色素含量范文

2024-06-21

色素含量范文(精选8篇)

色素含量 第1篇

关键词:原花色素,含量测定,分光光度法,香草醛

葡萄籽提取物中最重要的也是迄今研究最为广泛的成分是原花色素,它是儿茶素、表儿茶素及其没食子酸脂的一系列聚合体[1,2],它对人体由于氧化引起的疾病具有治疗和预防作用[3,4]。由于其组分是多种成分的混合物,用薄层层析法[5]只能对其进行简单的定性分析,分光光度法用于测定原花色素含量已有报道,但不同的显色条件对含量的计算影响较大[6,7],所以进行进一步的研究,确定合理的显色条件具有重要的意义。

本文研究了以香草醛-盐酸溶液为显色剂。确定了合理的显色条件,具有显色时间较短,操作简易,结果可靠等优点。

1 实验部分

1.1 实验材料及仪器

原料及试剂:原花色素标准品(样品、>95%),天津市尖峰有限公司;甲醇、盐酸、香草醛等试剂均为分析纯。

仪器:756型紫外-可见分光光度计,上海第三分析仪器厂。

1.2 实验过程

1.2.1 最大吸收波长的确定

显色剂的配制采用一定浓度的香草醛甲醇和盐酸甲醇溶液混合而成。配制浓度分别为0.5、1.00、1.50mg/10.00mL的香草醛-甲醇溶液和浓度分别为1.50、3.00、4.50mL/10.00mL的盐酸-甲醇溶液,选取一定浓度的溶液混合得到显色剂。

取0.1mL标准品置于5mL容量瓶中,用显色剂定容后,无水甲醇作参比,在0~850nm范围内进行全波长扫描,绘制吸光度-波长曲线。

1.2.2 显色条件的确定

显色剂的配制采用一定浓度的香草醛-甲醇和盐酸-甲醇溶液混合而成,本实验设计了香草醛浓度(A)、盐酸的浓度(B)、显色剂用量(C)和反应温度(D)四个主要因素对显色时间的影响,实验设计见表1。

1.2.3 标准曲线测定

在最佳显色条件下测定了原花色素水溶液的标准曲线(0.50~3.00mg/mL)。

2 实验结果及讨论

2.1 原花色素的显色机理

与儿茶素相似,其上的羟基可以和香草醛发生缩合反应,在浓酸作用下形成的产物变为有色的正离子[6],根据此正碳离子吸光度可测定出原花色素含量,反应式如图1所示。

由图2所示的吸收曲线可知,最大吸收波长在500nm处,以后的实验在该波长下测定。

2.2 显色条件对显色时间的影响

通过正交实验分析可知,4因子中温度对显色时间的影响最大,各因子的重要性依次为:D→B→A→C,通过对温度的单因素实验证明, 30℃时显色结果的重现性较差,可能是由于原花色素在较高温度下易于氧化而引起的。结合正交实验结果和单因素实验的结果,我们选用最佳显色条件为香草醛浓度0.15mg/10mL,盐酸浓度4.50mL/10mL,显色剂用量5.00mL,显色反应的温度为(20.0±1)℃,该条件下显色时间为15min。

2.3 标准曲线测定

在最佳显色条件下原花色素水溶液的标准曲线,结果见图3。当测定浓度在 0.50~3.00mg/mL之间时,线性方程为:y=0.2934x+0.0174,相关系数r=0.9987,回归关系显著。

2.4 稳定性试验

为了验证此方法的可靠性,对浓度为1.00mg/mL的样品进行测定,确定显色时间为15min。

2.5 准确度实验

向葡萄籽提取物溶液中添加原花色素标准品(1.03mg/mL、2mL),平行四次,计算回收率,结果如下表所示。

2.6 精密度试验

为了验证此方法的可靠性,对浓度为2.00mg/mL的样品重复测定4次,结果如表4所示,4次测定的最大相对标准偏差在1.23%之内。

3 结 论

通过实验发现,用分光光度法测定原花色素含量时,香草醛-甲醇-盐酸体系是较好的显色剂,显色温度对测定结果的影响较大,最佳显色条件为香草醛浓度0.15mg/10mL,盐酸浓度4.50mL/10mL,显色剂用量5.00mL,显色反应的温度为(20.0±1)℃,该条件下显色时间为15分钟,比文献报道值[6,7](15h)大大缩短了浓度测量时间,对原花色素的浓度测定可以起到重要的作用。

参考文献

[1]Jean-Marc Souquet,Veronique Cheynier,Franck Brossaud,et al.Poly-meric proanthocyanidins from grape seeds.Phytochemistry,1996,43(2):509-512.

[2]Corinne Prieur,Jacques Rigaud,Veronique Cheyiner,et al.Oligomericand polymeric procyanidins from grape seeds.Phytochemistry,1994,36(3):781-784.

[3]黄梅,赵余庆,吴春福.葡萄中抗氧化物质的作用及其机制研究进展.中草药,2003,34(3):285-287.

[4]Pignatelli P,Pulcinelli F M,Celestini A,et al.The flavonids quercetinand catechin synergistically inhibit platelet function by antagonizing theintercellular production of hydrogen peroxide.Am J Clin Nutr,2000,72(5):1150-1155.

[5]吕丽爽,曹栋.薄层色谱法分离葡萄籽中的低聚原花青素.无锡轻工大学学报,2001,20(1):65-67.

[6]姚开,何强,吕远平,等.葡萄籽中原花青素含量不同测定方法比较.化学研究与应用,2002,14(2):230-232.

色素含量 第2篇

关键词:大丽花;盛花期;叶绿素;类胡萝卜素

中图分类号:S682.2+61.01 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010)05-0040-04

大丽花(Dahlia pinnata Cav.)是菊科大丽花属多年生宿根草本花卉,原产于墨西哥和危地马拉地带,花姿优美、花型多样、色彩绚丽、花期长、品种繁多,被誉为花卉中的“宠儿”。目前,大丽花成为全世界栽培最广的观赏植物之一,现有大丽花品种3万余个,其中栽培品种3 000余个[1,2]。山东省果树研究所于2005年起先后引进300多个优良大丽花品种,经过几年栽培研究,初步选育出12个花型优美、颜色艳丽、适应性强、观赏价值高的品种。

