高效液相色谱范文

高效液相色谱范文（精选12篇）

高效液相色谱 第1篇

1 高效液相色谱仪结构

高效液相色谱仪的结构部件有:贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪以及数据处理装置。其基本的工作原理是:高压泵将贮液罐中的流动相打入系统, 样品溶液经进样器进入流动相, 随流动相流动而被载入色谱柱内, 由于样品溶液中的各个组分在流动相和固定相中的分配系数不同, 在两相中作相对运动时, 经过不断的吸附-解吸这样一个分配过程, 各混合组分之间渐渐拉开距离, 最终以相互分离的单个组分依次从柱内流出, 利用检测器的传感器将样品浓度转换成电信号传送到记录仪, 以图谱形式将样品数据打印出来。

2 液相色谱在多肽物质分离分析上的应用

随着现代生物技术的发展, 具有独特的吸收机制、极强的活性及多样性的多肽物质成为当今国内外研究的焦点, 市场上各种多肽类药物和保健食品的出现, 证明其存在巨大的经济价值和发展前景。但随着生物技术和医药工业的飞速发展, 传统的分离手段诸如膜过滤、沉淀等手段已经不能满足从复杂混合体系中特异性分离目标产物的要求, 迫使新方法和新思路在多肽物质的分离分析研究中的应用。经实验以及现代分离科学理论发现, 色谱和电泳技术是目前为止分离效果最优异的两种手段, 其中液相色谱技术以其大量制备的优点而发展成为实验室和工业生产上分离纯化复杂生物大分子的最有效和最常用的手段。

3 超高效液相色谱 (UPLC) 在中药领域的应用

传统的中药包含十分复杂的未知成分, 而UPLC对中药这个复杂体系的分离分析中很适用, 效果很好。Chen等采用粒径1.7μm的小颗粒填料BEHC18色谱柱, 用UPLC法对淫羊藿中包括淫羊藿糖苷C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅶ等在内的15种黄酮类成分进行了分析研究。实验采用的梯度洗脱液为乙睛2乙酸水溶液, 在15min内将15种黄酮类成分得到了分离, 且分离效果满足要求。最低定量限及最低检测限分别为0.52、0.13纳克。由于中药有效成分极为复杂而且又往往以组方的形式应用, 药理作用可能是各个组分协同作用的结果, 这样子对多组分药动学研究增添了巨大的困难。

UPLC因其所具有的高灵敏度、高分离度以及高通量的优点而使其能在复杂体系的分离中发挥巨大的作用, 对天然药物药动学的研究和发展产生了极大地促进作用。中药指纹图谱是新发展起来的一种综合的、可量化的化学鉴定手段, 在中药材和中成药的真伪鉴别, 原料药材质量优劣、半成品和成品质量的均一性以及稳定性发挥了重要的作用。而高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中得到了广泛的应用, 可以说是其核心技术。传统的HPLC用于中药指纹图谱研究时耗时较长, 分析时间短则数十分钟, 长则可以小时计。

而对于同样一个复杂的待检体系, 采用超高效液相色谱则可大大缩短检测时间, 一般可在数分钟内完成。目前中药因其药理的复杂性而难以全世界推广, UPLC的出现正好可以高效分析中药里面包含的各种复杂成分, 是当今国内外中药研究的发展趋势。

4 高效液相色谱法在食品分析中的应用

高效液相色谱法在食品行业的农药残留, 添加剂及违禁成分和食品中营养成分的分析环节发挥重要的作用。随着近年来在食品分析上的应用和改进, 检测范围得到了扩大, 分析水平也受到极大提高, 尤其针对食品中微量、痕量有毒有害物质残留的快速准确检测功不可没, 对我国食品卫生质量以及食品安全和人民身体健康提供了一个强大的技术支持, 并且促进我国生产的特色食品向世界的推广。

例如:我国近期的乳及乳制品的公众质量信心受到极大打击, 一方面的原因是其评价比较复杂, 检测指标包括蛋白质等营养成分及含量、独特的风味物质、抗生素等药物残留以及可能的毒物种类及含量等诸多方面, 为高效准确对其进行检测, 高效液相色谱技术正是不二选择。HPLC技术几乎可用于对乳制品糖、维生素、蛋白质等各种营养成分的检测。

5 高效液相色谱法在常用鱼药检测中的应用

为防止鱼类养殖过程中可能的病害及提高经济效益, 各类鱼药得到广泛使用, 从而致使鱼类食用的安全问题出现。为测定鱼类体内的鱼药残留, 人们采用了各类技术手段, 其中便有高效液相色谱法。HPLC因其独有的高效性而在鱼类抗寄生虫药物、抗生素类、磺胺类、呋喃类等药物残留检测中作用明显。

但HPLC还只是处于发展初期, 经实际应用发现, 为更好响应生产需求许多方面仍有待于更深入的研究和完善。例如:实际检测中能直接影响检测结果的环节包括溶剂的提取、净化条件以及色谱条件等的选择。但目前为止该方法的应用研究并未得到充分的重视, 导致检测效果还不能达到理想的预期。因此在应用高效液相色谱法进行检测之前, 需要根据具体的实验材料和目的, 自行开展方法学研究, 不断优化检测条件, 从而不断提高检测手段的灵敏度和准确度及分离度。

6 结语

色谱技术是目前分离纯化作业中的关键技术, 存在广阔的应用前景, 因其高效、快速、分辨率高等特性使其得到实验室水平和实际生产环节的大量应用, 能满足各领域的应用要求, 比如羊毛防毡缩整理、遗传代谢病筛查等领域。

参考文献

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[5]陆必泰, 陈明珍.高效液相色谱在羊毛防毡缩整理中的应用研究.纺织学报, 2004.

大豆磷脂的高效液相色谱分析 第2篇

采用正相高效液相色谱法,梯度洗脱程序和蒸发光散射检测器对大豆磷脂组成进行分析,在15 min内将大豆磷脂中4种重要组分:卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂和磷脂酸与其它组分完全分离.用外标法对这4 种重要成分进行定量,线性范围为0.2～5.8 g/L;回收率为96.7～100.8%;相对标准偏差为0.82%～1.34%.方法用于实际样品测定,获得满意的`结果.

