快速冰冻切片范文

快速冰冻切片范文（精选9篇）

快速冰冻切片 第1篇

冰冻切片延迟诊断及误诊的原因主要是取材不当, 切片质量不良, 对冰冻切片的特征认识不足及对少数病变解释错误。提高冰冻切片诊断的准确率是病理医师永远的课题之一, 其主要经验和体会有以下几方面。

1 加强与临床的沟通, 增进相互理解

冰冻切片检查要提前一天通知病理科, 临床医师要填写详细的病理申请单, 病理医师则要根据患者的病情尽可能深入临床科室, 了解病史和临床需求, 做到临床表现、影像学检验、病理检查三结合。临床医师在冰冻切片快速诊断中的作用不可忽视, 他们的手术所见相当于病理医师的大体观察, 这也是《手术中的病理诊断》一书的主编陈乐真医师所强调的[1], 要求临床医师认真填写术中所见, 如果术中决定做冰冻切片, 临床医师要主动与病理医师电话联系, 以使后者掌握第一手临床资料, 做到心中有数, 临阵不乱, 并且后者要与临床医师沟通, 告知临床医师冰冻组织的送检要求, 如骨、脂肪及钙化组织因切片困难, 不宜做冰冻切片;淋巴结的冰冻切片检查要了解临床意图, 可疑淋巴瘤不能靠冰冻切片来诊断, 因对淋巴瘤的诊断要有优质的石蜡切片作保证, 淋巴结的冰冻切片主要用于确定有无肿瘤转移等。虽不能忽视临床所见的提示, 却又不能盲从, 我们曾遇到一例病例:高龄妇女, 乳腺包块, 无论临床表现还是彩超检查、钼靶拍片均提示包块呈恶性, 结果经冰冻切片诊断为乳腺导管内乳头状瘤。由于冰冻切片诊断有其局限性, 无论病理医师多么精明和富有经验, 总会有少数冰冻切片检查不能确诊疾病, 对此临床医师要给予理解。当冰冻切片诊断与术中所见不一致时, 应坦诚地反馈给临床医师, 必要时重取组织。

2 提高取材质量

取材不当或疏漏会导致误诊, 可能由外科医师术中取材部位不准确或病理医师取材疏漏所致。因此, 外科医师要在病变处准确取材, 避开出血、坏死及钙化区;组织挤压或电灼等也可致细胞变形, 影响诊断, 因此所取标本不要擅自剖开, 以便病理医师全面观察病变及包膜情况;送检组织不能太小, 一是组织太小对病变的观察不全面, 容易造成诊断困难或误诊, 二是若组织太小经冰冻切片后就没有足够的组织进行石蜡切片检查了 (如免疫组化及激素受体检查等) 。病理医师进行标本检查要认真、仔细, 标本较大或数量较多时, 要逐个沿最大面切开, 多做剖面, 如果检查不细或经验不足, 就有可能漏掉病变的主体。如对甲状腺微小癌若取材不细则很容易漏诊, 滤泡癌的包膜和 (或) 血管侵犯、卵巢交界性肿瘤的诊断等均需要充分的取材、全面的观察。

3 提高冰冻切片质量

优质的冰冻切片是正确诊断的前提。冰冻组织要用干纱布包裹, 不能沾水或选用含水分的粘附剂固定, 若组织水分过多, 冰冻时就会产生冰晶, 在切片中形成空白区, 细胞内空泡也会增多, 最终影响对组织形态的观察, 特别是含水分多的脑组织, 如果在大量冰晶形成, 组织内细胞结构则难以辨识, 无法诊断, 极易造成误诊, 故要选用不含水分的OCT粘附剂, 不能用浆糊、胶水等替代。冰冻切片机温度要根据不同的组织进行调整, 如甲状腺、脑肿瘤等质地较脆的组织, 温度为-20℃~-22℃即可, 温度过低易产生切片皱折, 但对含有脂肪及质地较韧的组织温度应在-25℃左右。冰冻切片可略厚于石蜡切片, 一般为5~8μm, 若切片过厚或有折叠, 细胞就会显示密集丰富的假象, 易将良性疾病误诊为恶性疾病, 如软组织、骨及脑肿瘤等。切片固定时间为30~50秒, 固定时间过短, 组织水肿, 细胞体积大, 易造成判断错误;固定时间太长, 细胞核固缩, 核染色质结构不清晰, 同样影响诊断。冰冻切片质量不佳时, 易将恶性病变漏掉。同时病理医师和技术人员的密切配合也非常重要。华西医科大学张尚福[4]等在相关文章中, 特别提到可避免和不可避免的误诊问题, 均涉及制片质量, 包括组织小而碎导致制片难度大和组织退变严重导致制片质量差两种情况。根据笔者的体会, 技术人员水平、设备条件、切片染色全过程正规严格的质量控制等是制片的关键。总之, 对于病理医师来说, 没有好的切片质量, 要做出正确的冰冻切片诊断是十分困难的, 有时甚至是不可能的。要根据本单位的具体情况, 摸索经验, 做到切片平整, 染色适中, 结构清晰。在工作中, 我们将每块组织在不同切面均切2张冰冻切片, 这样既可对比观察、判断, 还可防止漏切病变。

4 提高冰冻切片诊断的准确性[5]

由于印片固定及时, 没有冰冻切片所引起的细胞形态改变等情况, 且细胞核染色质结构清晰, 有时其细胞学的特征比冰冻切片更为明显, 因此印片细胞学诊断是冰冻切片诊断的重要助手, 而不是竞争对手, 它具有无可置疑的使用价值, 两者可互为补充, 对比观察判断。我们在应用中体会到, 切面较干燥的实性肿瘤印片细胞容易脱落, 对诊断帮助大, 如乳腺、肺肿瘤等;但囊性及含水分较多的病变印片细胞则较少, 对诊断帮助相对较小, 如甲状腺、卵巢囊性病变等。印片细胞学检查对良、恶性肿瘤的鉴别, 特别是在冰冻切片质量欠佳时起至关重要的作用。但要注意非典型增生和交界性病变的印片细胞也有异型改变, 在内分泌肿瘤中不能以细胞异型性判断肿瘤的良、恶性, 而要结合冰冻切片观察其有无周围组织浸润和转移。

5 提高对冰冻切片中常见的易误诊病变的辨识力

5.1 甲状腺病变

诊断中最主要的困难存在于结节状增生中的乳头状增生、滤泡性腺瘤和增生结节中的微小癌、包膜内滤泡型乳头状癌和包膜内滤泡癌。防止微小癌的漏诊主要靠仔细的大体取材;乳头状癌的乳头结构在冰冻切片中不明显, 乳头可呈多种形态, 如树枝状、花瓣状、车轨状、脑回状和绒毛状等, 毛玻璃核是乳头状癌的主要诊断特征, 在冰冻切片中可能并不出现[6], 但仔细观察往往可见核沟、核重叠、核内假包涵体等特征。甲状腺良性病变中几乎不见沙砾体结构, 约有近半数的乳头状癌可见沙砾体结构, 因此沙砾体结构的出现支持乳头状癌的诊断, 但要注意沙砾体结构要与钙化和浓缩胶的胶质相鉴别。滤泡型乳头状癌缺乏乳头结构, 主要依据细胞核的特征性改变来确诊。我们曾遇到1例包膜内滤泡型乳头状癌病例, 冰冻切片检查虽然未见毛玻璃状核, 但核沟、核重叠均可见, 因病变微小, 诊断条件尚不足, 故未直接诊断甲状腺癌, 而诊断为甲状腺滤泡性肿瘤, 滤泡拉长变形, 间质纤维化, 疑为恶性肿瘤, 尚需石蜡取材确诊, 经石蜡切片检查发现已有包膜侵犯。滤泡癌的血管和 (或) 包膜侵犯在冰冻切片中不易被发现, 因此冰冻切片诊断一是要尽量多取材, 寻找诊断依据, 二是对滤泡特别密集、细胞有异型者诊断滤泡癌依据不足时采取延迟诊断。

