为报告率/%。
3 讨论
学生升入大学后,居住地由生源地转变为学校所在地,学生居住形式由以家庭分散居住为主转变为集体居住为主;多数大学新生脱离了家长的日常管束,衣食住行等日常生活也可能发生改变。以上因素使大学新生成为疾病特别是呼吸道、肠道等传染病防控的特殊群体。
人自然感染HEV或接种戊肝疫苗,血清中均可检测到抗-HEV Ig G[6]。本研究中大学新生均未接种过戊肝疫苗,抗-HEV Ig G流行率可以反映人群戊肝自然感染的水平。研究结果显示,山东省大学新生抗-HEV Ig G阳性率较低,仅为2.68%,低于2006年全国调查同年龄组人群(8.96%)[3];其中山东省生源阳性率为1.75%,亦低于2006年该省同年龄组调查数据(6.67%)[7]。2006年全国及山东省调查与本次调查均采用了同样的检测方法,检测试剂亦为同一厂家生产,调查结果的差异可基本排除检测原因。山东生源中抗-HEV流行率低于2006年全省调查结果,一方面反映了近10年山东省公共卫生条件和群众卫生习惯的改善导致HEV传播概率下降;另一方面也可能与大学新生整体素质高于同年龄整体水平,卫生习惯较好或疾病预防意识较强等有关。本研究中,我国西部生源抗-HEV Ig G阳性率最高,中部次之,东部最低,与我国全人群血清学调查地区分布一致[3],说明大学新生HEV感染的高低与生源地人群总体感染率密切相关。虽然沿海地区抗-HEV Ig G阳性率较高,且沿海地区多属东部地区,但沿海地区人口在整个东部地区人口中所占比例较低,因此,从全国范围来看,东部地区抗-HEV Ig G阳性率最低。近年来,包括我国在内的多个国家在贝类中检测出HEV[8,9],提示海产品的污染可能导致沿海地区戊肝高发。山东省既往调查结果显示,该省沿海地区人群HEV Ig G阳性率高于内陆地区[7];本研究中山东省省内生源中,沿海地区生源HEV Ig G阳性率高于内陆地区生源,但外省生源中未发现该差别,原因可能与外省沿海生源学生纳入调查人数较少有关。抗-HEV Ig M是戊肝新近感染的标志,本研究结果发现,调查地区大学生抗-HEV Ig M阳性率为0.14%,低于江苏省部分农村地区10~19岁(1.6%)和20~29岁(2.8%)人群的调查结果[10],提示山东省调查地区大学生戊肝新发感染处于我国较低水平。
我国自主研发的戊肝疫苗于2012年底上市,是迄今为止全世界唯一获批上市的戊肝疫苗,该疫苗已被证实安全、有效[4,5],但在我国的使用尚无明确的免疫策略。本研究结果提示,大学新生应被列入戊肝疫苗接种的重点人群,理由如下:(1)戊肝为肠道传染病,易在大学等实行集中就餐制的地点发生流行。(2)大学新生戊肝易感率高。本研究中97%的大学新生均为戊肝易感者;其他研究也显示,我国其他地区同年龄人群戊肝易感率高达85%~95%[11,12]。
戊肝作为一种新发传染病[13],关于其在人群中相关防治知识、态度、行为的调查报道较少。本研究中,大学新生仅12.3%听说过戊肝,而对于戊肝具有传染性和乙肝、戊肝合并感染危害更加严重的知晓率更低。大学生群体是在全社会教育程度相对较高的群体,该群体中HEV防治知识知晓率的低水平反映了整个社会戊肝防治知识的缺乏。本研究数据亦显示,在知道戊肝的大学生中近一半不愿接种疫苗,价格过高是影响接种意愿的主要因素,提示在今后戊肝疫苗的推广使用中还应探索通过降低疫苗价格或建立多元支付方式等方法,提高戊肝预防重点人群接种戊肝疫苗的积极性。
摘要：目的 了解山东省大学新生戊型病毒性肝炎(戊肝)流行及其相关知识、态度、行为现状,为高校制定新生戊肝防控及免疫策略提供科学依据。方法 在山东省招收大学生最多的济南、烟台2市随机选取4所大学,按照随机整群抽样方法抽取2014年入学新生共2 127名作为研究对象。对所有研究对象进行问卷调查,同时采集静脉血标本5 m L;采用酶联免疫吸附试验检测戊肝病毒(hepatitis E virus,HEV)Ig M抗体(抗-HEV Ig M)和Ig G抗体(抗-HEV Ig G)。结果 大学新生中抗-HEV Ig M和抗-HEV Ig G的总阳性率分别为0.14%和2.68%。不同年龄、不同性别新生抗-HEV Ig G阳性率的差异均无统计学意义(P值均>0.05);生源地为我国东、中、西部地区新生抗-HEV Ig G阳性率分别为1.97%,3.77%和6.76%,差异有统计学意义(χ~2=17.45,P<0.01);生源地为山东省内沿海地区学生抗-HEV Ig G阳性率(2.95%)高于内陆地区学生(1.32%)(χ~2=4.56,P=0.03)。仅12.32%(262/2 127)的新生听说过戊肝;42.75%(112/262)不愿意接种戊肝疫苗,其中39.29%(44/112)认为没有必要,56.25%(63/112)认为价格太高。结论 山东省大学新生处于戊肝易感状态,且戊肝防治知识知晓率较低,应开展戊肝防治知识宣传。
