肝脏纤维化范文（精选7篇）
肝脏纤维化 第1篇
资料与方法
据统计2010年12月-2013年2月在本医院行肝脏纤维化检测的患者约16000例次, 从中挑选出2000例次符合以下条件的受检者。
入选标准:肝脏纤维化检测结果肝脏硬度12~16k Pa, IQ值中位数0、8;年龄30~50岁, 男女性别无明显差异;BMI<26;受检者均为HBV或HCV感染者, 大多数无自觉临床症状或有轻度乏力;化验ALT<120U/L, 血常规、凝血功能、总胆红素、血清白蛋白均正常范围。
方法:受检者中部分人进一步行肝脏病理检测, 部分人接受了电子胃镜检测。病理结果采用《2000年病毒性肝炎防治方案》中肝脏病理标准。病理切片观察者为同一人。胃镜诊断者为同一人, 从而在一定程度上减少了检测误差。
结果
受检者中有450例进一步接受了肝脏病理检测, 证实为活动性肝硬化者有400例, 与肝脏纤维化检测一致率88.9%。受检者中有350例进一步接受了电子胃镜检查, 其中200例表现为轻度食管静脉曲张, 与肝脏纤维化检测一致率57.1%。
肝脏纤维化检测对代偿期肝硬化患者具有明确的辅助诊断价值, 其检测结果与肝脏病理检查结果符合率较高, 明显优于胃镜检测。肝脏纤维化检测为无创性检查, 较肝脏病理及胃镜检查更易于被检者接受, 可根据临床需要短期内反复测试, 而且费用较低廉。
讨论
国内中药抗肝纤维化的动物实验和人体临床研究提示早期肝硬化是可逆的[3]。肝硬化的发病年龄20~50岁, 男女无明显性别差异。肝硬化的发展演变包括以下4个方面: (1) 广泛肝细胞变性坏死, 肝小叶支架塌陷; (2) 残存的肝细胞不沿原支架排列再生, 形成不规则结节状肝细胞团[4]; (3) 假小叶形成; (4) 肝内血液循环的紊乱, 造成肝血循环障碍, 继而导致门脉高压, 且加重肝脏营养障碍。早期的纤维化是可逆的, 但到后期有再生结节形成则不可逆[5]。
结合早期肝硬化的病因和发病机制, 治疗主要是祛除病因和抗肝纤维化[6]。治疗时要注意长期性及其不良反应, 联合用药。对早期肝硬化患者早期诊治, 对患者预后及病程有重要意义。目前抗肝纤维化治疗主要是抑制HSC的活化和增殖, 减少细胞因子的释放[7]。公认药物有IFN (a、b、y3型) , 可直接抑制HSC的增殖和ECM的合成。L-半胱氨酸可直接抑制HSC的活化增殖和转化, 促进HSC凋亡;祛除炎性刺激;增加ECM降解, 起到抗纤维化作用。和络舒肝胶囊是由27味中药经科学加工精制而成的国家保护中药, 可抑制胶原蛋白为主的肝纤维外基质成分的增生, 有效地降解胶原纤维为主的肝细胞外基质成分的增生[8]。苦参素胶囊通过抑制TGF-β等多种细胞因子的表达, 抑制肝星状细胞活化增殖等直接抗肝纤维化。
肝脏在人体中有重要的生理功能, 有消化作用, 调节糖类、氨基酸、脂类的代谢, 有合成各种蛋白质及其他物质的功能。因此, 肝脏疾病不容忽视。合理选择抗肝纤维化药物, 发挥药物疗效, 可延缓甚至逆转病程。而及早发现肝脏纤维化是用药前提。从观察情况来讲, 笔者认为Fibroscan可帮助临床工作者及早发现肝硬化, 使患者及早得到治疗, 延缓或逆转病程。
然而在临床工作中发现急性肝炎及慢性肝炎的急性发病阶段, 如果谷丙转氨酶大于200U/L, 经Fibroscan肝纤维化检测肝硬度值明显增高。待病情恢复后如果复测肝硬度值下降至11k Pa以下, 考虑为肝炎阶断;如果复测值均大于14k Pa, 应积极进行肝脏病理或胃镜检查以排除肝硬化。一般复测时间与首测时间间隔>3个月, 其结果相差较为明显。由于以上临床观察病例数有限, 尚有待进一步观察。
摘要：目的:了解Fibroscan对早期肝硬化的辅助诊断价值, 为Fibroscan在肝病领域的应用提供科学的依据。方法:2010年12月-2013年2月接受Fibroscan检测的符合条件的受检者的肝硬度kPa值进行统计分析。结果:2000例符合条件的受检者中, 450例进一步接受肝脏病理检测, 证实为活动性肝硬化400例;有350例接受电子胃镜检查, 其中200例被镜下诊断为轻度食管静脉曲张。结论:应用Fibroscan反复检测肝硬度kPa值>12kPa, 提示早期肝硬化, 应及早接受抗肝纤维化治疗, 可延缓或逆转病程。
关键词：Fibroscan,早期肝硬化,肝脏病理,电子胃镜,肝纤维化
参考文献
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肝脏纤维化 第2篇
1 资料与方法
1.1 病例选择
慢性乙型肝炎患者130例,其中男性82例,女性48例,年龄21～55岁。全部病例随机分成4组,3个治疗组每组38例,对照组40例。4组在性别、年龄、病程及病变程度上均具有可比性。治疗方法:3个治疗组是在对照组治疗的基础上分别口服加用:(1)复方胎牛肝提取物,2片/次,3次/d,口服;(2)安络化纤丸,6g/次,3次/d;(3)复方鳖甲软肝片,口服,4片/次,3次/d,90d为1疗程。
1.2 观察项目
观察患者治疗前后症状、体征、不良反应等。应用放射免疫法检测患者血清肝纤维化标志物HA、LN、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),观察用药前后各项指标及肝脏生化学指标ALT、AST、TB变化。
1.3 统计学处理
数据采用χ2检验和t检验。
2 结果
2.1 治疗后治疗组和对照组患者的症状、体征均有不同程度的好转,两组相比差异有显著性。