5.2 乳腺病变

乳腺疾病冰冻切片诊断的难点在于一些交界性病变, 如乳腺增生病和管内癌的鉴别, 硬化性腺病和硬癌的鉴别, 乳头状增生病变的评价等。乳腺增生病中增生细胞呈簇状、丘状突向管腔, 实性巢间有不规则裂隙, 常有泡沫细胞;管内癌胞浆均质透明, 胞界清楚, 裂隙规则呈筛孔状, 有坏死;硬化性腺病纤维组织增生, 末梢导管受压变形, 形成假浸润现象, 容易与硬癌和小管癌混淆, 在低倍镜下其呈小叶状或类圆形斑块状分布, 不浸润脂肪, 受压小管保持双层结构, 上皮无异型, 小管外有厚层胶原纤维环绕, 但在冰冻切片上肌上皮细胞显示不好, 印片细胞学检查对两者的鉴别很有帮助。导管内乳头状瘤伴非典型增生时, 冰冻切片诊断非常困难, 甚至石蜡切片诊断也很困难, 因常有间质假浸润现象, 故易误诊为浸润癌, 因而我们在诊断时应十分慎重。延迟诊断病例大多为交界性病变, 此类病变在冰冻切片中上皮高度增生, 且与石蜡切片比较, 其细胞大, 边界不清, 腺腔狭小, 并且有一些人为的假象出现, 使在冰冻切片上判断不典型增生和癌变有时很困难。普通性导管增生的特征性图像为有大小及形态不规则的二级管腔, 常沿边缘分布, 中央部细胞呈流水状排列;不典型导管增生的特征性图像为均匀分布的单形性细胞增生, 通常细胞核呈卵圆形至圆形, 细胞排列呈微乳头状、桥状、筛状或实性;而恶性上皮增生 (原位癌) 为单一上皮呈微乳头状、筛状、实性增生, 细胞有异型性, 可见细胞坏死[7]。因此在实际工作中, 细胞既无异型又无坏死或切片质量差等原因都会给诊断带来困难, 这时需延迟诊断。

5.3 卵巢肿瘤

卵巢肿瘤诊断的主要困难在于对交界性肿瘤的诊断, 成熟性畸胎瘤与未成熟性畸胎瘤的鉴别。有取材局限原因, 但也有对交界性肿瘤细胞层数、核分裂像的认识不统一等原因。国外有学者提议, 冰冻切片诊断将卵巢交界性肿瘤分为3种情况加以说明:上皮细胞层数≤3层, 轻度核异型, 核分裂活跃, 但无肯定间质浸润的诊断为“交界性肿瘤”;处于交界性和良性之间的诊断为“交界性肿瘤待排除”;交界性与癌之间的诊断为“起码”或“至少”交界性肿瘤, 我们认为这种分法值得借鉴。

5.4 几种易误诊细胞

(1) 炎症细胞与肿瘤细胞:浆细胞在冰冻切片中特征明显, 胞核较大, 可聚集成行或呈腺样排列, 容易被误诊为腺癌;淋巴细胞增生与淋巴瘤在冰冻切片上难以鉴别, 需待石蜡切片诊断。 (2) 肺泡上皮细胞的变异:在炎性疾病及放疗、化疗的患者中, 肺泡上皮增生肥大, 形态异型, 容易被误诊为肺泡细胞癌;反之, 有些肺泡细胞癌容易被误诊为炎性假瘤等良性肺泡上皮增生。其鉴别点是炎性假瘤结构复杂多样, 有明显的炎症背景, 而肺泡细胞癌病变单一, 癌细胞可见核仁和核内包涵体。 (3) 印戒细胞:细胞体积小, 胞质透亮, 核偏位, 很难辨认, 容易被误诊为炎症细胞, 相反在一些良性病变中, 细胞内水肿, 胞质内出现空泡, 亦可误认为印戒细胞。诊断时要结合组织学结构加以分析判断。 (4) 透明细胞癌:癌细胞有时不显示透明状反而呈现嗜酸性胞浆, 制片不好时有间质的冰晶又造成许多人为的空泡, 容易被误诊为脂肪组织肿瘤或其他病变。

6 提高病理医师的诊断能力

病理医师在冰冻切片的诊断中负有主要责任, 这一点毫无疑义。病理医师本身还必须不断总结经验, 加强学习, 另外也要考虑到客观的困难性, 切忌主观臆断。病理医师之间的看法不尽相同, 这是正常现象。即使都是经验丰富者, 也难以避免看法不一致, 如美国Gephardt报道多个单位对同批病例的诊断, 符合率为98.58%, 即还有1.42%的单位有明显的意见不一致, 其中又有67.8%为假阴性诊断[8], 这些都体现了诊断的困难性。签发冰冻切片诊断报告的病理医师, 要有扎实的石蜡切片诊断基础, 并经过一定的冰冻切片诊断训练, 熟悉冰冻切片的特点和人为的假象, 能准确辨认冰冻切片的基本病变, 在实践中不断总结经验, 提高诊断能力。镜检应先用低倍镜观察组织结构有无包膜及浸润, 然后用中、高倍镜观察细胞形态改变, 切忌一开始就在高倍镜下紧盯病变的局部区域不放, 片面以核分裂像作为诊断的依据, 核分裂像在很多良性及增生性病变中也很常见。冰冻切片诊断既要结合临床和大体检查, 又要避免先入为主, 以病变的客观所见为依据, 全面分析, 综合判断, 阅片时要多考虑几种疾病的可能, 逐个排除, 最后得出最恰当的诊断。术中诊断的关键是要确定良性或恶性病变, 类型难以确定的肿瘤, 可报告为良性、恶性肿瘤, 类型待定。诊断时要严格把握恶性肿瘤的诊断标准, 严防假阳性诊断, 因为假阳性诊断会造成过度手术, 引起医疗纠纷或致残的严重后果。切片质量不良, 病变复杂, 诊断疑点较多或良、恶性病变难以确定时, 采取延迟诊断, 实事求是地向临床医师描述病变所见, 待石蜡切片确诊, 并将术后石蜡切片诊断结果及时通知临床医师, 以便及时处理。即使术后诊断为恶性肿瘤, 在几天内进行二次手术对预后也无太大影响。当冰冻切片诊断与临床诊断不符或病理医师之间对病变良、恶性有分歧时, 要分析原因, 必要时重新制片, 没有十足的把握不要勉强诊断。

参考文献

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[7]龚西騟.WHO乳腺肿瘤组织学分类 (2003) 简介[J].临床与实验病理学杂志, 2004, 20 (1) :5.

快速冰冻切片 第2篇

【摘要】 目的 探讨卵巢肿瘤术中快速冰冻切片的诊断价值，总结经验。方法 本次收集85例卵巢肿瘤患者作为研究对象，均为本院2009年3月～2013年9月收治，术中进行快速冰冻切片病理诊断，并与术后常规石蜡切片进行对照。结果 本组85例患者快速冰冻切片与术后石蜡切片对照，总确诊率为95.3%（81/85）。其中良性肿瘤确诊率为100%（58/58），交界性肿瘤确诊率为80%（8/10），恶性肿瘤确诊率为88%（15/17）。误诊4例，误诊率为4.7%。结论 病理医生与临床医生在术前及术中密切沟通，从实验室检查结果、病史、手术观察等多方面分析，最终做出诊断，为临床医师提供卵巢肿瘤性质，有助于临床医师选择适宜的手术方式，应用快速冰冻切片病理诊断的方法是确定手术方式和切除范围的最佳手段。