新生代型 第7篇
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2008年1月至2012年12月来我院妇产科进行产前常规检查, 年龄在22~35岁, 孕周在20~36周, 血型为O型的孕妇1422例, 配偶为A、B、AB型, 且身体健康, 无肝肾、血液系统方面疾病。
1.2 材料与设备
ABO血型抗A、抗B血型定型试剂, ABO标准红细胞, 标准筛选红细胞 (上海血液生物制品公司提供) ;2-巯基乙醇 (2-Me, 由上海血液生物制品公司提供) ;微柱凝胶检测卡 (由长春博讯生物技术有限公司提供) 。
1.3 试验方法
1.3.1 Ig G效价检测
常规空腹抽取肘静脉血5 ml, 采用EDTA-K2抗凝管, 分离血清、血球后备用。 (1) 另取小试管1只, 加入待检血清0.1 ml和巯基乙醇0.7 ml, 封口后予37℃温育60 min, 取出后待用; (2) 取试管2只, 分别加入A、B标准红细胞各0.05 ml, 加入温育后血清各0.1 ml, 离心。结果必须无凝集, 说明患者血清的Ig G抗体已经破坏; (3) 取小试管7支, 编成1~7号, 每只加入0.9%氯化钠注射液0.2ml; (4) 取温育后血清在1号管中加入0.2 ml; (5) 从2号管开始倍比稀释至7号管; (6) 取微柱凝胶卡, 先加入稀释浓度为0.8%的A或B细胞0.05 ml;然后按由高-低滴度依次加入倍比稀释的患者血清0.05ml。 (7) 专用孵育器孵育15 min, 专用离心机离心5min, 观察结果; (8) 以 (+) 的阳性结果的最后稀释度判读为相应的抗A、抗B效价。
1.3.2 新生儿溶血病的检测
取新生儿脐血或新生儿静脉血3洗后进行ABO血型检测、直接抗人球蛋白试验、游离试验及释放试验。严格按照全国临床检验操作规程进行[3]。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行秩和检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
孕妇血清Ig G-A或Ig G-B抗体效价测定结果, 见表1。1422例中共有566例抗体效价达1:64~1:512, 占39.8%, 其中孕妇为O型, 丈夫为A型, Ig G抗A 1:64~1:512者253例, 发生率为17.8%;丈夫为B型, Ig G抗B 1:64~1:512者180例, 发生率为12.7%;丈夫为AB型, Ig G抗AB 1:64~1:512者133例, 发生率为9.4%。通过相关分析, 各个效价间新生儿溶血病的发病率存在明显差异 (P<0.01) , 此外通过表2发现HDN的发病率随着效价的增高而增加。
3 讨论
在该组孕妇中, 丈夫为A型者Ig G抗A效价≥1:64者发生率17.8%;丈夫为B型者, Ig G抗B效价≥1:64发生率12.7%;丈夫为AB型者Ig G抗A (B) 效价≥1:64, 发生率为9.4%。试验发现丈夫为A型者, 孕妇Ig G抗A抗体效价较高, 其所生新生儿溶血病发生的概率也较高, 这与以往的报道接近, 丈夫是A型血易发生新生儿溶血病可能与人类A抗原较强有关。产前血清Ig G抗体效价检查结果≥1:64发生新生儿ABO溶血病的可能性较大, 当Ig G-A或Ig G-B抗体效价≥1:128时, 新生儿发生HDN的概率增大, 而当Ig G-A或Ig G-B抗体效价≥1:512时, 新生儿100%受害。表2的结果证明Ig G抗体效价的高低对HDN有一定的预见性, 且随着效价的增高发病率增加, 这是因为在孕早期时, 胎儿红细胞进入母体内的量少, 故孕妇产生抗体效价低, 随着孕周的增加, 孕妇绒毛膜等屏障的破坏[4], 导致大量胎儿红细胞进入母体内, 激发母体产生大量抗体, 当抗体量超过机体的一定保护机制时, 将会导致新生儿溶血病的发生[5,6]。所以控制Ig G抗体的效价值具有重要意义。