作 者：夏海涛 安红 刘郁芬 于春玲 作者单位：夏海涛,安红,刘郁芬(齐齐哈尔大学化学与化学工程学院物理化学教研室)

于春玲(北华大学吉林林学院)

高效液相色谱法测定叶酸片的含量 第3篇

【关键词】叶酸片；叶酸；测定

叶酸是由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物，是一种水溶性B族维生素，相当于蝶酰谷氨酸[1-2]。叶酸从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。叶酸对孕妇尤其重要。叶酸用于预防胎儿神经管畸形，准妈妈在备孕期间就服用0.4毫克叶酸可以下降胎儿神经管畸形率85%[3-4]。如在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可导致胎儿神经管发育缺陷，从而增加裂脑儿，无脑儿的发生率。人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，还会导致身体无力、易怒、没胃口以及精神病症状[5-7]。本文用高效液相法对叶酸片中的叶酸的进行了含量测定。

1.仪器与试药

1.1仪器

LC-100（梯度配置）高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司） ；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；制冷和加热循环槽（上海汗诺仪器有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）；ABS 220-4分析天平（德祥科技有限公司）；3升基本型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）；TΜ-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2试药

乙腈（杭州興成化工有限公司）、磷酸（江西省新干县金成化工厂）、盐酸（襄樊金译成精细化工有限公司）、磷酸氢二铵（淄博市淄川区鑫川化工厂）、冰醋酸（吴江市龙申化工有限公司）、甲醇（江西省新干县金成化工厂）、冰乙酸（杭州兴成化工有限公司）、四氢呋喃（吴江市龙申化工有限公司）。

2.含量测定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[8-12]。色谱柱为依利特hypersil BDSC18色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相；检测波长为254nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按叶酸峰计算应不得低于2000。

2.2供试品溶液的制备

取叶酸片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加适量5%氨水超声溶解，放凉，用水定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.3对照品溶液的制备

精密称取叶酸对照品约50mg，置50毫升棕色容量瓶中，用5%氨水超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含叶酸100μg）。

2.4阴性干扰试验

按方中比例取叶酸片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与叶酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备

制备浓度为20μg·mL-1、40μg·mL-1、80μg·mL-1、160μg·mL-1、200μg·mL-1、240μg·mL-1、280μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，叶酸对照品在40～320μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6精密度试验

精密吸取叶酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.77%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7重现性试验

分别称取同批叶酸片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.65%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品叶酸峰面积积分值的RSD为0.89%。结果表明叶酸至少在4h内稳定。

2.9回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的叶酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.95%。

2.10样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定叶酸片三批样品中叶酸的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.3%、99.6%、100.1%。

3.讨论

叶酸溶于热的稀盐酸和硫磺，略溶于氢氧化碱和碳酸碱溶液，微溶于甲醇，不溶于乙醇和丁醇。本实验采用5%氨水溶解效果较好。分别考察乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1），0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH到3.0）-乙腈（20∶80），乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：20：55∶0.1），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），乙腈-甲醇-四氢呋喃-水（10：15：35∶40），乙腈-甲醇-水（20∶20：60），磷酸二氢钾6.8g与0.1mol·L-1氢氧化钾溶液70mL，加水稀释至800mL，调节pH至6.3，加甲醇200mL，用水稀释成1000mL，磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液， 用磷酸调节pH 值6.0）-乙腈（60：40）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定叶酸片含量的方法。叶酸片中叶酸的含量为标示量的95-105%。 [科]

【参考文献】

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高效液相色谱 第4篇

固相微萃取(solid-phase microextraction,SPME)是在固相萃取(solid-phase extraction,SPE)基础上发展起来的一种集采样、萃取、浓缩、进样于一体的萃取分离技术,它摒弃传统样品前处理方法的很多缺点,具有下述优点:操作简单,萃取速度快,样品需要量少,所需有机溶剂少,易于实现自动化,与当今国际上提倡的绿色环境友好型样品前处理要求相符。SPME在发展之初主要是与气相色谱(GC)联用进行样品分析,然而GC难以满足多种物质尤其是不易挥发或高极性物质的分析要求,为拓宽SPME的应用,1995年,Chen和Pawliszyn[1]设计出固相微萃取-高效液相色谱(SPME-HPLC)联用接口装置,并由Supelco公司生产出商品,SPME-HPLC技术这才起步并蓬勃发展至今。随着液相-质谱技术的发展,SPME又越来越多地与液质联用并取得很大进展[2,3]。本文主要对固相微萃取和高效液相色谱、液相色谱-质谱技术联用的研究进展作一综述。

1 与液相色谱联用的固相微萃取类型

1.1 纤维针式固相微萃取

最经典的方法就是利用Pawliszyn研制[4]的纤维针式固相微萃取以及Chen等[1]设计的SPME-HPLC联用接口装置。SPME装置类似一个注射器,由手柄和萃取纤维头组成。萃取纤维头是涂有不同固定相或吸附剂的熔融石英纤维,外套不锈钢细管以保护石英纤维不被折断,纤维头在钢管内可伸缩,将SPME针管刺入样品瓶,推出纤维头浸入样品溶液,萃取一定时间后缩回纤维头退出样品瓶,插入SPME-HPLC专用接口。该接口由一个六通阀和解吸池组成,解吸池与进样管相连,将六通阀置于载样(load)状态时,纤维头插入解吸池,六通阀置于进样(inject)状态,流动相冲洗纤维头洗脱富集的化合物并随流动相进入色谱柱和检测器进行分离和测定,纤维头退回钢针中,拔离进样口,此为动态洗脱[5]。动态洗脱不彻底时可进行静态洗脱,即在六通阀置于load状态时使用注射器吸取适量的洗脱溶剂注入并充满六通阀和接口的洗脱室,静态洗脱一定时间后将六通阀置于inject状态。为避免记忆效应,在下次萃取进行前需将纤维头洗净并晾干。此方法由于其经典性一直沿用至今,如Adalberto M Filho[6]等运用此方法以静态模式检测芒果中5种农药残留,检出限可达0.6~3.3μg/kg。

1.2 管内固相微萃取(In–tube SPME)

为使SPME更好地与液相色谱在线耦合,1997年Eisert[7]等人发明管内固相微萃取装置,它将萃取固定相涂覆于GC毛细管柱内壁代替传统萃取头,一端插入试样溶液中,另一端与六通阀相连。六通阀置于inject位置时经自动进样系统控制注射器对试样溶液多次吸入和排出,使被测物在样品溶液和毛细管萃取涂层间达到平衡,再将样品溶液更换为洗脱溶剂,将六通阀先后置于load和inject位置,流动相将被测物导入色谱柱进行检测。之后几年中,In–tube SPME与自动进样器未作任何改造的Agilent LC 1100系列联用的报道较多[8]。管内固相微萃取与液相色谱联用除实现分析自动化,减少人为误差外,还可以克服现有商品SPME纤维种类不多的局限性;其次,GC毛细管柱可以适当增加长度,提高富集倍数;再次,由于采用自动进样装置进行萃取和解吸,其解吸过程可定量进行,防止超载的发生;进样针和毛细管柱每处理完一个样品后都会自动清洗,减少待测物的残留,克服记忆效应对样品检测的干扰。

2000年,Saito等[9~11]人在In–tube SPME基础上发明管内金属丝固相微萃取(Wire-in–tube SPME)和纤维管内固相微萃取(Fiber-in–tube SPME),它们在体积不变的情况下,增大萃取接触面积,提高萃取效率和解吸效率。为进一步提高其选择性和萃取效率,他们又在细丝表面涂覆聚合物涂层。2003年,Shintani等[12]首次将C18键合硅胶整体柱引入管内SPME与HPLC在线联用检测环境水样中的杀虫剂,2004-2006年,冯钰锜研究小组[13]将有机聚合物整体柱引入管内SPME技术中并对其萃取性能进行系统研究。

