精子质量检测系统（精选7篇）
精子质量检测系统 第1篇
关键词：精子质量检测系统,男性不育症
目前, 全球共有约8000万对夫妇患不育症, 且有逐年增加的趋势[1]。据WHO统计, 不孕不育将成为仅次于肿瘤和心脑血管疾病的第三大疾病[2]。有资料表明, 已婚夫妇不育症发病率约15%, 其中由于工作压力及环境污染等因素使男性不育症的发病率高达30%[3]。一直以来, 精液常规分析都被用来作为评价男性生育力的主要指标, 虽然过去有许多研究表明, 精液中精子数量及活动精子的百分率与自然怀孕率在统计学上有显著的相关性, 但由于以往精液常规采用手工操作分析, 主观因素大, 检测项目较少, 而且不能对精子的运动参数进行分析, 因此仅靠精液常规分析的结果来预测男性生育状况仍是很不准确的。据估计, 精液常规分析评价生育力仅有70%的准确性。
近年来, 随着计算机技术的广泛应用, 计算机辅助精液分析 (CASA) 逐步应用于男性不育实验室的诊断, 弥补了手工检测的许多不足, 并能对精子的运动参数进行分析, 从而改善了实验室的诊断工作, 提高了分析的准确性及精度。为探讨精子质量检测系统对药物治疗男性不育症疗效的判断价值, 本文采用WLTY-9000彩色精子质量检测系统对300例经壮阳生精片治疗前后的男性不育患者的精液运动参数进行了检测, 并比较治疗前后各参数的差异。
1 资料与方法
1.1 一般资料
300例研究对象均来自于我院生殖中心不育症门诊就诊的男性不育患者, 年龄22～48岁。纳入标准:夫妻同居1年或以上, 在未采取避孕措施情况下, 有正常性生活而女方不怀孕, 并已排除女方因素。
1.2 标本收集
所有研究对象均禁欲2～7d, 手淫取精于无菌容器中, 37℃水浴箱中孵育, 精液液化后, 对精子运动参数进行分析。
1.3 精液分析
采用国产WLJY-9000彩色精子质量检测系统对精子平均曲线运动速度 (VCL) 、平均直线运动速度 (VSL) 、平均路径速度 (VAP) 、精子平均侧摆幅度值 (ALH) 、精子平均鞭打频率 (BCF) 、精子运动的直线性 (LIN) 、精子运动的摆动性 (WOB) 、精子运动的向前性 (STR) 及精子运动的平均角度 (MAD) 进行分析。
1.4 统计学处理
采用SPSS 10.0进行数据处理, 数据用
2 结果
2.1 治疗前精子运动参数
300例男性不育患者治疗前VCL、VSL、VAP、ALH、BCF、LIN、WOB、STR及MAD分别为:43.67±8.45μm/s、28.75±9.23μm/s、34.52±6.78μm/s、1.43±0.42μm、4.91±0.42Hz、 (49.35±10.81) %、 (63.25±9.78) %、 (72.31±13.74) %及 (68.07±18.64) °。
2.2 治疗后精子运动参数
300例男性不育患者经壮阳生精片治疗后VCL、VSL、VAP、ALH、BCF、LIN、WOB、STR及MAD分别为:52.82±6.58μm/s、32.67±8.12μm/s、40.62±5.17μm/s、1.64±0.39μm、4.86±0.32Hz、 (58.47±9.54) %、 (70.32±8.65) %、 (80.43±11.25) %及 (56.12±15.71) °。
2.3 治疗前后精子运动参数比较
对300例男性不育患者经壮阳生精片治疗前后精子运动参数进行统计学分析, 结果表明:治疗后VCL、VSL、VAP、ALH、LIN、WOB、STR及MAD较治疗前均有明显改善, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 而BCF治疗前后无统计学差异 (P>0.05) 。见附表。
注:治疗前后比较, ★:P<0.05
3 讨论
在男性生育能力的判断以及男性不育症的诊断方面, 精液常规检测是一项重要的必不可少的检查手段。在精液常规检测的各参数中, 精子活力是反映精子活动能力的指标, 对男性生育能力的评价具有重要作用[4]。但由于常规精液检查常依赖于检验者的水平及经验、实验条件, 而且没有一种很好的质量控制的方法, 不同检测者检测结果之间往往相差甚大, 给临床诊断带来一定的困难, 并且无法测定精子细微运动, 对于精子活动能力的全面评价价值有限。而随着CASA技术的采用, 则很好地弥补了以上不足。研究表明, CASA重复性和一致性均优于人工检测[5], 并且能快速准确地测定精子的密度、活率、活力等参数, 可比性强, 还可以提供描述精子运动状态的多种参数[6]。而精子运动参数能够精确反映精子的运动能力, 与传统指标相比能更加确切地反映精子微细运动特点。
Chan[7]认为评估精子运动速度是预测受精前的有用参数。但目前国内对精子运动参数在男性不育中的应用研究并不多见, 尤其是精子质量检测系统对药物治疗男性不育症疗效的判断价值还未见报道。本研究采用国产WLJY-9000彩色精子质量检测系统对300例经壮阳生精片治疗前后的男性不育患者的精液运动参数进行了分析, 结果表明治疗后男性不育患者的精液参数VCL、VSL、VAP、ALH、LIN、WOB、STR及MAD较治疗前均有不同程度提高, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 而BCF则无显著性差异 (P﹥0.05) 。 可见, 精子质量检测系统分析精子运动参数对男性不育症治疗疗效的判断具有实用意义, 其中VCL、VSL、VAP、ALH、LIN、WOB、STR及MAD可作为药物治疗男性不育症疗效判断的指标。
参考文献
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精子质量检测系统 第2篇
笔者自2010年8月~2012年7月对正常生育男性和男性不育症患者进行了精液常规检查、精子形态学分析以及精子DNA碎片检测, 现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
2010年8月~2012年7月前来本院就诊的男性少弱精子症不育患者60例。年龄23~42岁, 平均 (31.9±4.6) 岁, 平均不育年限 (6.9±2.6) 年。男性体格检查包括男性第二性征、阴茎、阴囊、精索、输精管、睾丸、附睾等。30例近期有正常健康生育史的男性作为对照组。年龄24~37岁, 平均 (30.3±3.8) 岁, 男性体格检查均无异常发现。所有实验对象染色体检查均为正常核型 (46, XY) , 且Y染色体长臂的无精子因子 (azoospermia factor, AZF) 微缺失检测未发现异常。