两组肝功能均较前明显改善,治疗组优于对照组,但治疗组间无显著差异,见表1。
2.2 两组患者血清肝纤维化指标的变化
见表2。
与同组治疗前比较,P<0.05;治疗后治疗组与对照组相比,P<0. 01;治疗组间比较,P>0.05。
与同组治疗前比较,P<0.05;治疗后治疗组与对照组相比,P<0.01;治疗组间比较,P>0.05。
3 讨论
近年来研究表明:肝纤维化形成过程已趋向明朗。安珐特、安络化纤丸、复方鳖甲软肝片3种药物从不同机制延缓肝纤维化进程,达到相同的效果。但这3种药物有无相互协同作用,或联合应用有无加强作用,则有待进一步研究。
摘要：目的观察安珐特、安络化纤丸、复方鳖甲软肝片在慢性肝炎抗肝脏纤维化疗效方面的作用,了解三者在临床治疗方面的效果。方法对本科2006～2008年同期收治的慢性肝炎患者随机分为治疗组和对照组,前者采用综合疗法分别加用上述3种药物,后者单用综合疗法,分别进行统计学分析。结果治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论三者的生物活性稳定、安全性较高,可有效延缓肝纤维化进程,是治疗慢性肝炎的理想药物。
关键词：慢性肝炎,抗肝脏纤维化,回顾性研究
参考文献
肝脏纤维化 第3篇
1 资料与方法
1.1 一般资料
本次研究选择2012年3月-2015年3月本院接诊的60例慢性肝病患者为研究对象。入选患者均确诊符合慢性乙型肝炎诊断标准, 并排除肝功能衰竭患者, 根据患者病情分为慢性肝炎组 (慢性乙型肝炎患者28例) 与肝炎代偿期组 (乙型肝炎肝硬化代偿期患者32例) 。慢性肝炎组:男20例, 女8例;年龄25~66岁, 平均 (39.8±4.2) 岁。肝炎代偿期组:男22例, 女10例;年龄24~68岁, 平均 (39.5±4.5) 岁。两组患者在前述资料上比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
两组患者均实施吲哚氰绿 (ICG) 排泄试验、肝脏组织纤维化定性、肝脏硬度检测及终末期肝病模型 (MELD) 评分, 具体措施为: (1) ICG排泄试验:入院后测量身高与体质量, 取空腹外周静脉血进行Hb检测, 将前述指标输入脉冲式色素浓度图像分析仪中, 设定ICG给药量;空腹安静状态下平卧, 将分析仪连接患者鼻翼处, 于6~9 s将配置好的ICG从患者肘部正中注入, 测量ICG 15 min时的停滞率 (ICG R15) 与血浆清除率 (K值) 。 (2) 肝脏硬度检测:仰卧及右臂外展位, 将腋前线、腋中线7~9肋间作为探测点, 利用法国Fibroscan仪进行肝脏硬度检测[2]。 (3) 肝脏组织纤维化定性分析:取肝左外叶组织, 制作常规切片, 实施HE染色后予以Massin染色, 并利用计算机全自动图像分析, 蓝色区域为胶原纤维成分, 最后利用显微镜观察与测量纤维化面积[3]。
1.3 统计学处理
利用SPSS 18.0软件对本次研究数据进行统计学分析, 计量资料采用 (±s) 表示, 行t检验及线性相关性分析, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者ICG R15值、ICG K值及肝脏硬度相关性
慢性肝炎组与肝炎代偿期组ICG R15值、ICG K值及肝脏硬度比较差异均有统计学意义 (P<0.05) , 见表1。同时随着肝硬化程度增加, ICG R15值明显升高, ICG R15值与肝硬化程度成正相关 (r=0.785, P<0.01) , 而ICG K值则明显降低, ICG K值与肝硬化程度成负相关 (r=-0.731, P<0.01) 。
*与肝炎代偿期组比较, P<0.05
2.2 不同肝功能分级MELD评分比较及其与肝纤维化相关性
根据肝功能分级分为Child A级、Child B级、Child C级, 其MELD评分依次为 (9.53±3.55) 分、 (16.82±4.92) 分、 (23.77±7.41) 分, 可见随着肝功能分级越严重, MELD评分越高, 显示肝功能损害越严重;根据MELD评分分为三组, 比较显示MELD评分与肝纤维化呈现出正相关性 (r=0.817, P<0.01) , 见表2。
3 讨论
慢性肝病因肝脏组织受损, 肝脏储备功能被破坏, 为此及时准确评估肝脏储备功能, 对于诊断与治疗及预后的指导有着积极的意义。本院针对接诊的60例慢性肝病患者进行回顾性分析, 对肝脏储备功能与肝纤维化相关性进行探讨。根据病情分为慢性肝炎组 (慢性乙型肝炎患者28例) 与肝炎代偿期组 (乙型肝炎肝硬化代偿期组32例) , 两组均采取ICG排泄试验、MELD评分、肝脏硬度检测等。结果显示随着肝硬化程度增加, ICG K值明显降低、R15值明显升高, 组间比较差异均有统计学意义 (P<0.01) , ICG K值与肝硬化程度呈现出负相关, 而ICG R15值与肝硬化程度呈现出正相关;此外, 肝功能分级越严重, MELD评分越高, 肝功能损害越严重, MELD评分与肝纤维化呈现出正相关。