1.3 针内固相微萃取(In-needle SPME)

2004年,Abdel-Rehim等[14]在一个100~250μL的玻璃注射器内填充约1mg吸附剂制成针内固相微萃取装置,与LC-MS/MS在线联用检测人血浆中的罗哌卡因及其代谢产物,结果良好。很快,这种填充式注射器微萃取(microextraction in packed syringe,MEPS)技术以其简便、样品和溶剂使用量少、全面自动化等诸多优点引起临床、法医毒理学、环境等领域的广泛关注,例如Saracino等[15]成功运用MEPS技术与带有电导检测器(CD)的液相色谱联用检测血浆和唾液中的利培酮及其代谢产物9-羟基利培酮,Wietecha-Posluszny等[16]将MEPS技术与带有二极管阵列检测器(DAD)的液相色谱联用检测血浆中的6种三环类抗抑郁药。

1.4 管尖固相微萃取(In-tip SPME)

管尖固相微萃取是近年来新发展起来的一项SPME技术,目前主要被应用于生物样品的检测。它通过在移液管尖端插入[17]或吸取[18]一段吸附材料形成一萃取吸头与带有机械臂的96孔萃取装置联用实现自动化。移液管一般为一次性聚丙烯材料,吸附剂为大孔径的硅胶颗粒或其他整体柱材料(如甲基丙烯酸酯)。Xie等将其与LC-MS/MS联用检测人血浆中的药物MK-0533[17]和MK-0974[18],效果良好。总而言之,In-tip SPME是一项新型、高效、发展前景良好的前处理技术,它在实现SPME全面自动化的同时体现真正的样品平行性。

2 与液相色谱联用的固相微萃取涂层

2.1 非特异性涂层

涂层是SPME的核心部分,它决定SPME萃取过程的选择性、灵敏度和萃取容量,通常实验中选择涂层材料的原则都遵循“相似相溶”原理。目前常用的商品化有机涂层[19]主要有聚二甲基硅氧烷、聚丙烯酸酯、聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯、聚乙二醇/二乙烯基苯、聚乙二醇/聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇/模板树脂、聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯/聚乙二醇等。前2种为均相聚合物涂层,往往只能通过增加涂层厚度来增加萃取容量;后5种为多孔颗粒聚合物,可以通过增加涂层的多孔性来增加萃取容量及提高对被分析物的保留能力。虽然这些纤维涂层对SPME的发展作出巨大贡献,但仍存在吸附质成本高、价格昂贵、吸附容量小、耐溶剂性差、使用寿命短等缺点。于是很多研究者为提高SPME的灵敏度和稳定性而开发自制很多涂层,如无机碳材料涂层石墨碳黑[20]和活性炭[21],目前也已实现商品化。其他的如杨富巍[22]将介孔硅基分子筛SBA-15与辛基三甲氧基硅烷化后接枝反应合成新型介孔涂层C8-SBA-15。

碳纳米管(CNTS)是当前研究者们比较感兴趣的一类涂层材料,最早是由Iijima[23]发现的,CNTS是一种由石墨片按一定螺旋度卷曲成无缝纳米级圆筒的大分子,根据石墨片层数的不同,分为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管。Ma等人[24]利用单壁碳纳米管检测水样中的内分泌干扰化合物,对自来水和海水的样品加标回收率可达81.8%~97.3%。Ji[25]又将多壁碳纳米管用硫酸(98%)/硝酸(70%)的混合溶液处理后使CNTS侧壁引入部分羧基,形成氧化多壁碳纳米管,用于测定水样中的苯并咪唑类杀虫剂,结果表明氧化多壁碳纳米管具有很好的灵敏度和萃取容量。

其他的SPME涂层也越来越多地被应用于各个领域,如具有导电性的聚吡咯、聚噻吩[5]以及利用体积排阻作用阻止大分子物质(如:蛋白质)进入固定相内部的限进介质SPME涂层(RAM)[26,27]等。

2.2 特异性涂层

分子印迹技术[28](Molecular imprinting technique,MIT)是指以目标分子为模板,与功能单体、交联剂进行聚合反应。印迹分子(模板)除去后,聚合物中留下大量空穴,这些空穴和模板分子在大小和形状方面完全匹配,即该聚合物具有反结合模板分子的特异性能。分子印迹-固相微萃取(MIP-SPME)技术[29]因同时具备SPME的高灵敏度和分子印迹聚合物的高选择性而受到广泛关注。Turiel[30]等报道分子印迹固相微萃取整体棒的制备并成功应用于土壤、马铃薯和大豆中扑灭津的检测。Zhang[31]等运用分子印迹整体柱管内固相微萃取和HPLC联用检测人尿液中的8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHd G),加标回收率可达84%±3%,在对健康志愿者、焦化厂工人和癌症病人的尿液检测中,癌症病人的8-OHd G明显高于其他健康人群。

免疫亲和技术是一种以抗原和抗体特异性识别为基础的选择性强、特异性高的样品前处理手段,2006年Load等[32]成功利用硼酸硅盐玻璃棒研制针对苯(并)二氮类化合物的免疫亲和探针并与LC-MS/MS联用对尿样中7-硝基氟硝西泮进行检测。Queiroz等[33]将抗体固定到石英毛细管内壁进行免疫亲和管内固相微萃取并同LC-MS联用测定人血浆中的药物氟西汀。目前商品化抗体种类很多,免疫亲和SPME技术可针对多种目标物,所以这项技术将有非常广阔的发展空间和前景。

3 SPME-HPLC装置优化

SPME-HPLC技术发展至今,除萃取涂层的研制更新,萃取支持物的材料、联用接口、萃取进行位置、仪器设备等方面也不断得到优化和发展。萃取支持物从早期较脆易断的熔融石英纤维发展到后来的不锈钢纤维、碳质基体、石墨碳纤维、玻璃-陶瓷棒、改性的笔状铅纤维、硫化铜选择性纤维等[34],在增加机械强度提高使用寿命的同时,拓展分析范围。SPME-HPLC的传统接口由一个六通阀和脱附室组成,Wu等人[35]采用一根3cm的C8柱、一个十通阀及双泵(解吸泵、分析泵)构造整个解吸及进样系统,有效抑制色谱峰的拓展效应,提高灵敏度,可惜此方法仍沿用手动方式。Bagheri等[36]将金属铜电镀到液相色谱进样环内壁,采用溶胶凝胶技术直接在进样环自制以3-(巯基)三甲氧基硅烷为前驱体的涂层,将该装置应用于水样中多环芳烃的检测,自来水中的加标回收率可达90%~104%。舒馨等[37]将毛细管内固相微萃取和微柱高效液相色谱(In-tube-SPME-μHPLC)在线联用,用一段内壁交联色谱固定相的毛细管取代定量阀的外置定量管直接用于样品的浓缩和进样,无需特制接口和专门洗脱液,通过检测水样中的蒽和芴,发现峰高较直接进样分别提高15倍和20倍。