【关键词】 卵巢肿瘤；快速冰冻切片；病理诊断；准确性

卵巢肿瘤种类繁多，可分为良性、恶性、交界性肿瘤，在妇科常见疾病类型占较高病发率，术前不易确诊，妇产科医生在手术中如仅凭肉眼观察，难以确定肿瘤性质。因肿瘤性质不同，在治疗方案的选择上也存在较大差异。所以手术过程中确定肿瘤性质及制定合理的手术治疗方案所进行的行快速冰冻切片病理诊断是完全必要的，更是对生育机能是否保留对侧卵巢及手术范围的选择具有决定性作用[1]。作者就本院病理科2009年3月～2013年9月卵巢病变术中快速冰冻切片病理诊断进行回顾性分析，旨在提高卵巢肿瘤冰冻切片病理诊断的准确性。资料与方法

1.1 一般资料 本次共选择研究对象85例，年龄16～77岁，平均年龄（38.4±3.1）岁。均与WHO卵巢肿瘤组织学制定的相关分类标准符合，其中良性58例，交界性10例，恶性17例。术后均行常规石蜡切片病理诊断，与术中快速冰冻切片病理诊断对照。

1.2 方法 标本均为术中送检新鲜组织，由经验丰富的病理医师取材，术中仔细观察肿物表面并逐层切开肿物，选代表性的部位取材，肿块病变直径2.5 cm的肿块根据肿瘤情况酌取2～3块，置标本于涂有OCT包埋剂的冻头上，恒温冷冻切片机内冰冻切片，HE染色、光镜诊断。20 min发出冰冻报告，报告分为恶性肿瘤、良性肿瘤、交界性肿瘤及延迟诊断。冰冻报告发出后，将原冰冻剩余组织做石蜡切片，复习原冰冻切片及石蜡切片，将诊断分为三类：①确诊：指冰冻切片诊断与石蜡切片诊断完全相同或良恶性原则一致。②描述性诊断（延迟诊断）：指冰冻切片不能明确诊断，需待石蜡切片最后诊断。③误诊：肿瘤良恶性诊断错误。分假阳性和假阴性（假阳性指良性误诊为恶性，假阴性指恶性误诊为良性）。结果

本组85例患者快速冰冻切片与术后石蜡切片诊断结果对照，总确诊率为95.3%（81/85）。其中良性肿瘤确诊率为100%（58/58）；交界性肿瘤确诊率为80%（8/10），恶性肿瘤确诊率为88%（15/17）。误诊4例，误诊率4.7%，85例冰冻切片确诊81例，诊断符合率95.3%，见表1。2例交界性肿瘤的误诊原因，1例由于为取材不当，另1例由于制片不良，加上读片经验不足，未考虑由于制片不良导致的假象及干扰因素；而2例恶性肿瘤的误诊原因，1例由于取材的局限性，送检标本的体积大，取材不够准确及不够全面，局部癌变的区域未被发现；另1例为送检组织过少，加上患者年龄年轻，诊断时过于保守。讨论

从临床治疗的角度，术中冰冻切片病理诊断解决了手术过程中难以诊断其疾病良、恶性的问题。近年来，经济体制改革的迅猛发展显著带动了医疗科技水平，公众对诊疗服务要求不断提高，妇科卵巢肿瘤患者在临床具有一定特殊性，及时明确诊断，并制定有效治疗方案是保障预后，提高患者生存质量，维护家庭和谐和社会安宁的关键。卵巢肿瘤种类繁多，临床无法确诊。卵巢肿瘤患者的治疗中，手术治疗是最常用的也是最重要的治疗方法。而即使辅以B超，CT等检查，卵巢肿瘤在术前不易确诊，手术医生凭其肉眼也无法判定肿瘤性质。而术中快速冰冻切片作为一项快速组织学诊断手段，在临床已普遍应用。术中冰冻可以为妇科医生在手术中提供病变性质（良性、交界性、恶性），从而决定适当的手术方案。冰冻切片诊断可预防手术切除过度或不足，有的也可避免不必要的二次手术。

本次研究以快速冰冻切片在卵巢肿瘤临床诊断中的应用价值为重点，选取相关病例展开探讨，结合本次选取患者年龄结构示，平均年龄（38.4±3.1）岁，提示处于生育期、有活跃且旺盛生育功能的女性为卵巢肿瘤高发人群，与相关研究[3，4]结论一致。分析实验结果，得出卵巢肿瘤采用快速冰冻切片诊断准确性居较高水平，确诊率为95.3%，与文献报道冰冻切片诊断肿瘤的准确率为94%～97%[2]接近。熟练掌握WHO卵巢肿瘤分类是具备开展快速冰冻切片诊断的病理医生的基本要求。较高的确诊率是临床制定恰当的治疗方案的可靠保证。

提高快速冰冻切片诊断卵巢肿瘤的准确率在于以下几个方面：①在手术前对卵巢肿瘤患者的CT、B超等常规检查结果和各种临床表现等方面病史及肿瘤分布情况进行详细掌握，并且在手术过程中及时和临床医师进行沟通；②对送检的冰冻标本要认真仔细的检查确定病变部位和器官，要查看标本的完整性，有无包膜，包膜破损否，与周围组织有无粘连，切面为囊性、实性，还是囊实性，囊性区囊壁局部是否有乳头，都要仔细查看，卵巢肿瘤往往体积大，较大的浆液性和粘液性肿瘤大体标本特征常有明显局部差异，尽可能知道最可能存在何种肿瘤或病变，做到心中有数；③冰冻切片的取材是非常重要的环节，取材局限是造成延迟诊断的主要原因，取材时应仔细观察标本的切面，选取肿块的实性区、囊壁增厚处及衬有丰富的乳头状突起的囊壁等处。实性区应取灰白色鱼肉区域及不同质地和不同颜色区域，易发现上皮增生改变和癌变的区域；④优良的冰冻切片是保证冰冻切片诊断正确的关键，必须要制作优质的冰冻切片，要防止冰晶的发生，把握最佳切片温度，在冰冻组织的在速冻板上出现冰冻包埋剂周边开始变白，最后中央透明消失，这时就得及时从速冻板上取下冷冻头，固定切片机夹头上并开始修组织块，为最佳的切片温度（-25～-23℃）和切片时间。冰冻切片中出现的空泡，大都是取材时标本接触到水的原因，应尽量避免，若不小心接触到水后，制片过程中要多用无水酒精冲洗即可。切片要做到组织平整、厚薄均匀一致，细胞染色清晰，对比染色好。⑤病理医师要客观、冷静，充分了解患者病史、体征及各项术前检查，诊断时要严格把握恶性肿瘤的诊断标准，严防假阳性诊断，以免造成过度手术，引起医疗纠纷或致残等严重后果。但对部分特殊病例，特别是交界性肿瘤，并且年龄年轻的，有生育要求的患者，又确实难以明确诊断的，应及时与临床医师沟通并讲明情况，临床医师根据患者的具体情况决定手术方式。

总之，快速冰冻切片作为手术中病理诊断，在明确肿瘤的良、恶性、明确边缘组织有无肿瘤组织、淋巴结是否有转移，具有重大帮助和指导意义。病理科医师只有紧密与临床联系，不断更新专业知识，认真总结经验，才能提高冰冻切片诊断的准确性，减少误诊，为临床提供快速准确的诊断，满足广大患者的需要。

参考文献

[1] 苑晓军.肿瘤术中冰冻切片的病理诊断分析及临床价值.中国社区医师，2011，32（1）：213-214.[2] Sawady J，Bemer JJ.Accuracy of and resons for frozen section：a correlative rerrospeetive study.Hum Pathol，1998（19）：1019.[3] Chambers JT，Merino MJ，Kohorn EL，et al.Borderline ovarian tumors.Am J Obstet Gynecol，1988（159）：1088-1094

