快速代谢范文（精选3篇）
快速代谢 第1篇
当前国际上普遍采用液相色谱串联质谱法进行硝基呋喃代谢物的检测和确证[1]。水解和衍生化是质谱法检测硝基呋喃代谢物的关键步骤。常用的衍生化试剂是邻硝基苯甲醛,衍生时间长达16 h。本文在参考相关文献的基础上对实验条件作进一步优化:在酸性条件下使硝基呋喃代谢物与蛋白质水解,同时用邻硝基苯甲醛衍生化,研究对比发现使用水浴40℃水浴超声衍生1 h,不仅能够大幅缩短反应时间,而且可以提高检测的灵敏度,且方法的重现性好,精密度高,实现了快速检测水产品中硝基呋喃代谢物的要求[2]。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器:Aglient 1200系列高效液相色谱仪;Aglient 6410triple Quad LC/MS质质谱谱仪仪;旋旋转转蒸蒸发发仪仪(瑞瑞士士步步琪琪Rotavapor誖R-210/R-215);高速匀浆机;高速冷冻离心机等。试剂:呋喃唑酮代谢物AMOZ、呋喃它酮代谢物AOZ、呋喃妥因代谢物AHD、呋喃西林代谢物SEM标准品及其邻硝基苯甲醛衍生物2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM标准品,均购于Dr.E公司;乙酸乙酯、乙腈、正己烷,均为色谱纯;盐酸、氢氧化钠、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛,均为分析纯;水为二次蒸馏水。
1.2 试验方法
1.2.1 标准溶液的配制。
分别准确称取2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM标准品,用乙腈配制成1 mg/m L的标准储备液,-4℃避光保存。临用前移取适量标准储备液用流动相乙腈-0.05%甲酸水(1∶9,v/v)稀释成适当浓度的系列标准溶液。
1.2.2 LC/MS/MS分析条件。
色谱条件:Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm×150.0 mm,5μm);柱温35℃;流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为乙腈;梯度洗脱条件为:A相0~6 min,90%~5%;6~9 min,5%~90%;9~30 min,保持90%。质谱条件:离子源为ESI(+),多反应监测模式(MRM),利用保留时间和碎片信号比值判断定性结果。干燥气流速:10L/min;干燥气温度:350℃;雾化器压力:310.28 k Pa;毛细管电压:4 000 V。
1.2.3 样品处理。
准确称取5.00 g均质样品于50 mL离心管中,加入10 mL 0.2 mol/L的盐酸溶液,10 000 r/min均质30 s,10 mL 0.2 moL/L的盐酸溶液清洗刀头,合并匀浆液,加入100μL 50 mmoL/L的邻硝基苯甲醛的二甲基亚砜溶液,涡旋30 s后于40℃水浴中超声1 h。取出样品冷却至室温,10 000 r/min离心5 min,将上清液转移至另一离心管,并向其中加入5 mL 0.1 mo L/L的K2HPO4,用1 moL/L和0.1moL/L的NaOH调节pH值为7.5(±0.2)。加入10 m L乙酸乙酯,涡旋、振荡5 min,6 000 r/min离心5 min,吸取上清液。乙酸乙酯10 m L重复提取1次,合并乙酸乙酯层,45℃下减压浓缩近干。在残留物中准确加入5 mL乙腈-0.05%甲酸水(1∶9,v/v)定溶液溶解,涡旋30 s后加入3mL正己烷,超声1min后10 000 r/min离心5 min,下层水相经0.22μm微孔滤膜过滤后供仪器分析。