盛花期是植物花器官观赏价值最高的阶段,延长植物的盛花期具有明显的商业和社会价值[3]。光合作用是植物生长的重要能量来源和物质基础,叶绿素是植物光合作用的主要色素,植物叶片叶绿素含量是直接反映植物光合能力的一项重要指标[4]。叶绿素含量在一定程度上能反映植株的光合强度、营养水平及健康状况[5,6]。类胡萝卜素是植物光合作用的重要辅助色素和光氧化作用的保护剂[7]。盛花期的长短受光合产物多少的影响,也与光合色素含量高低密切相关。因此,研究大丽花盛花期间叶片中光合色素含量的变化具有至关重要的作用。有关大丽花品种的栽培[8]、病毒病[9,10]、基因组[11]等方面的研究已有报道,但大丽花花期光合色素含量与盛花期长短关系的研究尚未见相关报道。本试验以选育出的大丽花品种为试材,研究其盛花期叶片中叶绿素、类胡萝卜素含量的变化,探明光合色素含量高低调控大丽花开花的机理,从而为生产中提高大丽花观赏价值提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验于2007~2009年在山东省果树研究所观赏园艺室种质资源圃进行,3月上中旬开始对贮藏的大丽花块根进行催芽、扦插,5月中旬定植在大田中,常规管理。选取的优良大丽花品种特征见表1。

在大丽花盛花期(9月20日开始),选取每个品种枝条上相同叶位、无病虫害的功能叶(从基部数5~6片叶),每隔5 d采集1次,直至大丽花花谢(11月1日)。采后立即放入冰壶中带回实验室进行相关指标的测定。

1.2 试验方法

采集的叶片剪碎后混匀,称取0.1 g样品,用10 ml 80%丙酮遮光浸提24 h,用UV-2450型分光光度计分别在663、646、470 nm下比色。根据邹琦[12]方法计算叶绿素和类胡萝卜素含量,重复3次。文中数据由3年统计的平均值计算得出。

2 结果与分析

2.1 不同大丽花品种盛花期叶绿素a含量的变化

由图1看出,象牙塔、霍莉、斯温顿和塞尔维亚叶片中叶绿素a含量呈现降→升→降的变化趋势,为双峰曲线。象牙塔和塞尔维亚叶片中叶绿素a含量分别在盛花初期和第12天左右出现峰值,霍莉和斯温顿分别在盛花初期和第18天左右达到高峰。其它8个大丽花品种叶绿素a含量随着天数的增加先升高后降低,呈单峰曲线,其中奥麦、亮剑、芭蕾舞女、柠檬丝和北极星叶片中叶绿素a含量在盛花期第6天左右出现峰值,格雷斯和黄绣球叶绿素a含量在第12天左右出现峰值,白菊在第18天左右出现峰值。

2.2 不同大丽花品种盛花期叶绿素b含量的变化

不同大丽花品种盛花期叶绿素b含量随着花期的延长变化趋势不同(图2)。亮剑和斯温顿叶绿素b含量呈现双峰曲线,变化趋势为降→升→降,分别在盛花初期和第12天左右出现峰值。其它品种叶片叶绿素b含量随着天数的增加先升高后降低,呈单峰曲线。奥麦、霍莉、格雷斯、芭蕾舞女、北极星和黄绣球均在第6天左右出现峰值,象牙塔、白菊、塞尔维亚和柠檬丝在第12天左右出现峰值。

2.3 不同大丽花品种盛花期叶绿素a/b的变化

奥麦和塞尔维亚叶片中叶绿素a/b随着天数的增加呈现降→升→降的变化趋势,为双峰曲线(表2)。象牙塔和北极星叶绿素a/b变化趋势为降→升→降→升,白菊和格雷斯叶绿素a/b随天数的增加呈降→升→降→升→降的变化趋势,亮剑和斯温顿叶绿素a/b变化趋势为升→降→升→降→升,芭蕾舞女叶绿素a/b呈升→降→升→降的变化趋势。其它品种叶绿素a/b随天数的增加呈不规则的变化。

2.4 不同大丽花品种盛花期类胡萝卜素含量的变化

如图3所示,大丽花品种象牙塔、霍莉、亮剑、斯温顿、塞尔维亚和北极星叶片中类胡萝卜素含量随着天数的增加呈现降→升→降的变化趋势,为双峰曲线。象牙塔和亮剑分别在盛花初期和第12天左右达到高峰,霍莉、斯温顿、塞尔维亚和北极星分别在盛花初期和第18天左右出现峰值。奥麦、白菊、格雷斯、芭蕾舞女、柠檬丝和黄绣球叶片中类胡萝卜素含量随着天数的增加先升高后降低,呈单峰曲线。柠檬丝在第6天左右出现峰值,其它品种均在第12天左右出现高峰。

3 不同大丽花品种盛花期类胡萝卜素含量的变化

3 讨论与结论

3.1 叶绿素含量与大丽花花期的关系

植物的光合色素含量与其光合同化能力、生长发育特性和营养状况等具有密切的相关性,已经成为评价植物长势的一种有效手段[13]。研究葉片叶绿素含量的消长动态规律,有助于对叶片光合作用变化规律的认识[14]。本试验中,不同大丽花品种盛花期叶片中叶绿素a和叶绿素b含量随着天数的增加呈现不同的变化趋势。象牙塔、霍莉和塞尔维亚叶绿素a含量随天数的增加呈现双峰曲线的变化,亮剑叶绿素b含量也呈双峰曲线。斯温顿叶绿素a和b含量随天数的增加均呈双峰曲线。其它品种叶绿素a和b含量均为单峰曲线。

因为叶绿素a分解得比叶绿素b快,所以叶绿素a/b的变化可作为一个衰老指标[15]。本试验表明,供试大丽花品种奥麦、白菊、塞尔维亚和黄绣球花凋谢(11月1日左右)时叶片中叶绿素a/b比盛花初期(9月20日左右)低。“立秋”后天气转凉,有利于叶片中叶绿素a吸收低温季节的长波光,增加光合产物,积累较多的有机物质,从而有助于延长叶片的功能期和花朵的开放时间,这与牛立元等(1999)[16]在小麦上的研究结果一致。其它大丽花品种叶绿素a/b比值在花凋谢时高于盛花初期,仍能保持一个多月的花期,这可能与品种自身的特性有关,具体机理还有待于进一步研究。

3.2 类胡萝卜素含量与大丽花花期的关系

类胡萝卜素可参与植物光合机构中过剩光能的耗散,进而使植物免受光抑制的损伤[17]。本试验中,象牙塔、霍莉、亮剑、斯温顿、塞尔维亚和北极星叶片中类胡萝卜素含量随着天数的增加呈双峰曲线变化。奥麦、白菊、格雷斯、芭蕾舞女、柠檬丝和黄绣球叶片中类胡萝卜素含量随着天数的增加呈单峰曲线。开花后期类胡萝卜素含量逐渐下降,与叶绿素含量变化趋势一致,但因类胡萝卜素比较稳定,含量下降相对较慢,能够继续发挥其对叶绿素的保护作用,从而有利于营养物质的积累,进而为大丽花的营养生长、延长花期提供物质保障。

叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素这三种光合色素影响着大丽花的观赏价值,在生产中,可通过改善叶片通风透光的条件,喷施光合微肥、氮肥等[18]措施提高光合色素含量,促进光合作用,延长花期,从而提高大丽花的观赏价值。

参 考 文 献:

[1] 苑兆和, 冯立娟, 尹燕雷, 等. 大丽花[M]. 济南: 山东科学技术出版社, 2008.

