AQP4的表达

2024-07-18

AQP4的表达（精选4篇）

AQP4的表达第1篇

1 资料与方法

1.1 实验动物

选择Wistar大鼠45只,性别不限,体质量200~250g,将实验动物随机分为3组:对照组、治疗1组、治疗2组、每组15只。

1.2 试剂和药物

乌司他丁,由广东天普生化医药股份有限公司提供AQP4试剂盒,由武汉博士德生物工程有限公司提供

1.2 方法

1.2.1 实验方法

参照Longa等的方法[1],对照组、治疗1组、治疗2组均采用线栓法建立大脑中动脉阻塞(MCA0)模型,手术方法从略。

1.2.2 分组及给药法

乌司他丁治疗组大鼠分别于术后即刻、术后8h、16h腹腔注射乌司他丁1次,剂量分别为治疗1组1.0万U/kg,治疗2组4.0万U/kg;对照组在相同时间点给予等量生理盐水腹腔注射,三组均于术后24h处死。

1.2.3 指标观察及方法

1.2.3.1脑组织水孔蛋白-4(AQP4)免疫组化检测

分别取各组实验动物缺血脑组织后外部分作冠状位冰冻切片(15um),采用S-P法,选用一抗(AQP4抗体),并根据试剂盒上的步骤进行操作,免疫组化AQP-4阳性细胞胞膜呈棕黄色。

1.3 统计学分析

在400倍光镜下各时相点各取免疫组化切片5片,在同一光强度下随机选择不重叠的5个视野,细胞膜呈棕色为AQP-4免疫组化阳性,统计AQP-4表达阳性细胞数。数据均采用均数±标准差表示,组间比较采用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AQP4表达水平变化

AQP4主要在细胞膜中表达。治疗1组与对照组比较,24h后AQP4表达水平减轻(P<0.05),治疗2组与对照组相比,24h后AQP4表达水平减轻较明显(P<0.01)。

3 讨论

缺血性脑血管病率是严重危害人类健康的主要疾病之一,其急性期病理变化主要表现为脑水肿,其严重程度和持续时间的长短对脑缺血的预后有着直接的影响。所以,使用有效药物减轻缺血性水肿成为脑缺血急性期治疗的关键。研究显示在缺血性脑水肿的过程中,水孔蛋白-4(AQP4)与脑水肿关系密切[2,3,4],当使用相关药物能使水孔蛋白的表达减低时,即能有效的减轻脑水肿的程度。乌司他丁是一种广谱蛋白酶抑制剂具有抗炎性介质作用和多脏器功能保护作用[5]。近年来一些研究实验显示乌司他丁具有良好的脑保护作用[6,7],同时新近的临床多学科研究也表明乌司他丁的治疗效用与用药剂量呈正比关系,即较大剂量的乌司他丁能起到更好的作用[8,9],因不同剂量的乌司他丁在脑保护中起到的不同作用的研究及有关乌司他丁对缺血性脑水肿脑组织水孔蛋白-4(AQP4)的影响的研究目前仍未见报道。故我们通过建立脑缺血动物模型后,使用不同剂量的乌司他丁后,对脑组织进行实验室重要免疫组化指标水孔蛋白-4(AQP4)分析检测,探讨乌司他丁在预防及治疗缺血性脑水肿方面的疗效。

我们实验显示:与对照组比较,使用乌司他丁的治疗1组能使缺血脑组织的水孔蛋白-4(AQP4)表达下降(P<0.05),且随着使用乌司他丁剂量的增加,即:治疗2组可使血脑组织的水孔蛋白-4(AQP4)表达相对对照组明显减少(P<0.01)。我们的实验结果提示:乌司他丁能通过下调水孔蛋白的表达起到保护脑组织的作用,并且在大剂量的作用下能起到更好的效果。故我们认为在常规治疗脑梗塞的基础上,使用乌司他丁可以对脑梗塞后的脑水肿起到有效的辅助治疗作用,从而有利病情的好转和康复。但临床运用的有效性还待进一步临床实验证实。

摘要：目的探讨乌司他丁对大鼠缺血性脑水肿脑组织AQP4表达的影响及意义。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,随机分为3组:对照组、治疗1组、治疗2组,取24h时相点用免疫组化方法观察大鼠模型缺血区AQP4的表达。结果治疗1组与对照组比较,24h后AQP4表达水平减轻(P<0.05),治疗2组与对照组相比,24h后AQP4表达水平明显减轻(P<0.01)。结论乌司他丁能通过下调脑缺血组织AQP4的表达,起到脑保护作用。

关键词：乌司他丁,水孔蛋白4,脑水肿

参考文献

[1]Longa EZ,Weinstein PR,Carison S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[2]Taniguchi M,Yamashita T,Kumura E,et al.Induction of aquaporin-4 water channel mRNA after focal cerebral ischemia in rat[J].Brain Res Mol Brain Res,2000,78(1/2):131-137.