ICG是类色素, 在静注后迅速和血清蛋白结合, 可选择性地被肝细胞摄取, 之后游离并分泌到胆汁中, 经过肠道后排出体外, 并未参与到肠肝循环及生化转化, 故而不会从肾脏排泄出, 无明显毒副但应。目前, ICG排泄试验已经取代磺溴酞钠 (BSP) 成为肝脏储备功能检测最为理想的色素, 一般在静注15 min后血液中ICG R15或ICG K可作为衡量肝脏储备功能指标, 不仅可客观反映肝脏储备功能, 同时对外科手术方式与时机选择有着积极的意义[4]。比如有学者针对肝细胞性肝癌肝切除患者术前实施ICG R15、氨基酸清除率及氨基比林呼吸试验, 结果显示ICG R15属于肝细胞癌术前最为有效的肝脏储备功能评估指标。MELD评分属于新型评价体系, 充分结合肾功能状况, 并考虑肝肾综合征晚期并发症, 可对病情严重程度进一步划分, 更理想地判定终末期肝病病情严重程度, 进而预测预后, 加上MELD评分有着误差小与重复操作性强等优势, 逐渐代替传统Child-Pugh评分, 成为终末期肝病接受肝移植先后顺序的主要判定指标[5]。
综上所述, 慢性肝病肝脏储备功能随肝纤维化增加而降低, 为此加强肝纤维化检测对于衡量慢性肝病肝脏储备有着积极的意义, 值得重视。
摘要：目的:探讨慢性肝病患者的肝脏储备功能与肝纤维化间的相关性。方法:抽取2012年3月-2015年3月本院接诊的慢性肝病患者60例作为研究对象, 回顾性分析其临床资料, 根据患者病情分为慢性肝炎组 (慢性乙型肝炎患者28例) 与肝炎代偿期组 (乙型肝炎肝硬化代偿期患者32例) 。两组患者均实施吲哚氰绿 (ICG) 排泄试验、肝脏组织纤维化定性、肝脏硬度检测及终末期肝病模型 (MELD) 评分, 并对结果进行对比分析。结果:随着患者肝硬化程度增加, ICG K值明显降低, R15值明显升高, 组间比较差异均有统计学意义 (P<0.01) , ICG K值与肝硬化程度呈现出负相关 (r=-0.731, P<0.01) , 而ICG R15值与肝硬化程度呈现出正相关 (r=0.785, P<0.01) ;肝功能分级越严重, MELD评分越高, 肝功能损害越严重, MELD评分与肝纤维化呈现出正相关 (r=0.817, P<0.01) 。结论:慢性肝病患者的肝脏储备功能随肝纤维化增加而降低, 为此加强肝纤维化检测对于衡量慢性肝病患者的肝脏储备有着积极的意义, 值得重视。
关键词：慢性肝病,肝脏储备,肝纤维化,相关性
参考文献
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肝脏纤维化 第4篇
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集本院2008年3月~2011年6月慢性乙型病毒性肝炎患者162例。其中通过肝脏穿刺病理活检确诊的肝纤维化、早期肝硬化患者89例, 为肝纤维化及早期肝硬化组, 根据肝硬化病理分期标准:该组中S1、S2期 (即轻度肝纤维化) 患者为48例, 男34例, 女14例, 年龄19~61岁, 平均 (37.5±12.3) 岁;S3、S4期 (即重度肝纤维化) 和早期肝硬化41例, 男30例, 女11例, 年龄为22~57岁, 平均 (38.4±11.8) 岁。临床症状及影像学特点均典型的乙型病毒性肝炎后肝硬化患者43例, 即晚期肝硬化组, 该组男31例, 女12例, 年龄为35~68岁, 平均 (48.7±10.9) 岁。电脑随机选取因其他疾病需行上腹部CT检查的同期住院患者38例为对照组, 均无肝功能损害, 男25例, 女13例, 年龄21~58岁, 平均 (36.5±13.1) 岁。排除标准:血液性疾病、肝脾占位性病变等。
1.2 CT成像方法
(1) CTP扫描:采用德国Siemens Sensation 64层螺旋CT机。平扫后选取含有肝脏各叶、脾脏、腹主动脉和门静脉的肝门层面, 作为同层CTP的扫描层面, 参数设置如下:管电压120k V、管电流100m A、层厚度24mm, 每次扫描时间0.5s。选择肘前静脉以20G静脉穿刺针穿刺, 成功后推入10ml生理盐水, 如无外渗, 即可采用高压注射器团注碘普胺 (300mg I/ml) 40ml。延迟7s后动态扫描选定层面, 每次扫描间隔1.0s, 共80层即扫描80次。结束后5min予三期增强扫描。 (2) 肝脏灌注参数的计算:采用Siemens Body Perfect CT-syngo CT2009体部灌流软件, 在腹主动脉、门静脉、肝脏及脾脏上绘制感兴趣区域 (ROI) , 肝实质ROI选取应大, 以降低量子噪声干扰, 由于部分容积效应的影响, 也不应达肝脏边缘。通过软件形成时间-密度曲线 (time-density curve, TDC) , 肝脏灌注参数通过最大斜率法计算即可得出。灌注指标选取如下:肝动脉灌注量 (hepaticarterial perfusion, HAP) 、门静脉灌注量 (portalvenous perfusion, PVP) 、全肝总灌注量 (total liver perfusion, TLP) 、肝动脉灌注指数 (hepatic perfusion index, HPI) 和达峰时间 (time to peak, TTP) 共5个指标。
1.3 统计学方法
采用SPSS13.0进行统计学分析, 计数资料采用卡方检验, 计量资料以平均数±标准差表示, 进行t检验, 以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
随着肝脏纤维化严重程度逐渐增高, HAP呈先下降后升高趋势, PVP、TLP呈逐渐下降趋势、HPI和TTP呈逐渐升高趋势。见表1。相关性分析结果显示:HAP、HPI、TTP均与肝纤维化严重程度呈显著正相关, r值分别为0.587, 0.754及0.605 (P均<0.01) ;而PVP、TLP均与肝纤维化严重程度呈显著负相关, 相关系数r为-0.902, -0.851 (P均<0.01) 。