快速冰冻切片 第3篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集建德市第一人民医院和临安人民医院2005年1月至2009年12月甲状腺手术标本596例, 均术中冰冻切片, 发现甲状腺微小癌26例 (最大径0.1~0.9 cm) , 占总数的4.36%, 术后常规切片证实30例, 漏诊4例, 符合率86.64%, 其中2例为取材时漏诊, 2例组织形态不典型漏诊。30例患者中女性25例, 年龄34~58岁, 平均45岁;男性5例, 年龄54~67岁, 平均64岁, 男女比例1∶5。伴发疾病为结节性甲状腺肿23例, 腺瘤样甲状腺肿3例, 亚急性甲状腺炎2例, 桥本甲状腺炎1例, 甲亢1例。

1.2 方法

取手术切除新鲜甲状腺组织, 以0.2 cm间隔书页状平行切开, 仔细观察, 配合指腹触摸, 查见病灶或可疑病灶时以最大面取材, 有钙化者, 取钙化周围软组织 (钙化灶脱钙后常规石蜡制片) 。采用LEICA CM1900冰冻机、莱卡刀片, 零下18~20℃, 7微米厚切片。每个组织切片2~3张, 甲醇固定, HE染色, 光镜观察。冰冻标本10%福尔马林固定, 根据组织具体情况取材, 常规脱水, 石蜡包埋, 3微米厚切片, 光镜观察。30例TMC均行CK19、TG、P53免疫组化染色, 抗体为单抗, 按说明书要求操作。

2 结果

2.1 肉眼巨检

肿物大多数为灰白色质偏硬或质较脆区域, 与周围组织无明显界限, 或呈星芒状, 放射状瘢痕;部分有砂粒感。1例肉眼见结节有完整包膜;肿物大多数位于组织边缘, 被膜附近 (17例) , 位于实质内7例;2例在钙化组织旁;漏诊4例。2例在实质内, 2例靠近被膜, 最大径为0.15~0.3 cm, 与周围组织相比较, 色泽略淡, 须仔细观察才能发现微小差异。

2.2 病理镜检

26例甲状腺微小癌均为乳头状癌, 其中滤泡型7例。癌灶最大径0.5~0.9 cm者6例, 0.1~0.5 cm者19例, <0.1 cm者1例。其中0.5~0.9 cm癌灶均可见或多或少的真性乳头结构, 分支多为1~2级, 表面被覆1~2层上皮细胞, 与乳头状癌差别不大, 这类肿瘤很少漏诊。较大的微小癌 (0.1~0.5 cm) , 常显示促纤维结缔组织增生的间质, 并且胶原化 (19例中有15例, 占78.95%) , 其中散布着紊乱的滤泡上皮细胞或不典型乳头状结构。最小 (<0.1 cm) 肿瘤常显示滤泡结构, 缺少间质硬化[3], 诊断这类肿瘤主要依据细胞核的特征。本组病例中所有肿瘤均出现细胞核的相互重叠, 核染色加深 (26/26) , 核沟出现的频率占第二位 (2326) , 其次是核内包涵体 (14/26) , 毛玻璃状核最不易见到 (3/26) 。约20%的病例还可见到砂粒体, 为圆形、分层状、嗜酸性钙化球。漏诊4例, 有1例可见个别乳头结构, 其余3例都有硬化性间质, 核沟及包涵体都可见到。HE染色见图1。本组30例微小癌中, CK19均强阳性表达, 其中包括冰冻切片因组织形态不典型而漏诊的2例 (见图2) 。

3 讨论

手术中快速冰冻切片越来越多地应用于甲状腺病理学检查[4]。有资料报道[5], 冰冻切片诊断极为特异 (90%~97%) , 但敏感度不高 (60%) , 分析原因可能与取材、切片的局限性有关, 本组漏诊4例, 有2例在取材时漏取。

由于冰冻切片受制片因素的影响, 与石蜡切片相比, 组织结构欠清晰, 细胞形态变异性大, 甚至出现人工假象, 也给诊断带来困难[6,7]。对比甲状腺乳头状微小癌在冰冻切片与石蜡切片的组织形态, 认为有以下几点差异: (1) 乳头结构:冰冻切片的乳头形状不典型, 较柔和, 乳头中央的纤维血管间质常比较的水肿透亮。 (2) 肿瘤细胞群集较明显, 核染色深。 (3) 缺少核的毛玻璃样改变。 (4) 核的不规则更明显。 (5) 容易见到类似核内包涵体的人工假象, 须仔细识别。这种人工假象常在切片中大范围或整张切片中见到, 形状不规则, 有棱角, 透明或空白状, 而非均质红染的球状小体[8]。近年来文献报道对乳头状癌的诊断标准已从乳头结构转向细胞参数[9]。在冰冻切片诊断时, 需根据多项指标综合分析判断, 诊断不能明确时, 须向手术医师说明, 待常规病理检查后确定。

甲状腺手术标本避免漏诊微小癌的关键在于细心, 须诊断医师与技术员更好的配合。能做到以下几点将大大减少漏诊机会: (1) 取材仔细, 取材刀要锋利, 对所有送检甲状腺标本以0.2 cm书页状切开, 每个切面均仔细观察质地, 配合指腹触摸, 发现灰白、灰黄、孤立的、质地略硬的病灶, 瘢痕样结节或有纤维组织向四周呈放射状病灶, 均应取材, 特别须注意甲状腺被膜附近, 较大结节的附近。 (2) 肉眼观察病灶定位不明确时, 可酌情多取材;若见多处散在小病灶, 也可将几处病灶拼接在一个冻头上。 (3) 遇到明显钙化者, 取钙化周围软组织制片。 (4) 对组织的包埋面或某些特别需要关注的部位, 应当面向技术员讲清, 并可参与指导切片。 (5) 技术员须认真切片, 保证切片完整, 若预付组织质地偏硬或砂粒样钙化时, 可通过更换新刀片, 改变刀片角度等方法处理, 而不是简单地的将硬化点剔除。 (6) 认真全面阅片, 不遗漏玻片的任何地方, 特别在甲状腺边缘, 并且不受基础疾病的影响。 (7) 若瘢痕样区见增生活跃的滤泡或乳头, 既使是一个腺体或乳头也常提示癌的可能, 此时应重切组织或补取标本。 (8) 对可疑病变连续切片, 也是发现微小癌的有效方法。

CK19在甲状腺乳头状癌诊断和鉴别诊断上有重要的意义, 本组30例微小癌中, CK19均强阳性表达, 其中包括冰冻切片因组织形态不典型而漏诊的2例。由于癌灶的微小, 有5例在冰组织石蜡切片中见到癌组织, 诊断依赖冰冻对组织的石蜡切片。这就要求技术员在石蜡修片时, 应尽量的减少对肿瘤的消耗。我们应用冰对组织进行免疫组化CK19测定, 获得与常规石蜡切片同样的效果。

甲状腺微小癌早期治疗预后非常好, 基本不影响患者的生存质量, 但依靠临床及各种检查手段无法确诊, 病理诊断仍是公认的最权威诊断[10]。病理医师能够在术中冰冻切片明确诊断, 将有利于外科医师决定下一步的处理, 也有利于医患关系的和谐。

摘要：目的 提高快速冰冻切片甲状腺微小癌 (TMC) 的检出率。方法 回顾分析30例 (包括漏诊4例) 甲状腺微小癌巨检及光镜特点。结果 甲状腺微小癌肉眼观察大多数呈结节状、星形或放射状, 切面灰白、灰黄色, 界限不清。显微镜下大多数有纤维性间质反应, 可见核沟, 核内包涵体及砂粒体, 部分有明确乳头状结构, 结论 对甲状腺标本作书页状切开, 仔细观察, 配合指腹触摸, 多取材, 并熟练掌握微小癌病理形态特征, 可以减少漏诊, 误诊率。

关键词：甲状腺微小癌,快速冰冻,病理诊断

参考文献

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[9]李日增, 周宏, 潘黎静.甲状腺微小癌预后因素分析[J].实用医学杂志, 2009, 25 (21) :3653-3655.

