小鼠试验范文

小鼠试验范文（精选7篇）

小鼠试验 第1篇

为验证柏子仁、酸枣仁的镇静催眠效果,笔者进行戊巴比妥钠耐受试验,确定阈值下剂量戊巴比妥钠的用药量,进而比较不同剂量的柏子仁、酸枣仁在镇静催眠方面对经过阈值下剂量戊巴比妥钠处理的小鼠的效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明小鼠90只,体重20 g左右,购自北京华阜康生物科技有限公司。小鼠分笼喂养,自由饮食。

1.2 试验药物

柏子仁、酸枣仁各250 g,购自保定安国中药市场;0.5%地西泮注射液、戊巴比妥钠注射液、0.9%Na Cl注射液,由河北农业大学动物科技学院实验室提供。

1.3 戊巴比妥钠耐受试验

将30只小鼠随机分成6组,每组5只,小鼠称重、标记,按体重腹腔注射戊巴比妥钠注射液,记录入睡小鼠数量及睡眠时间,见表1。

注:*表示有部分小鼠注药后死亡。

与正常阈值剂量下戊巴比妥钠睡眠时间(1 h左右)比较,注射剂量45 mg/kg时的入睡率是100%,苏醒及时。当注射剂量低于45 mg/kg时入睡率都不到100%,睡眠时间相应缩短,但能表现出不同程度的镇静催眠作用,因而确定45 mg/kg戊巴比妥钠注射量是该试验的阈值剂量,而小于45 mg/kg的给药剂量均为阈值下剂量,本试验中将戊巴比妥钠的阈值下剂量确定为25 mg/kg。

1.4 中药对使用阈值下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡影响试验

将60只小鼠随机分成6组,分别标号称重。1~4组分别为柏子仁、酸枣仁处理组;5组为阳性对照组,地西泮处理;6组为空白对照组,生理盐水处理;各组分开喂养,戊巴比妥钠的注射剂量为25 mg/kg,试验设计见表2。

1~2组每天2次柏子仁煎剂灌胃,3~4组每天2次酸枣仁煎剂灌胃,空白对照组用生理盐水灌胃,每天2次,连续3 d;试验第3天对阳性对照组按体重4 mg/kg肌肉注射地西泮注射液。给药后在15 min内小鼠翻正反射消失达1 min(40 s以上皆可)为入睡指标,记录各组入睡小鼠的只数及睡眠时间。

1.5 试验观察的指标及其相应数据的处理

中药对小鼠入睡影响试验中,各处理组的入睡只数和睡眠时间以总体均值表示,并对数据进行χ2检验;在中药对使用阈值剂量下戊巴比妥钠注射液小鼠睡眠影响试验中,各处理组的睡眠时间以总体均值表示,对数据进行t检验。

2 结果与分析

中药对小鼠入睡的影响试验结果见表3。

注:与空白对照组比较,*表示差异显著(P<0.05),**表示差异极显著(P<0.01);肩标相同表示差异不显著(P>0.05)。

由表3经计算可知,柏子仁、酸枣仁低剂量组的入睡率比空白对照组高70个百分点,平均睡眠时间分别高2.3 min和1.7 min,差异显著(P<0.05);柏子仁、酸枣仁高剂量组的入睡率比空白对照组分别高80和90个百分点,其平均睡眠时间分别高3.3 min和3.5 min,差异极显著(P<0.01)。

柏子仁低剂量组的入睡率比高剂量组低10个百分点,平均睡眠时间少0.9 min;而酸枣仁低剂量组的入睡率比高剂量组少20个百分点,平均睡眠时间少0.8 min。相同剂量的柏子仁、酸枣仁入睡率分别为80%和80%,90%和100%,平均睡眠时间分别为3.8 min和4.2 min,4.7 min和5.0 min,比较接近,差异不显著(P>0.05)。和阳性对照组比较,柏子仁和酸枣仁低剂量组的入睡率少20个百分点,平均睡眠时间少2.0 min和1.6 min;柏子仁和酸枣仁高剂量组的入睡率分别低10个百分点和相等,平均睡眠时间分别少1.1 min和0.8 min。说明柏子仁、酸枣仁可以影响小鼠的睡眠。

3 讨论

1)不同剂量柏子仁、酸枣仁都有镇静催眠作用,但其程度不同。柏子仁、酸枣仁高剂量组与阳性对照组结果相当,明显高于低剂量组,说明镇静催眠作用与用药量有一定关系。相同剂量下的柏子仁、酸枣仁的入睡率、睡眠时间差异不显著(P>0.05)。

2)相同剂量的柏子仁、酸枣仁时对睡眠影响无明显差异,表明临床上都可以入药;但是药量不同作用也不同,因而要根据具体情况确定用药量。(020)

参考文献

脱毒蓖麻饼粕饲喂小鼠安全性试验 第2篇

1 材料与方法

1.1 材料

试验动物, 选用SPF级昆明雄性小白鼠 (体重16~18 g) , 中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。

基础日粮, 市售小鼠饲料。脱毒蓖麻饼粕, 采用天津科技大学食品工程与生物技术学院食品营养与安全省部共建教育部重点实验室选育的NP1、TPHH菌种发酵脱除其中的蓖麻碱和变应原。其主要成分含量:蛋白质35.67%、粗纤维33.87%、粗脂肪7.37%、粗灰分6.51%、蓖麻碱0.015%、变应原0.382%。蛋白质含量比脱毒前提高了1.5%, 蓖麻碱脱毒率为95%, 变应原脱毒率为88.3%。