3 讨论
随着慢性肝病发展, 其肝脏都将发生纤维化的改变, 进一步将恶化成肝硬化。而肝纤维化、早期肝硬化临床并无表现, 也无法识别其大体形态学的改变。有研究表明, 肝病患者发生慢性炎症时, 其肝、脾容积、门静脉系统管径将发生一定程度改变, 对其血流灌注量的测量有助于肝纤维化、早期肝硬化识别诊断[3]。为较为精确地了解肝脏的生理及病理改变程度, 有必要对肝内血流的灌注量做进一步的定量检测。CT灌注成像 (CT perfusion imaging, CTP) 可通过对肝脏微循环血流情况相应分析, 某种程度上也反应了肝脏的生理病理功能改变, 对疾病诊断及预后等有积极意义[4,5]。
肝纤维化S1、S2期时, 为轻度的肝脏弥漫性改变, 肝实质细胞发生肿胀变性, 导致肝血窦空间狭窄, 且引发肝间质纤维生成, 继而肝动脉灌注减少及门静脉回流不畅[6], 因此本研究中HAP、PVP、TLP均有所下降, 且后二者均显著低于对照组 (P<0.05) , 其中PVP下降程度最大, 可能与门静脉管壁不及肝动脉厚, 相应被挤压程度也大有关, 而门静脉担负着肝脏70%~80%的血液供应;对应的HPI、TTP均有不同程度改变, 与对照组相比均无显著差异 (P>0.05) 。
随着肝脏病变的进一步发展, 其肝小叶结构发生紊乱, 肝硬化小结节形成, 肝内血管床供应面积缩小, 血流灌注受阻程度加大[7], 因此到肝纤维化发生S3、S4期或早期肝硬化改变时, PVP、TLP下降程度显著加剧;而HAP升高至稍高于正常对照组水平 (P>0.05) 而显著高于S1、S2期组 (P<0.05) , 考虑是门静脉灌注量减少, 而肝动脉灌注量却代偿性增加所致;相应的, HPI增加明显, 显著高于对照组及S1、S2组;肝脏灌流受阻加重导致TTP显著长于对照组 (P<0.05) 。
晚期肝硬化时病理变化明显, 其肝小叶严重塌陷, 形成大量纤维组织及再生结节, 肝内的微循环结构高度破坏, 门静脉血管扭曲、减少导致肝脏血流严重受阻, 血管团在小叶纤维间隔间杂乱无序, 肝动脉、静脉及门静脉见广泛形成交通支[8]。显而易见的, 肝硬化晚期灌注参数各指标与对照组及肝纤维化组均有显著差异, 此期PVP明显降低而TTP延长显著, 肝脏的“自身调节”功能导致HAP增大, 必然引起HPI明显增大, 在本组中HPI高达 (43.5±10.3) %;门静脉灌注量的减少不能被增加的肝动脉灌注量充分代偿, 因此TLP仍然呈剧烈下降趋势。
总之, 随着肝脏疾病发展, 其病理在不同阶段发生变化引发的肝脏血流灌注的改变, 而相应的CTP参数值也将随之上升或下降, 而PVP的组间改变尤为剧烈。CTP参数值是反映不同疾病阶段肝脏血流灌注量变化良好的参考依据。但由于个体存在的差异性较大, 尚难以确定一个绝对的CT灌注参考阈值来判断重度肝纤维化或早期肝硬化[9], 相对的参考阈值也需进一步研究。
摘要：目的:探讨多层螺旋CT灌注参数评价慢性肝病中肝纤维化、肝硬化的临床价值。方法:对经肝穿刺病理活检确诊的轻度肝硬化 (肝纤维化分期为S1、S2期) 48例, 重度肝纤维化 (肝纤维化分期为S3、S4期) 和 (或) 早期肝硬化41例, 具有典型临床症状和影像学表现的晚期肝硬化43例及对照组38例行64层螺旋CT肝脏灌注扫描, 取得不同病变阶段肝实质的灌注参数, 包括肝动脉灌注量 (HAP) 、门静脉灌注量 (PVP) 、全肝总灌注量 (TLP) 、肝动脉灌注指数 (HPI) 和达峰时间 (TTP) 共5个指标, 与病理分期进行对照研究。结果:在对照组、S1、S2期组、S3、S4期组及肝硬化组中, 各组间CTP灌注参数 (HAPPVP, LTP, HPI和TTP) 差异均有统计学意义 (F值分别为61.92、212.52、212.60、152.45和21.93, P值均<0.01) 。HAP、HPI、TTP均与肝纤维化严重程度呈显著正相关 (r值分别为0.587、0.754及0.605, P均<0.01) ;而PVP、TLP均与肝纤维化严重程度呈显著负相关 (r分别为-0.902和-0.851, P均<0.01) 。结论:MSCT灌注参数可较好反映肝纤维化、肝硬化的血流动力学变化, 为临床提供良好的参考依据。
关键词：肝硬化,体层摄影数, X线计算机,对比研究
参考文献
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肝脏纤维化 第5篇
关键词：红景天,肝纤维化,HAb18G/CD147
肝纤维化是各种肝脏慢性疾病向肝硬化发展的重要环节[1], 实验研究证实肝纤维化阶段是可逆的病理变化, 因此在肝脏慢性疾病过程中控制肝纤维化进展可有效防止肝硬化的发生, 具有极为重要的临床意义。通过动物实验证实中药红景天可以保护肝细胞, 同时调节机体免疫功能, 从而抑制肝纤维化的发展。HAb18G/CD147 又称EMMPRIN ( 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子) , 属于免疫超家族成员, 是一种分子量43 - 66 k Da的跨膜糖蛋白, 在多种起源于上皮组织的肿瘤以及炎症组织中表达。其作用机制为诱导肿瘤细胞和基质细胞产生多种基质金属蛋白酶 ( MMP - 1、MMP - 2、MMP - 9) 使细胞外基质降解, 从而促进肿瘤细胞的浸润和转移[2]。同时研究发现肝硬化组织中在窦周间隙HAb18G/CD147高表达, 这提示HAb18G/CD147 在肝纤维化发展过程中具有重要作用[3]。本文应用半定量RT - PCR技术及免疫组化技术, 以HAb18G/CD147 为靶基因, 检测四氯化碳 ( CCl4) 诱导大鼠肝纤维化模型中HAb18G / CD147 的表达, 同时观察红景天对肝纤维化模型中HAb18G/CD147 表达的影响, 进一步探讨红景天干预实验性大鼠肝纤维化的可能分子机制及治疗肝纤维化的最佳药物浓度。