手术中冰冻切片病理检查志愿书 第4篇

门诊、住院科 室ID号住院号

姓名年龄性别职别单位

手术中冰冻切片病理检查是将切下的病变组织在冰冻切片机中迅速冷冻后制成病理切片，由病理医师即刻在显微镜下检查，做出病现诊断，主要目的是：（1）帮助判断病变的性质。如：炎症、肿瘤或其它性质的病变；如果是肿瘤，则需进一步判断是良性还是恶性肿瘤。（2）帮助判断切除肿瘤组织的边缘是否有残留的癌组织。（3）帮助辨认手术切除组织。

（4）判断手术切除的淋巴结中有无转移的癌细胞。冰冻切片病理诊断结果作为术中会诊意见提供给临床医生，临床医生将其作为重要的参考依据决定进一步手术的方式和范围。与常规石蜡包埋切片相比，冰冻切片诊断的局限性是：（1）冰冻切片质量较差，诊断准确率低于常规石蜡切片。（2）在做冰冻切片采取活检组织时，有造成肿瘤种植的可能，特别是在甲状腺和肺等实质器官。（3）术中冰冻切片技术不适用于脂肪组织和骨组织。（4）某些疑难病例和交界性病例有时在石蜡切片诊断都很困难，需要做免疫组化和电镜观察，仅凭冰冻切片难以确定诊断，因而要延缓病理诊断。（5）冰冻切片取材局限，有时局部的组织不能代表整个标本。因此，有的病例冰冻切片组织象和手术切除大标本的石蜡切片组织象相差很远，甚至造成假阴性诊断。（6）病变组织在冷冻过程中不可避免地形成冰晶，以及组织处理和诊断时间紧迫等技术因素所限，“冰冻”诊断的准确率有一定的局限性，有可能与最终的“常规”病理切片诊断不相符合，最后病理诊断应以“常规病理诊断为准”。

医师签名：年月日

我已仔细阅读并了解上述关于“冰冻”切片病理诊断的作用及其局限性，同意对实施手术中切除的病变组织进行冰冻切片快速病理检查。

患者本人签字：

代表签字：（与患者关系：）

年月日

快速冰冻切片 第5篇

1 材料与方法

1.1 材料

子宫平滑肌瘤19例、子宫内膜癌28例、子宫颈癌17例、卵巢纤维瘤8例、卵巢畸胎瘤38例、卵巢囊肿26例、卵巢恶性肿瘤32例。

1.2 仪器

采用德国LEICA CM-1900冰冻切片机。

1.3 方法

回顾分析2008~2009年牡丹江医学院红旗医院妇科168例术中冰冻病理的制片方法,不同组织选用冰冻切片机的温度不同、包埋剂不同、冰冻时间不同,并需选择合适的固定液和调整切片刀和防卷板的角度。

2 结果

168例妇科术中冰冻病理切片,切片平整,无皱褶,镜下:细胞核与细胞质染色对比清晰、透亮。无冰晶形成。

3 讨论

3.1 切片机的适宜温度

冰冻切片机应长期处于待机备用状态,冰冻台温度维持在-20~-25℃左右。不同质地的组织标本需要不同的切片机温度。

3.2 包埋剂

常用有以下几种:(1)进口OCT包埋剂;(2)羧甲基纤维素;(3)合成胶水[1];(4)自来水[2]。

一般采用自来水包埋。优点是切片平整,易贴附,无冰晶形成。关键掌握水量与用法,接触冰冻托的组织面湿润即可。合成胶水适用较硬的组织。无论是合成胶水还是自来水使用效果均与OCT相同,但价格低廉,不伤刀。

3.3 冰冻时间

不同质地组织采用不同冰冻时间,冰冻时间指从标本放入冰冻切片机到可以进行切片的时间。冰冻时间不易过长,时间过长,组织易碎。组织变脆时,可用手指在组织上摸一下再切或将组织拿出放置10s左右。见表1。

另外,送检的冰冻组织要求新鲜,切忌放在生理盐水、酒精或包入纱布中。取材时组织不能水洗,以免出现冰晶[3]。固定液种类很多,我科现采用的冰冻固定液是:无水乙醇80mL、甲醛15mL、冰醋酸5mL。固定效果较好。

切片时进刀的速度应均匀平稳,速度过慢,切片增厚[4],容易脱片;速度过快,组织易磕掉。一般将防卷板和切片刀的角度调节成5°。防卷板放置是否得当,直接影响切片能否展开。贴片时要依靠载玻片的热量将组织吸附上来,贴片时载玻片与刀面的角度成30°~45°。切忌压片。

总之,应用恒温冰冻切片机制作妇科不同组织冰冻切片要在工作中不断摸索总结工作经验。只有制作优质的冰冻切片,才能进一步提高冰冻病理诊断水平。

摘要：目的 探讨应用冰冻切片机制作妇科不同组织术中冰冻病理最佳切片的相关因素。方法 回顾分析2008～2009年牡丹江医学院红旗医院妇科168例术中冰冻病理的制片方法,不同组织选用冰冻切片机的温度不同、包埋剂不同、冰冻时间不同等。结果 168例妇科术中冰冻病理切片,切片平整,无皱褶,镜下细胞核与细胞质染色对比清晰、透亮,无冰晶形成。结论 冰冻切片机的适宜温度、包埋剂的选择、冰冻时间等是制作优质冰冻切片的关键。

关键词：冰冻切片机,病理切片,包埋剂

参考文献

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[7]崔京淑.冰冻切片的制作及常见问题对策[J].吉林医学,2009,52(17):173.

手术中冰冻切片延迟诊断分析 第6篇

1 材料与方法

选取2005年1月-2008年11月的病理切片资料1 128例,术中送检标本包于干纱布内或用不加固定液的洁净容器即时送达病理科。病理医生仔细检查大体标本,取病变最明显处组织1~2块,迅速置于全自动恒冷切片机(英国Shandon AS620型)内切片,厚5μm~7μm,经95%酒精固定,HE染色,由2名以上医师诊断。如送检组织不合格,立即要求手术医师再次送检。冰冻残余组织做常规石蜡切片。另多处取材,做成石蜡切片。

2 结果

1 128例冰冻切片病例分布在女性生殖系统、甲状腺、乳腺、肺、胃肠、肝、胆、胰、神经系统、泌尿、男性生殖系统、淋巴结、纵隔、口腔、骨关节和浆膜腔等15个不同的系统或组织。

结果判定:确定性诊断是冰冻切片与石蜡切片相符,假阴性是指恶性肿瘤诊断为良性肿瘤或非肿瘤,延迟诊断是指病变性质无法明确或仅做描述性诊断,等待石蜡切片报告,假阳性是指良性病变诊断为恶性病变。

1 128例冰冻切片中,与石蜡切片报告相符1103例,冰冻切片诊断总准确率为97.8%,延迟诊断19例(1.68%),假阴性6例(0.53%),无假阳性病例。确定性诊断中良性病变912例(82.7%),恶性病变182例(16.5%),交界性病例9例(0.81%)。见表1。

延迟诊断的病例中女性生殖系统9例,其中卵巢畸胎瘤2例,交界性肿瘤7例;乳腺4例,甲状腺2例,神经系统2例,软组织及泌尿系统各1例。假阴性病例中甲状腺3例,卵巢、乳腺及泌尿系统各1例。

3 讨论

术中冰冻可使外科医生在手术中知晓病变性质(良性、交界性、恶性),从而决定适当的手术方案。冰冻切片诊断可预防手术切除过度或不足,有的也可避免不必要的二次手术。但由于手术中冰冻切片病理诊断受到了很多因素的制约,准确性很难达到与常规石蜡切片相一致的效果。延迟性诊断和假阴性诊断时有发生。复习本组1 128例术中行冰冻切片的资料,冰冻切片诊断总准确率为97.8%,延迟诊断19例(1.68%),其中卵巢、乳腺和甲状腺是发生延迟诊断和(或)假阴性病例最多见的器官,现逐一进行分析。