1.2 精液常规检查及精子形态学分析
受检者禁欲3~5 d后手淫取精, 待精液液化后, 行计算机辅助动态分析 (CASA) , 测定精子密度、前向活动精子、活动率以及正常形态率等参数。疑为少精症者, 采用精子专用计数板 (Makler板) 计数分析。根据WHO标准对分析结果进行评价。
将经过常规分析后的精液400 g离心后, 去精浆, 加入EBSS调节精子密度后, 吸取精子悬液约20μL, 在玻璃片上均匀涂片, 涂片置倒置显微镜下观察精子密度适宜后, 放入37℃烤箱中烤干备用。伊红液配制:称取伊红0.5 g加入蒸馏水100 m L, 充分溶解后备用。苏木素液购自迈新公司。干燥后精子涂片用90%的乙醇固定30 min, 取出凉干后置入苏木素的染液中染色5 min;取出泡入流水中冲洗2 min, 取出滴干水, 泡入伊红染液中染色30 s~1 min, 取出流水冲洗2 min, 干燥后树脂封片备查。采用Kruger精子形态学标准, 在油镜下对精子头部的顶体、细胞核, 中部及尾部的形态进行分析, 随机计数分析精子200只以上, 求出每份精液样本的正常精子形态百分率。
正常精子的判定标准[3]:精子头部呈光滑卵圆形, 长3~5μm, 宽2~3μm, 头宽为头长的2/3~3/5, 顶体占头的40%~70%;中部必须是细长的且与头纵轴成一直线, 中部宽≤1μm, 接近头宽的一半;尾部 (主段及末段) 长45μm, 必须是规则的, 无卷曲现象, 稍细于中部。如有胞浆小滴须小于头部的一半。重要的是所有临界形态的精子均视为异常, 如头部接近椭圆形且无其他缺陷亦为异常。异常精子包括顶体过小、顶体过大、梨形头、圆形头、长形头、不规则形头、头部空泡、尾部连接部位异常、尾部弯折 (>90°) 、尾部卷曲等。
1.3 SCD实验检测精子DNA碎片
采用精子HalospermR试剂盒 (Halotech DNA, Spain) 说明书介绍的方法进行SCD检测, 步骤简述如下:新鲜精液用PBS稀释至精子密度10-5×106个/m L, 取出60μL加入溶解的低熔点琼脂糖凝胶60μL中, 37℃下混匀, 加20μL精子凝胶混合液于预处理载玻片上, 盖上22 cm×22 cm盖玻片, 4℃冰箱水平放置5 min。移去盖玻片, 放入酸性DNA变性液中, 室温孵育7 min。取出玻片浸泡于裂解液中, 孵育25 min。在蒸馏水中静置5 min洗去残余裂解液。玻片依次放入70%、90%和100%乙醇中各2 min脱水。晾干后玻片滴加瑞氏-姬姆萨染色液 (约0.5~0.8 m L) , 并让染液覆盖整个标本涂片染色1 min;再将磷酸缓冲液滴加于瑞氏-姬姆萨染色液上面 (滴加量与瑞氏-姬姆萨染色液等体积) , 以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状, 使两液充分混合, 染色5~10 min。用自来水缓慢从玻片一端冲洗, 凉干后镜检。200倍光镜下观察, 比较精子核和核周围晕轮大小, 计算精子DNA碎片指数 (DNA fragmentation index, DFI) 。
结果判断:计数500个精子, 观察精子光晕大小, 根据光晕与精子头部横径的比例, 粗分为大、中、小和无光晕4个等级, 大和中光晕表示精子DNA完整无碎片, 小和无光晕表示精子DNA断裂为碎片。大光晕精子晕环宽度与细胞核的较小直径相似或稍大;中光晕精子晕环大小在大晕环和小晕环之间;小光晕精子晕环宽度与细胞核的较小直径相似或小1/3;无光晕精子呈现不规则的核体或显色微弱。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0软件进行数据分析, 用均数±标准差 (±s) 表示, 计量资料采用t检验, 相关性分析采用Pearson相关分析, 为P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 男性少弱精子症不育组与对照组精液情况的比较
男性少弱精子症不育组与对照组精液情况的比较见表1, SCD实验检测精子DNA碎片的图片, 见附图。
注:覮与对照组比较, P<0.05
A为大晕环精子, B为中晕环精子, C为小晕环精子, D为无晕环精子
2.2 精子DNA碎片指数与精液常规及精子形态学指标的关系
精子DNA碎片指数与精液常规及精子形态学指标的关系见表2。
注:覮P<0.05
3 讨论
近年来, 不孕不育患者逐年增多, 在西方国家中, 有1/4的育龄夫妇因生育问题而需要治疗[4]。少弱精子症是男性不育的主要因素, 主要表现为精液中精子的数目和 (或) 活力低于正常具有生育能力男性的一种病症。本研究结果显示, 男性少弱精子症不育患者的正常形态率明显低于正常健康生育男性对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。
精子DNA断裂与男性不育也有着密切的联系[5,6], 精子DNA完整性破坏将导致精子受精能力显著下降[7]。SELI等[8]研究证实, 精子DNA的完整性决定了胚胎能否发育到胚泡期。在辅助生殖周期中, 使用DNA完整性损伤的精子可导致流产率和胚胎停止发育率增高, 也证实了DNA完整性损伤的精子可以成功完成受精和着床, 但仍然会导致不良妊娠结局[9]。本研究结果显示, 男性少弱精子症不育患者的精子DNA碎片率明显高于正常健康生育男性对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。COHEN-BACRIE等[10]和ZINI等[11]通过TUNEL和SCSA检测精子DNA完整性后证实, 精子DNA碎片率与精子密度、活力及形态均密切相关。本研究结果显示, DFI与精子密度、前项活动精子、活动率、正常形态率均呈负相关, 即随着精子DNA碎片率的升高, 精子密度、前向活动精子、活动率、正常形态率就降低, 男性生育力也将随之降低。
综上所述, 通过检测男性少弱精子症不育患者精子DNA的碎片率, 分析父方遗传物质, 建立更为完善和更具预测价值的精子评价体系, 对评估男性生育力和预测辅助生殖结局, 具有相当重要的临床意义。
参考文献
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精子质量检测系统 第3篇
1 对象与方法
1.1 实验动物
本实验应用的SD大鼠购买于广州中山大学(大学城)实验动物中心(合格证号:SCXK(粤)2015-0029),雄性,体重为185~200 g。
1.2 药物