1 材料和方法
1. 1 材料
健康♂SD大鼠60 只, 体重180 ~ 220g , 购于佳木斯大学实验动物中心。红景天胶囊购自广东长兴科技尊然健康管理有限公司。四氯化碳 ( CCl4) 购自郑州宇腾化工厂。HAb18G/CD147 上下游引物、兔抗鼠一抗、组织RNA提取试剂盒及逆转录试剂盒、辣根过氧化物酶 ( HRP) 标记的免疫组化通用型羊抗兔的二抗工作液购于上海颖心实验设备有限公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 分组: 健康SD♂大鼠60 只, 随机分组 ( 各组间暴露因素无差别, P > 0. 05) 。 ( 1) 对照组 ( 20只) : 腹腔给予橄榄油和生理盐水灌胃; ( 2) 模型组 ( 20 只) : 以CCl4ip法诱导大鼠肝纤维化, ( 橄榄油稀释100m L/L CCl4, 每周1 次1m L/kg, 共8wk) ; ( 3) 干预组 ( 20 只) : 同模型组, 同时给予浓度40g /L红景天 ( 剂量10m L/kg) 2 次/W灌胃 ( 共8wk) 。在实验第8 周注射CCl4后48h处死, 提取大鼠肝脏, 部分组织用10% 福尔马林固定, 其余肝组织置-80℃ 冰箱冻存。 ( 试验中所有试剂CCl4及红景天的最佳剂量均在前期试验中探索出) 。
1. 2. 2 常规HE病理学检查。
1. 2. 3肝组织中HAb18G / CD147mRNA RT - PCR检测: 冻存肝组织TRIzol一步法PCR反应。置于凝胶分析系统中进行电泳条带的分析。HAb18G/CD147: 上游: 5' - ACTCCTCACCTGCTCCTTGA - 3 ', 下游: 5'- GCCTCCATGTTCAGGTTCTC -3', 长度528bp;同时扩增GAPDH基因作为内参, 每一个反应设置3复孔。 GAPDH: 上游: 5 ' - GCACCGTCAAGGTCAAGAAC - 3', 下游: 5' - TGGTGAAGACGAGACTGGA- 3' 长度500bp。采用25μl的反应体系反应条件是:95℃ 3min; 95℃ 30s, 57℃ 30s, 72℃ 30s, 39 个循环;72℃10min; PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用Bio -Rad Gel Doc2000 型凝胶成像系统照像并用QuangtityOne软件计算基因相对表达值。
1. 2. 4 免疫组织化学检测HAb18G / CD147: 用二步法检测肝组织中HAb18G/CD147。
1. 3 统计学方法
采用SPSS17. 0 统计软件进行分析。统计学处理数据用表示, 统计方法采用t检验。
2 结果
2. 1 肝纤维化分期
本单位资深临床病理主任医师阅片。模型组20 只大鼠均形成明显肝纤维化 ( 15 只为3 期以上, 1只为早期肝硬化, 其余纤维化程度均超过2 期) , 干预组大鼠肝组织纤维化程度均较模型组明显减轻。
2. 2 HAb18G / CD147 表达情况
模型组与对照组比较HAb18G/CD147mRNA的表达显著增高 ( P < 0. 05) ; 干预组HAb18G/CD147mRNA的表达较模型组显著降低 ( P < 0. 05, 表1, 图1) 。HAb18G/CD147 在正常肝组织中可见微弱表达, 主要见于窦周间隙中。 模型组中HAb18G / CD147 的表达较对照组显著增强, 主要表现为胞浆着色, 差异有统计学意义 ( P < 0. 05) 。红景天干预组HAb18G/CD147 的表达低于模型组, 差异有统计学意义 ( P < 0. 05, 表1, 图2) 。
3 讨论
肝纤维化是多种慢性肝脏疾病发展为肝硬化的重要环节。肝脏长期受多种损伤因素刺激, 使肝窦内肝星状细胞 ( hepatic stellate cell, HSC) 活化, 使肝组织内细胞外基质 ( extracellular matrix, ECM) 过度增生与沉积, 致肝脏组织结构或 ( 和) 功能异常。HAb18G / CD147 于1982 年被发现, 属于免疫球蛋白超家族 ( Ig SF) 成员。促进MMP - 3、MMP - 9 的分泌诱导肝纤维化。研究显示在角膜成纤维细胞中HAb18G / CD147 通过促进 α - SMA表达有效促进角膜组织结构的重建与创伤修复。HAb18G/CD147诱导MMPs产生的MMP - 3、MMP - 9 活化TGF -β, 因此推断HAb18G /CD147、MMP - 3、MMP - 9 和TGF - β1 之间呈正反馈效应[4~6]。另外, 发现HAb18G / CD147 在乳腺癌中可以活化成纤维细胞, 从而诱导癌细胞进行上皮- 间质转化, 激活了肿瘤和基质的相互作用[7,8]。