3.1 卵巢肿瘤

术中冰冻切片的延迟诊断多存在于:(1)辨认未成熟性畸胎瘤中未成熟的神经上皮成分和(或)其他不成熟的间叶组织。冰冻取材局限、制片因素是造成术中明确诊断困难的原因。国外学者[3]认为此类病例在术后广泛取材后才能明确诊断,术中冰冻切片宜采用延迟诊断,本组病例中有2例延迟诊断属这种情况。冰冻切片中见成熟神经元和神经胶质的背景中有少量密集分布的核深染小细胞,但未找到明确的原始神经小管和菊形团。由于患者年轻,采用了延迟诊断。术后石蜡切片示:冰冻切片中所见的深染的小细胞实为小脑颗粒层细胞。(2)卵巢交界性和低级别表面上皮-间质肿瘤的术中诊断,过诊断或诊断不足时有发生[4],采用延迟诊断是较为合适的。取材局限是造成延迟诊断的主要原因[5],交界性病变或浸润常为局灶性的,需广泛取材才能明确诊断。此类肿瘤多为囊性或囊实性肿块,在快速取材时应仔细观察标本的切面,选取肿块的实性区、囊壁增厚处及衬有丰富的乳头状突起的囊壁等处。若在冰冻切片中有可疑浸润,则宜诊断为交界性肿瘤,并提示临床需待术后充分取材、常规切片后除外浸润。本组病例中有5例术中冰冻切片中未见间质浸润,考虑到取材的局限性,术中诊断为至少交界性肿瘤。其中有2例在术后石蜡切片中见毁损性间质浸润,诊断为浆液性乳头状囊腺癌。

3.2 乳腺肿瘤

在国外随着乳腺细针抽吸和粗针穿刺活检技术的推广应用,术中冰冻切片检查已大大减少[6]。在我们的日常工作中,乳腺病变常规在术中行冰冻切片检查,术中明确诊断的难点集中于:(1)硬化性腺病过诊为癌[7]。本组病例中延迟诊断的有1例硬化性腺病。陷于致密的纤维组织中的受压变形、伸长的腺管极似浸润性生长的癌性腺管,在冰冻切片中与浸润性癌不易区分。经仔细辨认,部分受压变形腺管似由两层细胞构成。由于患者年轻,且考虑到鉴别诊断的困难,术中冰冻倾向良性病变,采用了延迟诊断。术后多取材,常规HE制片,示病灶保留着分叶状轮廓,免疫组化证实腺管周围有肌上皮围绕。(2)导管上皮增生性病变。普通型导管上皮增生,不典型导管上皮增生和低、中级别的导管内癌可同时存在于一个病例中,其组织形态多变、结构复杂,有时经多处取材在石蜡切片中都可能难以确诊,需借助于免疫组化染色标记。因此不能苛求在短时间内且在1~2张切片中作出明确诊断,延迟诊断是较为明智的做法[6]。本组中有2例导管上皮增生性病变采用了延迟诊断,在冰冻切片时诊断为导管上皮增生,灶性区域增生活跃。术后经免疫组化证实为普通型导管上皮增生,无不典型增生。当然,冰冻切片诊断时过多使用“不典型导管上皮增生”可能会引起患者不必要的焦虑。

另外,取材也可影响诊断的准确性,病灶小于1 cm的病例可能导致假阴性诊断。本组仅有的1例假阴性诊断就是由于病灶过小、取材不当造成。该病例病灶小,快速取材时未扪及明显的肿块,冰冻切片示乳腺腺病。标本固定后取材时发现一灰白质硬区,病灶大小仅0.2 cm×0.3 cm,镜下证实为浸润性导管癌。剩余组织充分取材,未发现其他肿瘤病灶。临床医师考虑到病灶小而局限,未行二次手术。术后随访,患者至今未复发。

3.3 甲状腺肿瘤

延迟诊断和假阴性诊断的病例产生于:(1)乳头状癌,主要是包膜内滤泡型乳头状癌和微小癌的诊断。当乳头结构不明显时,诊断尤为困难。诊断依赖于识别特征性的癌细胞核:核呈卵圆形、染色质细、核拥挤重叠、有核沟、核内包涵体等。值得注意的是,毛玻璃样的核在冰冻切片中见不到,仅见于福尔马林固定后的石蜡切片中。另外,砂粒体不常见,但若能找到,则具有重要的诊断价值。(2)滤泡性肿瘤的诊断。滤泡癌的血管和(或)包膜侵犯在冰冻切片中不易发现,诊断时需仔细观察标本,尽量取包膜稍厚处,警惕滤泡密集的病例[8]。

术中诊断的关键是确定病变性质,诊断时要严格把握恶性肿瘤的诊断标准,严防假阳性诊断,以免造成过度手术,引起医疗纠纷或致残等严重后果。要掌握正确的取材方法,良恶性难定、复杂和疑难的病例宜采取延迟诊断。切不可勉强诊断,以免造成误诊和临床误治。

参考文献

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如何提高冰冻切片的准确性 第7篇

手术台上做冰冻切片的唯一理由是决定下一步的治疗方案。例如:卵巢, 乳腺肿块的良恶性决定是否需作根治术;又如肢体的肿瘤性质, 决定是否需要截肢等, 除这一原因外, 其它均无须申请作冰冻切片的理由, 对于病理医师来说, 冰冻切片要求快, 准确, 可靠。但是冰冻切片的质量一般均不如石蜡切片。另外, 取材有限。因此, 并不是所有冰冻切片都能做到快, 准确可靠。那么怎样才能提高冰冻切片的准确性呢?作者认为必须搞好以下工作。

1密切联系临床, 收集临床资料

收到冰冻切片申请单后, 立即下到病房, 认真了解病史及有关其它方面的检查及资料, 对于患者可触及的肿块, 可术前触诊, 问诊或行细胞学检查, 以便术前对患者肿块大体范围, 部位, 形态, 做到心中有数, 为冰冻切片诊断提供参考依据。

2注重标本的大体观察与取材

对于较大标本, 首先观察其颜色, 质地, 及有无出血, 坏死以及周围组织的关系。良恶性肿瘤在大体形态上是有区别的, 对于有经验的病理医师来说基本上能够判断, 然后选择有代表性的病变, 取材1～4块。对于较小的标本争取全部包取。当光镜检查觉标本取材不够时或有疑难时, 不要轻易下诊断, 必要时要求手术医师重新送检, 或等常规结果, 诊断不足并不严重, 诊断过头却是一个严重的错误。

3不断积累冰冻切片制片经验, 提高切片质量

切片质量的好坏是关系到诊断准确性尤为重要的一个环节, 这就是要求病理技术人员制片过程中不断积累经验。例如在固定液的温度作用时间的选择上就尤为重要。固定液温度过高作用时间过长, 就会使组织细胞收缩过度, 作用时间过短, 就会使细胞收缩不够, 不利于判断, 另外在染色过程亦同常规石蜡切片一样, 质量不佳即使是石蜡切片, 亦难作出判断, 因此, 切片质量不佳, 不要轻易下结论。

4做好与常规石蜡切片的对照

冰冻切片是在急剧低温的环境下切片, 因此, 组织较硬, 易受到挤压, 变形, 这就要求病理医师在诊断过程中善于发现, 判断是由于组织挤压过甚, 还是组织自身生长浸润进去, 常见误诊的原因有:1切片不佳, 导致阅片困难, 2由于经验不足。对送检标本选取部位不当。3诊断经验不足, 致阅片解释错误。因此冰冻切片与常规石蜡切片的对照, 对于积累经验, 纠正错误尤为重要, 诊断经验丰富, 诊断准确性就会提高。

362例乳腺冰冻切片病理诊断分析 第8篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2007年3月至2009年12月362例乳腺快速冰冻切片病例,其中男性8例,女性354例,年龄11~78岁,平均年龄44.5岁,左侧乳腺肿块218例,右侧乳腺肿块116例,双侧乳腺肿块28例。