雷公藤多苷片(glycosides of tripterygium wilfordii,GTW)由远大医药黄石飞云制药有限公司出品(国药准字Z42021212),五子衍宗丸由北京同仁堂股份有限公司出品(国药准字:Z11020188),生髓育麟汤药物组成:鹿茸、鱼鳔、龟甲胶、紫河车、人参、当归、熟地、山茱萸、山药、肉苁蓉、柏子仁、五味子、枸杞子、菟丝子、麦冬、桑椹子,由深圳和顺堂医药有限公司提供药材,深圳市中医院制剂室按照常规煎药方法制作,浓度为680 mg/m L。
1.3 模型制备
60只大鼠按照常规饲养方法饲养,1周后随机抽出10只编入正常对照组(G1组),继续日常饲养。另外50只给予GTW片20 m L/(kg·d)灌胃26 d。造模完毕后随机抽取10只编入造模组(G6组)处死,分析造模是否成功。剩下40只均分为4组:生髓育麟汤低剂量组(G2组)、生髓育麟汤高剂量组(G3组)、五子衍宗丸组(G4组)、观察对照组(G5组),每组各10只。
1.4 用药方法
G2组及G3组分别给予10、20 m L/(kg·d)生髓育麟汤灌胃26 d,同时给予正常饮食。G4组大鼠采用五子衍宗丸1.2 g/(kg·d),80 mg/m L灌胃26 d,同时给予正常饮食。G5组造模后不给予任何药物,只给予正常食物和水。各组大鼠每周测量体重以调整给药剂量。实验期间保持良好的实验环境,食物、饮水、温度等各项基础条件均相同。
1.5 检测指标
1.5.1 安全性检测
处死大鼠后进行肾脏、肝脏组织活检,观察肝、肾病理变化情况。
1.5.2 疗效性检测
1.5.2. 1 大鼠精液质量的常规检测
采用北京伟力彩色精子质量分析系统(WLJY-9000)检测。末次给药24 h后处死大鼠,在37℃恒温条件下快速摘取并剪碎双侧附睾尾部,分别置于1 m L 37℃生理盐水中,并存放于37℃恒温箱中。30 min后取悬液1滴置于精子记数板上,通过连接显微镜的摄像装置获取图像并分析、记录,检测精子密度、前向运动精子比例、活动率,进行量化分析。
1.5.2. 2 大鼠精液运动特征参数的检测
通过计算机辅助精液分析系统(CASA)获得相关运动特征参数,包括精子直线运动速度、平均行程速度、曲线运动速度、头部平均摆动频率、头部摆动幅度、平均纵线性比值。
1.6 脱落标准
实验过程中大鼠发生不明原因死亡列为脱落。
1.7 统计学方法
采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组计量资料比较采用方差分析;等级资料比较采用Ridit分析;以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 药物对大鼠体重的影响
实验后各组大鼠体重分别为G1组:(475.80±24.04)g;G2组:(471.10±11.03)g;G3组:(468.00±13.21)g;G4组:(470.50±25.18)g;G5组:(4710.5±21.05)g;G6组:(463.50±21.07)g。各组体重有所增加,但6组体重进行方差分析,差异无统计学意义(P>0.05),体重增加对研究无影响,具有可比性。
2.2 安全性及不良反应检测
实验过程未见不良反应。大鼠的肝脏和肾脏制成病理切片送检,在高倍光镜下观察各组大鼠肝脏以及肾脏的病理变化。病理结果显示:观察对照组大鼠肝小叶内和门管区有不同程度的单核细胞、淋巴细胞浸润,肝细胞内水分增多、肿胀,胞浆呈空网状;肾小球无明显变化,肾小管腔内有透明管型。其他3组大鼠的肝脏和肾脏均未见到明显的损伤,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 实验后大鼠附睾精子的密度、前向运动精子比例、精子活动率的统计
G1组大鼠附睾精子质量最高,G6组精子密度、前向运动精子比例、精子活动率明显降低,G1组与G6组比较,差异均有高度统计学意义(P<0.01);G6组精子密度、前向运动精子比例、精子活动率与G5组比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验后G2、G3和G4组精子密度、活动率和前向运动精子比例均有提高,且G3组更为显著,与G1、G2、G4、G5组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);G2组与G1、G4、G5组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。
2.4 计算机辅助精液分析系统图像分析
G1组精子密度高,多为正常形态精子,运动轨迹以直线居多,单位时间内行程较长;G2组精子密度较高,可见少量畸形精子,精子运动轨迹较为杂乱;G3组精子密度较高,多数精子形态良好,单位时间内行程较长;G4组精子密度一般,可见较多畸形精子和圆形细胞,运动轨迹较为杂乱,单位时间内行程较短;G5组精子密度低,可见大量圆形细胞和碎片,运动轨迹紊乱,单位时间内行程较短;G6组精子密度低,畸形精子比例较高,运动轨迹紊乱,单位时间内行程短。见图1。
注:与G1组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01;与G2组比较,■P<0.05;与G4组比较,*P<0.01;与G5组比较,#P<0.05,##P<0.01
A:G1组;B:G2组;C:G3组;D:G4组;E:G5组;F:G6组
2.5 实验后各组大鼠附睾CASA精子运动特征
G1组大鼠精子运动最佳,G6组的精子VSL、VAP、VCL、BCF、ALH、STR明显下降,与G1组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01);实验后G5组参数无改善,与G6组比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验后G2、G3组和G4组上述运动特征参数均有所提高,且G3组更为显著,与G1、G2、G4、G5组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);G2组与G1、G4、G5组上述参数比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表2。
3 讨论