通过动物实验证实红景天具有保护肝细胞及有效调节机体免疫等功能, 具有抑制四氯化碳 ( CCl4) 诱导的肝纤维化发展的良好作用[9,10]。有较多红景天抑制肝纤维化的报道, 红景天对肝纤维化组织内相关成分表达的影响也有各案报道[11~13]。红景天抑制肝癌的报道, 红景天对肝癌组织内相关成分表达的影响也有各案报道[14]。本文应用免疫组织化学染色与半定量RT - PCR的方法观察红景天对纤维化肝组织中HAb18G/CD147表达的影响, 大鼠肝组织HAb18G/CD147 的表达减少, 明显低于模型组, 高于对照组, 结果显示红景天可以较好防治CCl4损伤性肝纤维化。证实了红景天具有通过抑制HAb18G/CD147 的表达保护HSC及其周围正常的基底膜样细胞, 抑制HSC的活化与肝纤维化的发展。在四氯化碳 ( CCl4) 诱导的肝纤维化模型中HAb18G/CD147 的表达水平增加, 在红景天干预过程中HAb18G/CD147 的表达下降, 提示HAb18G / CD147 与肝纤维化的发生发展具有密切的关系, 红景天可有效抑制肝纤维化。
肝脏纤维化 第6篇
1 资料与方法
1.1 标本来源
46例血清标本来自2013-2016年住院患者, 其HBsAg阳性44例, 符合2005年修订的慢性乙肝防治指南的诊断标准[3], 其中男32例, 女14例, 平均年龄42.3岁。
1.2 方法
根据乙肝五项检测结果, 主要分为HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 模式, 定义为HBeAg (+) 组, 共20例;HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 模式, 定义为HBeAg (-) 组, 共20例。HBsAb (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 、HBsAb (+) HBcAb (+) 、HBsAg (+) HBcAb (+) 三种模式共6例, 因病例较少, 无法做统计学处理, 本文不作为观察对象。对HBeAg (+) 、HBeAg (-) 两组进行分析, 观察两组HBV-DNA定量、乙肝纤维化指标、血清肝功能指标 (ALT、AST、ALB、TBIL) 、外周血PLT等的差别。其中HBV-DNA采用实时荧光定量PCR法检测, 乙肝纤维化指标采用放射免疫法检测, 乙肝五项采用ELISA的方法, 血生化采用罗氏生化分析仪进行检测, 血常规采用希森美康五类全自动血液细胞分析仪进行检测。HBV-DNA的检测下限为500IU/ml。通过HBeAg (+) 、HBeAg (-) 两组的比较, 了解不同模式下乙肝炎症、肝纤维化程度差异及发生肝硬化的趋势。
1.3 仪器与试剂
HBV-DNA采用深圳匹基生物工程有限公司的PCR荧光定量检测试剂盒, 用RocheLightCycler荧光PCR检测仪检测, 乙肝纤维化指标放射免疫分析试剂盒购自上海海研医学生物技术有限公司, 乙肝五项采用上海科华生物有限公司提供的试剂盒检测。
1.4 统计学分析
采用SPSS20.0软件包进行统计分析。计量资料采用 (±s) 表示, 采用t检验, 计数资料采用χ2检测, 检验水准为0.05。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同乙肝标志物阳性模式HBV-DNA检测结果
在HBeAg (+) 组HBV-DNA的检出率为90%, 在HBeAg (-) 组HBV-DNA的检出率为60%, 两者的差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。
注:χ2=4.8, P<0.05。
2.2 不同乙肝标志物阳性模式肝脏纤维化指标检测结果比较
与HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 模式比较, 在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 的模式下乙肝患者的血清肝纤维化标志物 (HA、PCⅢ、CⅣ、LN) 水平显著上升, 相比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。结果见表2。
注:HA:透明质酸, PCⅢ:三型前胶原, CⅣ:四型胶原蛋白, LN:层连蛋白。
2.3 不同乙肝标志物阳性模式肝功能及血小板指标检测结果比较
与HBsAg (+) HBeAb (+) HB-cAb (+) 模式比较, 在HBsAg (+) HBeAg (+) HB-cAb (+) 的模式下乙肝患者的肝功能 (ALT、AST、ALB、TBIL) 及血小板指标水平显著上升, 相比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。结果见表3。
3 讨论
本研究表明, 在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 的模式下HBV-DNA的检出率为90%, 在HB-sAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 的模式下HBV-DNA的检出率为60%, 两者差异有统计学意义 (P<0.05) , 特别是在HBeAg (+) 时, 病毒复制明显, HBV-DNA很好的反映了HBV的复制, 且有很好的一致性。HBeAg (-) 患者中有部分经历过HBeAg (+) 过程, 由于自身免疫或外在抗病毒干预后病毒数量下降, 部分患者HBeAg由阳性转为阴性。