1.2 饲养管理

小鼠在恒温环境中自由采食和饮水, 饲料及饮用水均经过湿热消毒处理。

1.3 方法

将小白鼠60只随机分为6组, 每组10只, 每笼5只。阴性对照 (C-N) 组和E3、E4、E5、E6组的脱毒蓖麻饼粕添加量分别为0、15%、20%、30%、40%;另一组为阳性对照 (C-P) 组, 全部用未脱毒的蓖麻饼粕饲喂。从正式试验开始前3天饲喂基础日粮。每日称重给料, 定量给水, 记录采食量。每3 d称量小鼠体重1次。饲喂32 d后摘除小鼠眼球, 采血后折颈致死。解剖, 精确称取小鼠各脏器并进行病理观察, 然后将肝脏、肾脏、脾脏固定制片, H.E.染色, 镜检分析。红细胞、白细胞用常规方法计数, 同时检测血清谷草转氨酶 (GOT) 和谷丙转氨酶 (GPT) 水平。

1.4 数据统计与分析

试验期间, 每天记录小鼠体重、采食量、饮水量并观察小鼠的临床表现, 试验数据用Excel、SSPS软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 小鼠体重变化

脱毒蓖麻饼粕的饲料有发酵饲料的特殊芳香味, 小鼠都比较喜食, 采食量明显高于对照组, 试验期间小鼠的体重变化情况见表1。

注:*表示与阴性对照组比较差异显著 (P<0.05) , △表示与阳性对照组比较差异显著 (P<0.05) 。

饲喂未脱毒蓖麻饼粕影响了小鼠体重, 阳性对照组出现了减重和死亡现象, 并在23~29 d相继死亡5只小鼠。E5组饲喂24 d后出现减重, E6组饲喂27 d后出现减重。纵观整个试验期, E3、E4组与阴性对照组生长曲线基本一致, 增重呈直线增长。

2.2 小鼠脏体比分析 (见表2)

注:*表示与阴性对照组比较差异显著 (P<0.05) , △表示与阳性对照组比较差异显著 (P<0.05) 。

由表2可知:肝体比阴性对照组最低, 与其他各组均差异显著 (P<0.05) ;脾体比以阳性对照组最高。E3组和E4组的脏体比最为接近。

2.3 血液学检验结果 (见表3)

注:*表示与阴性对照组比较差异显著 (P<0.05) , △表示与阳性对照组比较差异显著 (P<0.05) 。

由表3可知, 脱毒蓖麻饼粕的添加对小鼠血液指标有一定的影响, 血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平以阳性对照组和E6组相对较高, 说明蓖麻毒素对小鼠的肝脏有损伤, 会引发病变。

2.4 病理组织学观察结果 (见图1、图2、图3)

小鼠解剖时, 各组织器官没有发现异常, 器官外形及颜色均正常。但阳性对照组的骨髓变成黑灰色, E5组和E6组也有轻微的变灰现象。在对肝脏、肾脏、脾脏做病理检测时发现, 阴性对照组存在肝小叶结构, 肝细胞排列整齐, 肝细胞未见变性、坏死, 间质未见纤维组织增生及炎细胞浸润;阳性对照组肝组织病变明显, 肝小叶中央小静脉周围肝细胞淤肿明显, 部分胞浆疏松, 偶见空心变性, 小灶状肝细胞坏死, 病变明显, 表明蓖麻毒素对肝脏有损伤;E3组与阳性对照组相比, 肝细胞淤肿较轻, 病变范围缩小, 部分肝细胞胞浆疏松, 未见肝细胞坏死;E4组肝细胞形态大致与组织细胞变化类似, 偶见肝细胞小灶坏死;E5组与阳性对照组相比肝病变轻微, 范围较小;E6组与E5组大致相似, 仅部分中央小静脉周围肝细胞轻微淤肿, 部分肝细胞接近阳性对照组。

3 结论

千世杨对小鼠急性肝损伤的保护试验 第3篇

关键词：千世杨,四氯化碳,肝保护

千世杨是由姬松茸多糖、鱼腥草、茶多酚等中药经过提取而成的, 是传统人用抗癌中药组方, 具有显著的抗癌疗效。肝损伤是多种严重肝脏疾病发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径。各种有害因素所致的肝损伤可表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁淤积、肝纤维化、肝硬化及肝癌等[1]。四氯化碳 (CCl4) 是经典的化学性肝损伤毒物[2], 试验研究了千世杨对CCl4诱导的肝损伤小鼠的保护作用, 为更好地开发和利用千世杨药物提供试验依据。

1 材料

1.1 试验药物

千世杨, 由天津济世生物科技有限公司提供, 常温保存。

1.2 试验动物

昆明种小鼠50只, 雌雄兼用, 体重为18～22 g, 由北京军事医学院试验动物中心提供, 动物许可证号为SCXK- (军) 2007-004。

1.3 试剂

橄榄油 (分析纯) , 购自上海索莱宝生物科技有限公司;CCl4 (分析纯, 生产许可证号为津临许化-0489) , 购自天津市北方化玻购销中心。

丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 、总蛋白 (TP) 、白蛋白 (ALB) 、葡萄糖 (GLU) 、碱性磷酸酶 (ALP) 测定试剂盒, 均购自中生北控生物科技股份有限公司;丙二醛 (MDA) 、谷胱甘肽-S转移酶 (GSH-ST) 试剂盒, 均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 仪器

752分光光度计, 上海菁华科技仪器有限公司生产;5810R冷冻型台式大容量高速离心机, 德国Eppendokf公司生产;XMT-DA数显调节仪 (浙制02810169) , 余姚市亚星仪器有限公司生产;microlab 300半自动生化分析仪, 合普机电工程 (天津) 有限公司生产。