4 展望

固相微萃取和高效液相色谱、液相-质谱技术联用的十几年发展进程中,鉴于其操作简单、高效、环保等优点,被广泛应用于各个领域。为进一步推动其发展、扩大其应用范围,SPME-HPLC可朝以下几方面发展:(1)继续发展新型涂层,提高纤维涂层的萃取容量和灵敏度,延长涂层寿命,扩大萃取对象;同时要深入研究高选择性、特异性的涂层,如分子印迹和免疫亲和技术等在SPME方面的应用还有很大的发展空间。(2)继续发展在线联用技术,这也是当前检测分析技术的热点。研制易于组装拆卸的接口及接口的商品化和标准化将受到关注,开展联用技术的自动化和数字化研究,仪器设备的微型化和集成化研究,将人为误差降至最低。(3)加强与其他先进的前处理萃取技术(例如超临界流体萃取)的联用研究,以及其他新型SPME技术(例如In-tip SPME)的应用和发展。相信SPME-HPLC必定会有更好的发展前景。

摘要：近年来随着现代分析技术的发展,固相微萃取技术作为一种简单有效的前处理手段被越来越多地应用于环境、食品、临床、生物学等方面的检测分析。本文主要综述固相微萃取和高效液相色谱、液相色谱-质谱技术联用的原理和发展现状,介绍该技术在实际应用中的优化,并对其发展前景作展望。

高效液相色谱 第5篇

免疫亲和色谱-高效液相色谱法测定土壤中氯磺隆残留

采用碳酰二咪唑(CDI)将Sepharose CL-4B活化并与纯化的抗氯磺隆抗体共价偶联,合成免疫亲和吸附剂并制备对氯磺隆具有特异性亲和力的免疫亲合色谱(IAC)柱.对IAC条件进行优化,选择0.02 mol・L-1 pH7.2磷酸盐缓冲液作吸附与平衡介质,80%(体积分数)甲醇水作洗脱剂.结果表明,在实验条件下,IAC柱对氯磺隆的.动态柱容量达2.6 μg・mL-1床体积.当标样溶液中氯磺隆含量为2.0 ng・mL-1时,经IAC柱富集后浓度提高近250倍.土壤中添加氯磺隆0.10 μg・g-1、5.0 ng・g-1,提取液以IAC柱分离富集,洗脱液采用高效液相色谱(HPLC)法测定,5次重复实验的平均回收率分别为92.9%、94.8%,相对标准偏差分别为8.46%、8.41%.成功建立了氯磺隆IAC-HPLC分析技术并用于土壤中痕量残留氯磺隆的测定.

作 者：冯大和 邵秀金 韦林洪 刘曙照 FENG Da-he SHAO Xu-jin WEI Lin-hong LIU Shu-zhao 作者单位：扬州大学环境科学与工程学院,江苏,扬州,225009刊 名：农业环境科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF AGRO-ENVIRONMENT SCIENCE年，卷(期)：25(6)分类号：X592关键词：免疫亲合色谱(IAC) 高效液相色谱(HPLC) 土壤 氯磺隆

高效液相色谱 第6篇

高效液相色谱技术概述

在色谱法中，高效液相色谱技术是重要分支，使用的流动相为液体，能够利用高压输液系统将流动相泵入色谱柱。而色谱柱内装有固定相，能用于进行不同极性单一溶剂、缓冲液和不同比例混合溶剂的分离，并将分离得到的各成分送入检测器，以实现试样分析。作为在农学、化学和商检等多个领域得到应用的重要分离分析技术，该技术具有较低检测限度，并且灵敏度较高，因此能够在食品检测中得到运用。

高效液相色谱技术在食品检测中的运用分析

在营养成分检测中的运用。在食品检测中，高效液相色谱技术可用于检测营养成分。在食品中的糖含量检测上，运用该技术能够完成多种糖的测定，比如酒类糖分和果聚糖异构体等。在脂肪酸检测方面，运用该方法能够对二十碳五烯酸等脂肪酸物质进行检测，从而为食品的加工、贮存和配比提供科学依据。而蛋白质具有相对分子量大和易发生变性等特点，以至于难以实现分离分析。运用高效液相色谱技术，则可以完成蛋白质和氨基酸分离，所以能够对这些营养成分进行灵敏测定。在食品保鲜方面，有机酸发挥着防腐的作用，同时也是食品鲜味和酸味的组成成分之一。运用高效液相色谱法进行检测，可利用反向C18柱完成有机酸分离，然后利用紫外吸收检测器等设备进行乳酸、柠檬酸和苹果酸等物质的检测。此外，在维生素检测上，可运用高效液相色谱法进行保健食品中多种水溶性维生素的检测。

在添加剂检测中的运用。在食品加工过程中，一般都要使用添加剂进行食品色、香、味得到改进，并对食品进行保鲜。而添加剂为人工合成或天然的物质，可以划分为甜味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂等。但是，人工合成的添加剂具有一定毒性，需限制其使用，所以还要进行食品中添加剂含量的检测。在甜味剂检测方面，运用高效液相色谱技术使用的色谱柱通常为C18柱、-NH2柱和阴离子交换柱，使用的检测器包含电导检测器和紫外-可见光检测器，可完成甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和甜味素等多种甜味剂的测定。在防腐剂检测方面，可使用R高效液相色谱法进行脱氢乙酸、BA和对羟基苯甲酸乙酯等防腐剂的测定，具有准确、灵敏和操作简便的特点。在色素检测方面，联合使用高效液相色谱技术和紫外-可见光检测器，并使用C18柱分离的梯度洗脱系统，可完成胭脂红、亮蓝、柠檬黄和日落黄等多种色素的测定。在抗氧化剂检测方面，运用R高效液相色谱法能够完成油脂中的9种抗氧化剂的同时测定，最低检测浓度可以达到2mg/kg。另外，运用高效液相色谱法进行BHA、PG、BHT等物质的分离，可分别达到84%、95%和99%的样品回收率。运用高效液相色谱法检测食品中的增白剂，可使用阴离子柱进行亚硫酸盐的分离，最低检出限能够达到0.2μg/kg。

在有毒有害物质检测中的运用。在食品中，可能含有多种有毒有害物质，如农药兽药残留和霉菌毒素等。如果误食含有霉菌毒素的食品，可能导致人出现急性或慢性中毒现象，甚至引发人体细胞癌变。运用高效液相色谱法，可进行食品中霉菌毒素的检测。从原理上来看，利用该方法能够结合不同微生物的化学组成或代谢产物进行样品中各种细菌的分析，以确定病原微生物的特异性化学组分，进而判定食品是否存在微生物超标问题。比如，在黄曲霉毒素检测方面，运用高效液相色谱法和质谱法进行食品检测，最低检测限可达0.02μg/kg，回收率则在77%-102%范围内。在农兽药残留检测方面，运用高效液相色谱法可完成热稳定性差和沸点高的农药残留检测，使用的色谱柱通常为C18或C8，联合使用的检测器包含荧光检测器、紫外检测器等。比如，联合使用高效液相色谱法和紫外检测器，可完成除虫脲、氟苯脲等蔬菜中苯甲酰脲类农药残留量的测定。此外，还可以利用高效液相色谱法与质谱法完成水果、蔬菜等多种食品中四溴菊酯残留检测。在兽药检测方面，联合使用高效液相色谱法和质谱法，则能完成多种磺胺类药物残留的测定，检出限在1.0-4.5μg/L的范围内，回收率在92%-100%之间，具有准确、方便和快速等检测优势。