血清肝纤维化标志物被临床接受并用来初步诊断肝纤维化, 近年来发现这些指标还可以作为诊断肝硬化的指标之一。有研究认为[4], HA与肝硬化程度呈正相关, 而PCⅢ、CⅣ、LN水平是肝硬化早期指标, 仅发生纤维化时增高, 但不反映肝硬化严重程度。仅仅依靠肝纤维化标志物水平来诊断早期肝硬化还存在一定的缺陷, 因此, 本文将乙肝标志物与肝纤维化标志物进行联合检测, 并对二者之间进行相关性分析, 结果显示, 与HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 模式比较, 在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 的模式下乙肝患者的血清肝纤维化标志物水平显著上升, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 说明HBeAg阳性乙肝患者机体的炎症反应明显, 炎症剧烈时肝脏的损伤修复亦剧烈, 通过纤维化有的患者肝脏修复好, 病情逆转, 有的进展至肝硬化, 本研究表明, HBeAg阳性乙肝患者炎症反应与纤维化反应均明显, 随访发现, HBeAg阳性乙肝患者发生肝硬化病程并不比HBeAg阴性患者重, 肝纤维化指标高, 但不反映肝硬化严重程度, 与报道一致。
临床常用血清学指标反映肝细胞损伤, ALT、AST、ALB、TBIL、PLT均为最常用的血清学指标, ALT、AST、TBIL在肝细胞中均存在, 肝细胞膜受损或细胞坏死时进入血清, 因此, 酶的活性可以反映肝细胞受损及损伤程度[5,6]。白蛋白是由肝细胞合成的, 肝脏病变时白蛋白的合成发生障碍, 特别是肝硬化时, 白蛋白的合成明显减少, 说明白蛋白值也是检测肝功能的一项比较敏感的指标。血小板是骨髓中巨核细胞质脱落下来的小块, 在凝血过程中起重要作用, 肝硬化患者大多有脾功能亢进, 大量血小板滞留在脾内, 血小板破坏过多, 明显减少。本研究表明, 与HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 模式比较, 在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 的模式下乙肝患者的肝功能及血小板指标水平显著上升, 差异有统计学意义, 说明HBeAg阳性乙肝患者肝细胞受损及损伤程度重, 肝脏的代偿功能较强, 肝细胞白蛋白的合成增强, 肝脏的损伤修复加强, 血小板较HBeAg阴性乙肝患者高, HBeAg阴性患者长期轻微肝脏炎症活动更多, 虽然HBeAg阳性乙肝患者肝脏损伤重, 但修复快, 相比较而言, HBeAg阴性乙肝患者更易进展至肝硬化, 脾功能亢进趋势更明显。
摘要：目的:分析乙肝HBV-DNA荧光定量检测及肝脏纤维化指标与乙肝五项结果的一致性, 探讨三者的相关性。方法:分别采用ELISA、PCR、放射免疫法对46例乙肝患者进行乙肝五项、HBV-DNA、肝脏纤维化指标的检测。结果:在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 的模式下, HBV-DNA的阳性率为90%, 在HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 的模式下, HBV-DNA的阳性率为60%。在HBsAg (+) HBeAg (+) HBcAb (+) 和HBsAg (+) HBeAb (+) HBcAb (+) 两种模式下, HBV-DNA阳性率、肝脏纤维化指标、肝功能、血小板等指标差异均有统计学意义 (P<0.05) 。结论:乙肝HBV-DNA含量、肝脏纤维化指标与乙肝五项的结果密切关联, 联合检测乙肝HBV-DNA荧光定量检测及肝脏纤维化指标能很好的反映乙肝病毒的复制及传染性, 肝纤维化程度及发生肝硬化的趋势, 对于乙肝的诊治具有指导意义。
关键词：乙肝五项,乙肝病毒,肝纤维化,HBV-DNA,相关性
参考文献
[1]杨秀清, 高蕾, 彰颖, 等.乙型肝炎患者HBV-DNA定量与血清标志物的关系分析〔J〕.检验医学与临床, 2009, 6 (16) :1332-1334.
[2]Liu P.The importance of explorations on the pathophysiological mechanisms and treatment methods for liver fibrosis〔J〕.Chin J Hepatol, 2010, 18 (8) :561-562.
[3]蔡春林, 张仁利, 姚相杰, 等.2009年深圳市外来劳务工血清乙肝标志物与HBV-DNA的检测分析〔J〕.实用预防医学, 2011, 18 (1) :47-49.
[4]朱为梅, 谢继明.肝纤维化血清学检测对肝硬化的诊断意义分析〔J〕.中国现代医生, 2008, 46 (4) :68-70.
[5]阮奕, 王冬莲, 陶丹丹, 等.肝硬化患者16项检测指标与childPugh分级关系的探讨〔J〕.江西医学检验, 2007, 25 (5) :443-445.
