PCV2感染范文（精选4篇）
PCV2感染 第1篇
1 发病情况
2007年10月，本市某集约化猪场从外地购回100多只30日龄左右小猪，饲养不到一个月，部分小猪出现渐进消瘦、高烧，部分猪腹下后肢内侧皮肤出血、淤血和黄疸，部分猪腹泻，粪便由开始的量大灰褐色稀粥样转变为后期的量少黄绿色水样，昏睡，仔猪体温达40～41.5℃，每天死亡4～5头;而同场成年母猪也出现发情不稳定，配种失败率高达60%和流产死胎的情况。发病期间先后在饲料中添加治疗剂量的泰乐菌素、泰妙菌素等抗生素进行治疗，没有明显效果，故将部分病死小猪的病料送实验室进行检测。
2 剖检变化
发病期间剖检病死猪和发病严重猪，均表现淋巴结病变明显，特别是腹股沟淋巴结、颌下淋巴结和肠系膜淋巴结肿大3～5倍, 硬度增加, 水肿, 部分病例淋巴结出血、坏死;多数病例肺肿胀, 部分病例肺有散在的橡皮状硬块;部分病例心叶、尖叶有暗红色斑块;脾肿大、有梗死灶;多数病例肾水肿、苍白, 被膜下有散在粟米大小的白色坏死灶, 质很脆。
1、PCV-I型阳性对照2、PCV-Ⅱ型阳性对照3、PCV型阴性对照4、样品PCV检测结果5、DL2000MARKER 6-7、样品PRV检测结果8、PRV阳性对照9、阴性对照
3 实验室诊断及结果
由于前面已进行了临床抗生素诊断治疗无效，故实验室检测主要针对病毒性疾病进行。(1)血清学检测：将20份血样样品用IDEXX公司试剂盒进行PRRSV抗体、伪狂犬病毒(PRV) gE抗体检测，操作过程见相关试剂盒说明书。结果PRRSV抗体均为阳性，PRV gE抗体为阴性。(2)病原学检测：将病料各取0.5-1g，经研磨粉碎，反复冻融3次后，离心取上清，用Trizol法提取RNA，用DNA提取柱提取DNA。使用世纪元亨公司的猪瘟(CSFV)、普通蓝耳病 (PRRSV) 、圆环病毒 (PCV) 、伪狂犬病 (PRV) 试剂盒进行病原PCR检测。将PCR产物进行电泳分析，可见圆环病毒Ⅱ型和普通蓝耳病PCR扩增为强阳性(图1、图2)。
4防制措施
经询问场主, 发现该厂并未做蓝耳病、圆环病两种免疫, 由此推测两种疾病是该场管理不善所引入。针对这两种疾病混合感染易引发多种细菌疾病暴发的特点, 对整个猪场采取了如下防治方法: (1) 每天淘汰重症病猪, 并与病死猪一起无害化处理。 (2) 加强消毒, 包括提高消毒频率, 各生产线由原来的每周1次常规消毒改为1次/d的紧急强化消毒;在保育舍猪群转出后, 塑料网床进行拆下集中浸泡消毒，安装复位后，全单元密闭熏蒸消毒;母猪舍、中大猪舍猪转出后，除进行常规喷雾消毒外，对水泥路缝地条再用拖把浸泡烧碱拖抹消毒，进猪前用清水冲洗地面及隔墙。(3)紧急预防接种：对全场公、母猪及8周龄以内的所有乳猪进行PRRS紧急预防接种，公、母猪用自家组织灭活疫苗(临时生产，短期使用)。把PRRS及PCV2纳入免疫接种范围，分离本场的PRRSV及PCV2毒株制成的二联灭活疫苗以备用。(4)药物预防继发感染：在断奶仔猪料中交替使用环丙沙星、阿莫西林+金霉素，并辅助使用黄芪多糖提高免疫力。(5)调整饲养管理，减少应激，改原来的4周龄断奶为5周龄断奶，减少早期断奶应激;提高动物蛋白原料比例，减少植物蛋白原料使用量;降低饲养密度，保育舍每单元由原来的断奶转入22头左右，减少到18头左右。经过上述措施，5周后发病率及死亡率明显下降，仔猪营养状况及生长速度明显提高。
1、PRSSV阴性对照2、PRRSV阳性对照3-4、样品PRSSV检测结果5、DL2000 MARKER 6-7、样品CSFV检测结果8、CSFV阳性对照9、CSFV阴性对照
5 讨论
PRRSV与PCV2单独一种毒力比较弱，单独感染猪均不会导致猪大批发病死亡，但它们若与其他病原混合感染，将会导致死亡率升高，危害较大[2]。这次发病的仔猪群PRRS病原检测阳性率很高，可能是PCV2感染后加速了PRRS的传播[3]。采取隔离、消毒、淘汰、加强免疫等措施，疾病得到了有效控制，考虑到PRRSV活疫苗可能会存在一定毒力和针对性不强，后整体改用本场分离毒株制备的PRRS-PCV二联苗，以便提高保护效果。
参考文献
[1]Harms P A, sorden S D, Halbur P D, et al.Experimental reproduction of severe disease in CD/CD pigs conemTently infected with type2porcine eircovirus and porcine respiratory and reproductive syndrome virus[J].Vet thol, 2001, 38:528-539.
