高校液相色谱法

高校液相色谱法（精选12篇）

高校液相色谱法 第1篇

氨基甲酸酯类农药是一种广谱性农药, 可用作杀虫剂、除草剂、杀菌剂等也用作灭蚊药、灭蟑药[1]。此类农药选择性强, 对咀嚼式害虫, 例如棉红铃虫等具有特效[2]。虽然氨基甲酸酯类农药的母体化合物毒性较高, 但由于它们在温血动物与昆虫体的代谢途径不同, 即在前者, 能产生水解, 在后者则仍保持母体化合物的毒性, 故而对前者的毒性较低。

氨基甲酸酯类农药对人体的急性毒作用与有机磷农药相似, 抑制体内乙酰胆碱酯酶, 使他失去分解乙酰胆碱的功能, 造成组织内乙酰胆碱的蓄积而中毒。

蔬菜具有生长期短, 流通快等特点, 要求快速、灵敏、准确地检测多种未知农药残留, 本文在现有标准和文献基础上, 通过对样品前处理和色谱条件进行了比较和优化, 旨在建立同时测定7种氨基甲酸酯残留的高效、准确、灵敏的分析方法。

1 材料与试剂

1.1 试剂

乙腈、二氯甲烷、甲醇 (均为色谱纯) 、氯化钠 (分析纯) 、柱后衍生试剂0.05mol/ml Na OH溶液, Pickering (cat.NO CB130) ;

OPA稀释溶液, Pickering (cat.NO CB130) ;

邻苯二甲醛 (O-Phthaladehyde, OPA) , Pickering (cat.NO CB130) ;

巯基乙醇 (Thiofluor) , Pickering (cat.NO 3600-2000) 。

1.2 仪器与设备

匀浆机、氮吹仪、Waters 1525液相色谱仪 (可变荧光波长检测器) 、0.22um滤膜、0.5mg氨基柱

1.3 实验方法

1.3.1色谱条件:

色谱柱为SB-C8 (5µm, 4.6×250mm) ;激发波长为330nm;发射波长为465nm。流动相为甲醇+水相=15+85;流速:0.5ml∕min。

1.3.2样品处理。

准确称取25.0g试样放入匀浆机中, 加入50.0ml乙腈, 在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤, 滤液收集到装有5g~7g氯化钠的50ml具塞量筒中, 收集滤液40~50ml, 盖上塞子, 剧烈震荡1min, 在室温下静置30min, 使乙腈相和水相分层。从100ml具塞量筒中准确吸取10.00ml乙腈相溶液, 放入150ml烧杯中, 将烧杯放入80℃水浴锅上加热, 杯内缓缓通入氮气或空气流, 将乙腈蒸发近干;加入2.0ml甲醇+二氯甲烷 (1+99) 溶解残渣, 盖上铝箔, 待净化。将氨基柱用4.0ml甲醇+二氯甲烷 (1+99) 预洗条件化, 当溶剂液面到达柱吸附层表面时, 立即加入上述待净化溶液, 用15ml离心管收集洗脱液, 用2ml甲醇+二氯甲烷 (1+99) 洗烧杯后过柱, 并重复一次[2]。将离心管置于氮吹仪上, 水浴温度50℃, 氮吹蒸发至近干, 加入甲醇3ml, 再用蒸馏水准确定容至5.0ml。在混合器上混匀后, 用0.22um滤膜过滤, 放入小瓶中待测。

1.3.3测定方法:

标样配制准确吸取0.5ml 1000μg/ml的涕灭威农药, 放入10ml容量瓶中, 并用甲醇定容到10ml, 配成50μg/ml涕灭威母液, 其余六种同样配制成同等浓度的母液, 再依次从7种母液中吸取1ml, 放入10ml容量瓶中配制成5μg/ml的混合标准溶液, 由此混合标准溶液配制上机的标准溶液。

2 结果与讨论

2.1 分离条件的选择

采用等度洗脱时, 无论甲醇和水比例如何, 这7种组分都不能很好的分离, 所以我们采用梯度洗脱, 7种组分能完全分离而且峰形良好。

2.2 本方法的精确度和准确度试验

测定方法准确度可用全过程标准添加回收率来衡量。采用上述建立的方法进行8种氨基甲酸酯农药在7种25.0g样品, 加入适量标样, 使被加样品的7种氨基甲酸酯农药的浓度分别在0.1mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg水平上, 然后按实验最终确定的方法进行提取实验, 最终进样测定, 实验设置5次重复, 分别进行回收率和精密度的计算。实验结果见表1。

番茄7种氨基甲酸酯类农药的测定结果和加标回收率见表1。由表1可知:测定的几种7种氨基甲酸酯类农药的加标浓度为0.1mg/kg时, 回收率为79.4~119.0%;相对标准偏差 (RSD) 小于11.5%, 加标浓度为0.2mg/kg时, 回收率为81.2~115.5%;相对标准偏差 (RSD) 小于8.1%, 均令人满意。

3 结论

本文建立了以乙腈为提取溶液, 高速匀浆提取样品, 氨基固相萃取柱净化, 采用高效液相色谱柱后衍生荧光法同时测定7种氨基甲酸酯类农药残留。选择体积比为1:99的甲醇:二氯甲烷进行洗脱, 可以同时测定氨基甲酸酯农药残留, 具有准确性高, 重现性好的特点。研究表明, 此方法可用于蔬菜中多种氨基甲酸酯农药残留的分析。

参考文献

[1]刘宏程, 杨光宇, 马雪涛, 等.测定中药材中氨基甲酸酯类杀虫剂残留的高效液相色谱柱后衍生法[J].药物分析杂志, 2006, 26 (6) :857-859.

[2]张静, 闫实, 王蕾, 等.HPLC测定蔬菜、水果中氨基甲酸酯类农药残留量[J].沈阳化工学院学报, 2007, 21 (2) :157-160.

液相色谱法分析烟草中吡虫啉 第2篇

建立了一种测定烟草中吡虫啉的简单、有效的高效液相色谱法,该方法以丙酮在超声波辅助下提取样品,保证了吡虫啉的.提取效率;使用C18处理柱净化样品,有效地消除了干扰物的影响;采用梯度洗脱方式进行分离与测定,改善了色谱峰形.

作 者：谷勋刚 刘晓松 作者单位：谷勋刚(安徽农业大学资源与环境学院,安徽,合肥,230036)

刘晓松(安徽省巢湖市居巢区种子管理站,安徽,巢湖,238000)

高效液相色谱法测定烟草上的噻森铜 第3篇

关键词：噻森铜；高效液相色谱；烟草

中图分类号： O657.7+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0284-03

收稿日期：2014-03-07

基金项目：贵州省重大科技专项（编号：20136024）；贵州省农业攻关项目（编号：20083053）。

作者简介：李智宁（1987—），男，河南开封人，硕士研究生，从事农药残留分析与环境毒理研究。E-mail：aning072@126.com。

通信作者：胡德禹，研究员，硕士生导师。Tel：（0851）8292170；E-mail：gzu_dyhu@126.com。噻森铜[N，N′-甲撑-双（2-氨基-5-巯基-1，3，4-噻二唑）铜]是我国自主创制的噻二唑类有机铜杀菌剂，是农业部全国农技中心重点推荐农药品种之一。其结构式见图1。其熔点300 ℃（分解），20 ℃时不溶于水，不溶于一般的有机溶剂，只微溶于吡啶、二甲基甲酰胺，遇强碱分解，在酸性条件下稳定。由于其结构由噻唑基与铜离子2 个基本基团组成，故有着特殊的作用机制 [1]。因此，噻森铜防治作物细菌性病害和真菌性病害具有高效广谱，低毒安全、环保无公害，不易产生抗性及持效期长等优点[2]