2 方法

2.1 模型的制备及给药

将50只小鼠随机分成5组, 每组10只。给药组每天灌胃给药1次, 连续给药7 d。空白对照组和模型组给予等体积的生理盐水。末次给药1 h后模型组和给药组按体重10 mL/kg腹腔注射0.2% CCl4植物油[3]。禁食24 h后摘眼球采血, 分别放入抗凝及促凝管中, 备用。快速处死小鼠, 取肝脏, 并在肝左叶相同部位取约 0.3 g组织, 放入冰冷的生理盐水中漂洗, 用滤纸拭干, 用组织匀浆器制成10%肝组织匀浆, 备用。

2.2 生化指标的检测

血清ALT、AST、TP、ALB、GLU、ALP和肝组织MDA、GSH-ST指标的测定均按试剂盒要求进行。

2.3 数据的统计学处理

应用SPSS11.0统计软件进行处理, 试验数据以平均数±标准差表示, 组间比较采用单因素方差分析。

3 结果与分析

3.1 千世杨对急性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性的影响 (结果见表1)

由表1可知, 腹腔注射CCl4可引起小鼠急性肝损伤, 模型组血清ALT、AST活性明显升高 (P<0.05) , 表明造模成功, 高剂量组的千世杨可抑制CCl4造成的ALT活性升高 (P<0.05) , 中、高剂量组的千世杨可抑制CCl4造成的AST活性升高 (P<0.05) 。提示中、高剂量千世杨对CCl4引起的小鼠急性肝损伤有保护作用。

注:同列数据肩标含相同字母表示差异不显著 (P>0.05) , 字母完全不同表示差异显著 (P<0.05) 。

3.2 千世杨对急性肝损伤小鼠血清TP和ALB水平的影响 (结果见表2)

注:同列数据肩标含相同字母表示差异不显著 (P>0.05) , 字母完全不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表2可知, 模型组小鼠血清TP和ALB水平与空白对照组相比都有所降低, 但是差异不显著 (P>0.05) 。低剂量的千世杨给药组与模型组相比TP含量有所升高但是差异不显著 (P>0.05) 。给药组ALB水平与模型组相比有所升高, 其中高剂量组达到显著水平 (P<0.05) 。

3.3 千世杨对急性肝损伤小鼠血清GLU和ALP活性的影响 (结果见表3)

注:同列数据肩标含相同字母表示差异不显著 (P>0.05) , 字母完全不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表3可知, 模型组与空白对照组相比GLU含量和ALP的活性均差异不显著 (P>0.05) 。

3.4 千世杨对急性肝损伤小鼠肝组织中MDA含量和GSH-ST活性的影响

注:同列数据肩标含相同字母表示差异不显著 (P>0.05) , 字母完全不同表示差异显著 (P<0.05) 。

由表4可知, 腹腔注射CCl4可引起小鼠急性肝损伤, 模型组小鼠的肝组织GSH-ST活性明显低于空白对照组 (P<0.05) , 表明肝损伤模型成立。而低、中剂量千世杨给药组使损伤小鼠的肝组织GSH-ST活性升高, 但2组间差异不显著 (P>0.05) 。模型组与空白对照组比较, MDA含量差异不显著 (P>0.05) 。

4 讨论

CCl4是典型的用于建立动物化学性肝损伤的亲肝性毒物, 其在肝脏经细胞色素 P450激活引起膜的脂质过氧化, 其脂质过氧化物在肝细胞的病变过程中发挥重要作用[4,5,6]。

AST和 ALT是肝损伤的标志酶, 在正常条件下, 这些酶存在于细胞质中, 当细胞膜受到损伤时就会释放出来, 在体液中流通, 故血清中 AST和 ALT活性的升高能够反映细胞膜结构的损伤[7]。试验结果表明, 灌胃千世杨能够抑制肝损伤小鼠血清 AST和 ALT活性的升高, 说明千世杨具有较为明显的改善肝脏功能的作用。

TP、ALB这2个指标反映了肝脏蛋白质合成及代谢的能力。如果蛋白质含量降低就表示肝脏合成功能受到损害, 其降低程度与肝损伤的严重程度成正比。在临床上, TP、ALB常用来作为肝脏疾病的诊断指标[8]。在试验中, 模型组与空白对照组相比小鼠ALB和TP含量都有所降低但差异不显著 (P>0.05) , 高剂量组ALB水平与模型组相比达到显著水平 (P<0.05) , 说明千世杨具有一定的肝保护作用。

ALP是肝脏细胞内的酶, 一般情况下肝内酶的活性比血清高1 000～5 000倍。CCl4代谢产生的自由基首先使肝细胞膜出现不同程度的损伤, 造成细胞内液外流, 由CCl4中毒引起动物ALP水平升高[9]。在试验中, 模型组和给药组ALP水平出现显著升高的趋势, 但差异不明显。模型组和给药组血糖含量也都高于空白对照组, 但各组差异也不显著。

脂质过氧化程度可以通过脂质过氧化产物MDA含量来间接评价[10]。MDA含量高低间接反映机体组织或细胞受自由基攻击和损伤的严重程度[11]。试验造模并未引起小鼠肝组织中MDA含量升高, 说明MDA损伤不明显, 试验未能考察出千世杨对MDA含量的影响。

GSH-ST具有清除过氧化物和解毒等多种功能, 可作为肝脏损伤的敏感指标, 当肝细胞受损害时, 肝细胞合成的GSH-ST明显减少, 肝组织活性降低[12]。在试验中, 模型组GSH-ST活性明显低于空白对照组, 而给药组GSH-ST活性有所升高, 说明了千世杨的肝保护作用。

参考文献

[1]彭维兵, 李国强, 孙伟之, 等.2种新型18β-甘草次酸修饰物对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用[J].中国海洋大学学报, 2011, 41 (1/2) :133-136.