[2]李玉峰, 王先炜, 姜平.上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染[J].中国兽医学报, 2003, 23 (5) :442-443.
PCV2感染 第2篇
为探讨猪圆环病毒Ⅱ型 (PCV2) 感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用, 选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪, 随机分成对照组 (4头) 和试验组 (15头) , 试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2, 并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头, 对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏, 流式细胞术检测细胞凋亡率, 荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度, 孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性, 荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ) mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组 (P<0.01) , Ca2+浓度均极显著高于对照组 (P<0.01) ;接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降 (P<0.05) , 脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降 (P<0.05) ;腹股沟淋巴结CaMKⅡm RNA转录在整个试验过程中无明显变化, 但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调 (P<0.05) 。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。
《南京农业大学学报》, 2012, 35 (1) :97-102
PCV2感染 第3篇
1 材料和方法
1.1主要材料 和试剂PCV2灭活疫苗 (O/W) 、PCV2种毒 (ZJ/C株) 、PK15细胞均由杭州荐量兽用生物制品有限公司制备和保存;MEM营养液、胎牛血清购 自Gibco公司 ; Balb/c雌性小鼠 , SPF级, 购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司;PCV2单克隆抗体购自浙江同点生物科技有限公司;FITC-羊抗鼠抗体购自美国KPL公司。
1.2PPCCVV2对小鼠的致病性取6~8周龄Balb/c小鼠40只随即分成A、B、C、D共4组, 每组10只。各组 小鼠分别 用病毒含 量为105.5、106.0、106.5、107.0TCID50/0.1 m L的PCV2种毒攻击, 腹腔注射0.45 m L/只, 另设10只小鼠作为不注射空白对照组。接种后21 d, 扑杀所有小鼠, 无菌采集所有小鼠脾脏进行病毒分离, 分离到病毒即判为病毒分离阳性。
1.3猪圆环病毒2型灭活疫苗最小免疫剂量试验该方法参照“猪圆环病毒2型灭活疫苗 (ZJ/C株) 质量标准中“小鼠免疫攻毒法”进行[7]。取抗原病毒含 量分别为105.0、105.5、106.15、106.5TCID50/0.1 m L的猪圆环病毒2型灭活疫苗分别腹腔注射免疫6~8周龄Balb/c小鼠各10只, 每只0.2 m L, 同时设10只不免疫小鼠作为对照。免疫后21 d, 连同对照小鼠, 用100%使小鼠致病的PCV2种毒攻击, 每只小鼠腹腔注射0.45 m L。攻毒后21 d, 扑杀, 取脾脏进行病毒分离, 分离到病毒即判为病毒分离阳性, 分离不到病毒即为保护。