通过分析可以发现，由于具有检测灵敏度高、分离效能高和分析速度快等优点，高效液相色谱法在食品营养成分、添加剂和有毒有害物质检测等方面得到了广泛应用，所以能够为食品安全提供更多保障。而相信随着该项技术的不断发展，其未来也将在食品检测领域获得更好的发展前景。

（作者单位：南京汉钦食品有限公司）

高效液相色谱 第7篇

夏红英等[3]报道了15%阿维菌素·毒死蜱水乳剂高效液相色谱分析方法, 刘志勇等[4]报道了20%阿维·毒死蜱水乳剂的高效液相色谱定量分析方法, 其均以甲醇+水作为流动相, 同时定量分析了阿维·毒死蜱水乳剂中阿维菌素和毒死蜱的含量。翟立红等[5]报道了6%阿维·毒死蜱乳油高效液相色谱分析方法, 以乙腈+水+冰乙酸为流动相, 对6%阿维·毒死蜱乳油进行了定量分析。但对于15%阿维·毒死蜱乳油的高效液相色谱分析却没有提及。本文采用高效液相色谱法, 以甲醇+水为流动相, 使用C18反相柱和可变波长紫外检测器, 对15%阿维·毒死蜱乳油中阿维菌素和毒死蜱的含量同时进行定量分析, 其准确度和精确度均能达到定量分析要求。该方法操作简便、快速、准确, 分离效果好, 可以作为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测的参考方法。

1 试验部分

1.1 试剂与仪器

试剂:甲醇 (色谱级) , 水 (新蒸二次蒸馏水) , 阿维菌素 (B1b+B1a标样, 99.1%) , 毒死蜱标样 (99.5%) , 15%阿维·毒死蜱乳油。

仪器:岛津LC-10AT高效液相色谱仪 (带可变波长紫外检测器) , Thermo ODS-C18 (150mm×4.6mm, 5μm) 不锈钢色谱柱, 过滤器 (滤膜孔径约0.45μm) 。

1.2 色谱操作条件

柱温:室温;流动相:V (甲醇) ︰V (水) =80︰20;流速:1.2m L·min-1;检测波长:235nm;进样体积:20μL。在上述色谱操作条件下, 毒死蜱的保留时间约为5.3min, 阿维菌素B1b的保留时间约为8.3min, 阿维菌素B1a的保留时间约为10.7min (图1、图2) 。

该操作条件是典型的色谱条件, 可根据不同的仪器和色谱柱做适当的调整, 以获得最佳效果。

1.3 测定步骤

1.3.1标样溶液的配制

称取0.01g阿维菌素 (B1b+B1a) 和0.10g毒死蜱标样 (精确至0.0002g) , 置于100m L容量瓶中, 加入甲醇溶解, 定容, 摇匀备用。

2.3分析方法精密度试验

采用上述方法对同一个15%阿维·毒死蜱乳油的样品平行测定5次, 结果见表1。

2.4 分析方法准确度试验

在已知含量的样品中分别加入不同量的阿维菌素和毒死蜱标样, 在上述操作条件下进行分析, 测定添加回收率, 结果见表2。

3 结论

上述试验结果表明, 本方法可同时检测15%阿维·毒死蜱乳油中的阿维菌素和毒死蜱含量, 有较高的准确度和精密度, 线性关系良好, 具有简便、快速、准确及分离效果好的优点, 能满足生产过程中的质量控制要求。

参考文献

[1]中国农药信息网.www.chinapesticide.gov.cn/service/aspx/CPMX.ASPX?ID=3363AC24380E3C4A2553D0DE6FCDE5C0.

[2]中国农药信息网.http://www.chinapesticide.gov.cn/service/aspx/CPMX.ASPX?ID=7BE72A4EC2F2E693D570C931621FB525.

[3]夏红英, 寿青毅, 等.15%阿维菌素·毒死蜱水乳剂高效液相色谱分析方法的研究[J].安徽农业科学, 2009, 37 (33) :16195-16196.

[4]刘志勇, 姚杰, 等.20%阿维·毒死蜱水乳剂的高效液相色谱定量分析方法[J].现代农药, 2010 (5) :38-40.

高效液相色谱法测定茶叶中多酚 第8篇

云南文山地区发现一种野生茶树,为探明其利用价值,本文取8种云南不同产地的茶叶与其对比实验测定其中茶多酚含量。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

Agilent 1100液相色谱包括:紫外二极管阵列检测器色谱工作站自动进样器,四元梯度泵,Milli-Q 50高纯水处理器(美国Millipore公司)。儿茶素(C)、表没食子酸儿茶素(EGC)、表儿茶素(EC)、表没食子基儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、绿原酸(Chlorogenicacid)、芸香苷(Rutin)标准品均购自Sigma和Fluka公司,纯度高于99%。甲醇、乙酸均为色谱纯试剂,实验用水为高纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱:AgilentZORBAX SB-C 18液相色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)。流动相为甲醇(B),0.5%醋酸(D)水溶液,按0min(B 18%+D 82%),4min(B 18%+D 82%),15min(B 30%+D70%),20min(B 80%+D 20%),28min(B 80%+D 20%),30min(B 20%+D 80%)梯度条件(均为体积分数),流速为1mL/min,进样体积为20μL,上述色谱条件下选择的检测波长为278nm。

1.3 实验方法

本实验采用了两种前处理方法进行比较。

1.3.1 索氏提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,于80℃水浴条件下蒸馏1h,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

1.3.2 超声提取法

茶叶样品粉碎过180μm(80目筛),称取0.2000g,加入70%乙醇40mL,保持30℃恒温提取24h,分别在0h,6h和24h时间点上超声20min,过滤并定容到50mL。用0.45μm针头过滤器过滤,进样20μL分析。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线、相关系数及检测限

分别配制质量浓度为100.0、50.0、25.0、5.0、1.0mg/L标准溶液,进样后根据浓度和峰面积,计算出回归方程。根据信噪比S/N=3,测得各组分的检出限,结果见表1。

注:A为峰面积(peakarea);C为质量浓度(concentration),mg/L

2.2 回收率实验及精密度

准确称取文山野生茶2份,其中1份加入已知量的多酚标样。将两份样品在相同条件下测定5次,通过加入多酚的测出量计算回收率,并计算其RSD,结果见表2。

2.3 样品分析结果

茶叶样品按以上中的样品前处理过程处理进样分析,索式提取结果见表3,超声提取结果见表4。

%

注:“-”指在该样品中未检出

%

注:“-”指在该样品中未检出

3 结论

采用索氏提取法及超声提取法两种方法对茶叶中多酚进行提取,结果表明,超声提取法对绿原酸、EGCG、EC、ECG等的提取率比索氏提取法要高。在比较9种茶叶样品的多酚含量时得出如下结论,七子青饼中茶多酚总的含量相对较高,逸神越陈越香中茶多酚总的含量相对较低。文山野生茶中绿原酸的含量相对较高。

参考文献

[1]魏泱,丁明玉.茶多酚的色谱分析法[J].色谱,2001,18(1):35-38.