[2] 冯立娟, 苑兆和, 尹燕雷, 等.大丽花优良品种扦插繁殖与栽培技术研究[J]. 山东林业科技, 2008,6:30-32.

[3] 刘海英, 崔长海, 刘 扬, 等.Fe2+对菊花花期衰老状态和花期的影响[J].安徽农业科学, 2009, 37(13): 5945-5946.

[4] 王 忠. 植物生理学[M].北京: 中国农业出版社, 2000.

[5] 李灵芝, 李亚灵, 温祥珍, 等. 不同配方不同浓度营养液对番茄幼苗叶片叶绿素含量的影响[J]. 华北农学报, 2006, 21(专刊): 73-76.

[6] 曹克友, 魏佑营, 吴 静, 等. 低温弱光胁迫对辣椒CMS三系幼苗光合特性与叶绿素含量的影响[J]. 山东农业科学, 2008, 6: 13-16, 19.

[7] 由继红, 陆静梅.钙对低温胁迫下小麦幼苗光合作用及相关生理指标的影响[J].作物学报, 2002, 28(5): 693-696.

[8] 杨群力. 大丽花名优品种的引种及露地栽培技术研究[J].中国农学通报, 2009, 25(11):108-116.

[9] Akiko N, Munetaka H, Shigeichi M, et al. Natural infection of chrysanthemum stunt viroid in dahlia plants[J].J.Gen. Plant Pathol., 2007,73:225 - 227.

[10]Zhu Y J, Agbayani R, Moore P H. Ectopic expression of Dahlia merckii defensin DmAMP1 improves papaya resistance to Phytophthora palmivora by reducing pathogen vigor [J]. Planta,2007,226(1):87 - 97.

[11]Temsch E M, Greilhuber J, Hammett K R W, et al. Genome size in Dahlia Cav. (Asteraceae-Coreopsideae)[J]. Plant Syst. Evol., 2008,276:157-166.

[12]鄒 琦. 植物生理学实验指导[M]. 北京: 农业出版社, 2001.

[13]唐延林, 黄敬峰, 王人潮. 水稻不同发育时期高光谱与叶绿素和类胡萝卜素的变化规律[J].中国水稻科学, 2004, 18 (1): 59-66.

[14]隋新霞, 樊庆琦, 李根英, 等. 不同穗型冬小麦品种春生叶片叶绿素含量的消长动态[J]. 山东农业科学, 2005, 3: 25-27.

[15]于龙凤, 孙海桥, 安福全. 不同大豆品种叶片叶绿素变化规律的研究[J]. 黑龙江农业科学,2009,2:32-34.

[16]牛立元, 茹振钢, 赵花周, 等.小麦叶片叶绿素含量系统变化规律研究[J]. 麦类作物, 1999, 19(2):36-38.

[17]Lu S, Li L. Carotenoid metabolism: biosynthesis, regulation, and beyond [J]. Journal of Integrative Plant Biology, 2008, 50(7): 778-785.

色素含量 第3篇

目前, 有些食品生产厂家在生产食品时为了使食品色泽鲜艳、着色力强、色调多样、价格低廉, 经常使用一些合成色素, 但是在制作合成色素时, 由于经过较复杂的工艺过程, 混入有害的物质机会较多, 制成的色素也可能有一定毒性[1,2]。随着毒理科学的发展, 发现某些合成色素具有慢性毒性或致癌性, 因此, 各国都在严格控制使用范围和使用量。本文对吉林省9个城市7类食品中合成色素含量抽样结果进行分析。

1对象与方法

1.1 抽查对象

2007年吉林省9个城市流通领域销售的生猪肉馅、生猪肉、猪头肉、香肠、酱卤肉、鸭脯肉、鸡丝肉等7类食品, 共54份样品。

1.2 检验项目及评价依据

样品的检验项目为苋菜红、日落黄、胭脂红, 评价依据为GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》。

1.3 方法

1.3.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪:带紫外检测器, 254 nm波长;色谱柱:YWG-C18 μm 10 μm不锈钢柱4.6 mm×250 mm;流动相:甲醇:乙酸铵溶液 (5∶95, pH=4, 0.02 mol/L) ;流速:1 ml/min。实验试剂均为分析纯。全部溶液均采用0.45 μm微孔膜过滤的二次重蒸去离子水配制。

1.3.2 试样处理

分别称取5.00 g粉碎试样, 放入100 ml小烧杯中, 加水30 ml, 温热溶解, 若试样溶液pH值较高, 用柠檬酸溶液调pH值到6左右。

1.3.3 色素提取

聚酰胺吸附法 试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6, 加热至60℃, 将1 g聚酰胺酚加少许水调成粥状, 倒入试样溶液中, 搅拌片刻, 以G3垂融漏斗抽滤, 用60℃ pH=4的水洗涤5次;然后用甲醇-甲酸混合液洗涤5次, 再用水洗至中性, 用乙醇-氨水-水混合溶液解吸5次, 每次5 ml, 收集解吸液, 加乙酸中和, 蒸发至近干, 加水溶解, 定容至5 ml, 经0.45 μm滤膜过滤, 待测。

1.3.4 测定

取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪, 根据保留时间定性, 用外标峰面积法定量。

2结果与讨论

从表1中可见, 2007年吉林省9个城市7类食品中合成色素含量抽查总体合格率较高, 日落黄和胭脂红均达100.00%, 苋菜红85.19%。

尽管2007年吉林省9个城市7类食品总体抽查的合格率比较高, 但使用合成色素的危害风险依然存在, 不容乐观, 仍有一些生产企业未能按国家制定标准严格执行。从表1可见, 猪肉类食品使用苋菜红的合格率高于家禽类, 说明食品中存在着质量差异。

应该继续加大对流通领域食品的监督抽查及查处力度, 对食品生产经营单位的领导、管理人员、员工定期进行《中华人民共和国食品卫生法》宣传教育, 增强从业者的知法、懂法、守法能力。对个体户、中、小型企业中一些抽检不合格, 设备简陋, 不符合食品卫生标准的厂家, 监督部门应责令停业整顿, 整顿后仍未达到要求的, 应吊销其卫生许可证。另一方面督促生产企业加强和完善管理制度, 改善食品质量, 使广大消费者购买到安全、合格、可靠、放心的食品, 保障人民身体健康。

参考文献

(1) 李红, 刘志诚, 张丽.哈尔滨市售食品中人工合成色素的检测 (J) .哈尔滨医科大学学报, 1996, 30 (2) :140-141.