2 结果与分析
2.1 样品衍生条件的优化
4种硝基呋喃的分子量在75~201,在这个质量范围内质谱背景噪音很大,4种代谢产物的电离效率比较低,同时这些代谢产物无特异性裂解行为(主要是去氨、水或二氧化碳),因此它们的质谱检测灵敏度低。而在酸性条件下,利用一些衍生剂如邻硝基苯甲醛上的醛基(-CHO)可以与AMOZ、SEM、AHD、AOZ等4种代谢物上的含氮亲核基团胺基(-NH2)发生醛胺亲核加成反应,可以分别形成较好的特性衍生物,使衍生物的分子离子质荷比大于200,处于相对适于检测的质量区域,质谱检测灵敏度会有很大提高。另外,由于硝基呋喃代谢物多与蛋白质结合的形态存在于有机体中,在参考相关资料的基础上,选择采用盐酸水解,邻硝基苯甲醛衍生[3,4]。本试验比较了40℃恒温振荡16 h、水浴超声1 h、恒温静置16 h等3种条件下的衍生效率。研究发现,除AOZ外,其他3种呋喃代谢物衍生效率在40℃水浴超声1 h条件下的产率最高。这可能由于超声波的空化作用,使溶液的流动性大幅增加,溶液中的分子碰撞速度加快,反应速度加快。本试验选择40℃超声1 h,缩短了反应时间且产率提高,实现了快速检测(图1)。本试验中还比较了超声时间和p H值对衍生效率的影响。研究发现,在超声1 h、p H值为7.5时,4种呋喃代谢物衍生物的回收率最高[5,6]。
2.2 快速超声水解衍生方法的有效性、重现性
为了确定新方法在检测实际样品时的有效性、重现性,选择了按照GBT 20752-2006方法检测获得的3个阳性样品,其中鳜鱼(Fish)AOZ、SEM含量为0.58μg/kg和1.86μg/kg,虾1(shrimp 1)和虾2(shrimp 2)中SEM分别为0.96μg/kg和10.87μg/kg,随后对这3个阳性样品分别采用40℃水浴超声1 h和按照37℃水浴振荡16 h 2种方法进行处理,结果如表1所示。从表1可以看出,新方法无论是在低浓度范围(0.5μg/kg左右)还是在高浓度范围内(10μg/kg左右)均有较高的灵敏度、较好的重现性。因此,新方法完全能够满足对实际样品的检测分析。
2.3 样品净化条件的优化
试验中比较了HLB柱和乙酸乙酯直接提取、正己烷除脂2种方法的回收率和净化效果。研究发现,HLB柱的净化效果好,但回收率不高且操作步骤复杂,不适合作为硝基呋喃类代谢物的快速分析检测方法;另一种方法净化效果和回收率均较好。本试验最终选择了后一种方法,因为其操作简单、快捷,且满足快速检测的要求。
2.4 质谱条件的优化
硝基呋喃代谢物是强极性物质,因此采用ESI正离子电离模式。分别将2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM注入离子源,在正离子模式下分别对其一级质谱分析得到分子离子峰,再对分子离子进行二级质谱分析,得到碎片信息,然后对Fragementor、collision energy进行优化,使分子离子与特征离子强度达到最大,确定最佳质谱条件(表2)。
2.5 线性范围和检出限
对样品中不含硝基呋喃代谢物的空白样品,其检出限(LOD)以3倍信噪比计算,定量限(LOQ)以10倍信噪比计算。4种硝基呋喃代谢物在0.25~25μg/kg范围内回归方程的相关系数大于0.998,检出限为0.25μg/kg,方法的灵敏度达到限量检测要求。
2.6 回收率和精密度
取3种水产品样品,各称取6份,按照试验方法处理。3个不同浓度水平的回收率、精密度见表3。从表3可以看出,4种硝基呋喃代谢物的加标回收率在81.9%~111.6%,相对标准偏差小于10%。
3 结论