祖国医学博大精深,历代的众多医家都很重视男性不育症,在历史众多医学著作中我们可以找到关于男性不育的病名,如“精少”“精冷”“天宦”“无子”等,其中的生理特点、病因病机、辨证论治等方面都不乏记载。《黄帝内经》是古老的中医典籍,文中有关于男性的性与生殖系统的论述,阐明了人体形体与生殖功能盛衰的过程[4],如《素问·上古天真论》云:“丈夫八岁,肾气实,发长齿更;二八,肾气盛,天癸至,精气溢泻,阴阳和,故能有子……”[5]又如文中还提到“肾者主水,受五藏六府之精而藏之,……今五藏皆衰,筋骨解堕,天癸尽矣。故发鬓白,身体重,步行不正,而无子耳”。虽然肾气由盛至衰是自然规律,但养生得法能延缓衰老———“道者能却老而全形,身年虽寿,能生子也”。文中认为肾气的盛衰,天癸的有无,脏腑功能是否协调,直接决定着男性的生殖能力,并且尚须夫妇“阴阳和”“故能有子”,这就为中医学关于治疗男性不育和养生保健奠定了理论基础[6]。明清时期中医理论继续发扬与创新,对男性不育症的病因、病机、诊断和治疗水平达到了一个全新的高度,涌现出大批有价值的文献著作,例如《石室秘录》和《傅青主男科》[7]。以傅山为代表的学派从“脾、肾”论治不育,认为脾为后天之本,肾为先天之本,先后天相互化生、相互促进。人体正常孕育功能需要脾肾关系的协调、五脏阴阳的调和,故治法当以“温润填精、扶中健运”“君相并重、健脾益气”[8]。精液清冷、质地稀少者,多因先天禀赋不足或者后天劳伤所致,对此类患者若只是片面温阳、滋阴则收效甚微,若不慎误用攻伐之品则后果更加不堪,应通过益精填髓之法,兼顾气血阴阳,广纳血肉有情之品,以求肾精充足,血气平正,这就为临床治疗少、弱精子症提供了理论依据。清代名医陈士铎是男科学方面颇有建树的一员,其著作《辨证录》中体现的学术思想与傅山一脉相承,生髓育麟丹[9]就是其中验方之一。该方由鹿茸、鱼鳔、龟甲胶、紫河车、人参、当归、熟地、山茱萸、山药、肉苁蓉、柏子仁、五味子、枸杞子、菟丝子、麦冬、桑椹子组成,具有益精填髓、生精种子之效。全方以“滋补肾精”为核心,所采用的“鹿茸”“龟甲胶”“熟地”等九味药皆入肾经,其中熟地黄“滋阴补血,填精益髓”,加上血肉有情之紫河车、龟甲胶、鹿角胶、鱼鳔共为君药;山茱萸、菟丝子、肉苁蓉、五味子为臣药,助君药补益肾精,并有收敛固精之效;俗话说“养精须养血”“精血同源”,故采用补血之当归,加上麦冬、桑椹子滋养胃阴共为佐药。方中加入人参、山药为臣,以求健脾培土,补益中气,防止食滞中焦妨碍脾土运化,有利于促进药物发挥效果。该方药性不温不燥,无金石、毒虫等峻烈之品,无伤胃之弊。陈氏言此方“妙在纯用填精益髓之味,无金石之犯,可以久服无害,不但可以种子,兼可益寿延年[10]。”广东省深圳市中医院长期应用此方治疗“肾虚”以及“脾肾两虚”型的男性不育症,深感此方之妙!
注:与G1组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01;与G2组比较,■P<0.05;与G4组比较,*P<0.01;与G5组比较,#P<0.05,##P<0.01;VSL:精子直线运动速度;VAP:平均行程速度;VCL:曲线运动速度;BCF:头部平均摆动频率;ALH:头部摆动幅度;STR:平均纵线性比值
本实验简化制作工艺,改丸剂为汤剂,专门针对少、弱精子症患者而设。根据我们前期的临床观察表明:生髓育麟汤有明显提高不育症患者精子数量、活动力,降低精子畸形率的作用[11];前期实验研究显示:生髓育麟汤能改善不育症患者内分泌功能,提高血清睾酮水平,抑制生精细胞的凋亡[12]。
五子衍宗丸源自明代《医学入门》,是添精种子之方,旧称“古今第一种子方”。该方由“枸杞子”“菟丝子”“五味子”“覆盆子”“车前子”组成,经烘焙、晒干,上为细末,炼蜜为丸。经长期的临床验证具有补益肾精之功,为治疗男性不育症的经典药方。故本实验选择该中成药作为对照药。
精子在睾丸生精小管中产生,经过曲细精管、睾丸网和睾丸输出小管进入附睾,循附睾头-体-尾运行,逐步达到成熟并存储在于附睾[13]。附睾的头端和体端是精子成熟的部位,尾端是精子贮存部位[14],所以实验动物精子一般是通过附睾尾部来获得,一来数量较多易获取,二来可以排除其他性腺的干扰,较客观反映睾丸、附睾物质代谢情况。任何损害睾丸曲细精管上皮结构及内分泌功能的因素都可以导致精子的生发障碍,也造成附睾内储存的精子数量减少,活力下降,例如环境因素、食品、药品因素等[15]。据多方面报道显示,GTW具有明显的生殖毒性,能够抑制睾丸的各级生精细胞,包括精母细胞、精子细胞和精子,甚至出现大量精原细胞脱落,阻塞曲细精管腔道造成少精子症[16]。大剂量使用GTW还对肝脏及肾脏造成一定的损害,并且所造成的病变随着时间推移不能自行修复[17]。精液分析是确定男性生育能力的重要手段[18],但以往简单的显微镜下检测技术存在较大误差,并且不能测定精子微细运动特点,不符合现代男性不育症的诊断要求[19]。CASA则能较客观地评价上述指标,运动特征的描述更能反映精子受精能力、精子穿透能力[20]。所以本实验采用SD大鼠为研究对象,采用GTW造模,采取生髓育麟汤和五子衍宗丸灌胃,收集大鼠附睾尾部的精子,通过CASA观察实验药物对大鼠精子密度、前向运动精子比例和活动率,并收集比较精子运动特征各项参数,参照人类的标准全方位地评价实验药物的作用机制和靶点。
本研究显示:大鼠经造模后与正常对照组比较精子质量显著下降,精子密度和前向运动精子比例、活动率都较低,精子运动特征参数也下降,说明GTW损害了睾丸生精能力,造成大鼠附睾中的精子数量和质量都下降;造模组与观察对照组比较,其差异不明显,说明随着时间推移睾丸精子生发功能未见恢复,少、弱精子大鼠造模成功;生髓育麟汤高、低剂量组和五子衍宗丸组分别与观察对照组比较,其精子密度和前向运动精子比例、活动率均存在显著差异,运动特征参数也提升,说明两者可能减轻了GTW的损害,恢复了大鼠的生精上皮细胞部分功能,促使生精细胞的成熟和分化,以至于附睾内的精子数量和活动力有显著提升,精子的穿透能力和受精能力也增强,从而改善了大鼠的生殖能力。两者比较生髓育麟汤更胜一筹,且随着剂量增加效果更显著。从安全角度观察:生髓育麟汤组和五子衍宗丸组肝脏和肾脏均未见到明显的损伤,说明两组药物药性温和,应用于临床较为可靠。生髓育麟汤各组与正常对照组比较精子质量仍然较差,说明采用该方治疗后虽然改善了实验大鼠的精子质量,但还没有达到完全健康的水平。是否因为两个生精周期(26 d)的治疗时间不够?继续用药或者加大剂量是否可以达到更好效果?中西药结合治疗是否可以提高疗效?也许未来可以通过优化药品制作工艺、增加实验观察时间进一步探讨。
