表达特性范文

表达特性范文（精选8篇）

表达特性 第1篇

一、河南民间美术的起源与发展

河南民间艺术起源于上古, 早在新石器时代, 中原人民就创造了灿烂的彩陶文化, 陶器、骨器和玉器上的绘画更是体现了中原人民丰富的创造力。据史料记载, 黄体部落曾举行“釜山会盟”, 会盟时的“百兽率舞”就是尊崇不同的图腾。而在进入华夏文明后更是达到了鼎峰。进入商周秦汉时期后, 新材料的涌现、青铜器的普及和画像石、砖的需求促使民间美术更上一层楼, 魏晋的雕刻雕塑, 唐三彩更是古代民间艺术一绝, 韵瓷、汝瓷蜚声国际。而在宋代, 手工业的发展带动了民间艺术的进步, 皮影戏、印花布、剪纸、朱仙镇木版年画等民间艺术形式蓬勃发展。自宋代的靖康之变后, 战乱带来了衰败, 也带来了变化, 中原地区吸收了北方游牧民族的艺术表现特点, 形成了粗狂豪迈的艺术风格。河南民间艺术发展至民情时期, 种类繁多, 手工经济发展成熟, 出现了一大批手工艺术匠人。

但是目前, 传统的民间美术正遭遇着全球化和现代化的强烈冲击, 一大批民间美术因无法进入市场而迅速衰亡, 许多身怀绝技的民间艺人在商品社会无法找到自己的定位, 优秀的民间美术工艺品又遭到社会的拒绝。在这个机遇与挑战并存的时代, 民间美术的当务之急是传承和发展艺术文化遗产, 探索新的发展道路:例如把民间美术引入科研开发领域, 实现艺术文化价值到经济价值的转变;把民间美术资源与本地旅游文化相结合, 体现当地民俗文化的精华;或将民间美术渗透到当地中小学教育中, 使文化得到有效的传承。

二、河南民间美术审美的地域与色彩特征

一方水土养一方人, 中原独特的地域性特征在河南的民间美术得到充分体现。年画是河南民间美术的重要组成部分, 无论是春节还是喜宴, 年画都必不可少, 因此林林总总美不胜收的年画比比皆是, 同时也带动了朱仙镇木板年画的诞生。朱仙镇木板年画又名朱仙镇门神, 其起于唐, 兴于宋, 盛于明, 距今已有800多年的历史, 被誉为中国木板年画的鼻祖。其中文门神有五子、福禄寿等, 武门神则是传说中的绿林好汉、英雄烈士等。年画的画幅较小, 人物造型夸张, 具有喜剧效果, 背景单纯, 色彩常选用大黄, 橙色, 深绿等鲜亮颜色, 以此烘托节日气氛。这些色彩鲜艳的年画能充实劳动人们的生活, 体现了河南人们独特的审美情趣。

皮影戏起源于汉代, 桐柏皮影则是河南境内桐柏县、泌阳县一带出名的艺术形式, 经典的节目有《杨家将》《岳飞传》《水浒传》等等等等。桐柏皮影具有鲜明的艺术特点, 其影人造型大胆夸张, 轮廓简洁但内部雕刻却十分精致, 具有浓郁的乡土气息却不缺艺术审美。

艺术审美是一项体现人的本体性价值的活动, 淮阳泥泥狗是淮阳农民手捏泥玩具的总称, 是淮阳太昊陵“人祖会”中用以出售、交换的玩具, 其题材广泛, 造型古朴稚拙种类繁多, 色彩以红、黄、青、白、黑为主, 其基本花纹都属于神祗崇拜的变异形式, 体现了泥泥狗独特的地域风格。

体现地域性的还有南阳玉雕, 据可靠的史料, 起源于春秋战国, 玉石颜色丰富, 质地细腻, 艺术价值观赏价值极高。还有寓意为吉祥纳福, 造型别致, 刀法简洁的方城小石猴, 和质朴醇厚的内黄农民画。