[2]张红梅, 王立林, 赵杰, 等.不同给药途径的云芝多糖抗小鼠CCl4肝损伤的试验研究[J].现代预防医学, 2009, 36 (17) :3332-3334.

[3]许青松, 宫德正, 谭成玉, 等.壳寡糖对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用[J].中国海洋药物杂志, 2006, 25 (5) :31-33.

[4]茹仁萍, 尤琳雅, 陈晓瑾.18α、18β-甘草酸及其不同配比物对CCl4肝损伤大鼠的影响[J].中华中医药学刊, 2011, 29 (2) :355-358.

[5]LESAGE G D, BENEDETTI A G, LASER S, et al.A cute carbontetrachloride feeding selectively damages large, but not small cholan-giocytes from normal rat liver[J].Hepatology, 1999, 29 (2) :307-319.

[6]杨小林, 陈平.竹节参多糖、总皂苷对小鼠急性肝损伤保护作用的研究[J].中国中医基础医学杂志, 2011, 11 (1) :65-66.

[7]YANG Y, WANSHUN L, BAOQIN H, et al.Protective effects of chi-tosan oligosaccharide and its derivatives against carbon tetrachloride-induced liver damage in mice[J].Hepatol Res, 2006, 35 (3) :178-184.

[8]齐艳萍.鹿茸对小鼠急性肝损伤的修复作用及相关机理研究[D].哈尔滨:东北林业大学, 2008.

[9]张国蓉, 王燕, 刘安军.富硒酵母对CCl4肝损伤小鼠保护作用的研究[J].食品科技, 2009, 34 (3) :118-125.

[10]GIROTTI A W.Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effectoraction in biological systems[J].J Lip Res, 1998, 39 (8) :1529-1542.

[11]许金鹏, 张慧慧, 李朝品, 等.原卟啉钠对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制[J].中国试验方剂学杂志, 2011, 17 (5) :168-172.

苦参碱对小鼠的亚急性毒性试验 第4篇

目前,关于苦参碱在人类和畜禽疾病防制中的研究较广泛,但对其毒性作用还缺乏重视和了解。对小鼠的急性 毒性试验 研究表明,苦参碱对 神经系统[9,10]、肾脏和肝脏[11]具有毒副作用,可导致小鼠神经系统退行性变化,肝脏水肿、点状坏死,肾脏水肿、出血,脏器指数升高。目前,有关苦参碱的亚急性毒性试验研究报道较少,本研究通过对小鼠进行亚急性毒性试验,确定苦参碱对小鼠亚急性毒性作用的主要靶器官和最低无毒剂量,以期为深入了解苦参碱的毒性作用机制及临床应用提供依据。

1材料

1. 1样品

苦参碱药品,生产批号 为20110419,纯度 ( HPLC) ≥98% ,购自宁夏紫荆花药业有限公司。

1. 2试验动物

4 ~ 5周龄昆白系小鼠40只,雌雄各半,体重为 ( 21 ± 3) g,购自宁夏医科大学动物实验中心。

1. 3主要仪器

生物显微镜( 型号为BX41—32H02) ,购自日本OLYMPUS公司; 石腊切片机( 型号为RM2235) ,购自德国莱卡公司; 电热鼓风烘箱( 型号为DHG9140A) , 购自上海琅玕实验设备有限公司; 电子天平( 型号为AL104) ,购自瑞士梅特勒公司; 全自动动物血液细胞分析仪( 型号为BC—2800Vet) ,购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

2方法

2. 1分组及染毒

将40只小鼠随机分为4组( 第Ⅰ ~ Ⅳ组) ,每组10只,雌雄各半,按组和性别分笼饲养。根据前期急性毒性试 验结果,确定苦参 碱对小鼠 的LD50为247 mg / kg,参照魏伟等[12]方法确定每组给药剂量, 第Ⅰ组为高剂量组( 1 /10 LD50,24. 7 mg /kg) 、第Ⅱ组为中剂量组( 1 /50 LD50,4. 9 mg /kg) 、第Ⅲ组为低剂量组( 1 /100 LD50,2. 47 mg /kg) 、第Ⅳ组为空白对照组( 灌服同等体积的生理盐水) 。各组均采用经口灌胃的方式给药,灌胃前4 h停止饲喂饲料,自由饮水, 连续灌胃给药30 d。各组灌胃后均自由饮水、采食。 灌胃期间,逐日观察并记录各组小鼠的精神状态、饮食、行为活动及临床症状等变化。

2. 2体重的测定

初次灌胃给药前称各组小鼠体重,之后每隔7 d称其体重,并计算平均日增重,计算公式: 平均日增重 = ( 终末体重 - 初始体重) /饲喂时间。

2. 3血液生理指标的测定

灌胃给药30 d后,断尾采血20 μL,采用全自动动物血液细胞分析仪测定小鼠红细胞( RBC) 数、白细胞( WBC) 数、血小板( PLT) 数、血红蛋白( HGB) 浓度和淋巴细胞( Lym) 数。

2. 4脏器系数的测定

灌胃给药30 d后,脱颈椎处死各组小鼠,处死前空腹4 h,剖检后观察各器官有无明显的病理变化,然后采集脑、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏等器官,用滤纸吸干表面水分后称重,并计算脏器系数,计算公式: 脏器系数 = 脏器重量/小鼠体重 × 100% 。

2. 5病理组织学观察

称重后的各器官立即用10 % 甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,H. E. 染色,进行组织病理学观察。