色素含量 第4篇

近年来对于影响小麦黄色素含量的主效基因定位取得了很大进展,研究表明7A和7B染色体上的基因对籽粒黄色素含量起着重要作用。Parker等[8]在Schomburgk/Yarralinka的150个SSD系中定位了位于7A染色体的主效QTL,可解释黄色素含量表型变异的60.0%。Patil等[9]对硬粒小麦杂交组合PDW 233/Bhalegaon 4的140个重组自交系进行研究,在1A、3B、5B、7A和7B染色体上发现了主效QTL,其中位于7A染色体的QTL可以解释55.22%的表型变异。张立平等[10]在中优9507/CA9632的DH群体中定位了一个位于7AL上的主效QTL,在不同环境中解释12.9%~37.6%的表型变异。

在黄色素含量的QTL定位工作中发现了一些与QTL紧密连锁的分子标记。如Parker等[8]发现一个与7A染色体上黄色素含量的主效QTL紧密连锁的AFLP标记Xwua26-7A.4,并随后将其转化为STS标记[11]。但Sharp等[12]的研究表明,这一标记只对与定位群体来源相同的亲本有效,而与其它品种的黄色素含量关系较弱,因此不能广泛用于分子辅助育种。其原因可能是对于不同品种,主效QTL的位点会有所差异,未必都在7A上。另外,该STS标记并非基因特异性的功能标记,不能与目标基因共分离,因此会造成对表型预测的偏差。He等[13]根据普通小麦7A染色体上PSY1基因Psy-A1的序列差异开发了共显性标记YP7A,该标记在具有等位基因Psy-A1a的材料中可以扩增出194 bp的片段,与高黄色素含量相关;而在具有等位基因Psy-A1b的材料中扩增出231 bp的片段,与低黄色素含量相关。

黑龙江省是我国春麦主要产区之一。其中,大兴安岭沿麓地区已被划为我国优质中筋、强筋小麦优势产业带[14]。该区光照时间长、昼夜温差大、土壤肥沃,有利于蛋白质积累,使得该区小麦具有优良的营养品质。近年来,随着生态派生系谱法与早代品质跟踪相结合等多种育种手段的广泛应用,小麦加工品质潜力得到很大提高。但该区品质育种的目标一直集中于面筋强度上,对面粉及其制品色泽的研究尚未开展。为此,本研究利用近年来开发出的黄色素含量的功能标记对黑龙江省建国以来推广的95份小麦品种进行检测,以期为该区小麦育种提供不同黄色素基因类型的亲本,同时也为该区小麦分子育种奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

选取95份黑龙江省小麦品种作供试材料(见表1)。这些品种是该麦区建国以来生产上的主栽品种,基本上反映了该麦区小麦生产和育种的历史与现状。

1.2 方法

1.2.1 供试引物

黄色素含量检测利用He等[13]开发的分子标记YP7A。该标记引物的序列见表2。所有引物由北京奥科生物技术有限责任公司(http://www.augct.com)合成。

1.2.2 DNA提取

每一供试材料选取3粒有代表性的种子充分研碎后放入2 mL离心管中,加入800 μL样品提取液(成分为288 mM NaCl,200 mM pH8.0 Tris·HCl,25 mM EDTA和0.5% SDS);放入65℃的水浴箱中30~60 min,期间每隔5 min摇晃混匀1次;加入800 μL酚/氯仿(1∶1),室温下混匀5 min后于10 000 r·min-1下离心5 min;将上清液转移至1.5 mL离心管中,加入0.6倍体积的异丙醇,轻轻混匀;放入-20℃冰箱中20 min以上,沉淀DNA;低速离心将DNA集于管底,倒出上清液;加入500 μL 70%乙醇洗涤2次,于室温干燥;加入500 μL TE溶解,置于4℃保存。

1.2.3 PCR扩增

YP7A的20 μL PCR反应体系为:模板DNA 50 ng,Taq酶1U(北京天根生化科技公司),上、下游引物(5 μmol·L-1)各1.0 μL,dNTP(25 μmol·L-1)0.2 μL,10×PCR缓冲液2 μL,用无菌蒸馏水补充反应体系至20 μL。PCR反应采用步降(Touch down)退火程序:首先95℃ 5 min;然后95℃ 30 s,由66℃开始,每个循环的退火温度降低0.3℃,退火时间30 s,72℃ 1 min,共40个循环;最后72℃ 5 min,4℃保温。

PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,采用缓冲体系为1×TAE溶液,用北京‘六一’厂的DYC-34A型电泳槽,200V电压电泳30 min,0.5%溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色10 min,蒸馏水漂洗后在GelDoc XR System成像系统上用紫外灯扫描成像并存入计算机。

2 结果与分析

YP7A是一个共显性的功能标记,该标记在具有等位基因Psy-A1a的材料中可以扩增出194 bp的片段,与高黄色素含量相关;而在具有等位基因Psy-A1b的材料中扩增出231 bp的片段,与低黄色素含量相关。在本研究中,95份推广品种中有39份材料扩增出194 bp特异条带,56份品种扩增出231 bp特异条带(见表3,图1)。

从品种来源上看,克字号系列59份品种中有18份品种扩增出194 bp特异条带,41份品种扩增出231 bp特异条带;龙字号系列19份品种中有6份品种扩增出194 bp特异条带,13份品种扩增出231 bp特异条带;龙辐号系列12份品种中有4份品种扩增出194 bp特异条带,8份品种扩增出231 bp特异条带;垦字号系列5份品种中有1份品种扩增出194 bp特异条带,4份品种扩增出231 bp特异条带。