在色彩方面, 河南民间美术具有装饰性、特征性、单纯性的特点。装饰性体现在河南的民间美术很少受表现对象的局限, 民间艺人更注重色彩的搭配和相互的协调。在色彩的应用方面, 不以理性分析, 而是以“好看”和“难看”进行区分。河南民间美术主要颜色构成补色、色相、明度的对比, 体出一种阳刚之气, 并且利用色彩穿插、套印等手法丰富色彩, 起到装饰的效果。

河南民间美术的配色有一个显著地特点, 就是优先考虑色彩的象征手法, 如红色代表忠义, 因此文官面部常用红色、黑色代表勇敢, 武馆面部常施以黑色、黄色代表暴虐、绿色代表顽强、在设色中, 朱仙镇的木板年画有许多专用口诀, 我们看不到色彩的立体感和空间感, 但色彩带来重象征、重神韵的河南民间美术的广阔空间, 呈现出地域性的色彩特色。

三、河南民间美术的审美表达特征

民间美术是劳动人民年复一年舒缓疲劳而创造出来的, 正是在劳动人民的创造下, 民间美术才得以生生不息。因此民间艺人在手法应用上更注重象征手法而忽略本体形象, 常采用寓意、夸张、变形等艺术语言表达情感格调。相处与相同地域的人们经过长期潜移默化, 演变成一种审美意识, 并且以习俗的形式传承, 这体现了河南民间美术的生命内涵。

河南的民间美术朴素豪放, 在漫长的历史河流中, 彩陶、青铜、石刻等艺术形式仍在河南蓬勃健康的发展着, 河南民间剪纸、皮影戏、刺绣等都大放异彩。民间美术审美可以从造型、色彩和文化传承入手。在造型方面, 河南民间美术有着独有的特点:注重隐喻象征, 随意性和概括性。艺人不仅表现物体的客观形象, 还加入艺人的主观想象, 表达创造者的思想感情。这样的方式可以打破时空的自然规律, 使艺术作品理想化, 达到超脱物体自身形象的束缚, 升华到艺术的境界, 更使作者的意念传达的更加清晰, 又为观者留下足够的想象空间。

色彩是民间美术的重要组成部分, 河南民间美术的材质与工艺技术决定了其单纯、简洁、明快的色彩特点, 和浓厚艳丽, 装饰性强的用色特点, 同时讲究色相和冷暖对比, 这样的特点显现出具有倾向性的审美意味, 取得了卓尔不群的艺术效果。

在传承方面, 民间美术本身就是一种带有原发性的美术形式, 它诞生于生活, 应用于生活, 有着纯真平淡的视觉审美特点, 也反应当地人民的审美选择和当地民间美术所具有的内涵和外延, 体现了河南民间艺术发展的历史脉络和文化精神。

四、结语

河南民间美术的产生和发展离不开劳动人民, 并与劳动人民的生产生活方式密切相关。现今, 民族的就是世界的, 人民对有着独特艺术特征的民间美术的审美也越发关注。河南民间美术以其粗犷豪迈, 刚柔并济, 色彩丰富闻名于世。它是中华民族的文化瑰宝, 也是世界艺术之林的璀璨明星。发扬和传承河南地域民间美术的审美特色, 保持其艺术价值, 不仅对河南民间艺术发展有益, 也是对世界艺术的奉献。

参考文献

[1]史丽.《中国民间美术赏析》[M].东南大学出版社:南京东南大学出版社, 2010.1-208.

[2]靳之林.《中国民间美术》[M].五洲传播出版社:五洲传播, 2010:1-134.

表达特性 第2篇

高磷条件下,MfPAP1主要在叶片中表达;在低磷条件下,MtPAP1在叶片中表达水平较低,在根系中的表达量则较高,超过了其它器官中的表达量.在以植酸盐为唯一磷供源的条件下,与对照相比,超量表达MtPAP1的拟南芥转基因植株中,根系细胞间隙中的酸性磷酸化酶(APase)活性明显提高.HPLC分析表明,液体培养基中的有机态磷可被转基因拟南芥分泌的.APase快速降解.在以植酸盐为唯一磷供源条件下,超量表达MtPAP1的拟南芥转基因植株的生物学产量、植株无机磷含量和全磷含量明显高于野生种.