目前国内外对噻森铜的研究主要集中在田间药效[3-4]及杀菌活性[5]，对其残留分析的研究未见报道，为此查阅了一些与其结构相似的噻二唑类杀菌剂（噻菌铜/噻枯唑[6-11]）的残留分析方法，如采用硫化钠溶液水解，XAD-7树脂富集提取，柱层析纯化，液相色谱检测[6-7]；硫化钠溶液和甲醇提取，乙酸乙酯净化，液相色谱检测[8-9]；乙酸乙酯和二甲基甲酰胺混合液振荡提取，离心净化，液相色谱检测[11]。采用硫化钠衍生易产生对环境危害的副产物，且柱层析净化耗时较长，成本较高。鉴于此，建立新颖的，对环境友好的噻森铜残留检测方法十分必要。故本研究拟建立高效液相色谱法检测噻森铜在烟草中的残留，旨在为噻森铜在烟草上及其他农作物上安全使用提供参考。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

1.1.1主要仪器Agilent 1100 高效液相色谱仪（配DAD检测器）；涡旋混合仪（QL-901，其林贝尔仪器制造公司生产）；旋转蒸发仪（RE-2000/2000A，上海亚荣生化仪器厂生产）；氮吹仪（N-EVAPTM，上海安谱科学仪器有限公司生产）；水浴恒温振荡器（SHZ-A，上海博讯实业有限公司生产）；循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ，郑州长城科工贸易有限公司生产）。

1.1.2试剂甲醇（分析纯、色谱纯），乙腈（色谱纯），乙酸乙酯、二甲基甲酰胺、冰乙酸、盐酸、氢氧化钠、硫代硫酸钠、碳酸钾和硫化钠均为分析纯；超纯水，硅藻土Celite545，无水硫酸钠（450 ℃ 烘烤4 h，于干燥器中保存）；噻森铜标准品（纯度95.6%，浙江东风化工有限公司提供）；2-氨基-5-硫基-1，3，4-噻二唑（AMT）标准品（纯度98.0%，购于北京百灵威有限公司）。

1.2试验方法

1.2.1样品的提取和净化衍生和提取：称取10.0 g烟叶样品置于150 mL锥形瓶中，然后加入50 mL 0.5 mol/L硫代硫酸钠溶液，在60 ℃ 恒温水浴中，衍生反应振荡提取2 h，取出冷却至室温，准确量取40 mL提取液于50 mL离心管中，待净化。

净化：在上述离心管中加入6 g NaCl，以及2.0 mol/L NaOH使得溶液pH至12～13，待絮状物杂质析出，并于 6 000 r/min 离心5 min，将上清液转入125 mL分液漏斗中，再用40 mL含2%乙醇的三氯乙烯溶液预萃取1次，弃去下层有机相，上层用1.0 mol/L HCl调节pH至3～4，用50、40 mL 乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，过无水硫酸钠，浓缩至近干，N2吹干，甲醇定容至1 mL，过0.45 μm滤膜，待HPLC检测。

1.2.2色谱检测条件分别对色谱柱A：Eclipse XDB-C18，ZORBAX SB-C18，Phenomenex kinetex XB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm） 和色谱柱B：Phenomenex C18/NH2，Lichrospher C18/CN/C8 （250 mm×4.6 mm，5 μm ）进行筛选，同时改变流动相乙腈与0.1%乙酸水的体积比，确定最佳流动相。

2结果与分析

2.1色谱条件的选择

2.1.1检测波长的选择采用DAD检测器对噻森铜衍生化产物标准溶液（AMT，125 μg/mL）进行全波长扫描（扫描范围210～400 nm），从而得到AMT的吸收波长和响应值之间的紫外吸收光谱图（图2），可见AMT的最大吸收峰出现在312～314 nm处。因此，确定AMT的最佳检测波长是313 nm。

2.1.2色谱柱的选择由图3可知，色谱柱A色谱柱短，响应值较大，出峰时间早，分析时间快，但是烟草基质复杂，会有杂质影响。图4显示，色谱柱B（Phenomenex C18 色谱柱）响应值较大，出峰时间合适，峰形尖锐，对称性好，与杂质峰分离效果较好。故本研究最终选择 Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm ） 色谱柱。

nlc202309040105

2.1.3流动相的选择AMT分子巯基上的质子可以电离，并测得其电离常数Ka=1.8×10-7，其溶液呈微酸性[12-13]；在水中的溶解度较小，但随温度的增加而增加，AMT水溶液的pH=3.9，AMT乙醇溶液的pH=4.6[14]；故本研究选择乙腈与乙酸水溶液作为流动相的组成溶剂，使流动相呈现一定的酸性，在实验中多次改变乙腈与乙酸水溶液的比例，最终确定了流动相为乙腈-0.1%乙酸水（17.5 ∶82.5，体积比），此时获得的峰形较好。

2.2噻森铜标准曲线

用电子天平称取0.026 1 g 噻森铜标准品于100 mL容量瓶中配制为250 mg/L的标准样品溶液备用。将250 mg/L的噻森铜标准样品溶液用甲醇稀释配得1.0、2.5、5.0、10.0、

25.0、50.0 mg/L系列标准溶液，按照“1.2.2”节中样品前处理步骤进行噻森铜标样衍生化，每个浓度重复3次，以噻森铜标准溶液浓度（x）与色谱峰面积（y）作标准曲线，浓度在2.5～50 mg/L线性范围内，线性方程为：y=31.812 0x-35.122 0，相关系数（r）=0.999 8。

2.3方法的准确度与精密度

取空白烟叶样品，添加不同浓度噻森铜标样，每个浓度设5次重复，按照“1.2.2”节的测定步骤进行添加回收率试验，另设空白对照。测定结果见表1，结果表明噻森铜在烟叶样品添加水平为0.5～50.0 mg/kg时，回收率分别为75.92%～107.40%，RSD为0.94%～7.55%。试验结果均符合农药残留分析要求。表1噻森铜在烟叶中的添加回收率（n=5）

噻森铜添加水平

（mg/kg）添加回收率（%）ⅠⅡⅢⅣⅤ平均RSD

（%）0.575.9280.5088.0784.8587.6183.396.172.578.8880.4080.0078.6779.8479.550.945.099.3296.98107.4093.5993.5198.165.8250.085.32102.9089.1790.8387.8091.227.55

2.4最低检出限和最低检测限

在建立的色谱分析条件下，外标法定量，以3 倍信噪比（S/N=3）确定仪器的最低检出限，结果表明，本研究建立的检测方法，噻森铜的最低检出限为1.8 ng。噻森铜在烟草样品中的最低检测限为0.5 mg/kg。烟叶空白样品（CK）、添加样品（TJ）和标准样品（BY）谱图如图5所示。

3结论

试验结果表明，采用高效液相色谱和紫外检测器建立的烟草中噻森铜残留分析方法，噻森铜最低检出限为1.8 ng，噻森铜在烟草样品中的最低检测限为0.5 mg/kg，满足国家标准或行业标准的检测要求，同时该方法经济、安全，有机溶剂用量较小，操作简单，杂质干扰较少，准确度高，重现性好，能保证检测分析数据的可靠性。

参考文献：

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[2]张纯标，梁帝允，王体祥，等. 新颖杀菌剂——噻森铜[J]. 世界农药，2007，29（2）：53-54.

[3]章瑶，王梅，张勇，等. 20%噻森铜悬浮剂对水稻细菌性病害的田间药效研究[J]. 现代农业科技，2006（19）：67.

[4]何荣林，邢家华，张纯标，等. 20%噻森铜悬浮剂防治水稻白叶枯病田间试验[J]. 现代农药，2007，6（2）：44-45.