通过本文的统计和总结分析, 对于产检时检测孕妇的Ig G抗体效价是非常必要的。同时对Ig G效价高者需动态监测, 必要时可通过胎监和B超一起辅助检查, 发现问题者可早期治疗, 如血浆置换, 静脉注射免疫球蛋白, 配合一些中药治疗, 以降低新生儿溶血病的发生率。
摘要：目的 通过对O型孕妇血清中血型抗体效价的测定, 旨在了解异常IgG类血型抗体效价与新生儿溶血病 (HDN) 之间的关系。方法 采用微柱凝胶法分别对1422例O型血孕妇血清中IgG抗A (B) 水平进行测定。并对其产后进行新生儿溶血病的检测。结果 母亲IgG抗体效价1:512, ABO-HDN患病率为100%;IgG效价1:256, ABO-HDN患病率为92.4%;IgG效价1:128, ABO-HDN患病率为88.3%;IgG效价1:64, ABO-HDN患病率为56.2%。各组间新生儿溶血病发病率差异有统计学意义 (P<0.01) , 且随效价增高而增加。结论 O型孕妇孕前IgG抗体效价的检测对ABO-HDN有一定的预见性。
关键词：ABO新生儿溶血病,孕妇,IgG抗体效价
参考文献
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新生代型 第8篇
关节软骨细胞外基质的胶原成分中Ⅱ型胶原蛋白含量为90%~95%[7]。正常人体关节软骨分为浅表层、移行层、柱状层和钙化层四层。钙化层是软骨与软骨下骨的过渡层,起着隔离软骨和软骨下骨的作用,同时将二者牢固地整合在一起,软骨营养主要来源于关节腔滑液,而关节液中的氧浓度明显低于软骨下松质骨的氧供浓度,软骨细胞适应低氧环境,低氧条件下有利于软骨细胞的分化、增殖,如果血液一旦侵入关节腔内,其中一些成分会因触发炎性反应而导致新生软骨细胞凋亡或坏死[17]。Ⅰ/Ⅱ型胶原复合支架的结构设计是与正常关节软骨的分层结构及软骨细胞顺胶原纤维方向呈柱状排列相对应,同时也有利于提高再生软骨组织的生物力学性能[8]。有学者曾采用温度梯度热诱导相分离(temperature gradient-guided thermal-induced phase separation,TIPS)技术成功制备了软骨细胞基质来源的定向结构支架[9],此种方式较为繁琐,仪器设备要求较高,且其支架构成材料为单一Ⅱ型胶原,不能兼顾Ⅰ、Ⅱ型胶原在软骨细胞生长中的作用[10]。笔者在Ⅱ型胶原支架的制备中发现胶原在凝胶状态转置于超低温冰箱迅速冷冻后部分纤维结构可呈定向排列,经过真空冻干后可筛选接切出定向结构较为均匀的定向支架,再经过化学交联并与Ⅰ型胶原复合后可以制成具有纵向排列纤维结构的胶原支架。尚未见使用快速冷冻真空冻干法制备定向结构Ⅰ/Ⅱ型复合胶原支架并与软骨细胞共培养体外构建定向结构组织工程软骨的报道。
1 材料与方法
1.1 材料
牛跟腱及关节软骨:北京市屠宰场购买的新鲜牛跟腱及猪膝关节关节软骨。
1.2 主要试剂及仪器
主要试剂:碳化二亚胺(EDC)(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司);N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司);乙烷磺酸(MES)(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司);氯化钠(Na Cl)(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司);胃蛋白酶(美国Sigma);Ⅱ型胶原酶(美国Sigma);盐酸胍(国药集团化学试剂有限公司);氢氧化钠(Na OH)(分析纯)(国药集团化学试剂有限公司);超纯水(武警总医院医学实验中心提供);DMEM高糖培养基(Invitrogen,美国);胎牛血清(Hy Clon-e,美国)。