作 者：肖凯 谷俊涛 Maria Harrison Zeng-Yu Wang XIAO Kai GU Jun-Tao Maria Harrison Zeng-Yu Wang 作者单位：肖凯,XIAO Kai(河北农业大学,农学院,保定,071001)

谷俊涛,GU Jun-Tao(河北农业大学,生命科学学院,保定,071001)

Maria Harrison,Maria Harrison(Boyce Thompson Institutefor Plant Research,Cornell University,NY 14853-1801,USA)

Zeng-Yu Wang,Zeng-Yu Wang(Forage Improvement Division, The Samuel Roberts Noble Foundation, Ardmore, OK 73401, USA)

产品设计中色彩的特性运用表达 第3篇

关键词：产品；设计色彩；特性化色彩；色彩运用

中图分类号：J022 文献标识码：A 文章编号：2095-4115（2013）12-46-2

在现代产品包装设计与产品功能中，色彩都有着举足轻重的地位。产品色彩设计和产品功能体现、造型展示、图案纹样以及材料工艺一样都是产品设计的重要内容之一，同时，产品的色彩设计也是产品设计的语言和手段，能刺激消费者增强购买欲望。因此，探讨产品设计中色彩的特性运用表达具有重要意义。

一、色彩在产品设计中的作用

在产品设计中，任何产品都离不开色彩设计，色彩是产品重要的外部特征，是产品的视觉外衣和皮肤，他决定了消费者是否中意并购买此产品。所以要让产品给消费者留下深刻印象，并且“一见钟情”，需要赋予产品特性化的视觉外衣，让产品“出挑”或与众不同。因此，色彩的特性化设计就显得十分必要了。在这个市场竞争激烈的时代，消费者不仅仅只看重产品的功能和性能，也看重产品的色彩是否能体现产品特性和时尚。产品的色彩设计已开始成为企业和品牌的核心竞争力之一，谁掌握了消费者心理的色彩需求，谁就掌握了市场。

首先，色彩能美化产品，展示产品特性，是产品的标识。产品给消费者留下的最简单、直接的印象往往是色彩，对色彩的兴趣也成为人们运用色彩来美化产品的前提，产品的色彩设计能有效的改善视觉效能，让产品色彩的视觉作用、展现力及心理影响力都充分地发挥出来。

其次，产品的色彩能明晰产品的使用功能。产品的色彩能把产品特征表达得更鲜明和更富有感染力，产品设计时的色彩变化往往会着重在产品的操控区域或功能展示区域，通过色彩搭配来更好地展示其功能和性能，使产品的功能和性能表达更清晰，使用更方便。

二、产品设计色彩运用法则

首先，产品设计色彩要能体现产品特性。色彩基本可以分为两个大类，一是彩色系，二是灰色系（无彩色系）。彩色系包括赤橙黄绿青蓝紫等颜色色素，还有不同纯度和明度的赤橙黄绿青蓝紫色阶；灰色系是指以白色和黑色为基调而调制的明度深浅不同的灰色，这也称为黑白灰色系列。

随着大众审美观的日渐成熟，产品与色彩在大众消费者心中形成了一些习惯性的看法和情感上的联系，这些对色彩习惯性的看法是随着消费者审美经验积累和长此以往约定俗成的观念而形成：比如彩色系代表着活泼、青春和个性；灰色系代表着沉着、冷静和睿智。以灰色系为列，这些色彩更能理性和中性地美化产品外观，在许多电子产品中灰色系是运用较多的。比如苹果公司推出的经典黑、白两色的iphone成为大众喜爱的颜色。空调、洗衣机、冰箱等电器如果采用白色或高明度灰色系颜色则会给人干净整洁、清新自然的感觉，使产品的功能表达与外观色彩表达形成统一，更容易获得消费者认可。