[2]姚林,王广增.茶多酚的抗肿瘤研究[J].肿瘤防治研究,1995,22:123-126.

高效液相色谱 第9篇

1 高效液相色谱技术在食品营养检测中的应用分析

1.1 糖类检测

在食品中, 必不可少的一种物质成分就是糖类, 通常包括有淀粉、果糖和葡萄糖等。在检测糖类的时候, 往往会因为糖类自身的易溶于水和还原性等特点, 而不能科学准确的提取相关检测参数, 加大了检测难度。但是通过高效液相色谱技术的应用, 则能够更好的测定食品中所蕴含的碳水化合物, 同时更好的判定食品中各种糖类物质的质量。

1.2 氨基酸检测

作为生物体主要基础性物质的氨基酸, 它包含有蛋白质和酶, 但是因为这种物质具备的易变性, 使得在检测中难以进行检测和判断, 因此想要得到良好的物质参数提取效果, 就必须要通过新技术和方法加以实现, 而高效液相色谱技术所具备的高度灵敏性以及较大的流动相色范围能够很好的满足这一要求。再加上该种技术的应用具备的操作简便、检测精确、重现性好以及分辨速度快, 使其得到食品检测领域的广泛应用和推广。

1.3 维生素检测

在以往食品维生素的检测中, 一般都是在相关食物中提取维生素, 然后再进行检测和检定, 这不仅不能得到良好的工作效率, 还有可能会影响食品质量。但是高效液相色谱技术因其操作简便、灵敏度高并具有一定的抗干扰性, 而得到食品检测领域的推崇, 同时在利用高效液相色谱技术之后, 还能够得到比传统检测结果更为准确的检测检定结果。

2 高效液相色谱技术在食品农药残留检测中的应用分析

2.1 对食品农药残留的检测

为了提高农作物的生长和产量, 当前农业往往会利用各种农药和有机化合物质, 但同时因为不科学的大量使用, 使得农产品中残留一定的农药和化学残留物。而这些残留物会因为分子量大、热不稳定性等因素, 对食用者的身体健康造成一定危害, 同时在检测中也因其所具有的特点而不容易被检测出来, 因此利用高效液相色谱技术这一方法进行食品检测, 能够有效的解决传统气相色谱法检测工作中对残留物质的检测缺陷, 成为当前定性、定量农产品中农药和化学残留物的重要手段。例如高效液相色谱技术柱后衍生荧光检测方法, 对多种水果样品中含有的7种氨基酸甲酸脂类农药残留量进行检测和测定。

2.2 对食品兽药残留的检测

兽药残留通常是指食品动物在用药之后, 动物产品中的食用部分中存在的原型药物以及相关代谢产物。一般情况下, 动物产品中残留的兽药包括抗生素类、生长促进剂、抗寄生虫类等兽药。例如检测养殖海水中恩诺沙星、环丙沙星以及诺氟沙星的检测来说, 工作人员会采取高效液相色谱-荧光测定方法进行检测, 首先对水样进行稀盐酸的酸碱度调和, 再通过HLB固相萃取柱完成净化和富集, 最后再通过外标法对喹诺酮类抗生素的残留量进行定量, 这种检测方法不仅具有高度的灵敏度, 同时还具备良好的重现性。

3 高效液相色谱技术在食品添加剂检测中的应用分析

3.1 甜味剂的检测

在食品中增加甜味的物质通常都是甜味剂, 一般根据其营养价值进行分类, 即非营养型甜味剂和营养型甜味剂, 其中非营养型甜味剂是人工合成的, 这种甜味剂因为价格低廉得到了广泛使用, 但是食用者食用过多, 那会对人体健康造成危害。而通过液相色谱-气相色谱的联用技术, 再结合其他相关色谱柱和采集模式, 就可以实现果冻、饮料食品中非营养型甜味剂含量的定量测定, 并且这种方法的分析时间短, 选择性好。

3.2 防腐剂的检测

对于食品中防腐剂的检测和测定, 高效液相色谱技术的应用同样可以得到准确的检测结果, 同时其操作简便, 反应灵敏。例如通过KFe (CN) 3、Zn (Ac) 2溶液对含乳饮料和纯牛奶样品进行预处理, 并利用甲醇混合溶液与甲酸盐缓冲液的流动相和C18色谱柱, 在波长为225nm的紫外线环境下进行检测, 可以精确的检测出食品中所含的苯甲酸含量。

4 结束语

综上所述, 在食品检测领域中高效液相色谱技术得到广泛的应用, 它对食品安全的检测有着十分重要的意义和作用, 也是保证人们饮食健康的重要手段, 因此食品检测相关部门一定要认识到高效液相色谱技术的重要性, 并随着科学技术的更新和进步, 不断改善和完善高效液相色谱技术, 并通过与其他检测技术的结合, 扩大食品检测范围, 提高食品安全检测水平。

参考文献

[1]辛丹敏.高效液相色谱法在食品分析和药物分析中的应用研究[D].西南大学, 2009, 08:10+21.

高效液相色谱法测定奥沙利铂含量 第10篇

关键词：高效液相色谱法,奥沙利铂,含量测定,方法学,稳定性,准确度,线性范围

奥沙利铂为继顺铂, 卡铂之后, 由法国Sanofi Winthrop公司开发, 并于1996年首次在法国上市的第三代铂类抗癌药物, 奥沙利铂联合方案2004年被FDA批准为治疗晚期结肠癌的一线方案, 对卵巢癌, 淋巴瘤, 非小细胞肿瘤也有一定的疗效。中国药典2010年版未收录该药。本文建立了奥沙利铂的反相高效液相色谱法 (RP-HPLC) 含量测定方法, 为奥沙利铂的进一步研究提供了可靠的分析方法及理论依据。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪;Dikma C18色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ;MS105型精密电子天平 (梅特勒) ;奥沙利铂对照品 (批号:100584-200902, 含量为100.0%, 中国食品药品检定研究院) ;奥沙利铂原料药 (自制) ;磷酸、乙腈均为色谱纯, 氢氧化钠为分析纯, 水为注射用水。

2 含量测定方法

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:磷酸溶液 (取10%磷酸溶液0.6ml, 加水稀释成1000ml, 用氢氧化钠溶液或磷酸调节PH值至3.0) -乙腈 (99:1) , 检测波长为210nm;流速为1.0ml/min;柱温30℃;进样量20μl。

2.2 测定法

取本品10mg, 精密称定, 置100ml量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液, 精密量取20μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 另取奥沙利铂对照品, 同法测定。按外标法以峰面积计算, 即得。