2. 6统计学分析

试验数据用± s表示,应用SPSS 17. 0统计软件对试验数据进行多重比较和方差分析。

3结果与分析

3. 1一般症状

第Ⅱ ~ Ⅳ组小鼠在连续灌胃30 d后,饮水、采食均无异常,行动自如,毛色光亮。第Ⅰ组小鼠在给药初期饮水、采食等行为与第Ⅳ组比较无明显差异,但在连续给药20 d后,小鼠活动明显减少,精神沉郁, 对外界反应性下降,试验期间无小鼠死亡。

3. 2苦参碱对小鼠体重的影响( 结果见图1和表1)

由图1可知,给药初期,第Ⅰ ~ Ⅳ组小鼠体重均呈增长趋势,各剂量组小鼠体重增长快于第Ⅳ组,第 Ⅰ、Ⅱ组体重增长相差不大。连续给药20 d后,第 Ⅰ ~ Ⅲ组小鼠体重增长减缓。

注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相( P > 0. 05) 。

由表1可知,小鼠日增重与每日给药剂量有关, 剂量越高日增重越高,统计分析结果表明,第Ⅰ组与第Ⅳ组相比差异显著( P < 0. 05) 。

3. 3苦参碱对小鼠血液生理指标的影响 ( 结果见表2)

由表2可知,第Ⅰ组小鼠的白细胞数与第Ⅳ组相比差异显著( P < 0. 05) ,第Ⅱ、Ⅲ组与第Ⅳ组相比差异不显著( P > 0. 05) 。小鼠血红蛋白浓度、红细胞数、血小板数和淋巴细胞数各剂量组与第Ⅳ组相比差异均不显著( P > 0. 05) 。

3. 4苦参碱对小鼠脏器系数的影响( 结果见表3)

注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相( P > 0. 05) 。

%

注: 同列数据肩标字母完全不同表示差异显著( P < 0. 05) ,含相( P > 0. 05) 。

由表3可知: 各组小鼠心脏、肺脏、脾脏器系数与第Ⅳ组相比均差异不显著( P > 0. 05) ; 第Ⅰ组小鼠肝脏、肾脏器系数与第Ⅳ组相比差异显著( P < 0. 05) , 第Ⅱ、Ⅲ组小鼠肝脏、肾脏器系数与第Ⅳ组相比均差异不显著( P > 0. 05) 。说明随着给药剂量的增加,脑脏器系数逐渐升高。

3. 5病理剖检和组织学变化

各组小鼠心脏、脾脏均无明显眼观病变,部分剂量组与第Ⅳ组小鼠的肺脏充血、出血。第Ⅰ组小鼠肝脏、脑、肾脏均有不同程度的肿大,肾脏肿大较明显, 边缘钝圆,表面光滑,有散在出血点。

第Ⅱ、Ⅲ组小鼠与第Ⅳ组相比各器官无明显病理变化。肝脏血管周围实质细胞结构较完整,可见明显的肝细胞索,距血管较远的部分肝细胞肿胀、拥挤、有空泡变化,细胞核溶解、消失,肝小叶结构紊乱,肝细胞索紊乱、窦状隙不明显,有淋巴细胞浸润,见233页彩图2A; 肾脏部分区域出血、坏死,见233页彩图2B,髓质和皮质均有炎性细胞浸润,肾小球肿大,肾小管壁增厚,管腔变小,部分上皮细胞坏死、脱落、形成细胞管型,见233页彩图2C; 局部大脑神经细胞变性、坏死,细胞核结构不清,尼氏小体消失,局部有小胶质细胞侵入神经细胞体内,坏死处被增生的胶质细胞填充,胶质细胞产生胶质纤维,胶质细胞体积增大, 胞浆透亮,血管周围 孔隙轻度 增大,见233页彩图2D。

4讨论

小鼠试验 第5篇

1 材料

1.1 主要试剂及仪器设备

党参、淫羊藿、当归、枸杞、何首乌、陈皮等中药均购于保定安国药市;环磷酰胺 (CTX) 批号为0901311, 山西泰盛制药有限公司生产;IL-2和TNF-α进口分装ELISA试剂盒为晶美生物公司产品;IgG标准品, 批号为110624, 北京博奥森生物技术有限公司生产;左旋咪唑, 批号为070105, 常州动物保健品有限公司生产;紫外可见分光光度计购于北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 试验动物

清洁级纯昆明种小鼠, 雌雄兼用 (18±2) g, 由河北北方学院实验动物中心提供。

1.3 中药水煎液的制备

党参20 g、淫羊藿16 g、当归10 g、枸杞8 g、何首乌10 g、桔皮10 g、升麻10 g、柴胡10 g, 自来水浸泡2 h, 先后加自来水800 m L和400 m L分别煮沸1 h和30 min, 合并两次药液, 纱布过滤, 水浴蒸发至100 m L得归参汤水煎剂 (约含生药1 g/m L) 。

2 方法

2.1 归参汤对小鼠免疫器官重量的影响

采用重量法。取小鼠50只, 随机分成5组, 分组情况见表1, 给药剂量:生理盐水、归参汤、左旋咪唑灌胃剂量分别为每10 g体重0.2 m L、每千克体重44 g、每千克体重0.1 g, 环磷酰胺组于第1天、第3天、第5天皮下注射环磷酰胺, 每千克体重0.03 g, 连续给药7 d, 末次给药1 h后脱臼处死, 取脾脏并称其湿重计算脾脏指数, 结果见表1。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