[5]邢家华，何荣林. 噻森铜对水稻白叶枯病和细菌性条斑病室内杀菌活性[J]. 农药研究与应用，2007，11（4）：31-32.

[6]赵善仓，邓立刚，赵领军，等. 反相高效液相色谱法测定冬枣中噻菌铜的农药残留[J]. 农药，2007，46（8）：555-556.

[7]毛江胜，邓立刚，李增梅，等. 高效液相色谱法测定西瓜中残留的噻菌铜[J]. 分析测试學报，2007，26（5）：752-753.

[8]傅新文，陈红梅，张滨. 噻菌铜在土壤中消解动态研究[J]. 网络财富，2010（11）：192-193.

[9]胡秀卿，李振，郭钤，等. 烟草中噻菌铜残留量检测[J]. 浙江农业科学，2010（6）：1389-1390.

[10]蒙缔亚，任立伟，覃章兰. 高效液相色谱法测定20%增效噻枯唑可溶性粉剂中噻枯唑含量[J]. 分析科学学报，2001，17（2）：131-134.

[11]王志新，鹿泽启，徐维华，等. 叶枯唑在桃和土壤中的残留分析[J]. 安徽农业科学，2012，40（14）：8116-8117，8142.

[12]Domaglina L，Przyborowski. Uber die verwendbarkeit von 2-amino-1，3，4-thiadiazol-5-thiol in der analyse[J]. Zeitschriftfür Analytische Chemie，1965，207：411-414.

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[14]武海顺，许小红，马文瑾，等. AMT异构体互变机理的理论研究[J]. 物理化学学报，2003，19（5）：408-413.

高校液相色谱法 第4篇

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器与试剂。

液相色谱—串联质谱仪器Agilent 1200RRLC/6410BQQQ-ESI, 高速冷冻离心机3-18K, 电子天平 (±20mg) ALC-210.2型, 组织捣碎机T18 Basic型, 氮吹仪N-EVAP24型, 乙腈 (HPLC) , 甲醇 (HPLC) , 氯化钠 (AR) , C18小柱, 盐酸 (AR) , 甲酸 (HPLC) , 乙酸铵 (HPLC) [2]。

1.1.2 标准溶液。

从农业部环境质量监督检验测试中心 (天津) 购买浓度为1 000 mg/L的标准品 (附有标准物质证书) , 用甲醇配制成100 mg/L的标准储备溶液, 贮存在-18℃以下冰箱中。使用时吸取适量的标准储备溶液, 稀释配成所需的标准工作溶液。

1.2 试验方法

1.2.1 提取。

准确称取制备好的样品 (果肉、皮) 20.0 g于100m L聚四氟乙烯离心管中, 加入1 mol/L盐酸1 m L[1], 再加入乙腈40.0 m L, 氯化钠6 g, 高速匀浆2 min后再采用7 000r/min离心。准确移取分层后的上层有机相10 m L于10 m L刻度离心中, 70℃恒温水浴上氮吹浓缩至近干, 加入2.0 m L甲醇+纯水 (1+1) , 待净化。

1.2.2 净化。

采用C18固相萃取柱, 先用乙腈4.0 m L预淋洗, 以4.0 m L水平衡, 当溶剂液面到达柱吸附层表面时, 添加上述提取液过柱, 用水2.0 m L淋洗后, 依次用甲醇4、4 m L洗脱样品, 收集淋洗液于10 m L具塞刻度试管中, 将盛有洗脱液的刻度试管置于氮吹仪上, 40℃下氮气吹, 用流动相定容至5.0 m L, 混匀后过0.20μm微孔滤膜, 用液相色谱质谱联用仪检测。

1.2.3 色谱测定。

分别吸取5.0μL标准溶液、1.2.2净化后的样品溶液注入Agilent 1200 RRLC/6410 BQQQ-ESI LC/MS/MS中, 以保留时间、离子对比例定性, 采用外标法以样品溶液峰面积与标准溶液定量离子峰面积比较定量。

1.2.4 仪器测定条件。

色谱柱:ZORBAX SB-C18 (2.1×50 mm1.8Micron) ;柱温30℃;流速0.3 m L/min;进样量5μL;电离源模式:ESI;电离源极性:负;雾化气:氮气;雾化气压力40psi;干燥气流量10 L/min;干燥气温度350℃;离子喷雾电压3 500 V[3,4,5]。

萘乙酸母离子185在不同的能量碰撞下也只能得到1个特征子离子141[2], 详见图1, 质谱参数见表1, 流动相见表2。

1.2.5 标准曲线。

取100 mg/L萘乙酸标准溶液, 移取1 m L于10 m L容量瓶, 用甲醇定容至刻度, 得到10 mg/L萘乙酸标准溶液, 再依次稀释至0.02、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L的标准溶液, 在上述色谱条件下依次测定利用Excel数据处理软件对试验数据进行处理[6], 结果表明:峰面积 (y) 与萘乙酸浓度 (X) 呈线性相关, 得到标准曲线方程为y=5 416.8x+128.17 (R2=0.999 1) , 标准曲线见图2。

1.2.6 结果计算。

根据所测峰面积, 用外标法计算样本中萘乙酸的残留量R, 计算公式如下:

式中, R—萘乙酸的残留量 (mg/kg) , C—进样瓶中萘乙酸浓度 (mg/L) , 由标准曲线计算得出, V—定容体积 (m L) , V0—提取液乙腈体积 (m L) , V1—分取乙腈体积 (m L) , V2—萘乙酸标样进样体积 (μL) , V3—样本进样体积 (μL) , M—样本量 (g) 。

2 结果与分析

2.1 回收率和精密度

在一定量的荔枝 (果肉、皮) 样品中, 按0.02、0.20、0.50mg/kg 3个不同浓度进行萘乙酸的添加回收率试验, 每个浓度5个重复。方法的准确度以全过程标准添加回收率来衡量, 方法的精确度以测定结果的相对标准偏差来衡量。结果表明, 荔枝中萘乙酸的回收率在86.8%~95.2%之间, 相对标准偏差为0.9%~3.1%;添加回收率和相对标准偏差在允许范围内, 符合农药残留分析的要求 (表3) 。

2.2 测定结果

对荔枝 (果肉、皮) 样品, 采用以上方法, 通过LC/MS/MS检测, 结果如表3、图3、4、5、6、7所示。

3 结论与讨论

该文着重于样品的前处理方法和仪器分析方法2个方面。在样品前处理方面, 采用液液萃取和固相萃取相结合的方法, 使样品更好地净化。用C18固相萃取柱分析样品中萘乙酸净化过程, 能够充分提取, 更好的净化, 使得萘乙酸得到较高的回收率和良好的重现性;在仪器分析方面, 充分利用液质联用仪抗干扰能力强、灵敏度高和定性准确的特点, 在LC/MS/MS条件下, 萘乙酸具有特征离子、峰形具有良好的重现性、保留时间稳定、灵敏度较好, 便于萘乙酸的定性和定量。结果表明, 荔枝中萘乙酸的回收率在86.8%~95.2%之间, 相对标准偏差为0.9%~3.1%, 添加回收率和相对标准偏差在允许的范围内。综上所述, 该文所建立的检测方法符合简便快递、准确可靠、重现性好, 符合农药残留分析的要求。

参考文献

[1]SN0346-95出口蔬菜中α-萘乙酸残留量检验方法[EB/OL]. (2008-05-26) [2015-01-23].http://www.instrument.com.cn/download/shtm L/006654.shtml.

[2]陈红平, 刘新, 王川丕, 等.分散固相萃取-超高压液相色谱-串联质谱法测定茶叶中赤霉酸和α-萘乙酸[J].分析化学, 2012 (7) :1059-1064.