建立了一种液相色谱串联质谱法方法快速检测水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ、呋喃它酮代谢物AMOZ、呋喃西林代谢物SEM、呋喃妥因代谢物AHD等硝基呋喃类代谢物。方法的准确度、回收率和精密度均较好,满足硝基呋喃类代谢物残留检测要求。
参考文献
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代谢综合征：代谢性疾病的前兆 第2篇
在这次聚会上，大家从班长住院这件事上或多或少地都意识到了自身的健康危机，谈论最多的不是位子、票子、孩子，而是“身子”。真是不说不知道，一说吓一跳，几乎将近一半的同学都存在这样或那样的健康问题，有的血压高、有的血脂高、有的血糖高，还有的“三高”全沾。不经意间，从事医疗工作的我竟成了这次聚会的主角，我给老同学们重点讲的内容是：生活方式与代谢综合征。
什么是代谢综合征
提起肥胖、高血压、糖尿病、血脂异常、脂肪肝、痛风等等这些代谢性疾病，想必大家都不陌生，但若提起代谢综合征，恐怕许多人还真不知道是怎么一回事。事实上它是许多代谢性疾病的前兆，当你了解了代谢综合征之后就会发现，它其实离我们并不遥远，甚至早已存在于你我身上。下面就让我们来看看代谢综合征的“庐山真面目”：
严格地讲，代谢综合征不能算作一个独立的疾病，而是指肥胖（尤其是腹型肥胖）、高血压、血糖异常、血脂紊乱、微量白蛋白尿、高尿酸血症、胰岛素抵抗及高胰岛素血症等多种代谢异常在同一个人身上集结的一种病态症候群，它与过去常说的“胰岛素抵抗综合征”或“X综合征”其实是一回事。
如何诊断代谢综合征
代谢综合征尚无一个全球统一的诊断标准，国内外不同的学术组织诊断标准都不完全一样，但其核心内容基本上大同小异。以下介绍的分别是中华医学会糖尿病学分会（CDS）和国际糖尿病联盟（IDF）关于本病的诊断标准：
根据中华医学会糖尿病学分会2004年制定的我国代谢综合征诊断标准，具备以下4项中的3项或以上者即可诊断为代谢综合征：
1、超重和(或)肥胖：体重指数≥25千克/平方米；
2、高血糖：空腹血糖≥6.1毫摩尔/升及(或)餐后2小时血糖≥7.8毫摩尔/升，及已经确诊糖尿病者；
3、高血压：收缩压/舒张压≥140/90毫米汞柱者；
4、血脂紊乱：空腹血甘油三酯（TG）≥1.7毫摩尔/升及(或)空腹血高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）男性<0.9毫摩尔/升、女性<1.0毫摩尔/升者。
国际糖尿病联盟2005年提出的诊断标准是以中心性肥胖为核心，合并血压、血糖、甘油三酯升高和／或HDL-C降低。其具体内容是：
1个必备的条件将肥胖作为诊断代谢综合征的必要条件。这里所说的肥胖特指“中心性肥胖”，而不是一般的肥胖，以腰围作为标准。考虑到种族和性别差异，其标准也不同。欧州男性腰围≥94厘米，女性≥80厘米；中国男性≥90厘米，女性≥80厘米为准。
2个多选条件在有中心性肥胖的情况下，以下4项中有2项达标即可诊断。
甘油三脂（TG）≥1.70毫摩尔/升；
高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）：男性＜1.03毫摩尔/升，女性＜1.2毫摩尔/升；
血压≥130/85毫米汞柱（或收缩压≥130毫米汞柱或舒张压≥85 毫米汞柱）；
空腹血糖≥5.6 毫摩尔/升或餐后2小时血糖≥7.8 毫摩尔/升或有糖尿病史。
两相对比可以看出，IDF的诊断标准较我国的标准更为严格。
代谢综合征是如何发生的
代谢综合征的发病机制尚不十分清楚，多数学者认为“胰岛素抵抗”是促发代谢综合征的始动因素，其过程可概括为：胰岛素抵抗→继发性高胰岛素血症→糖脂代谢紊乱及血管内皮细胞损伤→高血压、糖尿病、心脑血管疾病。
我们知道，导致“胰岛素抵抗”的首要原因是肥胖，而后者则与不良的生活方式有关。