2.2 归参汤对小鼠血清IgM含量的影响

取小鼠40只, 按表2分组并给药。每日给药1次, 连续7 d, 于试验第2天给药后用20%的绵羊红细胞 (SRBC) 免疫小鼠, 腹腔注射0.2 m L/只, 环磷酰胺组于第1天、第3天、第5天皮下注射环磷酰胺, 按每千克体重0.03 g。末次给药后1 h眼静脉丛采血制备血清, 离心后取上清液在540 nm处测定OD值, 再计算IgM含量, 结果见表2。

2.3 归参汤对小鼠血清IgG含量的影响

采用双抗夹心ELISA法。动物分组见表2, 给药及免疫方法与重量法相同, 于末次给药后1 h眼眶取血制备血清, 采用双抗夹心ELISA法检测IgG含量。结果见表2。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

2.4 归参汤对小鼠血清中IL-2和TNF-α的影响

采用双抗夹心ELISA法。取昆明种小鼠40只, 随机分为4组, 动物分组及给药见表3。除生理盐水组外, 其他各组小鼠在给药后第8, 10, 12天于皮下注射环磷酰胺, 按每千克体重0.03 g, 制作免疫抑制模型。给药后第15天, 所有小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后, 眼静脉丛取血, 分离小鼠血清, 按试剂盒说明书操作, 用ELISA方法测定IL-2和TNF-α的含量, 结果见表3。

注:**表示与生理盐水组比较差异极显著 (P<0.01) , *表示与生理盐水组比较差异显著 (P<0.05) ;△△表示与环磷酰胺组比较差异极显著 (P<0.01) , △表示与环磷酰胺组比较差异显著 (P<0.05) 。

3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计分析软件进行数据处理, 计量资料以均数±标准差 (X±S) 表示, 组间比较采用方差分析, P<0.05为有统计学意义。

4 结果

4.1 归参汤对小鼠免疫器官重量的影响

由表1可以看出, 中药组与生理盐水组试验末体质量相比差异显著, 说明中药组对小鼠有一定的促生长作用, 注射环磷酰胺组的小鼠试验末体质量出现负增长 (-0.08%) , 而注射环磷酰胺+归参汤组增重率是2.33%, 脾脏指数与环磷酰胺组相比差异极显著 (P<0.01) , 说明归参汤能颉颃由环磷酰胺所导致的体重下降, 但效果不及阳性对照组。

4.2 归参汤对小鼠血清IgG、IgM含量的影响

由表2可见, IgG和IgM含量测定中, 归参汤组与生理盐水组相比差异极显著 (P<0.01) , 环磷酰胺+归参汤组与环磷酰胺组相比差异极显著 (P<0.01) 。

4.3 归参汤对小鼠血清中IL-2和TNF-α含量的影响

由表3可见, 环磷酰胺组与生理盐水组相比, IL-2和TNF-α均显著下降, 归参汤组和左旋咪唑组与环磷酰胺组比较均能显著提高IL-2和TNF-α的含量。

5 讨论

试验较全面地从免疫器官重量、特异性免疫和非特性免疫等方面对归参汤进行了研究。结果显示, 归参汤对正常小鼠脾脏指数没有显著影响, 而对环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的脾脏指数有一定程度的促恢复作用, 能在一定程度上颉颃环磷酰胺造成的小鼠体重下降、脾脏增生等毒副作用。

淋巴细胞是机体免疫细胞的重要成员, 是构成免疫器官的基本单位, 在免疫应答过程中起着核心作用。B淋巴细胞是体内唯一能产生抗体免疫球蛋白分子的细胞。成熟的B淋巴细胞可分泌抗体, 发挥体液免疫功能, 因此, 体内IgG和IgM水平可反映机体的体液免疫功能。成熟的B淋巴细胞可以分泌特异性的抗体来中和抗原, 发挥体液免疫功能。试验结果显示, 归参汤能显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠体内的IgG和IgM水平, 从而发挥体液免疫功能。

小鼠试验 第6篇

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

LB琼脂培养基, 营养琼脂, 营养肉汤, 淡薄培养基, 生化培养基 (如葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖) , VP试剂, 吲哚试剂, 甲基红试剂, 革兰氏染色试剂和孔雀绿染色试剂均按常规方法自制。

1.1.2 试验小鼠

昆明系小白鼠, 购自宁夏医学院试验动物中心, 共计51只, 分为17组, 每组3只。

1.2 方法

1.2.1 增菌培养

将来源于偏僻地区健康鸡屠宰后, 分别从小肠上段、小肠下段、大肠上段、大肠下段和盲肠靠近黏膜处无菌地取少许内容物, 并刮取少许黏膜、黏液, 接种于营养肉汤培养基中, 在恒温培养摇床中进行有氧增菌培养。

1.2.2 分离纯化

用增菌培养后的菌液在营养琼脂平板上划线培养, 从中挑取形态不同的菌落再进行划线培养分离, 将分离纯化的菌落分别接种于营养肉汤培养基和营养琼脂培养基斜面上, 培养24～48 h后, 保存于4℃冰箱中, 待进一步鉴定。

1.2.3 菌株的鉴定

1.2.3. 1 革兰氏染色及菌体形态特征

取干净玻片, 用接种环取1环生理盐水于玻片上, 而后挑选在营养琼脂平板上呈圆形、表面湿润、边缘列齿且不透明的菌落均匀涂于玻片上, 待干燥后进行革兰氏染色, 于光学显微镜下观察菌体形态及染色结果。

1.2.3. 2 生化试验

根据以上结果, 筛选出革兰氏阳性菌株, 进行M.R.试验、V.P.试验、吲哚试验以及葡萄糖产酸产气试验和麦芽糖、乳糖、蔗糖等的产酸试验, 37℃培养24～48 h。