[3]张璇, 闫征.高效液相色谱法测定黄瓜中萘乙酸的残留量[J].山西农业科学, 2014 (11) :1172-1174.

[4]黄何何, 张缙, 徐敦明, 等.Qu ECh ERS-高效液相色谱-串联质谱法同时测定水果中21种植物生长调节剂的残留量[J].色谱, 2014 (7) :707-716.

[5]周昱, 庄无忌.毛细管气相色谱法测定果蔬中α—萘乙酸残留量[J].分析测试学报, 1993 (4) :49-51.

液相色谱法测定环境空气中酞酸酯类 第5篇

液相色谱法测定环境空气中酞酸酯类

制作了半挥发性有机物中流量采样装置,使用超细玻璃纤维滤膜采样,反相液相色谱法测定环境空气中酞酸酯类,并对样品净化方式、目标化合物在气相和颗粒物上的`分布规律及采样器的捕集效率进行了试验.方法在0.50 mg/L～50.0 mg/L之间线性关系良好,当浓缩体积为1.0 mL、采样体积为144 m3时,目标化合物的检出限为0.4×10-3 μg/m3～6.0×10-3 μg/m3;当采样体积为6 m3时,检出限为0.008 μg/m3～0.145 μg/m3.

作 者：苏娜 王玉平SU Na WANG Yu-ping 作者单位：沈阳市环境监测中心站,辽宁,沈阳,110016刊 名：环境监测管理与技术 ISTIC PKU英文刊名：THE ADMINISTRATION AND TECHNIQUE OF ENVIRONMENTAL MONITORING年，卷(期)：19(4)分类号：O657.7+2关键词：液相色谱法 酞酸酯类 环境空气

高校液相色谱法 第6篇

关键词：地西泮 液相色谱 猪肉

中图分类号：S816 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0041-02

地西泮又名安定，是一种具有镇静、抗惊厥作用的药物，常用于治疗成人焦虑、失眠等症状。但据了解，目前有些养猪场在育肥阶段，在饲料中添加地西泮，以达到减少动物运动，促进睡眠，提高长成效率的目的。由于地西泮具有成瘾性，如长期摄入可致耐受与依赖性，且对新生儿、哺乳期妇女、孕妇影响显著，农业部公告235号规定，地西泮只能用作动物疾病治疗应用，不得用作饲料添加剂，在动物性产品中不得检出地西泮药物残留。

2014年1月1日实施的GB 29697-2013标准中，规定了动物性食品中地西泮的国标测定方法为气相色谱-质谱法，该方法对实验室仪器条件要求较高，本文探索一种使用液相色谱对猪肉中地西泮残留检测的方法，该方法适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与装置

Agilent1100高效液相色谱仪；Grace Smart RP18 （250×4.6mm，5μm）色谱住；分析天平；冷冻离心机；高速匀浆机；旋转蒸发仪；氮气吹干仪；固相萃取装置。

1.2 主要材料与试剂

乙腈、甲醇：色谱纯；无水硫酸钠、乙酸铵、异丙醇、冰醋酸、高氯酸、三乙胺：分析纯；地西泮：标准品；1%高氯酸溶液；C18固相萃取小柱（500mg，3ml），含碳量为17%；微孔针筒式滤膜：0.2μm。

标准溶液的制备：称取50.0mg地西泮，用乙腈溶解并于50ml容量瓶定容，取此标准贮备液，用1%高氯酸水溶液稀释成浓度为0.05，0.10，0.20，0.50和1.00μg/ml的标准工作液，进样测定。

1.3 试验条件

色谱柱：Grace Smart RPC18 （250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.02M乙酸铵水溶液（60：40，v/v）；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样量：50μl。

1.4 样品的提取与净化

称取5g（准确至0.01g）匀浆试样，加无水硫酸钠5g，用20ml乙腈提取，经超声、离心后，取上清液，重复一次，收集两次提取液于鸡心瓶中，加5-10ml异丙醇，旋蒸至近干，用5ml甲醇-水（2：8，v/v）溶解。C18固相萃取柱平衡后，将上述复溶液上样；再用5ml甲醇-水-三乙胺（35：65：0.1，v/v）洗滌小柱；最后用5ml甲醇-乙酸（95：5，v/v）洗脱样品残留，收集洗脱液。洗脱液经氮气吹干，用1%高氯酸水溶液1ml，正己烷2ml复溶，取下层水相过0.2μm滤膜，供HPLC分析。

2 结果与讨论

2.1 方法的线性

本方法采用浓度为0.05，0.10，0.25，0.5，1.0ug/ml的标准样品，作标准曲线，地西泮的线性相关系数分别为0.9997，标准曲线见图1。

2.2 方法最低检出限的确定

检出限由添加的最低浓度得出，按照3倍信噪比设定地西泮检出限，本方法的最低检测限为0.01mg/kg。

2.3 准确度与精密度实验

以空白猪肌肉样品做3个浓度的加标回收实验，每个浓度做6个平行样，具体实验结果如下：

（A）空白猪肉样品（B）添加浓度为0.01mg/kg猪肉（C）0.05ug/ml标准溶液。

经测定，猪肉的平均回收率分别为89.1-92.3%，本方法的精密度好，准确度高，操作简便，适合推广应用。

3 结语

本研究提供了一种液相色谱法检测猪肉中地西泮含量的方法，是对气质联用的国标测定方法的有效补充，本方法回收率、精密度均理想，采用实验室常规的仪器设备和试剂，适合在具有一般检测条件的实验室进行推广。

参考文献

[1]中国农业部公告235号 （2003）.

[2]中华人民共和国药典，国家药典委员会编.化学工业出版社，2005年版，二部.

[3]M.L. Olmos-Carmona， M. Hernandez-Carrasquilla， J. Chromatogr. B. 734 （1999） 113.

[4]T. Edeki， D.W. Robin， C. Prakash， I.A. Blair， A.J.J. Wood， J. Chromatogr. 577 （1992） 190.

高效液相色谱法测定茶叶中多酚 第7篇

云南文山地区发现一种野生茶树,为探明其利用价值,本文取8种云南不同产地的茶叶与其对比实验测定其中茶多酚含量。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

Agilent 1100液相色谱包括:紫外二极管阵列检测器色谱工作站自动进样器,四元梯度泵,Milli-Q 50高纯水处理器(美国Millipore公司)。儿茶素(C)、表没食子酸儿茶素(EGC)、表儿茶素(EC)、表没食子基儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、绿原酸(Chlorogenicacid)、芸香苷(Rutin)标准品均购自Sigma和Fluka公司,纯度高于99%。甲醇、乙酸均为色谱纯试剂,实验用水为高纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱:AgilentZORBAX SB-C 18液相色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)。流动相为甲醇(B),0.5%醋酸(D)水溶液,按0min(B 18%+D 82%),4min(B 18%+D 82%),15min(B 30%+D70%),20min(B 80%+D 20%),28min(B 80%+D 20%),30min(B 20%+D 80%)梯度条件(均为体积分数),流速为1mL/min,进样体积为20μL,上述色谱条件下选择的检测波长为278nm。

1.3 实验方法

本实验采用了两种前处理方法进行比较。

1.3.1 索氏提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,于80℃水浴条件下蒸馏1h,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

1.3.2 超声提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,保持30℃恒温提取24h,分别在0h,6h和24h时间点上超声20min,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线、相关系数及检测限

分别配制质量浓度为100.0、50.0、25.0、5.0、1.0mg/L标准溶液,进样后根据浓度和峰面积,计算出回归方程。根据信噪比S/N=3,测得各组分的检出限,结果见表1。

注:A为峰面积(peakarea);C为质量浓度(concentration),mg/L

2.2 回收率实验及精密度

准确称取文山野生茶2份,其中1份加入已知量的多酚标样。将两份样品在相同条件下测定5次,通过加入多酚的测出量计算回收率,并计算其RSD,结果见表2。

2.3 样品分析结果

茶叶样品按以上中的样品前处理过程处理进样分析,索式提取结果见表3,超声提取结果见表4。

%

注:“-”指在该样品中未检出

%

注:“-”指在该样品中未检出

3 结论

采用索氏提取法及超声提取法两种方法对茶叶中多酚进行提取,结果表明,超声提取法对绿原酸、EGCG、EC、ECG等的提取率比索氏提取法要高。在比较9种茶叶样品的多酚含量时得出如下结论,七子青饼中茶多酚总的含量相对较高,逸神越陈越香中茶多酚总的含量相对较低。文山野生茶中绿原酸的含量相对较高。

参考文献

[1]魏泱,丁明玉.茶多酚的色谱分析法[J].色谱,2001,18(1):35-38.