综合各项研究结果可以证实:生髓育麟汤能改善实验性大鼠附睾中的精子密度、活动率和前向运动精子比例,优化了精子运动特征。本实验验证了生髓育麟汤的作用靶点在睾丸和附睾,作用机制是维护了睾丸和附睾内环境的稳定,促进生精细胞的分化和成熟。五子衍宗丸作为治疗不育症的传统药物其疗效已受肯定[21,22],而生髓育麟汤较五子衍宗丸更有优势,显示了推广生髓育麟汤治疗不育症的良好前景以及从“脾肾论治不育症”的科学性。生髓育麟汤是如何影响精子的生发功能?下一步也许可以从睾丸物质代谢、基因调控和蛋白表达干预方面进一步深入研究。
摘要：目的观察生髓育麟汤对少、弱精子大鼠附睾精子质量的影响。方法 60只大鼠按照常规饲养方法饲养,1周后随机抽出10只大鼠编入正常对照组,另外50只予雷公藤多苷片20 mg/(kg·d)灌胃26 d。造模完毕后随机抽取10只编入造模组处死,将剩下的40只大鼠随机分为4组:生髓育麟汤高剂量组[20 m L/(kg·d)]、低剂量组[10 m L/(kg·d)]、五子衍宗丸组以及不给予任何药物,只给予正常食物和水的观察对照组,每组各10只。实验结束后获取大鼠附睾精子对各组大鼠的精子质量进行分析。结果 生髓育麟汤能明显增加精子密度、前向运动精子比例、精子活动率,并且随着浓度的增加,效果更显著,此外,生髓育麟汤还能改善精子运动特征参数;生髓育麟汤低剂量组、生髓育麟汤高剂量组与观察对照组比较,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。结论 生髓育麟汤能改善少、弱精子大鼠附睾中的精子质量。
精子质量检测系统 第4篇
1 资料与方法
1.1 检测对象
选择不育夫妇116对, 年龄22～41岁, 不孕时间2～13年, 其中8例有习惯性流产或死胎病史;11例有器质性原因 (精索静脉曲张, 前列腺炎, 附睾炎, 子宫颈炎, 附件炎等) ;15例有泌尿生殖道感染病史。对照组75对均为妻子正在怀孕15～27周的夫妇。
1.2 方法
1.2.1 精液和血清收集
手淫法采集禁欲3～5d的丈夫精液, 37℃水浴自然液化。采集夫妇静脉血各2mL, 分离血清56℃灭活30min备用。
1.2.2 精子制动试验
液化精子用磷酸盐缓冲液 (PBS) 洗3次, 混悬于Bark's缓冲液中, 校精子数为50×106/mL分别取此悬液0.05mL置含有倍比稀释过的血清中, 37℃水浴1h, 轻轻混匀, 取1滴载玻片上, 加盖玻片, 用显微镜观察结果, 精子凝集者为抗精子抗体阳性。
1.2.3 免疫选洗法
取24孔聚苯乙稀板, 用经预试合适的人IgG包被, 4℃冰箱过夜, PBS洗3次再加羊抗人IgG (浓度经预试选定) 血清, 37℃水浴箱1h后PBS洗3次备用。液化新鲜精液用PBS洗3次后再用5%FCS (小牛血清一PBS-A精子稀释液校精子数约为50×106/mL取精子悬液0.2mL于0.2mL被检血清在试管中混合, 加含有5%FCS的PBS、Ex、Bio精子孵育液[5%FCS-PBS中含有CaCl (0.19g/L) 、MgCl (0.19g/L) 、H2O (0.4mL) ], 混匀, 37℃1h, PBS洗3次, 取0.25mL加到备用的24孔聚苯乙烯板中, 37℃1h, PBS洗3次, 用倒置显微镜观察结果, 精子大量附着于孔底为阳性, 孔底无或有数个散在精子者为阴性。
1.2.4 固相酶染色法
液化新鲜精液PBS洗3次后加0.5mLFCS、Ex、Bio精子孵育液混匀, 校精子浓度为50×106/mL涂于载玻片上一式2份, 自然干燥, 甲醇固定10min再加被检血清37℃30min, PBS洗3次后用羊抗人IgG-HRP37℃反应30min, 洗3次加新鲜配制的底物 (DAB) 37℃15min, 同法洗3次, 油镜观察结果, 阳性呈棕黄色, 阴性不着色或呈黄色。
2 结果
用三种方法同时检测116对不育夫妇, 结果见表1。三法均为阳性者35例, 均阴性者81例, 符合率69.8%, 不育夫妇与生育夫妇抗精子抗体, 阳性率比较均有极显著的差异 (P<0.001) 。三种方法之间阳性检出率比较, SIT法较其他两法为高Penning法与SESA法比较结果相似。统计学处理三种方法间检出率均无明显差异 (3P>0.05) 。三种方法测得的血清抗精子抗体阳性结果在男女性别间均无明显差异 (3P>0.05) 。有感染者和无感染者三种方法阳性检出率比较均无显著性差异 (3P>0.05) 。
注:*与生育组比较有显著差异 (P<0.001)
3 讨论
最近几年来, 笔者感触到我国育龄男女中, 发生不孕不育症的人数逐年攀升, 因此, 对于这方面疾病的治疗也成了我国生殖医学中一大研究热点。在导致男女出现不孕不育症的因素中, 约有30%的因素是免疫方面的, 而在免疫方面的因素中, AsAb是导致育龄男女出现不孕不育症的最重要因素, 并被列为临床诊断检查的确定指标。
精子作为一种具有强抗原性的隐蔽性抗原, 在与机体免疫系统进行接触后, 本身就会具有较强的免疫反应, 从而产生抗精子抗体。在通常情况下, 精子抗原由于具有血睾这一保护屏障, 从而不会产生自身的免疫反应, 所以, 不存在抗精子抗体。但是当血睾屏障受到外伤、手术或者感染等破坏时, 精子抗原自身因为被暴露于机体的免疫系统中, 所以会产生抗精子抗体。而对于育龄妇女而言, 其生殖道也发挥着屏障的作用, 从而阻止精子抗原与机体免疫系统的接触, 但是当其生殖道被损伤或者感染, 以及进行流产时, 就会降低其生殖道的屏障作用, 增加精子抗原与机体免疫系统的接触, 从而使女性产生抗精子抗体, 或者女性对丈夫的精子有过敏反应。据研究表明, 抗精子抗体能够使精子的活力和穿透宫颈液的能力大大降低, 对胚泡的植入和受精过程产生干扰, 从而不易受孕。
另外, 抗精子抗体在免疫性不孕中的作用, 已通过大量的实验研究和临床观察得到肯定, 抗精子抗体无论存在于男方还是女方都可导致不育[3]。尽管抗精子抗体的作用机理及其对生殖的影响程度还不十分清楚, 但抗体的检出对临床不育的治疗和愈后的判断提供了有价值的指标。抗精子抗体的检出率因采用的检测方法不同, 各家的报道结果也不一致[4]。我们用三种方法检测了129对不育夫妇抗精子抗体, 其男女阳性率与多数文献报告结果相近, 与同时测得的生育夫妇阳性率检出率偏高, 其原因可能SIT法的结果同时反映血清中β凝集素与精子非特异性凝集, 从而出现一些假阳性或反映血清中IgG和Igm两类抗精子抗体。SIT操作简单, 灵敏度高, 阳性患者血清滴度高达1:64, Panning和SESA敏感性特异性都很高, 但操作繁琐, 各实验室可根据自己的条件加以选择, 如能同时采用两种以上的方法, 可能会进一步提高抗精子抗体的检测水平。
参考文献
[1]郑艳芬, 邓辉.不孕不育患者免疫性抗体检测结果分析[J].实用医技杂志, 2006, 13 (7) :1102.