中年白领是代谢综合征的重灾区。一方面，作为高收入阶层，顿顿美酒佳肴，导致营养过剩，血脂、血尿酸升高。另一方面，工作性质久坐少动，能量消耗不足，导致身体过早发福。再就是，他们作为社会中坚及单位骨干，需要承担超负荷的工作，机体长期处于高度紧张状态，导致心率加快、周围血管收缩及血压升高。
代谢综合征的流行现状及其危害
据中华医学会糖尿病学分会的调查报告，目前在中国城市20岁以上的人群中，代谢综合征的患病率为14％~16％，即每6~7个人中就有一个人患有代谢综合征。
代谢综合征的患病率随年龄而增加，在50~70岁人群中达到发病高峰。需要警惕的是，代谢综合征年轻化趋势非常明显，许多30岁左右的年轻人在体检时查出高血压、血糖偏高、血脂异常、脂肪肝、肥胖等比比皆是，久坐少动、工作压力大的办公室白领问题尤为突出。
由肥胖、高血压、高血糖和血脂异常等心血管危险因素组合而成的代谢综合征，早期可能没有什么症状，但其对患者的损害是不知不觉、悄无声息的。从长远角度看，它可以显著增加糖尿病、心脑血管疾病的发病危险。代谢综合征患者发生冠心病、心肌梗死和脑卒中的危险性是正常人的3倍，如不积极加以控制，还会导致猝死等严重后果。
国外报告的一项针对35~70岁人群的调查表明，在未来7年中，每8个人就会有1人死于代谢综合征，因此，代谢综合征目前已成为一个比较严峻的现实问题，防治代谢综合征已成为各国政府及卫生部门的当务之急。
代谢综合征的高危人群
代谢性疾病发病的高危人群有：
40岁以上者；
有一项或两项代谢综合征组成成分（如肥胖、高血压、高血脂等），但尚不符合诊断标准者；
有心血管病、非酒精性脂肪肝病、痛风、多囊卵巢综合征者；
有肥胖、2型糖尿病、心血管病、高血压、血脂异常，尤其是多项组合代谢综合征家族史者。
代谢综合征的临床表现多种多样，如果你是代谢综合征的高危人群，临床上又出现身体不适、疲乏无力等自觉症状，就要到正规的专业的医疗机构进行体检，由临床医生给你做出明确诊断。力求做到“四早”，即早检查、早诊断、早预防、早治疗。
代谢综合征的预防与治疗
防治代谢综合征的手段包括“生活方式干预”和“药物干预”，要求全面控制各种代谢异常。其中减肥是核心，其最终目的是为了预防和减少心脑血管疾病及2型糖尿病的发生。
生活方式的干预
生活方式干预是远离代谢综合征的重要手段。
饮食方面要求低热量、低脂肪（少吃动物内脏、蛋黄、鱼子、奶油及油炸食品）、低盐（每日食盐摄入量不超过6克）饮食，适当增加水果、蔬菜和粗粮，戒除吸烟、酗酒等不良嗜好。
运动方面要求长期坚持规律性的体育锻炼，以达到消耗热量、减轻体重、降低血糖之目的。由于肥胖是代谢综合征的发病源头，因此，超重或肥胖者应务必做到：
一个信念：与肥胖决裂；两个要素：不多吃一口，不少走一步；三个不沾：不吸烟、不喝酒、不熬夜；四个检查：定期检查血压、查血糖、查血脂、查血粘度；五六个月：减肥不求速成，每月减1~2公斤即可；七八分饱：饮食上要“总量控制、结构调整、吃序颠倒”，即每餐只吃七八分饱，以素为主，营养均衡，进餐时先吃青菜，快饱时再吃些主食、肉类；远离西式快餐。
药物干预
对于生活方式干预后效果仍不满意者，应加用药物治疗，在专业医师的指导下，针对组成代谢综合征的各个环节进行有针对性的治疗，如降压、降糖、调脂等等。
目前认为，“胰岛素抵抗”是导致代谢综合征的中心环节，而噻唑烷二酮类药物（罗格列酮、吡格列酮等）及双胍类药物（如格华止）可分别改善外周及肝脏的胰岛素抵抗，增加胰岛素敏感性，是代谢综合征的首选治疗药物。此外，此类药物还可通过降糖、调脂、抗纤溶、保护血管内皮功能、减轻炎症反应等发挥抗动脉粥样硬化作用,具有潜在的器官保护作用。
美国曾对25~44岁存在糖代谢受损人群进行二甲双胍降糖和生活方式干预，结果发现可以预防2型糖尿病的发生。同时切记心存幻想，别以为有了药物就可以放松饮食与运动的治疗。