主要仪器:系统冷冻干燥机(中国四环LGJ-10C);磁力加热搅拌器(中国国华78-1);电子天平(美国Denver TB-2002/203);台式低温高速离心机(美国贝克曼);倒置荧光显微镜(日本奥林帕斯IX-71);超微量分光光度计(美国Alphaspecul);酸碱测定仪(美国贝克曼);立式恒温振荡器(美国精骐);Milliproe超纯水机制造系统(英国ELAGA CENTRA-200);可调高速匀浆机(中国FS-1型);低速冷冻离心机(中国长沙湘智DL-5);-80℃低温冰箱(日本SANYO-530L);扫描电子显微镜(scanning electronic microscope,SEM,Hitachi,日本);生物材料力学测试机(Shimadzu,日本)。
1.3 方法
1.3.1 定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原软骨支架制备及性能检测
1.3.1.1Ⅰ型胶原蛋白的提取
以新鲜牛跟腱为原料,采用乙醇脱脂-乙酸溶胀-胃蛋白酶消化-盐析-透析-真空冷冻干燥法提取Ⅰ型胶原蛋白,并用超微量分光光度计在220~800 nm波长范围内,进行紫外吸收峰扫描,测定样品最大紫外吸收峰的波长。
1.3.1. 2 Ⅱ型胶原蛋白的提取
将猪膝关节股骨髁软骨以手术刀小心剃下,混入少量75%酒精后置于匀浆机打碎,采用乙醇浸泡脱脂-盐酸胍去糖蛋白-胃蛋白酶消化-盐析-透析-真空冷冻干燥提取Ⅱ型胶原蛋白[11],并用超微量分光光度计进行紫外吸收峰扫描,测定样品最大紫外吸收峰的波长。
1.3.1. 3 定向与非定向结构Ⅱ型胶原支架制备
Wu等[12]研究证明了单向冻干法制备定向多空明胶支架的可行性。笔者将制备好的Ⅱ型胶原二次溶胀制成凝胶状,浓度为150 mg/m L,常温下小烧杯中磁力搅拌器搅拌6 h,将凝胶状Ⅱ型胶原转置入培养皿中。胶原凝胶置于未预冷的真空冻干机中,打开真空抽干机,可见大量气泡逐渐膨胀破裂,待胶原凝胶膨胀至将要溢出器皿时关闭真空抽干机并放气,重复此操作3~5次可见胶原凝胶中气泡消失。将除完气泡的凝胶置于-80℃超低温冰箱快速冷冻24 h,去除冷冻后的胶原凝胶快速置于提前遇冷至-35℃真空冻干机中真空冷冻抽干24 h。观察冻干后的胶原支架有部分区域呈均匀定向排列,以眼科剪剪取直径5 mm、厚度3 mm具有垂直定向结构的Ⅱ型胶原支架。同时采用传统的真空冻干法制备非定向Ⅱ型胶原支架。
1.3.1. 4 制备Ⅰ/Ⅱ复合胶原膜
将制备好的Ⅰ型胶原二次溶胀,配制浓度为200 mg/m L的Ⅰ型胶原凝胶,均匀铺在直径5 cm培养皿中,超净工作台中风干。将直径5 mm、厚度3 mm的定向结构Ⅱ型胶原支架铺于风干后的Ⅰ型胶原膜上。非定向Ⅱ型胶原海绵采取同样方法切割并铺于风干后的Ⅰ型胶原膜上,倒入配制好的碳二亚胺交联剂(含0.05 mol/L MES、0.033 mol/L EDC和0.02 mol/L NHS,95%的乙醇溶液)并置入立式恒温振荡器室温下交联24 h后,配制交联剂再次交联24 h,超纯水反复冲洗5次。普通光学显微镜及SEM观察定向支架及非定向支架的微观结构特点。
1.3.2 构建新生组织工程软骨及相关检测
采用3周龄新西兰大白兔膝关节软骨为材料,经Ⅱ型胶原酶消化法提取关节软骨细胞[13],体外扩增培养至第2代,移液器吸取细胞悬液分别接种两组支架,细胞接种数量控制在10.0×105个/块。培养3 d后利用SEM观察软骨细胞在定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架和非定向支架上的形态及分布特点,采用MTT方法检测细胞在两组支架上的增殖情况。在共培养第7天和第14天利用生物材料力学测试机分别测定两组新生组织工程软骨的杨氏模量(0.05 N,速率0.01 mm/s,行程:初始高度的4%,松弛相:2000 s)和抗拉强度(5 mm/min拉伸),检测两组新生组织的生物力学性能。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件,若数据符合正态分布以均数±标准差(±s)表示。采用独立样本t检验(independent-tests)比较MTT法检测的细胞在两组支架上增殖情况,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较两组新生组织工程软骨生物力学性能,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胶原紫外吸收峰及大体和显微镜观察支架结构