[2]李笑梅, 陈永华, 汤明礼, 等.精子活力与畸形率及抗精子抗体的回归分析[J].临床检验杂志, 1998, 16 (4) :251.
[3]王启凤, 谢晓东, 江平.不孕不育患者抗精子抗体分析[J].中国优生与遗传杂志, 2006, 14 (6) :110-118.
精子质量检测系统 第5篇
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 精子和卵母细胞
为延边黄牛冻存精子、延边黄牛卵母细胞。
1.1.2 主要试剂及配制
精子获能试剂, 肝素 (20 μg/ mL) 。
考马斯亮蓝水溶液 (CBBI) 染液:考马斯亮蓝50 mg溶于100 mL纯化水中, 煮沸溶解, 滤膜过滤;考马斯亮蓝高氯 (CBBⅡ) 染液:考马斯亮蓝50 mg溶于3.5%的高氯酸溶液, 滤膜过滤;台盼兰-姬姆萨 (GT) 染液:1%台盼兰液、固定液 (6.8%重铬酸钾40 mL+甲醛10 mL) 、姬姆萨液 (8.5%姬姆萨原液+5.5%PBS+100 mL纯化水) 。
1.2 方法
1.2.1 冻精的处理
从液氮中取出冷冻保存的精液细管, 投入38 ℃水浴锅中使其溶解, 用38 ℃的D-PBS 10 mL稀释精液, 1 800 r/ min离心3 min, 去除上清液, 加500 μL肝素 (20 μg/ mL) , 之后放入CO2培养箱中获能15 min。每份精液样品在进行染色的同时做延边黄牛卵母细胞体外受精试验。
1.2.2 染色
(1) 考马斯亮蓝水溶液染色。
染色液置于37 ℃水浴锅中预热10 min→精子涂片→置于考马斯亮蓝水溶液染色液中浸染5～7 min→纯化水冲洗→吹干→封片。
(2) 考马斯亮蓝高氯染色。
染色液置于37 ℃水浴锅中预热10 min→精子涂片→置于考马斯亮蓝高氯染色液中浸染5～7 min→纯化水冲洗→吹干→封片。
(3) 台盼兰-姬姆萨染色。
获能精液加入等量的1%台盼兰液→37 ℃水浴15 min→涂片→风干→纯化水冲洗→室温下用固定液固定45 min→水洗→风干→姬姆萨染液染色30 min→水洗→风干→封片。
1.2.3 卵母细胞与精子共培养
精子与卵母细胞置于39 ℃、5%CO2培养箱中共培养24 h, 在倒置显微镜下观察卵裂情况, 计算体外受精率。
2 结果
2.1 不同染色方法精子顶体反应的形态学表现 (见图1)
A.发生顶体反应精子, B.未发生顶体反应精子。
考马斯亮蓝水溶液染色和考马斯亮蓝高氯染色结果在光学显微镜下观察, 所有精子尾部都被染成紫蓝色, 头部呈现两种类型:A型是未发生顶体反应的精子, 顶体区呈紫蓝色, 而顶体后区不染色或呈浅紫色, 少量精子顶体后区也呈紫蓝色;B型为发生顶体反应的精子, 顶体区不染色或呈浅紫色, 其余部位染色结果与A型相似。
经台盼兰-姬姆萨染色后在光学显微镜下观察, 可将精子分为两类:A类核后帽部不着色或呈淡青色, 顶体部未着色或部分呈红紫色或部分呈暗青色, 为发生顶体反应的精子;B类核后帽部呈暗青色, 顶体全呈紫红色或暗青色, 为未发生顶体反应的精子。
2.2 不同检测方法检测的顶体反应率及延边黄牛卵母细胞体外受精情况
用肝素处理精子, 在染色的同时做延边黄牛卵母细胞体外受精试验。表1为不同染色方法检测的顶体反应率, 利用SPSS分析软件进行处理, 经显著性检测, 3种染色方法间均差异极显著 (P<0.01) 。
注:同列数据肩注不同字母表示差异极显著 (P<0.01) 。
精子经肝素 (20 μg/mL) 诱导体外获能后, 将精子与延边黄牛卵母细胞共培养, 表2为卵母细胞体外受精率。
将有顶体反应的精子率与受精率做反正弦转换后进行相关性分析, 各相关系数见表3。从表3可以看出, 顶体反应与卵母细胞受精率呈正相关。
3 讨论
精子顶体反应是精子在受精过程中经历的重要环节, 而顶体反应的快速检测一直是众多学者研究的热点。鉴于顶体反应是精子顶体部所发生的形态学变化, 所以直接观察顶体形态是比较直接的方法。试验采用了3种不同染色方法对延边黄牛精子顶体反应进行了检测, 将3种不同方法检测的顶体反应率进行显著性分析, 结果三者均差异极显著 (P<0.01) 。可以看出, 台盼兰-姬姆萨染色法效果最佳, 顶体反应率最高, 这与前人的试验结果相似;而考马斯亮蓝水溶染色法和考马斯亮蓝高氯染色法效果欠佳, 顶体区和顶体后区着色不容易区分, 容易造成视觉上的误差。
精子质量检测系统 第6篇
1 人精液中ROS的产生来源
所有精液都具备ROS的潜在来源, 每一份精液中都有部分精子受到氧化损伤并伴有功能受损, ROS的产生是一个连锁反应, 即一种活性氧的出现会促进其他ROS的产生, 所以ROS对男性生育的影响是一个程度问题, 而不是存在或不存在病理学的问题。精液中ROS的细胞来源包括形态异常精子、生精细胞和白细胞, 其中白细胞和形态异常精子是人精液中ROS的主要来源。精子可通过两种方式产生ROS: (1) 在精子质膜水平上的NADPH-氧化酶体系, (2) 线粒体水平上的NADH依赖性的氧化还原酶体系。线粒体酶体系是不育男性精子中ROS的主要产生方式。激活的白细胞能产生比未激活的白细胞高100倍剂量的ROS。白细胞可能在炎症等各种刺激应答时被激活。所以如果患者患有附睾炎, 会因白细胞的增多而产生更多的ROS[1]。
辅助生殖技术 (ART) 之前常规精子优选, 最终得到没有精浆、细胞碎片及病原微生物污染的精子悬液, 同时回收足够数量的形态和功能都正常的精子[2], 方法主要有精子洗涤、上游法、密度梯度离心法及玻璃棉柱过滤法等。精浆是精液抗氧化物质的主要来源, 去除精浆的同时将导致精子的超氧化状态。离心洗涤精子是精液处理的常规步骤, 但体外处理时间过长, 离心步骤过多, 离心速度过快, 可造成精子的物理损伤并形成过氧化物或其他氧残留物, 导致ROS的大量产生, 增加DNA损伤概率。