专家提醒
快速代谢 第3篇
据报道, 用于检测硝基呋喃类抗生素及其代谢物残留的方法主要有色谱方法及其联用技术、分光光度法、免疫分析法等[1,2,3,4]。沈阳市农业检测中心常采用免疫分析法, 即速测法与液-质联用技术结合的方法。通过对58批次淡水鱼的检测, 比较、分析2种不同的检测方法的优缺点。
1 材料与方法
供试材料为58批次鱼类样品。
1.1 快速检测方法 (胶体金法)
检测原理:采用免疫竞争法结合胶体金标记技术进行检测。主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性, 在金标蛋白结合处, 在显微镜下可见黑褐色颗粒, 当这些标记物在相应的配体处大量聚集时, 可见红色或粉红色斑点, 因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。
检测试剂:氯霉素及硝基呋喃代谢物 (AOZ、AMOZ、SEM) 快速合检试剂盒, 批号:EG10009, 生产日期:2012-07-11, 北京六角体科技发展有限公司。检出限:1.0μg/kg。结果判定标准见图1。
1.2 液-质检测方法
检测原理:鱼中残留的硝基呋喃类蛋白结合代谢物在酸性条件下水解, 用2-硝基苯甲醛衍生化, 经乙酸乙酯液-液萃取净化后, 液相色谱-串联质谱仪测定, 内标法定量[5,6,7,8]。检出限:0.25μg/kg。
2 结果与分析
从表1、图2可以看出, 58批次鱼样中, 快速检测法20批次不合格, 不合格率34.5%;液-质检测法8批次不合格, 不合格率13.8%, 其中6批次最终确证为AOZ超标, 1批次确证为SEM超标, 1批次确证为AMOZ超标, 排除假阳性12批次, 不合格率降低20.7个百分点。分析原因, 因快速检测法检出限是1.0μg/kg, 液-质检测法检出限是0.25μg/kg, 本实验室在判定时, 本着宁枉勿纵的原则, 快速检测时严格判定, 将T线偏浅于C线的测试板即判定为阳性, 然后以液-质检测法确证, 从而保证检测结果的准确性。
注:快速检测结果中有5批次鱼样AOZ和AMOZ同时不合格。AOZ最高值27.6μg/kg, SEM检出值3.8μg/kg, AMOZ检出值0.4μg/kg。
3 结论与讨论
通过对上述2种方法操作及结果的比较显示, 快速检测方法具有快速、简便、灵敏、高特异性等优点, 缺点是容易出现假阳性问题;液-质联用技术LC-MS提高了分析的灵敏度、精确度, 降低了检测限, 特异性更强, 假阳性率更低, 其应用前景广阔, 但同时存在实验设备要求高、操作费时、费力、有机溶剂污染等缺点。建议在使用快速检测法测定时加强质量控制, 进行方法确证, 增加标品添加试样、试样空白和试剂空白的检测, 从而提高判定结果的准确性与依从性。
我国加入WTO以后, 发达国家的“绿色壁垒”、“技术壁垒”问题严重冲击着我国对外出口贸易。因此, 快速、准确地检测硝基呋喃类药物代谢物是检测工作者的工作目标和重点, 值得深入研究和探讨。
摘要：通过对58批次鱼样硝基呋喃类代谢物进行快速检测法与液-质检测法检测, 结果表明, 快速检测法20批次不合格, 不合格率34.5%;液-质检测法8批次不合格, 不合格率13.8%, 排除假阳性12批次, 不合格率降低20.7个百分点。看似不合格率偏差较大, 主要原因是快速检测法检出限是1.0μg/kg, 液-质检测法检出限是0.25μg/kg, 故试验将T线偏浅于C线的测试板即判定为阳性, 严把质量关, 然后再以液-质检测法确证, 从而保证检测结果的准确性。
关键词：水产品,硝基呋喃类代谢物,检测方法,比较
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