1.4病毒分离
1.4.1组织处理取小鼠脾脏, 按每0.05 g组织加入1 m L无菌的MEM无血清培养液后, 研磨制备匀浆, 反复冻融3次。组织匀浆以12 000 r/min离心10 min, 收集上清, 用0.22μm的一次性针头滤器过滤除菌, -20℃保存备用。
1.4.2分离培养PK15细胞单层 用0.02% EDTA0.05%胰酶在37℃条件下消化6~10 min, 用含8%胎牛血清的MEM细胞生长液制成浓度为2×105个/m L细胞悬液, 按照1.5 m L/孔将细胞悬液加入到12孔细胞培养板, 置37℃、5% CO2培养箱培养24 h。取小鼠脾脏组织悬液各0.15 m L, 分别接种到以 上细胞板 中 , 轻轻震荡 混匀 , 置37℃、5% CO2培养箱继续培养48 h, 收获细胞板, 反复冻融3次, 12 000 r/min离心10 min, 取上清液作为第1代接种物。取第1代接种物按上述方法再盲传1代, 作为第2代接种物。
1.4.3检测将用含8%胎牛血清MEM营养液制备的2×105个/m L的PK15细胞悬液加入到96孔细胞板中, 每孔100μL, 然后取上述第2代接种物10μL同步接种于96孔板中, 每个样品2孔, 同时设PCV2阳性对照和细胞空白对照各2孔。37℃、5% CO2培养箱培养72 h, 弃细胞培养液, 每孔加入100μL冷丙酮固定液, -20℃固定30 min, 弃固定液, 自然晾干备用。
1.4.4结果判定参照Tischer等[8]、崔尚金等[9]方法进行间接免疫荧光IFA鉴定, 一抗为PCV2单克隆抗体, 二抗为FITC-羊抗鼠荧光抗体。在倒置荧光显微镜下观察结果。阳性对照孔应出现绿色荧光, 阴性对照孔应无绿色荧光, 样品孔有绿色荧光细胞的判为阳性, 无绿色荧光细胞的判为阴性。
2 结果和分析
2.1 PCV2对小鼠的致病性通过病毒分离可以看到, 小鼠样品病毒分离阳性的在荧光显微镜下可见到翠绿色荧光, 并且无干扰背景, 而空白对照组未见荧 光 (见图1) 。其中 , 种毒病毒 含量为105.5TCID50/0.1 m L时病毒分离阳性数为6/10, 种毒病毒含量为106.0TCID50/0.1 m L时病毒分离阳性数为9/10, 种毒病毒 含量为106.5和107.0TCID50/0.1 m L时病毒分离阳性数均为10/10, 空白对照组病毒分离阳性数为0/10 (见图2) 。据此结果选择10/10使小鼠致病最低病毒含量种毒的C组作为小鼠免疫攻毒用种毒, 即106.5TCID50/0.1 m L。
2.2猪圆环病毒2型灭活疫苗最小免疫剂量试验当疫苗中抗原病毒含量为105.0TCID50/0.1 m L时可使小鼠5/10保护 , 当疫苗中 抗原病毒 含量为105.5TCID50/0.1 m L时可使小鼠7/10保护, 当疫苗中抗原病毒含量为106.15TCID50/0.1 m L以上时可使小鼠10/10保护, 见表1。
3 讨论
评价动物疫苗免疫效果的最直接方法是对试验动物的免疫攻毒。由于猪圆环病毒病的发病率高达50%, 阴性猪难以筛选[1], 再者猪体试验费用高, 因此选用替代动物来评价免疫效果是十分必要的。由于小鼠和猪的亲缘关系较近, 遗传学背景清楚, 具有价廉、试验周期短、易于饲养和操作等优点, 许多疾病可以此为动物模型进行相关研究。国外, Kiupel等[10]、Quintana等[11]证实PCV2可以感染Balb/c小鼠, 为后续研究提供了重要依据。我国现有PCV2疫苗的ZJ/C株和SH株的效果评价也已选用Balb/c小鼠作为替代动物, 其中SH株采用ELISA测抗体法, ZJ/C株采用分离病毒的方法。