随着ART的进展, 精液冷冻技术应用范围日益扩大。在利用低温保存的同时, 许多学者注意到冷冻对精子存在损伤作用, 最为明显的是精子活动率、活动力下降[3]。另外, 透射电镜发现冻融后精子顶体肿胀, 顶体内、外膜分离, 外膜形成波浪状皱褶, 有的核局部出现凹陷, 线粒体改变呈基质密度降低, 结构模糊等;精子膜的脂质水平流动性在顶体区、顶体后区均明显下降[4]。
2 ROS对精子的损伤及精子自身不能修复DNA损伤的原因
由于精子膜含有高浓度的不饱和脂肪酸, 而且精子自身的抗氧化能力很弱, 在过量活性氧的攻击下, 易发生脂类过氧化反应, 使精子膜的流动性和完整性受到损伤, 进而破坏精子功能, 并最终引起男性不育。也有证据显示, 在不育男性的精子中通常观察到的DNA片段是由高水平的ROS介导的[2]。ROS产生过多也会破坏精子核内DNA的完整性。DNA碱基对氧化应激敏感, 这些结构的过氧化能引起碱基修饰、DNA链断裂以及染色质交联。由过量ROS诱发的DNA损伤会加速生殖细胞凋亡过程, 导致与男性不育相关的精子计数降低, 以及可以解释近半个世纪以来所观察到的精液质量明显下降现象[2]。另外, 过量ROS诱发精子DNA损伤后, 会导致一系列的不良后果, 如减弱受精率, 破坏植入前的胚胎发育, 增加流产率, 增加后代的发病率等[5]。因此, ROS必须不停地被灭活以保持只有少量必需浓度的ROS来维持正常细胞功能, 所以许多不同类型的抗氧化剂可被用来对抗氧化物。
3 γH2AX形成机制
DNA损伤引起的快速反应是H2AX蛋白C末端139位的丝氨酸磷酸化形成γH2AX。研究表明, γH2AX焦点的形成没有细胞特异性[6], 并且无论何种因素诱导的DNA双链断裂 (DSBs) 都伴随有H2AX的磷酸化和簇集。
当普通细胞受到损伤DSBs形成以后, H2AX即会被磷酸化, 形成γH2AX, 随后募集损伤修复相关蛋白进行修复。γH2AX可以与BRCA1, 53BP1和MDC1协同定位于DSBs处[7]。另外, NBS1、CHK2、SMC1、Rad51和Rad50等相关蛋白也出现在γH2AX焦点形成处[8,9], γH2AX在募集其他蛋白形成焦点复合物过程中的关键作用可由Paull等[10]的研究证明。在成熟精子DNA损伤后同样能检测到γH2AX焦点, 但焦点复合物形成后并没有随时间改变减少, 证实了成熟精子自身不能修复的观点[10]。
4 γH2AX技术原理及其对DNA损伤的检测作用
由于H2AX在染色体上基本上是不可以移动的, 且H2AX的磷酸化-去磷酸化循环不遵循扩散交换机制, 也就是说γH2AX焦点在染色体上是不可以移动的。特异抗γH2AX蛋白荧光抗体证实, 在染色质DNA双链断裂周围出现的H2AX磷酸化核灶 (nuclear foci) , 几乎与DNA双链断裂的数量相同, 比值为1∶1[11]。识别抗体免疫荧光法是近年来发展起来的一种检测电离辐射致DNA双链断裂的方法, 根据DSBs可以诱导产生γH2AX, 并且γH2AX的量和DSBs的量存在正相关系这一事实基础上建立和发展起来的。该项技术已成为一种快速、灵敏检测电离辐射致DSBs的新技术。γH2AX识别抗体免疫荧光法检测DSBs具有免疫反应的特异性, 不仅能够判断双链断裂与否, 还可以知道双链断裂的数量, 并且能够将双链断裂的修复情况量化[12]。
丙型肝炎病毒核心蛋白与JNK/SAPK信号转导通路
许立博1, 2, 冯晓燕2*, 唐丽1, 2
(1.沈阳农业大学畜牧兽医学院, 辽宁沈阳110161;2.军事医学科学院基础医学研究所, 北京100850)
[摘要]丙型肝炎病毒 (HCV) 核心蛋白是一种多功能的病毒核衣壳蛋白, 对细胞信号转导途径具有明显作用, 从而影
响相关的靶基因。JNK/SAPK信号转导通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起
着至关重要的作用, 是正常与疾病状态时细胞的一个重要调节靶点。
[关键词]丙型肝炎病毒核心蛋白;JNK/SAPK;信号转导[中图分类号]R373.2[文献标识码]A
[文章编号]1673-7210 (2009) 04 (c) -006-02
[Key words]HCV core protein;JNK/SAPK;Signal transduction
生性转化[1]。在核心蛋白转基因雄性C21小鼠中, 有25.9%发生肝脂变和HCC[2]。冯晓燕等[3]在研究工作中也同样发现核心蛋白能够诱导人正常肝细胞系L02发生恶性转化, 并在裸鼠体内形成瘤块。这些研究表明, HCV核心蛋白具有致癌潜能, 且与HCC的发生发展密切相关。目前认为核心蛋白可能是通过作用于宿主细胞内信号蛋白, 激发信号转导级联而发挥致病效应。
现对丙型肝炎病毒核心蛋白与JNK/SAPK信号转导通路二者关系进行综述。
1丙型肝炎病毒核心蛋白
丙型肝炎病毒 (HCV) 核心蛋白是HCV前体多肽N端的水解产物, 是组成HCV核衣壳的基本单位;它同时又是一种多功能蛋白, 有实验证实核心蛋白能使原代人肝细胞发生永
[基金项目]国家自然科学基金项目 (30600308) ;“十一五”全军医药卫生科研基金 (06MA319) ;国家“十一五”重大科技专项 (2008ZX10002-013) 。[作者简介]许立博 (1982-) , 女, 满族, 辽宁丹东市人, 在读硕士研究生, 专业:预防兽医学, 研究方向:动物传染病学。
2 JNK/SAPK信号通路