经过超微量分光光度计(Picdrop Application系统软件)测定Ⅰ型胶原蛋白的紫外光吸收值在226.5 nm左右形成一个波峰(图1a);Ⅱ型胶原凝胶在233.8 nm左右形成一个较高的波峰(图1b),这符合Ⅱ型胶原最大吸收峰特征[14]。支架大体结构及显微镜观察示Ⅰ/Ⅱ型双层复合胶原膜结构中,底层为高度致密、光滑、均匀的Ⅰ型胶原膜;顶层为相对低密度Ⅱ型胶原膜层,表面呈白色、粗糙、海绵样结构,镜下孔径致密,分布较均匀,为软骨细胞提供良好的生长环境;Ⅰ、Ⅱ型双层胶原膜之间经过化学交联,使它们结合紧密,坚固牢靠无空隙。交联后的定向结构支架显微镜下可见胶原纤维平行排列,非定向胶原支架纤维镜下可见胶原纤维无序排列(图2~3)。
2.2 扫描电镜观察定向与非定向双层支架微观结构
对定向支架横切面的SEM观察发现,横切面胶原纤维排列虽然缺少一定规律,但可见管状空道,孔道间有空隙相互贯通(图4a,封三)。纵切面观察可见上方纵向规律排列的Ⅱ型胶原纤维及与之密切交联、密度较大的Ⅰ型胶原底面(图4b,封三)。非定向支架SEM观察其横向和纵向切面胶原纤维排列无显著差异,纤维排列呈均匀多孔状结构,排列无序相互间有微孔贯通(图5a、b)。
a.Ⅰ型胶原蛋白的最大紫外光吸收;b.Ⅱ型胶原蛋白的最大紫外光吸收
a.定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架示意图;b.非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架示意图;c.定向Ⅱ型胶原支架海绵大体观察;d.非定向Ⅱ型胶原支架海绵大体观察
a.Ⅰ型胶原凝胶风干后作为底层与Ⅱ型胶原交联;b.交联后的Ⅰ/Ⅱ型双层复合胶原支架;c.显微镜下观察定向结构胶原支架图像(100×);d.显微镜下观察非定向结构胶原支架图像(100×)
a.非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架纵切面观察(200×);b.非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架横切面切面观察(200×);c.非定向支架内生长的软骨细胞(500×);d.软骨细胞分裂(5000×)
2.3 扫描电镜观察软骨细胞在两组双层支架上的生长情况
将兔软骨细胞植入两组胶原支架后共培养3 d,SEM观察两组支架上均能发现正常生长的软骨细胞,软骨细胞黏附于定向支架内平行排列微观孔道的孔壁上,细胞分布具有一定的规律性和方向性(图4c,封三),可见细胞伸出伪足,生长状况良好(图4d,封三);非定向软骨支架中的软骨细胞分布较为随机和均匀,无明显的方向性(图5c),生长状况良好(图5d)。
2.4 MTT法检测软骨细胞不同时间段在两组双层胶原支架上的增殖情况
第1~4天时定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架与非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架上细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);第5~11天定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架中细胞数量大于非定向支架组,差异有统计学意义(P<0.05);第12~15天两组支架细胞数量再次趋于一致,差异无统计学意义(P>0.05)(图6)。
2.5 生物力学检测