上述结果表明,在Psy-A1位点控制低黄色素含量的等位基因Psy-A1b的材料在黑龙江省小麦中的分布频率为58.9%,而控制高黄色素含量的等位基因Psy-A1a的材料在黑龙江省小麦中的分布频率为41.1%,说明黑龙江省小麦品种Psy-A1位点以Psy-A1b为主。从材料来源上看,克字号及龙辐号小麦的表现与全省总体趋势基本一致,而龙字号小麦却以高黄色素含量的等位基因Psy-A1b为主,占68.4%。但从单个品种上看,当前黑龙江省主栽小麦品种及骨干亲本却大多以高黄色素含量的等位基因Psy-A1b为主,如龙麦26、龙麦30、龙辐麦12、龙辐麦16、克旱18、克旱19、克旱20等。而克丰6号、克丰10号、克丰12及龙辐麦15为低黄色素含量的等位基因Psy-A1a类型。

3 讨论

黑龙江省小麦商品率很高,随着市场对面粉专用化要求程度的提高,黄色素含量成为决定小麦市场竞争力的重要指标之一。本研究所选用的材料为黑龙江省建国以来所推广的历史品种及当前生产上的主栽品种,可以很好地代表黑龙江省小麦品种的历史及现状。从本研究结果可以看出,在黄色素含量方面,黑龙江省小麦品种的高含量与低含量特异条带并存,且低含量条带占主体,为69.5%,这有利于加工面条、馒头等传统食品。但从单个品种上看,当前主栽小麦品种及骨干亲本却大多以高黄色素含量的等位基因Psy-A1b为主,应该引起育种者的重视。

色素含量 第5篇

复硝酚钠化学成分为单硝化愈创木酚钠、邻硝基苯酚钠和对硝基苯酚钠三种物质的混配制剂[6], 是一种强力细胞活剂, 能够促进细胞的原生质流动, 提高细胞活力, 被广泛应用于粮食作物, 经济作物及油料作物, 并已在世界上多个国家和地区推广应用[7]。试验以复硝酚钠和小球藻为研究对象, 探讨复硝酚钠对小球藻生长及叶绿素a、b和类胡萝卜素含量的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料

小球藻藻种由扬州大学水产养殖保种室提供。复硝酚钠购自郑州中大农化有限公司。

1.2 试验方法

采用水生4号培养液作为基础培养液。分别配制浓度为0 (对照) 、5, 10, 20, 40和80 mg/L复硝酚钠, 每个浓度设置4个平行试验组。将添加复硝酚钠的各藻液摇匀后, 置于温度为25℃、2 000 lx连续光照条件的DG-2C多功能恒温箱中培养, 每天定时摇瓶。培养1周后取出分别测定其生长情况和叶绿素a、b及类胡萝卜素的含量。

1.3 小球藻生长, 叶绿素a、b含量和类胡萝卜素的测定和分析

细胞密度测定, 培养1周后, 取原藻液, 用血球计数板在显微镜 (10×40) 下计数。

光密度值 (OD) :以培养液的光密度值 (OD) 作为小球藻生长量的间接指标[7], 用722N型可见分光光度计在波长680 nm处分别测定每个锥形瓶内藻液的OD值。

小球藻叶绿素a、b含量和类胡萝卜素的测定, 按《植物生物化学分析方法》[8]进行。

试验数据用SPSS13.0软件, 进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较。

2 结果

2.1 复硝酚钠对小球藻生长的影响

复硝酚钠浓度0~40 mg/L, 小球藻的细胞密度由 (1.3±0.4435) ×105 ind/L逐渐增加至 (7.4±0.6785) ×105ind/L。小球藻吸光度由0.0170±0.0041逐渐增加至0.06375±0.0065。随着复硝酚钠浓度增大, 小球藻细胞密度和吸光度也相应增大 (表1) 。

注:同列中相同字母表示差异不显著 (P>0.05) , 不同字母表示差异显著 (P<0.05) 。

复硝酚钠浓度40 mg/L时, 小球藻密度最高, 为 (7.4±0.6785) ×105 ind/L。复硝酚钠浓度80 mg/L, 小球藻的细胞密度为 (6.0±0.9345) ×105 ind/L, 有下降趋势。

方差分析表明, 5、10、20、40、80 mg/L的复硝酚钠能够显著促进小球藻的生长 (P<0.05) 。40 mg/L的复硝酚钠对小球藻的促生长作用显著高于其他试验组的复硝酚钠 (P<0.05) 。因此40 mg/L的复硝酚钠对小球藻的生长促进作用最佳。

2.2 复硝酚钠对叶绿素a、b和类胡萝卜素含量的影响

复硝酚钠浓度0~80 mg/L, 小球藻叶绿素a含量由 (0.5717±0.1117) μg/m L逐渐增加至 (2.0648±0.3043) μg/m L。叶绿素b含量由 (0.0478±0.1233) μg/m L增加至 (0.7527±0.1202) μg/m L。类胡萝卜素含量由 (0.3058±0.0227) μg/m L增加至 (0.9298±0.1366) μg/m L。随着复硝酚钠浓度增大, 小球藻叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量也相应增大 (表2) 。

方差分析表明, 和对照组相比, 5、10、20、40、80mg/L的复硝酚钠能够显著促进小球藻的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量 (P<0.05) 。80 mg/L的复硝酚钠对叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素促进作用显著高于0、10、20、40 mg/L的复硝酚钠 (P<0.05) 。因此, 80 mg/L的复硝酚钠对小球藻叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量促进作用效果是最高的。

3 讨论

3.1 复硝酚钠对小球藻生长的影响

复硝酚钠为单硝化愈伤木酚钠盐细胞赋活剂, 能迅速渗透到植物体内, 促进细胞的原生质流动, 促进细胞分裂和增殖, 有利于叶绿素和蛋白质的合成[9]。试验结果显示, 复硝酚钠能显著促进小球藻的生长 (P<0.05) 。由于小球藻为单细胞藻类, 细胞分裂和生长速度快, 且和复硝酚钠直接接触, 因此促生长效果明显。和其他植物生长调节物质一样, 复硝酚钠对植物影响的效果与其浓度有关, 高浓度条件下抑制生长甚至可以杀死植物体。试验结果中, 5~80 mg/L的复硝酚钠对小球藻的生长均有不同程度的促进作用。其中40 mg/L的复硝酚钠对小球藻的生长促进作用效果最佳, 如果进一步增加复硝酚钠的浓度, 复硝酚钠的促生长作用效果降低了。

3.2 复硝酚钠对小球藻光合色素含量的影响

小球藻叶绿体中含有叶绿素a、b及类胡萝卜素等色素, 叶绿素a是最主要的光合色素, 是光能的捕捉器和转换器, 是光合作用的核心。叶绿素b、类胡萝卜素等具有收集和传递光能的作用[10], 小球藻的生长依赖于光和色素的光合作用, 叶绿素的含量在某种程度上反映着藻体生物量的大小[11]。研究表明5~80 mg/L的复硝酚钠对小球藻的叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量都有不同程度的促进作用, 80mg/L时小球藻的叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量达到最大, 和小球藻的生长规律不一样, 其原因可能是小球藻的生物量达到一定值后, 消耗了培养液中的营养物质, 从而影响了小球藻的生物量。