c-Jun氨基末端激酶 (JNK) 家族是促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 八大亚族成员之一, 而JNK/SAPK途径是这些亚族组成的三大通路 (P38通路、ERK1/2通路、JNK/SAPK通路)
*[通讯作者]冯晓燕, 博士, 副研究员。
总之, γH2AX的快速诱导、H2AX磷酸化光信号的放大, 以及γH2AX焦点和DSBs在数量上呈一一对应的关系, 为γH2AX应用于检测DSBs提供了理论依据, 使其成为检测DNA损伤的金标准[12]。
摘要：活性氧类物质 (ROS) 产生过多会破坏精子核内DNA的完整性, 促进了一系列男性生殖功能的病理学改变。DNA损伤发生DNA断裂 (DSBs) 均可诱导H2AX的磷酸化 (γH2AX) 和簇集。近年来γH2AX识别抗体免疫荧光法是检测DNA双链断裂的热点之一。
精子质量检测系统 第7篇
1 资料与方法
1.1 一般资料:
选取2011年1月至2013年5月来本院妇科和男科门诊就医的本地区不孕不育症患者1600例, 其中男性不育700例, 年龄25~45岁, 不育期超过1年, 无器质性生殖器疾病, 女方生殖系统正常;女性不孕900例, 年龄22~40岁, 不孕时间超1年, 有周期性排卵现象, 输卵管畅通, 无生殖器畸形, 男方无生殖器畸形且精液分析正常。正常对照选择已正常怀孕的孕妇及其丈夫200例, 男100例, 年龄23~35岁;女100例, 年龄21~33岁。
1.2 仪器与试剂:
雷勃MK3酶标仪 (芬兰雷勃公司提供) ;抗精子抗体酶联免疫试剂盒 (北京贝尔生物工程有限公司提供)
1.3 方法:
抽取患者空腹静脉血3~5 m L不抗凝, 分离出血清后, 立即测定或置-20℃左右冰箱保存定期检测, 严格按试剂盒说明书操作, 用酶标仪450 nm波长检测各孔OD值, 然后计算出S/CO值, 若S/CO值≥1, 则为阳性, 若S/CO值<1, 则为阴性。
1.4 统计学处理:
采用SPSS 12.0软件进行统计学分析, 实验数据采用χ2检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不孕不育男女分别与其正常对照血清抗精子抗体测定结果比较:
不孕不育男女血清抗精子抗体阳性均非常明显高于正常对照组, 差异均具有统计学意义 (χ2男=14.11, P男<0.01;χ2女=21.37, P女<0.01) , 具体分别见表1, 2。
2.2 男女不孕不育组血清抗精子抗体测定结果比较:
女性不孕血清抗精子抗体阳性率明显高于男性不育, 差异有显著性意义 (χ2=10.92, P<0.01) , 具体见表3。
3 讨论
人类精子抗原中, 其中与生育相关的精子抗原分别为精子固有抗原和附着抗原, 这两类抗原与机体免疫系统接触后, 都能诱发机体产生自身的抗精子抗体[3]。男性正常情况下, 由于血睾屏障的完整存在, 机体免疫系统与精子不会接触, 但如果生殖道由于炎症、外伤、手术、胱结石或肿瘤等损伤了血睾屏障, 可导致精子或其可溶性抗原漏出到外围组织而被吞噬细胞吞噬, 进而致敏淋巴细胞发生免疫反应, 从而产生自身的抗精子抗体。女性正常情况下, 女性生殖道有屏障作用, 精子抗原与女性体内免疫系统不直接接触, 且精液中有精浆免疫抑制物能抑制女性对精子抗原的免疫反应而形成免疫耐受, 但如果在女性在经期、生殖道受到损伤或感染、人工流产等致使生理屏障受到破坏时进行性交, 女性可产生抗精子抗体。另外如果女性体内独特型抗体和抗独特型抗体的网络功能紊乱, 或者女性对精子过敏, 或生殖道的酶系统缺陷, 也可使女性产生抗精子抗体[4]。
抗精子抗体引起不孕不育的机制:①使精子发生凝集, 制动精子而影响精子的活动力, 使精子难于进入子宫;②抗体使精子膜发生变化, 进而干扰精子获能;③影响精子顶体释放透明质酸酶, 从而抑制精子的顶体反应, 使精子失去溶解卵膜的作用, 不能进入卵内受精;④抗体与精子结合后, 可激活补体系统进而杀伤精子, 同时还可引起机体的炎性反应;⑤在早期胚胎上仍有精子抗原, 抗精子抗体与之反应并介助补体、巨噬细胞和杀伤细胞来杀伤受精卵和早期胚胎, 从而导致流产[5]。
本研究显示, 对本地区1600例不孕不育患者血清抗精子抗体检测结果, 总阳性率为24.00%, 男性阳性率为20.00%, 女性阳性率为27.11%, 且均非常明显高于正常组 (P男<0.01, P女<0.01) , 表明抗精子抗体是引起本地区男女免疫性不孕不育症的重要原因之一, 因此, 抗精子抗体检测对不孕不育夫妇进行病因初筛有着重要意义, 此外男性与女性抗精子抗体检出结果比较显示, 女性抗精子抗体的检出阳性率高于男性, 差异有显著性意义 (P<0.01) , 提示女性明显较男性易产生抗精子抗体, 这可能是由于男性和女性生殖系统的生理结构差异, 女性产生抗精子抗体的机会比男性明显增多所致[6]。
参考文献
[1]戈一峰.精子膜抗原的研究新进展[J].中华男科学杂志, 2003, 9 (4) :292-294.
[2]刘敏扬, 黎明.793例不孕不育症患者血清免疫性抗体结果分析[J].中国当代医药, 2012, 19 (19) :120-121.
[3]季明勇, 黄明孔, 马天根, 等.男女性不育症8331例血清抗精子抗体检测结果分析[J].中国男科学杂志, 2009, 23 (5) :46-48.
[4]马为群.910例不孕症患者抗精子抗体测定的结果分析[J].浙江中医药大学学报, 2006, 30 (5) :504-505.
[5]曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社, 2008:98.