[2]姚林,王广增.茶多酚的抗肿瘤研究[J].肿瘤防治研究,1995,22:123-126.

高效液相色谱法测定水中莠去津 第8篇

1 材料方法

1.1 仪器与试剂

waters 600型高效液相色谱仪,KD浓缩器;莠去津标准溶液(100μg/ml,农业部环境保护科研监测所);甲醇为色谱纯;二氯甲烷、无水硫酸钠为优级纯;超纯水、乙醚、石油醚、氯化钠均为分析纯。

1.2 色谱条件

改进后方法检测波长:254nm;柱箱温度:40℃;流动相配比:甲醇∶水=5∶1;流动相流速:1.2ml/min;进样量:10μl。原方法:检测波长:254nm;柱箱温度:40℃;流动相配比:甲醇∶水=5∶1;流动相流速:0.9ml/min;进样量:10μl。

1.3 莠去津标准系列

分别取100μg/ml的莠去津标准储备溶液0.0、0.05、0.1、0.5、1.0、3.0、5.0ml于100ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配成浓度分别为0.0、0.05、0.1、0.5、1.0、3.0、5.0μg/ml的标准系列,过0.45μm滤膜。

1.4 样品处理

取100ml水样于250ml分液漏斗中,加入5g氯化钠,溶解后加人20ml二氯甲烷分两次萃取,转移出有机相,合并。萃取液经过无水硫酸钠脱水后,于KD浓缩器浓缩至近干,再用高纯氮气将其刚好吹干,用甲醇定容至1ml,过0.45μm滤膜,供色谱分析用。

1.5 样品测定

按1.2色谱条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 流动相流速的优化

本实验以GB/T 5750-2006为基础,但应用于waters 600型高效液相色谱仪,色谱峰出现拖尾现象,通过反复摸索性实验,最终确定流动相流速在1.2ml/min时,样品中莠去津分离效果最佳,且峰型良好(见图1、图2),重复性良好。

2.2 标准曲线

以流速为1.2ml/min时,分别测定不同浓度的莠去津标准溶液。以测得峰面积做曲线(图3),进行回归计算。结果显示,莠去津浓度在0.05～5.0μg/ml范围内,线性良好(r=0.999 3)。

2.3 精密度、回收率的确定

经过6次测定,结果相对标准偏差为1.41%。水样加标后,以此方法测定6次,平均回收率为95.3%,见表1。

2.4 方法重现性

连续2d测定系列浓度莠去津标准溶液,对测定结果进行统计学处理,标准偏差在0.002～0.3ng/ml之间,改进方法重现性好。

2.5 比对试验

使用本改进方法对5批水样进行测定,同时按照国标(GB/T 5750.9-2006)方法对上述样品进行对比分析[4]。经检验分析,测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

采用高效液相色谱法对生活饮用水中的莠去津含量进行测定,该方法在莠去津浓度0.05～5.00μg/ml范围内,测定线性良好(r=0.999 3),RSD为1.41%。平均回收率为95.3%。经上述试验证明该方法能达到快速准确的测定饮用水中莠去津。

摘要：目的 研究水中莠去津含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,检测波长254 nm;柱箱温度-40℃;流动相配比:甲醇∶水=5∶1;流动相流速为1.2 m l/m in;进样量:10μl。结果 该方法测定RSD为1.41%,线性回归良好(r=0.999 3),平均回收率为95.3%。结论 该方法可以快速准确测定饮用水中莠去津。

关键词：莠去津,高效液相色谱,测定

参考文献

[1]李小平,姚浔平,范建中.固相萃取HPLC法测定水中莠去津及其降解物的研究〔J〕.中国卫生检验杂志.2009,19(6):1242-1244.

[2]李竺,陈玲,郜洪文,等.固相萃取-高效液相色谱法测定环境水样中的三嗪类化合物〔J〕.色谱,2006,24(3):267-270.

[3]谢文明,范志先,张玲金,等.固相萃取-高效液相色谱法快速测定土壤及水中莠去津〔J〕.岩矿测试,2003,22(2):93-94.

高效液相色谱法测定AMPS的纯度 第9篇

目前AMPS作为有效的改性单体已经渗入油田化学品各个领域的聚合物改性, 很好解决了采油聚合物中抗盐性、抗高温性、抗剪切三大棘手问题。中国AMPS最大市场是油田三次采油, 作为钻井液、完井液和压裂液等。目前中原油田等已经将AMPS聚合物作为油田三次采油的化学品立项, 预计仅此一项2005年国内将至少消耗1万吨。

目前全球约1/3的AMPS单体用于水处理工业。AMPS的均聚物或与丙烯酰胺、丙烯酸等单体的共聚物, 可作为污水净化过程中的淤泥脱水剂;在封闭水循环系统中用作铁、锌、铝、铜以及合金的防腐剂;还可用于加热器、冷却塔、空气净化剂和气体净化剂的除垢剂、阻垢剂等。国外大量使用表明, 以AMPS作为处理剂用量少, 效果优于现有聚丙烯酰胺类水处理剂。目前国内一些大中城市污水处理已经开始使用AMPS, 其中华东年消耗约300吨, 华南年消耗约150吨, 京津唐年消耗200吨, 年总消耗量约650吨, 预计2005年将达到1000吨。

目前AMPS已成为国内引人瞩目的热点有机化工原料, 部分科研机构的合成技术也较成熟, 尤其是中国许多油田处于三次采油期, 国内水处理领域用量巨大, 都对AMPS质量和数量提出了更高更多要求。因此, 国内在加快建设AMPS装置的同时, 应加大应用研究力度, 以促进AMPS工业健康快速发展。

AMPS单体的纯度对其后续的加工有着很大的影响, 本文建立了一种快速分析AMPS单体纯度的方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与药品

HP1100高效液相色谱仪 (美国Agilent) , 包括G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器和G1329A自动进样器;Milli-Q超纯水仪 (美国Milli-Pore公司) ;磷酸、磷酸二氢钾均购自北京分析试剂厂, 均为分析纯;甲醇为Fisher试剂公司色谱纯;水为超纯水。

1.2 溶液配制

流动相的配制:以甲醇体积含量为5%的超纯水溶液为溶剂, 配制0.01mol/L KH2PO4磷酸盐缓冲液, 并以5%磷酸调节溶液p H为2.3, 经0.45μm水系滤膜过滤后备用。

1.3 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相:0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节p H为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0m L﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。

1.4 标准曲线的制备

因实验室没有AMPS的标品, 所以使用日本的7号样品作为标准来测定其他样品的相对纯度。

根据前述实验步骤和条件, 按表一将混合标准溶液 (M溶液) 逐级稀释, 得不同浓度的标准溶液, 经0.45μm水系滤膜过滤后, 以进样5μL进行色谱分析, 以对照品浓度 (X) 对峰面积 (Y) 进行线性回归, 得工作曲线:

1.5 样品的测定

将样品按照1.4的方法配制, 以5ul进样量进入色谱分析, 结果见表2。

1.6 讨论

以上分析六种AMPS单体的纯度, 从测定结果 (图1) 可以看出, 样品在色谱柱中的保留时间完全吻合, 具有很高的精确度。在实际的AMPS聚合工作中, 同等条件下2号样合成效果最好, 3号样聚合效果最差, 与色谱分析的纯度结果一致, 说明这种方法是可行的。所建立的分析方法不仅用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。

由于实验室缺少AMPS的标品采用了日本产7号样作为相对标准, 在以后的检测工作中应使用AMPS的标品作为标准物, 以取得准确的数据。

2 结论

本文建立了高效液相色谱法测定AMPS单体的方法, 该方法准确、简便、快速, 不仅适用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。该方法可用于目前市场上一些油田化学原料的检测分析, 便于区分不同批次样品纯度, 方法简便易操作。

摘要：本文建立了分析油田化学常用原料AMPS的高效液相色谱 (紫外检测器) 的方法。色谱柱为ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相采用0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节pH为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0mL﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。采用该方法可以应用该法对不同来源AMPS单体原料进行了成功分析检测, 分析过程简便、结果可靠, 可用于固井水泥外加剂合成原料的纯度分析。

关键词：液相色谱,纯度分析,油田化学品原料

参考文献

[1]刘约权.现代仪器分析.2版[M].高等教育出版社, 2006, 5.

[2]于世林.高效液相色谱方法及应用.2版[M].北京:化学工业出版社, 2005, 6.

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[5]谢音, 屈小英, 主编.食品分析[M].科学技术文献出版社.

[6]杨松成.第十届全国有机质谱学学术会议[Z].1999.

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[9]李海生, 白海娇.高效液相色谱应用中的若干问题与方法[J].天津药学, 2006 (4) :6.

[10]王俊德, 商振华.高效液相色谱法[M].北京:中国石化出版社, 1992:133.

高校液相色谱法 第10篇

目前有关性激素类药物残留的检测方法主要有气相色谱-串联质谱法 (GC-MS) [5]、高效液相色谱法 (HPLC) [6]、液相色谱-串联质谱法 (LC-MS) [7,8,9]等。气相色谱-串联质谱法需衍生化, 操作繁琐、灵敏度不高;高效液相色谱法易受杂质干扰产生假阳性, 且流动相消耗量大, ;液相色谱-串联质谱法具高效分离和准确定性的特性, 快速且前处理简单, 是性激素多组分残留同时检测的首要方法。凝胶渗透色谱法 (GPC) 作为一种通用的样品前处理净化技术已广泛应用于药物多残留分析, 但应用于性激素类药物的残留分析较少。本实验利用凝胶渗透色谱技术对样品进行前处理净化, 并采用液相色谱-串联质谱法对多种性激素进行同时检测, 建立一种简单、高效、灵敏测定水产品中性激素残留量的分析方法。

1 试验部分

1.1 材料与试剂

甲酸、乙酸铵均为色谱纯 (sigma公司) ;乙腈、环己烷、乙酸乙酯为农残级 (德国Merck公司) ;实验用水为Milli-Q高纯水;性激素标准品:甲基睾酮 (CAS:58-18-4) 、醋酸甲孕酮 (CAS:71-58-9) 及醋酸炔诺酮 (CAS:51-98-9) , 纯度均≥98%, 均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司;其他试剂均为分析纯。

标准储备液:准确称取5.00 mg甲基睾酮、醋酸炔诺酮、醋酸甲孕酮标准品, 用乙腈溶解定容于50 m L容量瓶, 4℃避光保存, 保存期限为6个月。使用时逐级稀释至100 ng/m L。

1.2仪器与设备

ACQUITY超高效液相色谱-串联质谱仪 (配电喷雾离子源, Quattro Premier XE美国Waters公司) ;T18匀浆机 (德国IKA公司) ;MS2漩涡混合器 (德国IKA公司) ;N-EVAP112氮气吹干仪 (美国Organomatio公司) ;Centrifuge5810高速离心机 (德国Eppendorf公司) ;GPC ULTRA全自动凝胶净化在线浓缩系统 (德国LClech公司) 。

1.3 实验条件

1.3.1 样品前处理

准确称取2.00 g均质样品于50 m L离心管中, 加入3.00 g无水硫酸钠和10 m L乙酸乙酯, 涡旋振荡1 min后, 5 000 r/min离心4 min, 转移上清液至另一50 m L离心管, 残渣再用10 m L乙酸乙酯重复提取一次, 合并后的上清液40℃氮气吹干。向残留物中加入10 m L环己烷-乙酸乙酯混合溶液 (VA∶VB=1∶1) , 涡旋振荡1 min, 过GPC净化, 收集15~20 min时的馏分, 40℃氮气吹干。残渣用1 m L流动相溶解, 5 000 r/min离心5 min, 上清液经0.22μm滤膜过滤后, 供液质分析。

1.3.2 GPC条件

柱子类型:GPC 10010 (500 mm×25 mm) ;填料:50.0 g Bio-Beads SX-3 (中性、多孔的聚苯乙烯-二乙烯基苯微球体;排斥极限:相对分子质量400~14 000) , 柱床高32 cm;流动相:环己烷-乙酸乙酯 (1∶1) ;流速:5.0 m L/min;样品定量环:5.0 m L, 浓缩至2 m L;预淋洗体积:85 m L;洗脱体积:50 m L;清洗体积:35 m L。

1.3.3 色谱条件

色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18柱 (2.1 mm×50 mm, 1.7μm) ;柱温40℃;样品室温度10℃;进样体积10μL;流速0.2 m L/min;流动相A为含有体积分数0.1%甲酸水溶液, B为乙腈, 梯度洗脱:0~3.0 min, 60%~20%A;3.0~4.5 min, 20%~60%A;4.5~5.0 min, 60%A。

1.3.4 质谱条件

离子源:电喷雾离子源, 正离子扫描 (ESI+) ;检测方式:多重反应监测 (MRM) ;毛细管电压:3.5 k V;离子源温度:110℃;脱溶剂气温度:380℃;脱溶剂气流量:650 L/h;锥孔气流量:50 L/h;锥孔电压和碰撞能量等质谱多反应监测实验条件如表1所示。

*定量离子 (Quantitative ion) 。

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的选择

甲基睾酮、醋酸甲孕酮及醋酸炔诺酮均属于脂溶性物质, 主要富集在样品的皮脂层, 而肌肉中含量相对较少。试验分别选用乙酸乙酯、乙腈、甲醇3种溶剂作为提取剂, 比较3种溶剂对分析物的提取效率。甲醇易溶于水沸点较高, 且影响净化不易蒸干;而乙腈的提取效率偏低, 不适合作为分析物的提取剂;乙酸乙酯提取效率高, 且易于蒸干, 满足分析物提取需要。因此, 实验选择乙酸乙酯作为提取试剂。

2.2 凝胶渗透色谱净化

水产品中化学物残留分析的主要干扰物包括色素、蛋白质、脂肪等。凝胶渗透色谱是基于分子大小进行分离的技术, 甲基睾酮、醋酸甲孕酮、醋酸炔诺酮的相对分子质量分别为303.1、387.2、341.1, 因此3种分析物在GPC柱上能与干扰物达到有效的分离, 达到较好的净化效果。试验根据3种分析物的结构和性质优化GPC条件, 结果表明3种分析物的流出时间为15~20 min, 杂质流出时间为6~12 min。