1.2.3. 3 芽孢生成试验

为了确定待测菌株是否产生芽孢, 进行了芽孢生成试验。用淡薄培养基培养筛选菌株72 h后, 用无菌小管分装3 ml菌液, 分别于85℃水浴保温15、20和25 min, 再将菌液接种于平板, 培养过夜, 进行芽孢染色。

1.2.3 小鼠毒性试验

将筛选出的8株芽孢杆菌接种于肉汤培养基中, 在恒温培养摇床中培养72 h, 细菌计数。饲喂的细菌正常量为2 500万个芽孢/ (只·d) , 加倍量为芽孢杆菌5 000万个芽孢/ (只·d) , 备用。小鼠试验分组, 随机按3只小鼠为1组, 共分为17组, 其中包括对照组1组、每株菌株正常量、加倍量各1组。试验前5 d, 进行正常饲喂, 使小鼠适应新环境, 每天测定小鼠的进食量和饮水量。试验期为20 d, 通过饮水给试验组小鼠饲喂测试菌种, 每天观察2次, 保证食物供应充足。试验开始和结束时, 为每只小鼠称重 (始重和末重, 计算每组小鼠体重的平均值) 。试验结束时将小鼠处死, 观察肝脏和肾脏的色泽以及纵切剖面, 记录结果。

2 结果

2.1 革兰氏染色及菌体形态特征

试验共分离出菌株42株, 经染色镜检从中筛选出8株为革兰氏阳性菌。经涂片染色镜检可知, 菌体呈杆状, 可见芽孢, 位于菌体中内或一端。

2.2 芽孢生成试验

将芽孢生成试验培养的菌落进行孔雀绿染色。结果表明, 所鉴定菌株均有芽孢生成, 芽孢椭圆或柱状, 中生或端生。

2.3 生化试验

对筛选的8个菌株进行多项生化试验, 结果见表1。M.R.试验、V.P.试验、吲哚试验均为阳性, 葡萄糖产酸、蔗糖产酸均为阳性, 乳糖产酸均为阴性, 葡萄糖产气试验均为阴性, 麦芽糖产酸根据菌株不同而不同。参照《伯杰细菌鉴定手册》第八版、《微生物分类学》等对所选菌株进行鉴定, 初步鉴定此8株菌均为芽孢杆菌[3,4]。这8株细菌编号为H01、H02、H03、H04、H05、H06、H07、H08。

注:“+”为阳性, “-”为阴性。

2.4 小鼠毒性试验

将筛选出的8株芽孢杆菌饲喂小鼠, 进行小鼠毒性试验, 结果见表2。从表2可看出, 除H08菌株正常饲喂量组的体重增重率略低于对照组外, 其他各组的体重增重率均高于对照组, 这表明本次试验所选用的绝大多数菌种有改善消化道微环境、促进消化和吸收的功能。从表2还可看出, 总体菌种按加倍量饲喂的效果都要比按正常量饲喂的效果好。在加倍量组中H02和H06体重增重率最为明显, 达到了96.06%和92.32%。

注:表中A为对照组, 始重和末重为计算每组小鼠体重的平均值。

通过对肝脏和肾脏的色泽以及对这些脏器纵切剖面的观察, 试验组小鼠的肝脏和肾脏均与对照组一致, 未发现脏器肿大和任何病变。这表明本次试验所选用的测试菌种均较安全, 不会造成肝脏和肾脏的肿大和中毒性病变。

3 小结与讨论

3.1 本试验从鸡肠道分离出42株菌种, 通过对菌种菌落进行培养特性、形态观察、生化试验以及芽孢生成试验, 初步鉴定出8株细菌为芽孢杆菌。需氧的芽孢杆菌在肠道中主要通过生物夺氧维持肠道生态平衡, 它在肠道中短时间定植后, 可以消耗大量氧气, 维持肠道的厌氧环境, 为消化道中的乳杆菌、肠球菌和乳球菌等兼性厌氧菌及拟杆菌等厌氧菌提供更为理想的生长环境, 增强肠道对厌氧菌的定植能力[5]。此外, 芽孢杆菌可产生淀粉酶, 将淀粉转化为单糖, 再由肠道中其他菌种将这些单糖转化为乳酸, 降低肠道中的pH值, 从而起到抑制病原菌的作用。芽孢杆菌配合乳杆菌、肠球菌、乳球菌和拟杆菌制成动物微生态制剂, 可有效抑制消化道中致病菌繁殖, 改善消化道的微环境, 代替抗生素预防和治疗畜禽消化道疾病[6]。

3.2 用筛选出的8株芽孢杆菌对小白鼠进行为期20 d的正常量和加倍量的饲喂, 从试验结果可以看出, 试验组小鼠的肝脏和肾脏均未出现肿大或病变, 这表明本次试验所选用的菌种均安全, 可作为动物微生态制剂的菌种。此外, 除个别试验组外, 绝大多数试验组小鼠的体重增幅高于对照组, 尤其是加倍量饲喂菌种试验组小鼠的体重增幅更高。微生物之间的相互关系较复杂, 可简单分为对抗性或互利性, 其中还存在着各种类型。微生物种群相互作用的基本类型有中性作用、竞争作用、偏害作用、偏利作用、寄生作用、互利作用等。从动物体分离得到的有益芽孢杆菌对肠道病原细菌的体内、体外拮抗作用已有研究报道[7]。微生物种群间的拮抗机理, 目前认为, 产生有机酸、抗生 (菌) 素及过氧化氢等物质对病原细菌有抑制作用, 占位性作用, 对营养、氧气的竞争, 从而对病原细菌的排斥。本试验结果表明, 所选用的菌种有改善消化道的微环境、促进消化和吸收的功能, 至于将这些芽孢杆菌应用于鸡体内将对哪些致病菌有生物拮抗作用, 还有待进一步证实。

参考文献

[1]金升藻, 金巍, 李红梅.微生态制剂研究进展与应用前景[J].湖北畜牧兽医, 2005, (3) :51-53.