1.2 检查方法

本组362例乳腺肿块,335例肿块全部切除送检,27例肿块部分切除送检。标本经病理医师多部位、多切面重点取材,由技术员进行冰冻切片。机器为英国SHANDON快速冰冻切片机SME型,工作温度为-22~-24℃,切片厚度为4~5μm,经甲醛固定,HE染色,中性树胶封片,病理医师光镜观察,电话加书面报告,每例时间18~30min,平均24min。冰冻残余、剩余组织做常规石蜡切片对照分析。

1.3 判断标准

将每例快速冰冻切片报告与慢速石蜡切片报告进行对照分析,分为完全符合、基本符合、不能确诊、误诊4种情况:(1)完全符合:快速冰冻切片诊断与常规石蜡切片诊断在病变良恶性及分类、分型上完全一致;(2)基本符合:病变良恶性诊断肯定,但分类、分型不完全一致,不影响手术治疗方式和措施;(3)不能确诊:快速冰冻切片不能肯定良恶性,或可疑恶性,需延迟等待石蜡切片确诊者;(4)误诊:良恶性病变混淆,将恶性肿瘤误诊为良性,为假阴性,或将良性病变误诊为恶性,为假阳性。

2 结果

本组362例乳腺肿块快速冰冻切片诊断,确诊357例,占98.62%,其中完全符合325例,占89.78%,基本符合32例,占8.84%;不能确诊4例,占1.10%;误诊1例,为假阴性,占0.28%见表1。

2 讨论

乳腺肿块位于体表,通常采用手术切除治疗,术前对肿瘤的性质难以确定,B超、钼靶,CT检查对肿瘤的大小、范围有重要参考价值,但对肿瘤的性质难以确定,以前由于没有术中快速冰冻切片,常常对肿瘤做单纯切除,待石蜡切片诊断结果出来后,如果是恶性,再行第2次手术根治,等待时间长,石蜡切片诊断需3~7d出结果。病人增加了痛苦,加大了治疗费用。术中快速冰冻切片能够在30min内确定肿瘤的良、恶性,能够直接指导手术的范围,准确率高,文献报道乳腺病变冰冻切片诊断的准确率为96.1%~99.6%[1~7],本组病例准确率达98.62%,与文献报道符合。因此,有条件的医院,广泛开展术中快速冰冻切片诊断技术,在乳腺肿块手术治疗中成为常规项目。

但与石蜡切片相比,快速冰冻切片技术有其局限性[8~9]:(1)快速冰冻切片质量差,好的与石蜡切片相差不大,差的模糊不清,严重影响诊断质量;(2)冰冻切片取材局限,有时仅取部分小块组织,甚至没有取到病变组织,影响诊断结果;(3)快速冰冻切片需在短时间内做出诊断,经验不足的病理医生难以胜任该项工作;(4)疑难病例和交界性病例,石蜡切片诊断都很困难,快速冰冻切片诊断就更加困难,常需做免疫组化或电镜观察,需要延缓诊断,否则容易发生误诊。

影响误诊原因分析:(1)冰冻切片质量差,对人为假象不熟悉。(1)细胞体积胀大,境界不清,易拉长、变形;(2)组织固定不好,染色欠佳,细胞结构模糊,辨认困难;(3)细胞内出现空泡,误认为是粘液或脂类物质,含水分多的组织,易形成冰晶,在制片过程中溶解形成空泡;(4)细胞胞浆境界不清,多核巨细胞难辨认;(5)胞浆内嗜酸性颗粒不清楚;(6)血管丰富的组织或肿瘤,在冰冻切片上呈空白区。(2)对病理医师的训练不够,故对某些病变不认识。(3)取材局限,大体标本检查不仔细。(4)某些病变,如乳腺导管内乳头状瘤、导管内乳头状病、硬化性腺病等在冰冻切片诊断中比较困难,勉强诊断有可能造成假阳性的诊断错误。如乳头状肿瘤的真性或假性浸润冰冻切片上难辨认,乳头状瘤中有时有部分癌变,而冰冻切片使组织变形造成可能有癌变的假象。(5)切片观察不仔细、不全面,遗漏病变,有可能造成假阴性的诊断错误。

为了提高快速冰冻切片的准确率,减少误诊,必须做到:(1)由高年资病理主治医师或副主任以上病理医师担任快速冰冻切片诊断工作,临床医生必须与病理医师密切配合,提前1d向病理科提交冰冻申请,详细填写申请单,与患者签订快速冰冻知情同意书,告知优、缺点和风险。病理医师要在做冰冻诊断前对患者一般情况、B超、钼靶,CT等辅助检查结果、初步的临床诊断有充分的了解,必要时要亲自查看病人及查看病历,做到心中有数。(2)临床医生要尽量将肿块完全切除,全部送检,如果由于肿块过大或容易出血,不能完全切除,应取具代表性的肿块,且组织块足够大,避免挤压,标本标记清楚。病理技术人员接收标本时应严格核对病人姓名、床号、住院号、标本名称和数量。病理医师要亲自取材,仔细检查,观察标本形态特征,一般良性者,有完整包膜,边界清楚,切面灰白,质软或质韧;恶性者,包膜不完整或没有包膜,边界不清楚,切面灰白或鱼肉样,质脆,部分有出血、坏死。取材要多切面、多点重点取材,尽量避开出血、坏死区,组织块数量要足够,一般3~5块,必要时多取或重取。(3)安排有丰富经验的病理技术员制作冰冻切片,选用锋利的一次性刀片,提前将快速冰冻切片机开机运行至合适温度,待机准备。检查、更换固定液、染色液,使其保持新鲜。病理医师取材后将组织块交给技术员,技术员马上进行冰冻切片,切片厚度4~5μm,快速固定、染色、封片,力求在最短时间内制作出高质量的冰冻切片交给病理医师观察、诊断。(4)病理医师镜检时,应先低倍,后高倍,反复仔细观察,不漏掉一个视野,直到找到充足良性或恶性依据时,才能报告该肿瘤或该疾病为良性或恶性,能够组织分型就分型,不能分型就待慢速石蜡切片诊断再分型。如果诊断依据不充足,病变没有代表性时,要建议临床医师重新取材送检,或与临床医生一起商讨取材。直到找到充足依据为止。如因切片质量欠佳而难于诊断时必须重新制片,直到切片满意,能够诊断为止。如果确是病变复杂,诊断依据不足,难以作出诊断时,只能发“等待石蜡切片诊断”的报告,不能勉强发出确诊报告,以免误诊而带来严重后果和医疗纠纷。(5)冰冻报告应以电话加书面形式发出,必须要手术医生接听电话,病理医师报告2~3遍,手术医师复述正确为准。(6)临床医生对冰冻报告结果有疑问,要马上与病理医师联系、讨论,必要时再次取材送检,直至临床、病理一致。(7)冰冻残余、剩余组织及时固定,做常规石蜡切片诊断。

提高快速冰冻切片质量,增强责任心,密切配合,仔细观察,可以明显提高冰冻切片准确率,减少误诊,保障医疗质量,减少医疗纠纷。

摘要：乳腺疾病常常表现为乳腺肿块,通常采用手术治疗,术前对肿块的性质难以确定,采用术中快速冰冻切片能够快速明确肿块的良、恶性,帮助确定手术范围,准确率高,诊断时间短。

关键词：乳腺疾病,冰冻切片,诊断

参考文献

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[8]中华医学会.临床技术操作规范.病理学分册[M].北京:人民军医出版社,2004:10～12.