[3]Kiening KL,van Landeghem FK,Schreiber S,et al.Stover JF.Decreased hemispheric Aquaporin-4is linked to evolving brain edema following controlled cortical impact injury in rats[J].Neurosci Lett,2002,324(2):105-108.

[4]Manley GT,Fujimura M,Ma T,et al.Aquaporin-4deletion in mice reduces brain edema after acute water intoxication and ischemic stroke[J].Nat Med,2000,6(2):159-163.

[5]邵明义,张良清,邓烈华,等.乌司他丁对全身炎症反应综合征的治疗作用[J].中国危重病急救医学,2005,17(4):228-230.

[6]章国军,杜杭根,殷利春,等.乌司他丁在重型颅脑损伤应用中血浆内皮素水平的变化[J].浙江中医学院学报,2004,38(2):68-70.

[7]张华芳,唐勇,姜保芹,等.乌司他丁对鼠缺血性脑水肿的防治作用[J].潍坊医学院学报,2003,25(1):29-31.

[8]孙传玉,邵伟,毕严宾.不同剂量乌司他丁的心肌保护作用观察[J].山东医药,2005,49(45):71-72.

AQP4的表达第2篇

你面对挑战总是那么自信！祝贺你，又成功向前迈了一步。

如果说幸福是五角星的话，我想我已经抓住了他的四角。剩下的只能在你那里得到，希望我门在一次相遇时，我的那颗星星回带给你温暖，要记得，无论你走到那里，都回有一颗心在你的身边陪这你。

天下雨了，是云儿哭了，树叶静了，是风儿要睡去了，夜幕降临了，是夕阳醉了，哼着情歌的我们已经很疲惫了，看信息的人啊，我又想你了！

不见你娇美的姿容已经一个星期了，真如七年一样。在这七天里，你的倩影无时不刻在我心海浮现！

不知道你今天好不好，我的情况可不妙。只觉得前前后后，左左右右，脑子里里外外，嗡嗡的都是你，你想我吗?

我的思念，是被岁月催放的花朵，漫山遍野地开放！朵朵花儿，化成一只只蝴蝶，夜夜，飞入你的美梦！

我今天只做了两件事，呼吸和想你！

我可以一杯接着一杯，只为了你想要喝醉，在你迷朦眼神是，仿佛才有我的美.

我想你，在每一个黑暗来临之际；我想你，在每一个破晓到来之时；我想你，在每一个晨曦开始之时。亲爱的，你知道我的心，早已跟随你千万里。

想你想得睡不着,冷冷的夜晚真糟糕;念你念得发高烧,苦苦的心儿受煎熬;爱你爱得比天高,孤单的人儿把你找;疼你疼得像块宝,短短信息把话捎:想你了

星光在闪，日历在翻。不能见面，多么想念。信息一章，飞向你方。带去祝福，送去希望。奉上温馨和健康，祝春节愉快、事事顺心！

一个人有点寂寞，两个人才有快乐；苍天安排了你和我，一路上不断奔波；苦一点累一点算什么，开花就会有结果；没有你陪的日子，思念总牵着我的手！

长相思：晓风寒，晚风寒，情人佳节独往还，顾影自凄然。见亦难，思亦难，长夜漫漫抱恨眠，问伊怜不怜。

这些日子以来我爱你的每一天都好比是一年,亿万年太短,但我没有虚度！

真诚之中与你相识相知,灵犀之间与你朝夕相伴.在每个想念的日子,想你不容易,不想你更难!情人节快乐~!

才下眉头,却上心头,分开也许能给我们增添一些酸甜苦辣的感受,聚首能让我们更加珍惜对方的深情和温柔.想你在心头.

独坐相思椅，手握相思笔，望着相思月，想者相思的你，写着相思信，句句相思语，滴滴相思泪，全部相思你，天是蓝的海是深的，我爱你是真的！

好想，好想你！如果清风有情，请带去我对你的思念，这一生都为你牵挂；如果白云有意，请带去我对你的爱恋，生生世世都愿和你共缠绵！

金蛇狂舞辞旧岁，骏马奔腾迎新春，春至九洲生瑞气，马行千里展雄风，祝您新春快乐马到成功身体健康万事如意！

看着你疲惫中仍充满宠溺的双眼，我知道：做你的新娘，陪你一生一世，将会是我的天长地久。

面貌的美丽固然重要，但心灵和思想的美丽才是真挚爱情的牢固基础。虽然你并不沉鱼落燕，但却有一颗金子般的心灵。

AQP4的表达第3篇

1 材料与方法

1.1 动物分组及脑出血模型制作

1.1.1 分组

健康Wistar大鼠(由本校实验动物中心提供),体重300～350 g,雌雄不限。随机分成三组,即对照组、ICH组、抑肽酶组,每组按造模后6 h、1 d、3 d和7 d时间点分成4个亚组,每个亚组各5只大鼠(n=5)。

1.1.2 动物模型制作参照R OSENBER G等的方法进行[1]