培养第7天,定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架与非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架压缩弹性模量分别为(0.21±0.04)、(0.11±0.03)MPa,差异有统计学意义(P<0.05);抗拉强度分别为(0.88±0.05)、(0.53±0.04)MPa,差异有统计学意义(P<0.05)。培养第14天,定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架压缩弹性模量为(0.33±0.09)MPa,非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架压缩弹性模量为(0.20±0.06)MPa,差异有统计学意义(P<0.05);抗拉强度分别为(1.01±0.08)、(0.63±0.07)MPa,差异有统计学意义(P<0.05)。但两组均明显低于正常关节软骨的压缩弹性模量[(0.69±0.09)MPa]、抗拉强度[(5.20±0.72)MPa],差异有统计学意义(P<0.05)(图7~8)。
3 讨论
当前国内临床医生在治疗关节软骨缺损时采取的主要方法有骨髓刺激技术,如软骨下钻孔术、微骨折手术等,而这些技术新生软骨大多为纤维样软骨,另一种常用的手术为马赛克技术,该技术取自体非负重区软骨作为移植供体,对于患者本身可能造成二次损伤[15]。近年蓬勃发展的基质诱导的自体软骨细胞移植(MACI)技术已应用于临床且被证明是一种临床效果显著、再生软骨以透明软骨为主的软骨缺损理想治疗方法[16]。但是当前国内用于构建组织工程软骨的细胞支架材料各不相同且多为单一类型支架,实验研究中若没有类似软骨基底层的隔离,来源于软骨下骨的血液会侵入关节腔内,其中一些成分不仅会对软骨缺损修复研究产生干扰,更严重地会触发炎性反应而导致新生软骨细胞凋亡或坏死。这也就要求我们在制备软骨细胞支架时要模拟正常关节的骨软骨分层结构,才能更好地促进关节骨软骨缺损的修复[17],其在临床中对人体关节软骨缺损的治疗作用尚待进一步试验证实。胶原纤维和软骨细胞整体上具有柱状排列的趋势并垂直于关节表面,这种高度方向性的排列方式对于正常关节软骨机械力学性能的维持尤为重要[18]。
与非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架比较,*P<0.05;与定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架比较,#P<0.05
与非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架比较,*P<0.05;与定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架比较,#P<0.05
Ⅰ/Ⅱ型双层复合胶原膜结构中,底层为高度致密、光滑、均匀的Ⅰ型胶原膜,镜下孔径微小;顶层为高浓度Ⅱ型胶原膜层,表面呈白色、粗糙、海绵样结构,镜下孔径致密,分布较均匀,为软骨细胞提供良好的生长环境;Ⅰ、Ⅱ型双层胶原膜之间经过化学交联,使它们结合紧密,坚固牢靠无空隙[19]。在培养第5~11天细胞增殖量定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架明显多于非定向支架,原因可能为培养初期软骨细胞沿着定向支架中纵向排列的微观孔道向支架内部快速迁移,同时代谢产物交换和营养物质输送得到了促进,因而导致细胞增殖速度明显提高[20]。随着支架上种子细胞的数量及软骨细胞不断分泌的基质成分持续增多,可能部分堵塞定向微管孔壁上相互贯通的孔隙,抵消了定向支架所具有的优势,导致两组支架上的细胞数量最终趋于一致。通过压缩弹性模量检测和抗拉强度检测说明定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架的机械力学性能高于传统非定向支架,原因可能是定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架所具有的垂直平行排列微管结构提高了组织工程软骨力学性能,在一定时间段内促进了软骨细胞的增殖和自分泌,这也可能有助于提高组织工程软骨的力学性能。虽然笔者在实验中未检测比较定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架与传统的定向结构支架间生物力学性能间的差别,但传统的定向结构微观通道软骨支架多为单纯Ⅱ型胶原,而本研究在此基础上于Ⅱ型胶原底部增加了较为致密且生物力学性能更强的Ⅰ型胶原,这也就大大增强了复合胶原膜的生物力学性能,而其增强程度有待于进一步研究。