[2]陈旭东, 马秋刚, 计成, 等.芽孢杆菌和果寡糖在仔猪营养中的应用[J].中国饲料, 2004, (3) :24-26.

[3]R.E.布坎南, N.E吉本新.伯杰细菌鉴定手册第八版[M].北京:科学出版社, 1984, 729-758.

[4]张继忠.微生物分类学[M].上海:复旦大学出版社, 1990, 44-45, 62-72, 89-109.

[5]赵明军, 谌南辉.动物微生态制剂研究进展[J].山东家禽, 2002, (6) :42-43.

[6]杨汉博, 周安国.饲用芽孢杆菌研究进展[J].饲料博览, 2002, (10) :7-10.

小鼠试验 第7篇

1 材料与方法

1. 1 主要试剂

砷酸盐,购自南京建成生物工程研究所; 白藜芦醇,购自上海葳环进出口有限公司。

1. 2 试验动物及分组

将21只小鼠( 购自哈尔滨兽医研究所) 随机分为3组,即对照组、砷组、砷 + 白藜芦醇组,每组7只。所有药物均通过腹腔给药,连续给药5 d,在第6天采样测定。对照组按体重给予生理盐水2. 1 mL /kg,砷组按体重腹腔注射砷酸盐2. 1 mg /kg,砷 + 白藜芦醇组按体重腹腔注 射砷酸盐2. 1 mg /kg、白藜芦醇2. 1 mg / kg。

1. 3 样品的采集及处理

最后一次给药24 h后将小鼠处死,采集卵巢组织样品,用眼科小剪尽快剪碎,倒入组织匀浆机中制成组织匀浆,离心组织匀浆,取上清液待测。

1. 4 各项指标的检测

采用超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧物酶( GSH - Px) 、丙二醛( MDA) 、活性氧( ROS) 试剂盒( 均购自南京建成生物工程研究所) 对样品进行测定。取0. 3 g组织样品,加入5 mL硝酸 - 高氯酸( 体积比1∶3) 进行消化,采用原子荧光光谱法测定总砷含量,测定条件为5% 盐酸载液和2% 还原剂( 0. 5%氢氧化钠 + 2% 硼氢化钾) ,参照GB5009. 11—2003中的方法进行测定。

2 结果与分析

2. 1 卵巢组织中 SOD、GSH - Px 活性、MDA 及 RO水平的测定

2. 1. 1 卵巢组织中 SOD 和 GSH - Px 活性的测定结果见图 1、图 2。

由图1和图2可知: 对照组相比,砷组卵巢组织中SOD和GSH - Px活性显著降低( P < 0. 05) ; 砷 +白藜芦醇组的各抗氧化物酶活性接近正常水平,并与砷组比较差异显著( P < 0. 05) 。

2. 1. 2 卵巢组织中 ROS 和 MDA 水平的测定 结果见图 3、图 4。

由图3和图4可知: 与对照组相比,砷组卵巢组织中ROS和MDA水平显著增高( P < 0. 05) ; 砷 + 白藜芦醇组中的白藜芦醇能很好地减弱这一变化趋势,与砷组对比差异显著( P < 0. 05) 。

2. 2 卵巢组织中总砷含量的测定( 结果见图 5)

由图5可知: 与对照组相比,砷组小鼠卵巢组织中砷浓度增加显著( P < 0. 05) ; 与砷组相比,砷 + 白藜芦醇组小鼠卵巢组织中砷浓度显著降低 ( P <0. 05) 。

3 讨论

氧化应激在砷暴露中是常见的并发症,砷诱导的这些并发症的机理尚不清楚,但很有可能和过多的ROS相关。本试验结果表明,ROS水平变化显著,证实砷暴露可导致机体的氧化应激。细胞膜和脂质极易受自由基所诱导的氧化反应的影响[1],MDA是脂质过氧化的第2种产物,其水平的变化是组织氧化损伤的指示器[2]。

由于自由基的有害作用,哺乳动物细胞在进化过程中形成了一系列的抗氧化酶类来保护细胞免受氧化应激损伤。本试验结果表明,SOD和GSH - Px活性下降,提示砷暴露使抗氧化酶类防御体系的防御能力减弱,导致机体氧化应激。

白藜芦醇的重要生物功能是抗氧化潜能,它既是自由基清除剂又具有抗氧化潜力,可以促进一系列抗氧化酶活性的增加,这与本试验结果是一致的。R.Zini等[3]最早提出白藜芦醇是一种自然的抗氧化物,有抑制脂质过氧化的作用。同时,白藜芦醇还具有很强的清除ROS的能力[4],本试验结果与以往的研究结论一致。另外,白藜芦醇可以明显降低砷在卵巢组织中的蓄积水平,可能是由于白藜芦醇对砷在组织内的代谢产生了一定影响。

参考文献

[1]MINOTTI G.Metals and membrane lipid damage by oxy-radicals[J].Ann N Y Acad Sci,1988,551:34-44.

[2]OZKAN O V,YUZBASIOGLU M F,CIRALIK H,et al.Resveratrol,a natural antioxidant,attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury in rats[J].Tohoku J Exp Med,2009,218(3):251-258.

[3]ZINI R,MORIN C,BERTELLI A,et al.Effects of resveratrol on the rat brain respiratory chain[J].Drugs Exp Clin Res,1999,25(2/3):87-97.