大鼠经水合氯醛麻醉后,固定于立体定位仪上,行头部正中纵行切口,剥离骨膜暴露前囟和冠状缝。于前囟前0.2 mm,中线向右旁开3.0 mm处钻一直径1.0 mm小孔。脑出血组大鼠用微量注射器从股动脉抽取适量血,在立体定向仪引导下经钻孔垂直进针,深度约6.0 mm(相当于右侧尾状核),缓慢注血75μL。留针10 min后退针并再注入3μL生理盐水;抑肽酶组在大鼠脑出血前30 min按500m IU/kg腹腔注射抑肽酶,其它操作同脑出血组;对照组仅注入78μL生理盐水。

1.2 指标检测

1.2.1 标本采集与处理分别在预定时间点将大鼠快速断头处死并取脑,在注血点作冠状切开,前半部分用于脑含水量的测定,后半部分用于AQP4 m RNA的测定。

1.2.2 脑含水量将各时间点的前半脑组织分别用电子分析天平称重(湿重),然后置入100℃恒温箱中,24 h后取出再称重(干重)。以(湿重-干重)/湿重×100﹪来计算脑含水量,以此代表脑水肿的水平。

1.2.3 脑组织AQP4 m RNA的表达采用RT-PCR法进行分析,使用Trizol试剂盒和RT-PCR Kit(AMV)试剂盒。电泳结果用凝胶图像分析系统进行电泳条带光密度分析,计算AQP4产物与β-actin产物的光密度积分的比值,作为AQP4mR-NA表达的量化指标。

1.3 统计学处理

实验结果以均数±标准差(x±s)表示,用SPSS 10.5及Excel软件进行统计处理。采用方差分析和t检验进行分析。

2 结果

2.1 脑含水量

ICH组脑含水量从6 h即开始上升,3 d时达到高峰,之后缓慢下降,7 d时仍高于正常(P<0.05);抑肽酶组与ICH组相比,各时间点脑含水量明显下降(P<0.01)。见表1。

注:1)表示与对照组比较P<0.01;2)表示与出血组比较P<0.01

2.2 脑组织AQP4 mRNA表达

对照组大鼠脑组织存在AQP4mRNA表达;ICH后AQP4mRNA表达升高,6 h即高于正常,3 d时达到高峰,7 d时仍高于正常;抑肽酶组除6 h外,其余时间点明显低于ICH组(P<0.01)。见表2。

注:1)表示与对照组比较P<0.01;2)表示与出血组比较P<0.01

2.3 脑含水量与AQP4 mRNA表达的相关分析

ICH后脑含水量与AQP4 m RNA表达的变化趋势一致,相关分析表明脑含水量与AQP4 m RNA呈正相关(r=0.826,P<0.01)。

3 讨论

AQP4是近十年来发现的一类膜通道蛋白,广泛存在于各种生物的细胞膜上,仅对水分子及一些小分子物质有通透性,是水分子跨膜转运的主要分子基础。目前在哺乳动物体内已发现十种AQP(AQP0～AQP9),分布在体内不同的组织。AQP4是中枢神经系统内分布最广泛的水孔蛋白,在大脑灰质和白质均有分布,在室管膜上皮细胞、软膜细胞、室旁核、视上核、齿状回的颗粒细胞层及小脑蒲肯野细胞层上也有表达,尤其在朝向血管及软膜面胶质细胞膜AQP4选择性地高表达,提示AQP4是胶质细胞与脑脊液以及血管之间的水调节和运输的重要结构基础[2,3,4]。研究发现[5,6,6],AQP4在各种原因如缺血、出血、外伤、肿瘤等引起的脑水肿的病理生理机制中均发挥重要作用。本实验发现在ICH组中,AQP4 m RNA的表达于ICH后6 h即开始升高,3 d时达到高峰后缓慢下降,7 d时仍高于正常水平;脑含水量在ICH后6 h也开始升高,3 d时达到高峰,之后开始下降,7 d时仍然高于正常,与AQP4 m R-NA表达的变化一致,二者呈显著正相关(r=0.826,P<0.01),与文献报道一致[7,8]。ICH组AQP4 m RNA表达水平和脑含水量在相应时间点上均高于对照组(P<0.05),提示AQP4在ICH后脑水肿的形成过程中起着重要作用,AQP4 m RNA表达的上调导致脑含水量的增加。抑肽酶组与ICH组比较,AQP4m RNA表达明显下调,脑含水量明显减少(P<0.01)。提示血肿释放的凝血酶有可能通过上调AQP4的水平加重ICH后的脑水肿。动物实验表明:凝血酶与ICH后的脑水肿密切相关,自发性ICH以后,暴露的组织因子启动外源性凝血途径产生大量凝血酶,过量凝血酶渗透进入组织间隙,通过广泛分布于血小板、血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、神经元、神经胶质细胞等细胞表面的凝血酶受体,诱导多种毒性反应。