冰冻切片制作技术的改进及临床应用 第9篇

1 材料与方法

1.1 材料

选用2008～2012年菏泽医专附属医院完成的冰冻切片进行回顾性研究总结。采用德国莱卡恒温式冷冻切片机、小型电动吹风机、一次性刀片、普通胶水、固定液、苏木素染液、0.5%盐酸酒精分化液、1%氨水、梯度乙醇溶液、中性树胶。

1.2 操作方法

择取新鲜活体组织取材后直接冻结、切片、随即投入固定液中,固定0.5～1min,苏木素染核1～2min,水洗后,0.1%氨水返蓝,水洗后,1%梯度乙醇脱水,树胶封固。

2 结果

由于在制作冰冻切片的各个环节采取相应的改进措施,所制冰冻切片用时短,质量好,染色鲜艳,镜下组织结构清楚,细胞形态清晰,细胞核、细胞浆色彩鲜艳对比分明,无脱片和冰晶现象产生,术后诊断符合率高。

3 讨论

病理技术是病理学诊断的基础,制作切片的质量好坏直接影响病理医生做出正确的病理诊断,进而可影响临床手术中确诊病变性质,决定手术范围。为了提高制片质量,防范责任事故,避免医疗纠纷,有必要加强对病理技术进行科学规范管理和技术改进。

3.1 准备工作

冰冻切片机应24h处于备用状态,白天温箱维持在-25℃,冰冻台的温度-35℃～-40℃,避免经常开关机器。要定期磨刀及更换刀片,保证刀刃锋利,提前安在刀架上,调整合适的角度。保持防卷板干净、平整、无缺损,准确调校至合适部位。另外,冰冻切片机要根据需要冷冻不同的组织预先设定合适的温度。

3.2取材

正确的处理手术送检组织是制作冰冻切片的关键,取材不当会影响冰冻切片的制作质量和诊断的正确性。所取组织必须新鲜,尽量避开脂肪及坏死出血区。如是手术标本应立即送检,夏天应置于小冰箱内送检,冬天不超过半小时,以保证组织细胞的生活状态。最好用一次性乳胶或塑料手套盛放,谨记勿用医用纱布盛放组织,因为纱布上的线毛容易脱落粘在组织上,不容易清除,且易损伤刀刃。切忌水洗,如果表面有血迹或组织含水量高,可用滤纸将其吸干。组织块大小要合适,厚度在0.2～0.3cm,最好不超过0.3cm。组织过大,切片时阻力过大,易产生褶皱及刀痕,组织易崩碎,增加制片难度影响诊断

3.3包埋

选用进口包埋剂OCT或者普通胶水,要涂抹均匀,使组织深埋其中。OCT价格昂贵,需要进口,随机配带数量有限,合成胶水来源广,价格低廉,经济适用,是一种良好的替代产品。若组织小,可采取放少许胶水于切片托上做一冰台,垫高后再放入组织包埋。

3.4冷冻温度和时间

冰冻温度和时间是切片的最关键环节,对切片机而言包括工作室温度、速冻台温度、冷冻头温度。冷冻头温度是切片的关键,不同的组织要设置不同的冷冻温度和时间,冷冻时间过长,组织块过冷、过硬,切片易呈碎屑或条痕状,可以用带乳胶手套的拇指按压回温或室温放置20s后再切;反之,冷冻时间过短,切片呈粥糜状或切不下来,需要继续冷冻。因此,想要获得一张高质量的切片,必须根据组织的种类、大小、厚度来控制冷冻时间。肝、肾、脾、肌肉等组织,质地致密受温度影响明显,最佳温度为-21～-22℃,时间应控制在2min以内;脑、肾、卵巢等质地比较嫩、组织结构疏松的的组织,温度不宜过低,-7～-10℃;脂肪类组织温度要低一些,-45～-55℃,时间也要长一些;淋巴结、甲状腺、皮肤等组织一般-17～-20℃;对乳房肿块、软组织肿瘤组织控制在-20～-25℃。另外,冰冻头不宜预先冷冻,因为与包埋剂温差太大而不能牢固粘合,发生脱片。

3.5切片

当冷冻致组织和包埋剂发白后即可切片。切片时手摇轮用力要均匀,刀速缓慢均匀,转速8～10r/min为宜。调整防卷板与切片刀之间的角度、距离,角度一般为5°左右。另外防卷板与刀刃的最高点要留有一定的距离,这样切出的切片顺利通过两者之间的缝隙并且平整。切片厚度对组织的固定和染色效果起决定作用,一般5～8μm。细胞密集且细胞体积小的组织:如肝、脾、淋巴结等,切片厚度为3～5μm;细胞疏松且细胞体积大的组织:如脂肪、脑等,切片厚度可为8～10μm。如果遇到组织中含有软硬不同质地时,较硬的放在上端,先切较软的后切较硬的部分,以避免组织间发生挤压,导致变形。往载玻片附贴时,动作要轻、快、稳,避免发生皱折。如果贴片速度慢,组织升温变软,则帖不成片。载玻片一定要干净并且在室温中放置,利用温差将切片吸附到载玻片上,如果载玻片不干净或者温度较低,可能导致脱片或者影响镜下观察,可采用防脱粘附剂处理过的载玻片进行粘贴。整个切片过程尽量避免多次开盖,避免仪器反复启动导致震动影响切片,同时使冷冻温度保持恒定。

3.6固定

切好后立即放入准备好的固定液中及时固定。如果停留时间稍长再固定,容易造成细胞退变。做出的切片细胞核模糊不清,呈云雾状。留置时间越长,这种现象越严重。因为细胞核在空气中会迅速退变,核着色力下降,影响染色效果。固定液一般选用95%酒精,95%酒精穿透力强,能迅速沉淀蛋白质,对细胞有较强的收缩性,可迅速固定标本,所以固定时间不宜过长,一般30秒效果良好。并且95%酒精无需配制,使用方便,是目前比较理想的一种固定剂。也可用10%中性福尔马林和botiin氏液做冰冻切片固定液,因其含水量高,染色时易脱片,可稍微延长固定时间,效果不如95%酒精。固定液长时间放置可导致浓度降低,从而导致脱片,要定期更换。

3.7染色及封固

固定后的切片无需水洗,用电吹风将切片吹干,直接做快速HE染色,预先加热的37℃苏木素染核1～2min,水洗后,0.1%氨水返蓝,水洗后,1%梯度乙醇脱水,树胶封固。封固前不用二甲苯透明,此方法减少污染,避免切片制作人员接触有毒试剂。做脂肪切片封固时,可用滤纸轻压标本吸去油脂后再封固。

3.8常见问题

冰晶的形成是制作冰冻切片最常遇见也是较难避免的问题。使切片质量明显下降,从而影响病理诊断。细胞中约有90%都是水分,水在各种组织中含量最多,为避免冰晶的形成,可从以下几点改进:标本取材尽量小一些,厚度勿超过4mm,这样有利于组织快速冻结,将组织块迅速移到冷冻头上骤冷可以减少冰晶现象出现,有效防止冰晶挤压周围组织,改变甚至破坏组织原来的形态结构[2]。因为冷却速度越快,所形成的晶核数量越多,晶体来不及生长就被冻结,从而不能形成较大冰晶。当送检标本时应尽量避开水源,不要用生理盐水浸泡或用潮湿纱布包裹组织,因为液体浸泡后,组织内水分增加,造成冷冻后组织内冰晶形成增多。

总之,要获得一张高质量的冰冻切片,必须加强责任心,在日常的工作中不断学习、积累和提高,掌握关键性技术操作要领,为提高病理诊断率提供更有利的条件。

摘要：目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高冰冻切片的临床应用价值。方法:选取新鲜活体组织,取材后直接冻结,采用恒温式冰冻切片机切片,冰冻固定液固定,HE染色。结果:质量较好,染色鲜艳,显微镜下组织结构、细胞形态清晰,细胞核浆对比分明。结论:制作高质量的冰冻切片需要在取材、冷冻、切片、固定等多个环节上精益求精,不断改进,以提高病理诊断率,提高其临床应用价值。

关键词：冰冻切片,制作,临床应用

参考文献

[1]赵阿红,张秋红.Leica CM1900冰冻切片机的应用质量保证[J].临床与护理工程,2005,20(3):72