参考文献

[1]李师翁, 李虎乾, 张建军.小球藻大规模培养研究的进展[J].植物学通报, 1985, 15 (4) :45-50

[2]Tanaka K, Konishi F, Himeno K, et al.Augmentation of antitumor resistance by a strain of unicellular green alga Chlorella vulgaris[J].Cancer Immunol Immunother, 1984, 17:90-94

[3]A.H.Scragg.The effect of phenol on the growth of Chlorella vulgaris and Chlorella VT-1[J].Enzyme and Microbial Technology, 2006, 39:796-799

[4]徐淑风, 刘志芳.添加植物生长刺激素α-奈乙酸钠培养底栖硅藻的效果[J].水产科学, 1987, 6 (2) :43-44

[5]刘世名, 梁世中.植物激素在小球藻异养培养中的作用[J].植物学通报, 1999, 16 (6) :696-700

[6]王美桂.新型植物生长调节剂-复硝酚钠[M].中国农村科技, 2006, 7:19

[7]刘兴宇.新型植物生长调节剂复硝酚钠及其应用[M].农药市场信息, 2007, 14:35-35

[8]X.H.波钦诺克.植物生物化学分析方法[M].北京:科学出版社, 1976:257-258

[9]韩德元.植物生长调节剂的原理与作用[M].北京:科学技术出版社, 1997:166

[10]潘瑞炽, 董愚得.植物生理学 (第3版) [M].北京:高等教育出版社, 1995:67-81

色素含量 第6篇

1 仪器试剂试药与样品

1.1 仪器

SHIMADZVLC-10Avp, LC-10ATvp型泵, SCL-10Avp型控制器, SPD-10AVP型检测器, CLASS-VP色谱工作站, 岛津UA-1700型紫外-可见分光光度计。Sartovius BP121S (d=0.1 mg) , BP211D (d=0.01 mg) 电子分析天平。HU3120B超声波清洗器 (120W, 40KHZ;天津市东科仪器设备有限公司) 。

1.2 试剂试药

羟基红花黄色素A对照品 (批号:111637-200503中国药品生物制品检定所提供, 供含量测定用) 。甲醇、乙睛为色谱纯, 磷酸为分析纯, 水为高纯水。

1.3 样品

苏木-7汤样品, 红花原料药材由内蒙古中蒙医院提供。

2 方法验证

2.1 色谱条件的选择

色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶, 本试验研究采用Diamousil (钻石) C18柱 (250 mm×4.6 mm;5 μm) , 流动相为A:甲醇-乙睛 (19:2) B:0.7%磷酸溶液以三乙胺调节PH值 至 (6.0± 0.1) ;A:B (20:80) , 检测波长为403nm, 柱温35℃。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算, 应不低于3000[2]。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取羟基红花黄色素A对照品适量, 加25%甲醇制成每1 ml含33 μg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备的制备

取本品约1.0 g, 精密称定, 精密加入25%甲醇25 ml, 称定重量, 超声处理 (功率120W, 频率40KHZ) 40 min, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。另取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照 (缺红花) 适量, 依上法操作即得阴性对照液。

2.4 阴性对照试验

在上述色谱条件下, 分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各20 μl, 注入液相色谱仪, 测得结果为:阴性对照色谱中在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱中相对应的保留时间处无色谱峰出现, 表明其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。见色谱图 (A、B、C) 。

2.5 线性关系考察

取羟基红花黄色素A对照品约3.0 mg精密称定, 置50 ml量瓶中, 加25%甲醇使溶解, 并稀释至刻度, 摇匀 (相当于含羟基红花黄色素A0.0652 mg/ml) 精密吸取1、3、5、7、9、10 ml溶液分别置10 ml量瓶中, 加25%甲醇至刻度, 摇匀, 各取20μl进样, 按上述色谱条件测定, 以峰面积对进样量进行回归分析, 结果羟基红花黄色素A在0.1304~1.304 μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为

Y=2889240X-15751 R=0.9997

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液, 分别于0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h进样测定, 结果羟基红花黄色素A峰面积积分值基本稳定, RSD为0.81%, 结果表明在12 h内供试品溶液基本稳定。

2.7 精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液, 连续进样5次, 测定羟基红花黄色素A峰面积积分值, RSD为0.9%。

2.8 重复性试验

取同一批号 (批号020930 1号样) 供试品6份, 各约1.0 g, 精密称定, 分别按含量测定项下方法操作, 测得每份供试品含量, 结果平均含量为0.9820 mg/g, RSD为0.85%, 表明结果较好。

2.9 加样回收试验

取供试品 (批号020930 1号样, 含量0.9820 mg/g) 9份, 各约0.50 g, 精密称定, 分别在其中3份中各精密加入浓度为0.0501 mg/ml的羟基红花黄色素A对照品25%甲醇溶液5 ml, 再分别精密加入25%甲醇溶液20 ml;另3份中各精密加入浓度为0.0501 mg/ml的羟基红花黄色素A对照品25%甲醇溶液10 ml, 再分别精密加入25%甲醇溶液15 ml;其余三份各精密加入浓度为0.0501 mg/ml的羟基红花黄色素A对照品25%甲醇溶液15 ml, 再分别精密加入25%甲醇溶液10 ml, 分别按含量测定项下方法操作, 进样20 μl, 测定每份含量, 计算回收率, 结果见表1。

2.10 供试品含量测定

分别精密吸取2.2对照品溶液和2.3供试品溶液各20 ul, 在2.1色谱条件下进行测定。供试品含量测定结果见表2。

3 讨论

检测波长的选择:取羟基红花黄色素A对照品溶液, 于岛津UA-1700型紫外可见分光光度仪上, 自200~600 nm做光谱扫描, 结果羟基红花黄色素A在404.0 nm处有最大吸收。结合《中国药典》2005年版一部“红花”项下HPLC的检测波长为403 nm, 确定检测波长为403 nm。

提取效率的考察:甲醇提取过程中为保证被测成分提取完全, 试验中考察了不同超声处理时间对提取效率的影响如:超声处理30 min、40 min、50 min、60 min。结果超声处理40 min供试品中羟基红花黄色素A含量不再增加, 故确定甲醇超声处理40 min。

参考文献

[1]国家药典委员会, 中华人民共和国药典 (一部) .化学工业出版社, 2005:1.