ELISA抗体检测法由于方便、快捷省时、成本低廉被许多学者所采用。董信田等[12]通过ELISA方法检测小鼠抗体, 证实PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答, 并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。王建龙等[13]用制备的PCV2 DNA疫苗免疫小鼠, 发现免疫后第14天小鼠血清ELISA抗体水平达到峰值, 加强免疫后抗体水平无显著变化。而病毒分离方法结果判定更为直接, 并且也最为准确可靠。因此, 本研究中也采用免疫攻毒后分离病毒的方法, 通过间接免疫荧光法 (IFA) 检测, 荧光显微镜判定结果, 不仅特异而且易于判定。通过致病性试验发现可使小 鼠10/10感染的最 低病毒含 量为106.5TCID50/0.1 m L。用该种毒攻击PCV2灭活疫苗免疫后的小鼠, 通过病毒分离发现, 当疫苗抗原病毒含量为105.0TCID50/0.1 m L时, 可使小鼠5/10保护, 而当疫苗抗原病毒含量为105.5TCID50/0.1 m L时, 即可使小鼠7/10保护, 达到疫苗质量标准的要求, 说明所制备的疫苗具有较好的免疫效果, 为疫苗生产工艺的改进提供了重要的数据参考。
摘要：本研究首先用猪圆环病毒2型种毒攻击Balb/c小鼠, 通过病毒分离, 找出可使全部小鼠感染的最低病毒含量, 然后用该种毒攻击免疫后的Balb/c小鼠, 评价免疫保护情况。结果显示, 可使小鼠全部感染的种毒最低病毒含量为106.5TCID50/0.1 m L, 当疫苗病毒含量为105.5TCID50/0.1 m L时即可使7/10免疫小鼠得到保护, 达到了疫苗的免疫效果。该研究为现有疫苗的生产工艺改进提供了重要的参考数据。
PCV2感染 第4篇
众所周知, 猪圆环病毒2型 (PCV2) 造成猪只的免疫抑制或免疫低下, 是导致仔猪断奶后多系统衰竭综合征 (PMWS) 的主要病原。猪圆环病毒病是全球公认的危害养猪业的重要疫病, 也是困扰我国养猪业的三大疫病之一。
PCV2在中国感染率和发病率都呈逐年上升趋势, 而在各项防制策略中疫苗是预防PCV2相关疾病的关键。疫苗免疫的作用正是其价值所在:降低发病率和死亡率;减少PCV2的载量;提高猪群整齐度;提高日增重;改善饲料报酬;减少继发感染和混合感染;投资回报显著, 这些都是已经被业界普遍承认的事实。
李博士通过对疫苗类型的讲解与市场分析, 对比国内外的疫苗相关信息和效果, 深入全面的向与会者展示了诸元妥的特点。
诸元妥研发历时7年, 于2013年1月29日获得新兽药注册证书。诸元妥选用国内流行的PCV2b新型优势毒株--ZJ/C株, 此毒株为浙江大学周继勇教授分离自有PMWS症状猪的腹股沟淋巴结, 较目前国内PCV2株有更强的侵染能力和复制能力, 较传统PCV2疫苗株有更好免疫原性。
目前圆环疫苗免疫效果评价指标, 多是免疫后检测抗体, 或攻毒后观察体温变化、临床表现、发病率等。而对于PCV2来讲, 有抗体不见得保护, 带毒不一定发病;还要看有效抗体水平的高低和免疫后攻毒带毒情况。诸元妥是国际上首个仅以防感染为评价标准的疫苗, 其效力检验采用对免疫后21天的仔猪攻毒, 攻毒后14天取肺脏和腹股沟淋巴结分离病毒, 在细胞上盲传3代后进行病毒检测, ≥80%分离不到病毒判定为疫苗合格。
诸元妥的抗原含量是目前所有毒株中标准最高的, 公司内控标准为灭活前每毫升病毒含量≥107.8TCID50。复合抗原 (全病毒+Cap亚单位) 制备技术的应用, 使其抗原谱更广、有效抗原含量更高。
先进的灭活与乳化工艺使它更具安全性和高效性。β-丙内酯低温彻底灭活病毒核酸, 不影响蛋白质成分的结构完整性, 免疫原性佳。且灭活后β-丙内酯在37℃条件下降解, 接种无刺激、无残留。诸元妥使用进口水性佐剂、采用先进的乳化工艺, 保证了其诱发高免疫力, 无副反应。
诸元妥的免疫保护力产生时间最早, 免疫持续期最长。一次免疫, 21天即可产生保护力, 早于同类产品7～14天, 免疫持续期达6个月以上。仔猪仅需1次免疫, 即可保护至出栏。种猪每年接种3次, 可确保其全年的高水平免疫力。
另外, 瑞普生物唯一拥有获得兽药生产批准文号的“猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒” (锐捷) , 可为选购疫苗的用户提供准确的疫苗免疫和抗体监测一体化服务。