3 方法学试验

参照拟定的高效液相色谱法进行含量测定, 并对该方法进行方法学研究。

3.1 准确度试验

取已知含量的供试品、奥沙利铂对照品, 配制80%、100%、120%测试浓度溶液各3份, 按加样回收率测定法测定, 结果见表1。

结果表明:含量测定平均回收率为100.14%, RSD为0.77% (n=9) , 准确度试验符合测定要求。

3.2 线性范围试验

储备液的制备:称取奥沙利铂对照品10mg, 置50ml容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为储备液。精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml, 分别置10ml容量瓶中, 加水稀释至刻度, 作为线性试验溶液。分别精密量取20μl, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。以奥沙利铂浓度与相应峰面积计算线性回归方程, y=13308x+102.5, 相关系数r=0.9991。

由以上结果可以看出, 奥沙利铂浓度在0.06mg/ml~0.14mg/ml范围内, 浓度与峰面积之间具有良好的线性关系。

3.3 重复性试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 重复测定6次, 计算其平均值。结果表明:按该含量测定方法对奥沙利铂进行含量测定, 6次测定的平均含量为标示量的100.58%, RSD为0.71% (n=6) , 平行性好, 重复性试验符合测定要求。

3.4 溶液稳定性试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 每隔1小时测定一次, 共测定5次, 计算其平均值。结果表明:奥沙利铂平均含量为标示量的100.44%, RSD为0.36% (n=5) , 供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。

3.5 进样精密度试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 精密量取20μl, 注入液相色谱仪, 连续进样6次。结果表明:奥沙利铂测得峰面积RSD为0.46% (n=6) , 该方法进样精密度良好。

3.6 中间精密度试验

取供试品, 照含量测定项下方法试验, 变动因素为不同日期, 不同人员。计算其平均值以及相对标准偏差RSD, 考察该测定含量方法的精密度。结果表明:奥沙利铂平均含量为标示量的100.18%, RSD为0.41% (n=6) , 该测定方法中间精密度良好。

3.7 定量限

取3.2线性范围试验中对照品储备液, 分别进行梯度稀释, 制备成梯度浓度的对照品溶液, 分别进样20μl, 直至信噪比S/N=10时浓度进行计算, 测得结果该高效液相色谱含量测定方法下奥沙利铂的定量限为8ng。

4 样品含量测定

取三批奥沙利铂原料供试品, 分别精密称定约10mg, 置100ml量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液, 精密量取20μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 另取奥沙利铂对照品, 同法测定, 按外标法以峰面积计算。三批供试品含量测定结果分别为99.8%, 100.2%, 100.3%。拟定本品含量限度为98.0%~102.0%之间, 三批供试品含量测定结果均符合规定。

5 讨论

建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、溶液稳定性试验、进样精密度试验、中间精密度试验及定量限等方法学试验, 表明我们拟定的高效液相色谱法奥沙利铂含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点, 可有效控制奥沙利铂的含量。

参考文献

[1]陈红梅.奥沙利铂原料药有效含量的测定[J].广东化工, 2007, 34 (1) :79:80.

[2]田琳.HPLC法测定注射用奥沙利铂主药含量[J].中外医疗, 2009, 14:14.

[3]刘小平, 耿丹清, 石炳光等.奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的含量测定[J].中国医药导报, 4 (25) :101-102.

高效液相色谱 第11篇

关键词：乳品检测 有机酸 酸奶 高效液相色谱法

中图分类号：TS207文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）18-0026-01

离子色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法是目前常用三种有机酸检测办法，其中高效液相色谱法因其操作简单、准确度高等优点运用最为广泛。高效液相色谱法能同时检测食品中9种有机酸，对于乳品中有机酸的检测非常方便，具有实用价值，本文谈谈高效液相色谱法的研究情况。

1 材料与方法

（1）仪器与器材。高效液相色谱仪（PE-200型）超声波振荡仪（KQ-250型）可见分光光度计（UV-260）离心机。（2）试剂。乳酸、乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、丁二酸、丙酸，浓度分别为：10.0mg/ml，抗坏血酸20.0mg/ml，苹果酸40.0mg/ml，于冰箱保存作为贮备液，抗坏血酸标准溶液临用新配。（3）实验方法：①色谱条件。色谱柱为C18柱（5μm，250×4.6mm）；柱温：25℃；流动相：甲醇：0.01mol/L（NH4）2HPO4缓冲溶液pH2.8；流速：0.7ml/min；可见光-紫外检测器，检测波长215nm。②酸奶样品处理及测定。称取搅匀的酸奶样品2g于10ml比色管中，用超纯水稀释至10.0ml，混匀后超声脱气，取400μL稀释酸奶于Eppendof管中，加入100μL超纯水、3.5mol/L高氯酸25μL，混匀，离心（12000r/m，6min）使蛋白充分沉淀，取上清液过0.45μm滤膜作为样液。样液、混合标准应用液均取10μL进样，以保留时间定性，峰高增量法确认，标准曲线法定量。

2 结果与讨论

高效液相色谱法（HPLC）分析是1970年代迅速发展一种高效分离技术，小说和快速分析。由于不同的分离机制，可以分为以下几种类型：液固色谱法、液相色谱法、离子交换色谱、离子色谱、色谱法应该使用更多，占70% - 80%的高效液相色谱法（HPLC）。高效液相色谱法（HPLC）具有以下突出优点和特点：

高效液相色谱法（HPLC），高电压，高效液相色谱法（HPLC）液体，液体作为流动相，称为载体。由于加载流体流经色谱柱时，压力比较大，为了使液体迅速通过色谱柱，必须携带流体压力，压力一般150～350x 105pa。高速度：高效液相色谱法（HPLC）与高压、携带液速度快，因此分析所需的时间远低于经典液相色谱，超过十分钟至数十分钟才能完成。效率高：高效液相色谱柱效率非常高，可以达到超过30000板/m。灵敏度高：由于检测器的灵敏度高，自动操作，分析精度高、所需样本量较少。高分辨率，可以选择固定相，流动相以达到最佳的分离效果。高适用范围：百分之七十以上的有机化合物用高效液相色谱法（HPLC）分析，特别是高沸点、大分子化合物，极性强、热稳定性差的分离和分析，显示了优势。

高效液相色谱的缺点。需要高压力：一般可以达到150～350x105pa.2。柱效应：在注入器和检测器之间，除了任何死亡空间，其他职位如取样器，柱接头、连接管和细胞，如果流动相的流型的变化，分离物质的任何扩散和保留会造成色谱峰显著扩大，柱效率较低。

高效液相色谱（HPLC）的分类根据不同的分离机制，高效液相色谱（HPLC）法可分为：（1）分配色谱固定相是液体，使用液体固定相对于组件的样品溶解能力不同，样品的各种组件在液相固定相分配系数的差异，并实现样品的设置点色谱分离。根据不同的相对极性固定相和液相，可分为正相分配色谱和反相色谱法。（2）分配色谱法或逆转阶段。吸附色谱法，使用固体吸收剂作为固定相，用不同极性溶剂作为流动相，基于每个组件的样本实现分离。（3）吸附剂吸附性能的差异。离子交换色谱法，离子交换剂为固定相。