2.3 色谱条件优化

根据分析物的化学性质, 本实验采用亚乙基桥杂化颗粒 (BEH) 的C18色谱柱, 并在相同仪器条件下比较不同有机相。结果表明, 有机相为乙腈时硝基呋喃类药物的灵敏度比有机相为甲醇时高, 因此选择乙腈作为有机相。当使用0.1%甲酸水溶液作为水相时, 能得到更好的色谱分离, 且3种分析物的响应值均较高, 且峰形尖锐对称, 如图1所示。因此本实验最终选择乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相。

2.4 线性范围和定量限

用3种性激素标准使用液配制质量浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/L的标准溶液, 进样后制作标准曲线, 3种性激素的线性方程及相关系数如表2所示。结果表明, 3种性激素在0.5~20.0μg/L内线性良好, 方法的检出限理论上为被测物质丰度较弱子离子的信号/噪声比 (RSN) 不小于3, 将加标质量浓度逐级稀释添加于空白样品中测定信噪比, 最终确定该方法的3种性激素检出限均为0.1μg/kg, 定量限均为0.3μg/kg。

2.5 回收率及精密度

准确称取2.00 g阴性样品, 添加水平为0.5、2.0、10.0μg/kg的标准溶液, 每个添加水平平行测定6次, 计算其回收率和精密度, 见表3。结果表明, 方法在0.5~10.0μg/kg添加水平之间的回收率为88.6%~96.4%, 相对标准偏差为1.84%~6.24%。完全符合水产品中激素残留的检测要求。

2.6 实际样品检测

利用本方法对某地的8家养殖塘, 共计16个养殖水产品进行检测。结果有1个样品甲基睾酮检出, 浓度为1.28μg/kg, 表明此样品的养殖塘曾投放过少量激素类药物。因此, 有必要在监测控制激素类药物, 为水产品质量安全提供重要保障。

3 结论

本实验建立了水产品中性激素的凝胶渗透色谱净化-超高效液相色谱-串联质谱分析方法, 通过GPC能有效净化水产样品, 降低基质干扰, 提高了方法的检测灵敏度和精确度, 满足日常检测工作需要。

参考文献

高校液相色谱法 第11篇

关键词：溴酸盐；高效液相色谱法；试验；柱前衍生；水

中图分类号：S123 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2016）05-0010-03

含Br-的山泉水或矿泉水经过氧化剂特别是O3消毒处理后，会产生对身体有害的溴酸盐。溴酸盐能够致癌、致畸及致DNA损伤，BrO3-被国际癌症研究机构定为2B级致癌物。当前测定水体中BrO3-的方法主要有IC，GC，GC-MS，HPLC，UV等。用IC法测定BrO3-时，样品的前处理较为繁琐、操作较为费时、且容易受到Cl-和CO32-等阴离子干扰，离子色谱仪和离子交换色谱柱价格较为昂贵，使用寿命较短。GC-MS的检测限较低、灵敏度较高，但仪器价格较为昂贵、日常维护较为繁琐，不能应用于所有检测机构。GC采用衍生方法将BrO3-转化成为溴代有机物，通过测定溴代有机物浓度来确定BrO3-含量，此法抗干扰性很强，但GC衍生化反应操作非常难控制，GC或者GC-MS需要有机物萃取才能测定，工作较为繁琐，且试剂毒性大。为此，采用一种在色谱柱前衍生化的方法，随后用HPLC测定矿泉水中BrO3-的含量，并将其扩展至其他水样测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent1100高效液相色谱仪（配有VWD紫外光检测器）：美国安捷伦科技有限公司；重蒸水系统。

水中溴酸根溶液标准物质（标准值1 000 mg/L），使用前配成100 μg/L的标准溶液储备液；2 mol/L H2SO4溶液100 mL；15.0 g/L KBr溶液100 mL；0.5 mol/L苯酚溶液100 mL。试剂全部是分析纯及色谱纯，水均为一级水。

1.2 样品处理过程

准确量取5 mL BrO3-标准溶液，置于具塞的10 mL比色管中，依次准确加入1.0 mL KBr溶液、0.5 mL H2SO4溶液和0.1 mL苯酚溶液，用一级水定容至，混匀后置于75 ℃恒温水浴1 h，取出后迅速冷却至常温，加纯水补充减少的溶液体积，过0.45 μm滤膜，进样分析，同时做空白试验。

1.3 测定方法

采用Thermo BDS HYPERSIL C18柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）；柱温为室温；流动相水：甲醇（45‥55）；流速为1 mL/min；检测器波长为230 nm；进样量为10 μL。试验结果表明：2—溴苯酚和4—溴苯酚的保留时间分别为7.900 min和9.997 min，如图1所示。

2 结果与分析

2.1 苯酚衍生化原理

在强酸性条件下，BrO3-可与过量Br-发生反应，其生成物在强酸性条件下与苯酚发生取代反应，生成2-溴苯酚以及4-溴苯酚，反应原理为：

反应所生成的2-溴苯酚及4-溴苯酚浓度与BrO3-浓度有一定的数量关系。通过对比2种生成物的峰面积及BrO3-浓度关系确定，采用4-溴苯酚的峰面积进行定量较为准确。

2.2 衍生化温度

伴随着衍生化温度的升高，目标产物的峰面积也在不断增加；当反应温度从75 ℃增加到95 ℃时，峰面积趋于不变。考虑成本原因，确定75 ℃为最佳衍生化温度。

2.3 硫酸浓度对衍生化反应影响

研究不同体积H2SO4溶液对衍生的影，结果表明：随着溶液酸度增加，4-溴苯酚的峰面积不断增加，当H2SO4溶液的体积大于500 μL时，即使继续增加，4-溴苯酚的峰面积基本不变，如图2所示。据此推断BrO3-和Br-只能在强酸性条件下反应，即苯酚发生一溴取代反应，否则将会生成三溴苯酚白色沉淀。确定应加入0.5 mL硫酸溶液。

2.4 衍生化剂用量

选取苯酚为衍生化反应的试剂，其加入量势必影响目标物质测定。增加苯酚用量，可以促进反应进行。在BrO3-浓度恒定的情况下适当增加苯酚浓度，4-溴苯酚的峰面积也不断增加；当苯酚加入体积多于0.1 mL后，苯酚的量继续增加，峰面积基本不变。因此确定苯酚溶液的最佳加入量为0.1 mL。

2.5 溴离子引入量

在反应过程中，增加溴离子浓度能促进反应向右移动，而且伴随着溴离子浓度增加，4-溴苯酚的峰面积也增加。但是，在加入KBr溶液体积多于1.0 mL后，峰面积基本无变化。确定KBr溶液（15 g/L）的最佳加入量是1.0 mL。

2.6 反应时间及生成物稳定性

在同浓度同温度情况下采取反应时间0.2，0.5，1.0，1.5 h进行对比试验，发现随着反应时间增加，4-溴苯酚的峰面积也在增加；当反应进行1.0 h后，峰面积基本保持不变，说明衍生反应已经基本完成。因此选定1.0 h作为最佳反应时长。

样品溶液在75 ℃下反应1.0 h后，在室温下每隔3.0 h进样分析1次，观察其峰面积大小。发现样品在12.0 h内稳定性好。因此可不用考虑测定时间间隔太久引起的偏差，样品衍生完成后能放置较长时间。

2.7 线性关系及检出限

分别量取1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，8.00 mL BrO3-标准溶液（100 μg/L），置于10 mL具塞比色管中，用4-溴苯酚峰面积对BrO3-浓度做标准曲线，进行线性回归，得回归方程为：y=1.063 6x+1.729 2（r=0.999 8），计算方法检出限0.001 mg/L，且具有很好的线性关系。检出限小于矿泉水及生活引用水的限量值0.01 mg/L，符合溴酸盐含量检测要求。