肝脏纤维化 第7篇
1实验材料与方法
1.1 实验动物
雄性SD大鼠,体重80～100g,30只,清洁级喂养,由中国科学院上海实验动物中心提供。
1.2 主要药品与试剂
免疫组化一抗(兔抗大鼠多克隆抗体Bc1-2,兔抗大鼠多克隆抗体Bax,小鼠抗大鼠单克隆抗体PCNA):武汉博士德公司。免疫组化二抗试剂盒(SA1021-小鼠Ig-G,SA1022-兔Ig-G,免疫组化DAB显色试剂盒):武汉博士德公司。Masson染色试剂盒:广州市俪科贸易有限公司。Poly-L-Lysine:武汉博士德公司。HA放免试剂盒、LN放免试剂盒:上海海研生物技术中心。养肝抗纤汤:由白芍、鳖甲、枸杞子、女贞子、五味子、鸡血藤、当归、丝瓜络、路路通、郁金组成,由丽水市中心医院药物制剂室配制,生药浓度为22g/ml。
1.3 动物分组
健康雄性Sprague-Dawley系大鼠30只,体重80～100g,随机分为3组:正常组10只、肝纤维化模型组10只、养肝抗纤汤治疗组10只。
1.4 造模及给药
模型组、治疗组以0.5%的二甲基亚硝胺(DMN)按0.2ml/100g的剂量腹腔内注射,每周前3天每天1次,连续4周。同时模型组、治疗组、正常组按10ml/kg分别给予自来水、养肝抗纤汤浓缩剂、自来水灌胃,持续给药4周。
1.5 取材
6周后处死各组大鼠,先用10%水合氯醛0.35ml/kg麻醉,剖腹经下腔静脉采血,取出肝组织立即用4%甲醛固定12小时,之后脱水透明石蜡包埋。
1.6 观察指标测定
1.6.1 Bcl-2、Bax、PCNA蛋白表达的测定
采用S-P免疫组织化学方法染色组织切片,每次染色时用试剂公司提供的Bcl-2、Bax和PCNA阳性片作阳性对照,PBS代替第一抗体作为阴性对照。每张切片随机选取5～6个高倍视野(×400),计算每1000个肝细胞中的Bcl-2、Bax和PCNA的阳性细胞数。
1.6.2 组织学观察
切片经苏木素-伊红染色及Masson三色染色后普通光学显微镜下观察肝组织结构的变化。纤维化程度分期按2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订《病毒性肝炎防治方案》[1]中慢性肝炎分期标准。
1.6.3 肝功能及HA、LN检测
经下腔静脉取血标本,全自动生化分析仪检测ALT、AST、ALB,放免法检测HA、LN。
1.7 统计学处理
采用SPSS11.5统计软件分析。所有数据进行正态性检验,计量资料用均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)。此外还要对部分正态性资料进行相关性分析,对含等级资料的进行秩和检验。
2结果
2.1 各组大鼠肝功能、HA、LN的检测结果
见表1。
与正常组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01
2.2 各组大鼠肝组织病理学观察
2.2.1 肉眼观察
正常组:大鼠肝组织质地柔软,表面光滑;模型组:大鼠肝脏质地坚韧,表面粗糙,颜色灰暗,有些可见颗粒状小结节;治疗组:大鼠肝脏表面较模型组光滑,质地也较模型组柔软。
2.2.2 光镜观察
正常组:大鼠肝小叶结构正常,肝细胞索排列规则有序,肝板以中央静脉为中心呈条索状向四周放射状排列,板间有不规则肝窦,仅于汇管区和中央静脉周围有少许胶原纤维存在。模型组:多数正常肝小叶结构破坏或消失,由汇管区和中央静脉伸出粗大胶原纤维条索分割、包绕肝小叶,肝细胞索排列紊乱,肝细胞浊肿明显,坏死出血较多;纤维隔内有大量炎性细胞浸润。治疗组:肝细胞坏死、纤维组织增生与模型组相比减少,肝小叶结构破坏减轻,纤维条索疏松变窄,肝细胞水肿好转,肝内炎症细胞浸润减少。各实验组大鼠肝脏病理分级情况见表2。
与正常组比较*P<0.05,*P<0.01;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01
2.3 各组大鼠肝组织Bcl、Bax、PCNA表达的检测
见表3。
与正常组比较*P<0.05,*P<0.01;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01
3讨论
肝纤维化是各种慢性肝病发展的共同途径,也是进一步向肝硬化发展的必经之路。中医认为多由情志失调及湿热疫毒之邪侵袭,日久肝肾血虚、气血阻络所致。养肝抗纤汤为临床治疗肝纤维化的有效验方。该方以“养肝滋肾、理气通络”为基本治法,取白芍、鸡血藤、当归养血柔肝,鳖甲、枸杞子、女贞子滋水涵木,丝瓜络、路路通、郁金活血通络,五味子敛补肝阴。本研究显示养肝抗纤汤可明显改善肝组织病理学变化,减轻肝纤维化程度,保护肝功能,降低HA、LN水平。
目前认为肝纤维化的发生、发展及转归与细胞凋亡和增殖有关[2]。一般认为Bcl-2是重要的抗凋亡因子,Bax是促凋亡因子[3],增殖细胞核抗原(PCNA)是评价肝脏再生的一个指标[4]。通过本实验发现:模型组的PCNA、Bax明显升高,与正常组相比有显著差异(P<0.01),Bcl-2表达水平与正常组无显著差异,提示在肝纤维化的过程中随着肝纤维化程度的加重,肝细胞凋亡增加,肝细胞增殖增加,与以往相关报道相符[5]。
使用养肝抗纤汤治疗后,治疗组PCNA、Bcl-2的水平较模型组明显提高,有统计学差异(P<0.05),Bax表达水平与模型组无显著差异,提示在养肝抗纤汤的干预下,肝细胞凋亡减少,肝细胞增殖能力进一步增加。一般认为正常情况下,细胞凋亡和增殖的平衡维持着细胞群体数量的相对恒定,以保证组织器官正常的生理功能。因此,当肝纤维化伴随肝细胞大量凋亡时,为了维持肝细胞数量的相对恒定,肝细胞增殖能力代偿性增加。养肝抗纤汤通过抑制肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,更有利于恢复肝细胞数量的相对恒定,从而使肝细胞炎症减轻,纤维化进程得到遏制。因此,我们认为养肝抗纤汤可能通过调节肝纤维化大鼠的肝细胞凋亡和增殖水平来抑制肝纤维化和改善其预后。
参考文献
[1]中华医学会传染病与寄生虫病学会.肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志,2001,19(1):56.
[2]刘莺,刘平,刘成海,等.细胞增殖与凋亡相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与消减中的动态变化.中华肝脏病杂志,2005,8(13):563.
[3]吴正治,李明,陈光,等.常见舌苔上皮细胞凋亡与bax、bcl-2基因表达关系的研究.中国中医药科技,2004,11(4):193.
[4]Wolf HK,Michalopoulos GK.Hepatocyte regenetation in acute fulmi-nant and nonfulminant hepatitis:a study of proliferation cell nuclear antigen expression.Hepatology,1992,15:707.