色素含量 第7篇

关键词:熟肉制品,人工合成色素,卫生监督,食品安全

熟肉制品是大众餐桌上常见的食品, 主要以猪、牛、鸡、兔等畜禽的肉为主要原料。食品中使用人工合成食用色素可以弥补因光线、空气、加热等原因引起的脱色, 以提高食品的感观和对消费者的吸引力[1]。人工合成色素是从煤焦油中提取的, 或以芳烃类化合物为原料合成的, 特点是色泽鲜艳, 着色力强, 性质稳定, 不易褪色, 且价格便宜, 它作为一种添加剂广泛用于食品中。但某些厂家为了使产品的色泽外观鲜艳, 在生产的时候超范围使用人工合成色素。国家对其使用有严格的限量规定, 熟肉制品中不得检出人工合成色素。毒理学研究发现, 某些合成色素有慢性毒性或致癌性, 使用过量会对人体产生有害作用[2]。为保障消费者的身体健康和安全, 了解我市熟肉制品中人工合成色素的使用情况, 我中心于2011—2012年对市场上销售的熟肉制品进行了抽样调查, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 样品

于2011—2012年, 对清远市区内大型酒店、小型加工单位和个体私人作坊所出售的熟肉制品进行抽样调查, 共抽样233份。

1.2 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪 (配PDA检测器) , 超声震荡器, 10 000转离心机 (离心半径=10cm) , 恒温水浴箱。

1.2 试剂及标准

实验用水为一级超纯水, 甲醇为优级纯, 乙酸铵为分析纯;柠檬黄 (500μg/ml) 、胭脂红 (500μg/ml) 、日落黄 (500μg/ml) 、诱惑红 (100μg/ml) 标准均购自于中国计量科学研究院。

1.3 实验方法

GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂测定方法》和GB/T 21916-2008《水果罐头中合成着色剂的测定高效液相色谱法》。

1.4 评价标准

GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》熟肉制品中不得检出人工合成色素。

2 结果

2.1 不同年份的样品合格率比较

2011和2012年共抽检样品233份, 合格率分别为92.94% (79/85) 和95.95% (142/148) , 总合格率为94.85% (221/233) 。2年合格率比较, 差异无统计学意义 (χ2=0.998, P=0.318) 。

2.2 不同种类的样品的合格率比较

2011和2012年共抽检3类熟肉制品, 其中烧烤类129份, 酱卤类44份, 腌制肉类60份。3类熟肉制品合格率比较, 差异无统计学意义 (χ2=4.582, P>0.05) 。见表1。

2.3 人工合成色素的检出情况

在233份熟肉制品中检出含有人工合成色素的有12份, 检出率为5.15%。柠檬黄所检出的含量范围为0.001 1~0.008 1 g/kg, 胭脂红含量范围为0.001 4~0.004 6 g/kg, 日落黄检出含量范围为0.001 1~0.010 g/kg, 未检出含有诱惑红的样品。见表2。

3 讨论

根据GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》规定, 熟肉制品中不得检出人工合成色素。从监测结果来看, 2011—2012两年共抽样检测分析了233份样品, 不合格率为5.15%。与刘虹等[3]报道的不合格率为6.59%相近, 低于李兰芳[4]等报道的13.9%和徐国卉等[5]报道88.3%。这是由于监管部门从近年以来, 每年都积极开展卫生监督监测和健康教育的宣传, 所以熟肉制品的合格率都比较高;所抽检3类熟肉制品, 烧烤类和腌制肉类都有检出, 合格率为92.25%和96.67%。但酱卤类制品合格率为100%, 这与其生产工艺有关, 本身酱就已上色, 为大众所接受, 并不需要再添加其他色素来增加卖相;233份样品中检出含有1种人工合成色素的有7份, 为叉烧、烧排骨和白切鸡。叉烧、烧排骨中检出日落黄5份, 白切鸡检出柠檬黄2份。2种色素混合添加的有5份, 其中叉烧和腊肉有检出。叉烧检出日落黄和柠檬黄2份、日落黄和胭脂红1份, 腊肉检出柠檬黄和胭脂红2份。从以上的结果可以看出, 熟肉制品中有添加人工合成色素的现象, 尤其以日落黄和柠檬黄添加较为普遍。

随意使用人工合成色素将威胁人体健康, 尤其是对正处于生长发育的儿童危害更大。据有关文献报道, 儿童过多地摄入食用色素浓的食品, 会影响神经系统, 以致引起其好动、情绪不稳定、注意力不集中、自制力差、食欲减退等不良症状, 因为儿童体内器官功能比较脆弱, 神经系统发育尚不健全, 对化学物质尤为敏感。

虽然本市的抽检合格率比较高, 但确实存在着超范围使用的情况。由此可见, 在当今强调食品安全的大环境下应加强对此类食品的监督管理:①对从事食品加工的人员进行食品安全知识培训和法律法规教育。卫生部门要与工商等部门密切配合, 从源头上把关, 对熟肉制品实行卫生许可制度, 无卫生许可证的熟肉制品不允许进场销售[6]。开展定期抽样检测, 对抽样不合格的经营户酌情给予处罚, 敦促其规范行为。对生产者而言, 通过有针对性地改进其产品加工的工艺, 解决容易造成质量问题的隐患。有售卖者称售卖熟肉制品在加工过程中并无添加任何色素, 但从其抽样的样品中有检出。原因是配料含有色素, 所以熟肉制品的生产过程中每个环节都要引起重视。②在消费者方面, 选择食品时, 要仔细辨别, 避免购买过分鲜艳的食品。③应致力于少用或不用人工合成色素, 发展其他绿色天然的物品来替代。

参考文献

[1]沈向红, 丁钢强, 俞莎, 等.肉禽类制品中人工合成食用色素调查及分析[J].中国食品卫生杂志2002, 14 (5) , 36-37.

[2]雷霖.熟肉制品中人工合成色素含量的高效液相色谱测定法[J].职业与健康, 2013, 17 (2) :184-185, 188.

[3]刘虹, 谢承恩, 郑少珍.广州市售糕点、熟肉制品中人工合成色素含量的现状分析[J].中国卫生检验杂志, 2007, 17 (2) :341, 358.

[4]李兰芳, 魏华江, 黄明元, 等.海珠区市售糕点和熟肉制品中人工合成色素调查[J].海峡预防医学杂志, 2007, 13 (2) :66.

[5]徐国卉, 吕炎.唐山市肉制品中人工合成食用色素使用情况调查[J].中国食品卫生杂志, 2007, 19 (3) :269-270.