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2.8 加标回收试验

选用实验室制备的重蒸水，实验室自来水，超市里销售的纯净水、矿物质水、矿泉水作为本底，分别加入了不同浓度的BrO3-标准溶液（10，20，40 μg/L），按上述方法进行测定，结果如表1所示。方法加标回收率在98%～105%之间。

2.9 精密度试验

低浓度范围内配制10，15，20 μg/L 3种不同浓度的BrO3-标准溶液，平行测定8次，结果如表2所示。BrO3-的相对标准偏差（RSD）都小于2%，可达到分析要求，重现性较好。

2.10 样品测定

选取若干天然水源地水及超市里销售的饮用纯净水、矿物质水、矿泉水，经0.45 μm滤膜过滤检测BrO3-含量，结果如表3所示。

3 结论

采用柱前衍生化法进行高效液相色谱分析，能够准确测定矿泉水、纯净水及天然水源地水体中的BrO3-含量，且结果较为可靠，具有用量较少、灵敏度高、操作简单方便、重复性及线性关系好等优点，可以满足现有检测需求。

参考文献

[1] 林立，陈玉红，王海波.离子色谱-电感耦合等离子体质谱联用测定饮料中的溴形态[J].食品科学，2010，31（12） ：226-228.

[2] 刘贞，崔艳，胡志军，等，柱前衍生化高效液相色谱法（HPLC）测定水中微量溴酸盐含量[J].中国无机分析化学，2012，2（1）：27-30.

Abstract： In this paper， by the method of chromatographic colum and pre-column derivatization， HPLC-UV was used to determined the content of bromate in water. The results of derivative optimization showed that： The range of recovery rate is98% to 105% by this method， and the RSD conformed to the requirements of the test； Detection limit was 0.001 mg/L， of good linear relation， which could meet the current standard testing requirements and be worth popularizing.

Key words： bromate； HPLC-UV； experiment； precolumn derivatization； water

高校液相色谱法 第12篇

甲醛作为合成助剂、复鞣剂、醛鞣剂、甲醛固色剂等的原料,广泛应用于皮革生产中。由于甲醛对人体有很强的毒害作用,并且在人们崇尚生态皮革的潮流下,甲醛含量问题已引起很多国家的重视,并颁布法律法规限制皮革中的甲醛含量[1]。

微量甲醛的检测大多采用比色法,即通过显色反应后,用紫外-可见分光光度计进行测定[2~4]。但是一些皮革样品的提取液颜色较深,如果提取液颜色处在比色法检测波长范围时,就会对测量结果产生严重干扰。近几年出现了一种新型液相色谱技术———超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC),较传统液相色谱增强了选择性和分析通量,提高了灵敏度,并且能大幅缩短分析时间[5,6]。

本文建立了测定皮革中甲醛含量的超高效液相色谱方法。方法简便、准确、快捷,并且能消除样品基质干扰,较GB/T19941-2005[2]中规定的传统液相色谱方法,分析时间明显缩短,适用于皮革中甲醛含量的测定。

2 实验原理

皮革样品经十二烷基磺酸钠溶液萃取处理后,以2,4-二硝基苯肼为衍生化试剂,生成2,4-二硝基苯腙,用超高效液相色谱测定,对照标准工作曲线计算样品中的甲醛含量。

3 实验部分

3.1 仪器与试剂

1200 SL超高效液相色谱仪,配二元泵、自动进样器、二极管阵列检测器(安捷伦公司);恒温水浴振荡器(HZS-HA,哈尔滨市东明医疗仪器厂);皮革切粒机(莱州市电子仪器有限公司)。

甲醛标准品(11.2 mg/m L,中国计量科学研究院);2,4-二硝基苯肼(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);十二烷基磺酸钠(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);柠檬酸(分析纯,北京化工厂);乙腈(色谱纯,DIMA Technology Inc.);其它试剂均为分析纯;实验用水均为超纯水。

3.2 溶液配制

十二烷基磺酸钠溶液(0.1%):称取1.0 g十二烷基磺酸钠后,溶于1000 m L水中;

衍生化试液:称取0.05 g 2,4-二硝基苯肼,用适量内含0.5%(体积分数)醋酸的乙腈溶解后置于100 m L棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。此溶液不稳定,应现用现配;

甲醛标准储备液为11.2mg/m L,标准工作溶液用水稀释至所需浓度。

3.3 分析条件

色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB C18分析柱(4.6×50mm,1.8μm);流速1.0 m L/min;进样量3μL柱温30℃;流动相:65%乙腈和35%的水;DAD检测波长355 nm。

3.4 样品处理

精确称取皮革试样2 g,用皮革切粒机切碎后,放入100 m L锥形瓶中,加入50 m L预热到40℃的十二烷基磺酸钠溶液,盖紧塞子,在40℃的水浴中振荡60min,震荡完毕后冷却至室温。准确移取1.0 m L试样溶液和2.0 m L衍生化试液到具塞试管中,混合均匀后在60℃的水浴中反应30min。此溶液冷却至室温后用0.45μm的滤膜过滤,供UPLC/DAD分析。

4 结果与讨论

4.1 定性分析

分别取试样溶液和标准工作溶液衍生化之后进行超高效液相色谱检测,通过比较试样与标准物质在规定检测波长下色谱峰(见图1)的保留时间以及紫外可见光谱进行定性。甲醛衍生物2,4-二硝基苯腙的紫外光谱图见图2,在350~360 nm处有较强的吸收峰,因此,本方法选择355 nm为检测波长。

4.2 定量分析

4.2.1 线性范围及检出限

在实验的最佳条件下,按照实验方法,测定甲醛浓度与2,4-二硝基苯腙色谱峰面积的关系曲线,如图3所示,甲醛质量浓度在11.2~1120 ng/m L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,其线性回归方程为A=36.58 c(甲醛)+6.48,线性相关系数为0.99989,其检出限以基线噪声的3倍计算,为5.6 ng/m L。

4.2.2 精密度和准确度

使用液相色谱对甲醛进行检测,可以有效地排除杂质干扰,通过色谱峰保留时间和紫外光谱的双重比对,能避免假阳性的可能。实验中,我们选取皮革的阳性样品,按照最优方法进行11次平行实验,相对标准偏差(RSD)为0.93%;使用空白皮革样品进行回收率测定,样品经处理后,在提取液中分别加入0.056、0.56、1.12、5.6μg/m L的甲醛标准溶液,然后加入衍生化试剂,反应后进行超高效液相色谱检测,回收率结果见表1。

5 结论

本文针对GB/T 19941-2005进行了方法改进,应用超高效液相色谱仪分离检测了皮革中甲醛的含量,取得了很好的分离效果,方法简便、准确、快捷,并且明显缩短了分析时间,适用于皮革中甲醛含量的检测。

参考文献

[1]刘显奎,韦娜.皮革中甲醛含量测定问题综述[J].中国皮革,2004,33(1):39-41.

[2]中国轻工业联合会.GB/T19941-2005皮革和毛皮化学试验甲醛含量的测定[S].北京:中国标准出版社,2006.

[3]丁友超,吴浩,田姝,等.高效液相色谱法测定纺织品和皮革中的甲醛[J].印染助剂,2007,24(10):44-46.

[4]The International Orgnaization for Standardization.ISO/TS17226:2003(E).Leather-Chemical tests-Determination of formaldehyde contents[S].Switzerland,2003.

[5]杨义芳.超高效/高分离快速/超快速液相色谱在中药及其制剂研究中的应用[J].中草药,2008,8(39):1259-1263.