成分的高效液相色谱（HPLC）（1）高压泵、高效液相色谱法（HPLC）使用色谱柱是很薄（1～6毫米），使用的固定相粒径非常小（几微米到几微米），所以流动相在柱中的流动阻力很大，在一般情况下，流动相流速非常慢，效率低，耗费时间。为了实现快速、高效分离，将流动相的压力很大，加速流动的列。因此，必须使用高压高压输液泵。（2）梯度洗脱装置：梯度洗脱是携带流体包含两个（或更多）不同极性的溶剂剂，按照一定程序分离的过程中不断变化的负载电压和极性溶剂的液体，通过携带液体改变极性变化分离组件分离的因素，为了提高分离效率。（3）色谱柱：是最重要的组件的色谱仪。通常使用后壁玻璃管或不锈钢管的内表面抛光，腐蚀的一些样品，需要高压电阻、铜管、铝管或聚（四氟乙烯管。发展趋势是减少包装大小和柱直径为了提高柱效率。（4）样本设备：注射器灌装设备跟踪样本注射器和抽样方法时，气相色谱方法。注射压力小于150x105pa，当注射压力大于150x105pa，停止流入必须使用样本。（5）检测设备：主要用于监控组件的色谱柱分离后的浓度的变化，并记录仪器绘制光谱进行定性和定量分析。（6）数据处理设备：高效液相色谱法（HPLC）分析的结果除了可用光谱数据记录器地图，微处理器和色谱数据工作站也可以用来记录和色谱分析数据处理。合成和天然高分子化合物等，涉及石油化工产品、食品、药物合成和生物化工产品和环境污染等，约占80%的有机化合物，其余20%的有机化合物，包括永久气体、挥发性低沸点和中分子量化合物只能气相色谱分析。

3 结语

采用乙酸锌-亚铁氰化钾、硫酸锌-亚铁氰化钾、硫酸铜-氢氧化钠等来沉淀奶制品中的蛋白质，此类方法在国内外较为常用，但是它操作步骤多，耗费时间长。然而本文通过用3.5mol/L高氯酸来沉淀奶制品中的蛋白质，操作简便，不影响待测组分的测定。综上所述，高效液相色谱法在乳品检测中应用广泛，它可对食品质量的监管与食品加工工艺的研究提供技术支持，具有使用价值。

参考文献

高效液相色谱法测定AMPS的纯度 第12篇

目前AMPS作为有效的改性单体已经渗入油田化学品各个领域的聚合物改性, 很好解决了采油聚合物中抗盐性、抗高温性、抗剪切三大棘手问题。中国AMPS最大市场是油田三次采油, 作为钻井液、完井液和压裂液等。目前中原油田等已经将AMPS聚合物作为油田三次采油的化学品立项, 预计仅此一项2005年国内将至少消耗1万吨。

目前全球约1/3的AMPS单体用于水处理工业。AMPS的均聚物或与丙烯酰胺、丙烯酸等单体的共聚物, 可作为污水净化过程中的淤泥脱水剂;在封闭水循环系统中用作铁、锌、铝、铜以及合金的防腐剂;还可用于加热器、冷却塔、空气净化剂和气体净化剂的除垢剂、阻垢剂等。国外大量使用表明, 以AMPS作为处理剂用量少, 效果优于现有聚丙烯酰胺类水处理剂。目前国内一些大中城市污水处理已经开始使用AMPS, 其中华东年消耗约300吨, 华南年消耗约150吨, 京津唐年消耗200吨, 年总消耗量约650吨, 预计2005年将达到1000吨。

目前AMPS已成为国内引人瞩目的热点有机化工原料, 部分科研机构的合成技术也较成熟, 尤其是中国许多油田处于三次采油期, 国内水处理领域用量巨大, 都对AMPS质量和数量提出了更高更多要求。因此, 国内在加快建设AMPS装置的同时, 应加大应用研究力度, 以促进AMPS工业健康快速发展。

AMPS单体的纯度对其后续的加工有着很大的影响, 本文建立了一种快速分析AMPS单体纯度的方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与药品

HP1100高效液相色谱仪 (美国Agilent) , 包括G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器和G1329A自动进样器;Milli-Q超纯水仪 (美国Milli-Pore公司) ;磷酸、磷酸二氢钾均购自北京分析试剂厂, 均为分析纯;甲醇为Fisher试剂公司色谱纯;水为超纯水。

1.2 溶液配制

流动相的配制:以甲醇体积含量为5%的超纯水溶液为溶剂, 配制0.01mol/L KH2PO4磷酸盐缓冲液, 并以5%磷酸调节溶液p H为2.3, 经0.45μm水系滤膜过滤后备用。

1.3 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相:0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节p H为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0m L﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。

1.4 标准曲线的制备

因实验室没有AMPS的标品, 所以使用日本的7号样品作为标准来测定其他样品的相对纯度。

根据前述实验步骤和条件, 按表一将混合标准溶液 (M溶液) 逐级稀释, 得不同浓度的标准溶液, 经0.45μm水系滤膜过滤后, 以进样5μL进行色谱分析, 以对照品浓度 (X) 对峰面积 (Y) 进行线性回归, 得工作曲线:

1.5 样品的测定

将样品按照1.4的方法配制, 以5ul进样量进入色谱分析, 结果见表2。

1.6 讨论

以上分析六种AMPS单体的纯度, 从测定结果 (图1) 可以看出, 样品在色谱柱中的保留时间完全吻合, 具有很高的精确度。在实际的AMPS聚合工作中, 同等条件下2号样合成效果最好, 3号样聚合效果最差, 与色谱分析的纯度结果一致, 说明这种方法是可行的。所建立的分析方法不仅用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。

由于实验室缺少AMPS的标品采用了日本产7号样作为相对标准, 在以后的检测工作中应使用AMPS的标品作为标准物, 以取得准确的数据。

2 结论

本文建立了高效液相色谱法测定AMPS单体的方法, 该方法准确、简便、快速, 不仅适用于单体纯度的测定, 而且还可应用于聚合物开发、生产过程中单体转化率的测定。该方法可用于目前市场上一些油田化学原料的检测分析, 便于区分不同批次样品纯度, 方法简便易操作。

摘要：本文建立了分析油田化学常用原料AMPS的高效液相色谱 (紫外检测器) 的方法。色谱柱为ZORBAX SB-AQ柱 (5μm, 4.6×150mm, Agilent) ;流动相采用0.01mol/L KH2PO4溶液 (用5%H3PO4调节pH为2.3) -甲醇 (体积比为95∶5) ;检测波长:210nm;流速:1.0mL﹒min-1;柱温:20℃;进样量:5μL。采用该方法可以应用该法对不同来源AMPS单体原料进行了成功分析检测, 分析过程简便、结果可靠, 可用于固井水泥外加剂合成原料的纯度分析。

关键词：液相色谱,纯度分析,油田化学品原料

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