色素含量 第8篇

关键词:阿日希·阿嘎如-8味散,羟基红花黄色素A,高效液相色谱

蒙医药拥有2 000多年悠久的历史, 是蒙古族人民与自然和疾病长期斗争实践中创造积累和精选出来的、有其独特风格的经验结晶, 是蒙古族文化的重要组成部分[1,2]。但因在药效学基础、质量标准、生产工艺及安全性评价等方面的研究比较落后, 蒙药迄今为止还没有真正进入国内外医药主流市场[3,4]。在当今全球化迅猛发展的时代, 经济上处于劣势的民族的医药文化正受到巨大的冲击, 许多古老的医药文化正在消失。因此应该不断加大对蒙医药文化的保护力度, 系统整理与挖掘传统蒙医药文化, 同时还应利用现代化先进技术加快具有民族特色的蒙药开发研究步伐, 推进蒙医药现代化进程。

阿日希·阿嘎如-8味散, 别名让·阿嘎如-8, 来源于《蒙医传统验方》, 由山沉香、白檀香、广枣、红花、肉豆蔻、天竺黄、北沙参、紫檀香八味药材组成, 具有清肺止咳、平喘、缓解胸闷刺痛的作用, 用于胸闷刺痛, 心悸气短, 咳嗽, 为蒙医常用药[5]。但目前有关阿日希·阿嘎如-8味散的研究较少, 更缺少系统科学的质量评价体系, 无法保证人民用药安全。本实验首次采用高效液相色谱法 (HPLC) 测定蒙药阿日希·阿嘎如-8味散中羟基红花黄色素A的含量, 为进一步完善与制定阿日希·阿嘎如-8味散质量标准奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT泵;岛津SPD-20A检测器;岛津CTO-10AS色谱工作站;FA1104型电子分析天平;METTLER TOLEDO-XS205型电子分析天平。

1.2试剂与试药

羟基红花黄色素对照品 (111637-201106) , 由中国药品生物制品检定所提供;供试品三批 (批号分别为20110311-015、20110412-041、20100719-064) , 由阿拉善盟蒙医医院制剂室提供;甲醇、乙腈为色谱纯, 水为纯净水, 其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 标准品溶液的制备

取羟基红花黄色素A对照品11.2 mg, 精密称定, 置100 m L量瓶中, 加25%甲醇使其溶解并稀释至刻度, 摇匀, 备用。

2.1.2 样品溶液的制备

取阿日希·阿嘎如-8味散样品0.4 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入25%甲醇50 m L, 称定重量, 超声处理40 min, 放冷, 再称定重量, 用25%甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即为样品待测液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备

按处方比例并以相同工艺制备的缺红花的阴性对照品, 按供试品溶液制备方法制备。

2.2 色谱条件

色谱柱为Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm) 及Inertsil ODS-SP柱 (150 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:0.7%磷酸溶液-甲醇-乙腈 (72∶26∶2) ;柱温:30℃;检测波长:403 nm。在此条件下, 分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、样品溶液各10μL, 注入液相色谱仪。结果表明, 理论板数n>3 000;R>1.5, 阴性对照色谱中在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现, 表明其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。具体分离效果见图1。

A:阿日希·阿嘎如-8味散空白溶液HPLC图;B:羟基红花黄色素A标准品HPLC图;C:阿日希·阿嘎如-8味散样品HPLC图;1:羟基红花黄色素A色谱峰

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察

取羟基红花黄色素A标准品溶液, 在2.2色谱条件下, 分别进样1、2、3、4、5μL, 以峰面积和进样量 (质量) 进行回归分析, 回归方程为Y=352 131X-3 242, r=0.999 6。结果表明:羟基红花黄色素A在0.112~0.560μg范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 稳定性试验

取同一份供试品溶液, 在2.2色谱条件下, 分别于0、2、4、8、12、24 h, 精密吸取10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 测定其峰面积, 结果RSD为1.11%, 表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.3.3重复性试验

取同一份样品 (自制小样) 6份, 各约0.8 g, 精密称定, 按2.1.2项下进行溶液的制备, 在2.2色谱条件分别进样10μL, 将峰面积值代入标准曲线, 进而计算含量, 结果表明羟基红花黄色素A的平均含量为0.69 mg/g, RSD (%) =1.0, 表明该含量测定方法具有良好的重复性。

2.3.4 加样回收试验

取供试品 (自制小样, 羟基红花黄色素A含量0.687 4 mg/g) 9份, 各约0.8 g, 精密称定, 其中1、2、3号各精密加入用25%甲醇配制的羟基红花黄色素A对照品溶液 (羟基红花黄色素A浓度为0.112 0 mg/m L) 1 m L, 4、5、6号各精密加入上述对照品溶液2 m L, 7、8、9号各精密加入上述对照品溶液3 m L, 测定每份供试品含量, 计算加样回收率, 结果羟基红花黄色素A的加样回收率平均值为103.15%, RSD为0.76%, 表明方法准确度高。具体数据见表1。

2.4 样品含量测定

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL, 进样, 照上述色谱条件分离、测定, 以外标法计算样品含量, 结果见表2。

3 讨论

本实验采用高效液相色谱法测定阿日希·阿嘎如-8中羟基红花黄色素A含量, 其中流动相的选择参照《中国药典》2010年版一部“红花”项下流动相比例进行流动相条件摸索, 样品保留时间太短, 经调整流动相比例至0.7%磷酸溶液:甲醇:乙腈为72∶26∶2时, 羟基红花黄色素A与其他成分达到较好的分离度, 并具有较好的保留时间。实验柱温采用30℃, 可降低流动相粘度, 降低柱压。检测波长的选择, 也是参照《中国药典》2010年版一部“红花”项下的规定, 选用403 nm作为检测波长[6]。

总之, HPLC测定蒙药阿日希·阿嘎如-8味散中羟基红花黄色素A的含量方法简便、快捷、准确、重复性和稳定性好, 可用于阿日希·阿嘎如-8味散质量检测的标准。

参考文献

[1]那生桑.蒙药学概况[J].中国民族医药杂志, 2007, 13 (1) :32-34.

[2]周桂坤, 关金凤.蒙药的历史渊源、研究现状及展望[J].中国民族民间医药杂志, 2007, 8 (1) :6-9.

[3]罗布桑.蒙药学[M].北京:民族出版社, 1989:321.

[4]毕力夫, 吴岩.蒙药材质量标准化研究的现状与意义[J].内蒙古医学院学报, 2008, 30 (1) :36-38.

[5]白清云.中国医学百科全书蒙医学 (上) [M].赤峰:内蒙古科学技术出版社, 1986:707.

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