其次，产品色彩设计要体现消费者心理需求。色彩的变化对人们视觉上的冷暖、距离、温度、轻重有着重要的作用。在产品设计中，优秀的产品设计应该明确掌握冷暖色调的用色原则，如要表现干净整洁的家用电器一般选择冷色调，而要表现家的温暖则多使用暖色。比如风扇、冰箱等家电可以采用纯度稍低的冷色色彩，能使人感觉清爽；微波炉上的点缀色彩则不宜采用冷色系，适宜采用暖色来表现其温度感。在激烈的市场竞争中，许多企业为了吸引消费者目光，产品采用大面积高纯度的彩色来提升产品视觉冲击力，但是切忌不能与民风民俗相悖。

最后，产品色彩设计要与产品适应的环境相协调。色彩的设计要在产品、环境和人的整体系统中完成对比的协调性，产品的色彩如果与环景色不协调则会让人产生紧张和疲劳等不舒适感，通常家电产品大都不会运用高纯度的彩色系颜色，主要是由于无色彩的家电显得温馨、和谐，能更好地融入生活环境，不会给人突兀感，易接受的人群更多。当然，色彩的协调不都只是产品适应环境，优秀的设计师们也能把产品变得出色，运用各种彩色搭配来主动灵活地点缀产品、美化环境，使产品在环境中起到画龙点睛的作用。

三、如何让产品的色彩设计适合产品特性

产品既是企业品牌的代表，又是市场的竞争先锋，同时还是消费者生活需求的工具介质。一个优秀的产品色彩设计既要符合企业形象，又要体现其产品的特性，还能符合目标消费者的心里和审美要求。

从企业方面来说，产品是企业的成果，产品的色彩设计应符合企业形象，树立鲜明的企业形象，实行整体经营战略和统一视觉效果，这就需要在设计产品色彩时，整体色调应和企业形象相统一，以避免产品色彩和企业形象相悖而形成视觉上的反差。

从市场竞争来看，产品每年更新，每年都有很多不同品牌的产品涌入市场，在产品色彩方面流行色作为设计实践，在一定程度上能引导消费者的审美倾向。流行色和时尚色被大众接受的可能性高，选择流行色或时尚色适当运用到产品色彩，可以提升产品的市场竞争力。

社会的进步、科技的发展和思想文化的积累给产品的色彩设计提出了更多的可能和更高的要求，消费者会有更多的色彩选择，且产品的色彩设计对人们生活的影响也越来越受到重视，色彩也将扮演产品设计中更为重要的设计角色，影响着人们的生活，并为人类更好的使用。

参考文献：

[1]刘涌涛.色彩与包装设计的探究[J].考试周刊，2011，（06）.

[2]陈茁，胡群.论商品包装设计的色彩应用[J].郑州轻工业学院学报（社会科学版），2006，（06）.

作者简介：

表达特性 第4篇

Ki67基因是近年来国内外研究肿瘤的有关热点基因之一。本文对恶性肿瘤恶性特性和Ki67基因的相互关系研究进展作一综述。

1 Ki67基因及其生物学功能

Ki67蛋白是1983年Gerdes等用霍奇金瘤系L428细胞的粗核成分免疫鼠后首次制备出的一种核抗原,当时实验地点是德国的Kiel城市,所用培养板编号为67,故名Ki67。Ki67基因是一个周期相关基因,也是细胞核增殖相关基因,与细胞增殖成正比。在G1中及晚期出现,在S期及G2期中渐增加,在M期的有丝分裂中达到最大值。有丝分裂后,Ki67蛋白迅速消失。从S期进入G2期,Ki67蛋白与染色质及有丝分裂关系非常密切,可能是具有结合特性的重要结构蛋白,在有丝分裂中起着维持DNA规则结构的重要作用[1]。Ki67蛋白的分子结构为双链,重量分别为345kd和395kd。定位于人染色体上10q25(ter)上,由巨大的mRNA转录、编码。在cDNA中其编码点λgtll由1095bp的有3个重复的高保守区片所组成,每个重复点有多个长约62bp的高保守区及半胱氨酸残基。其3’端是GTP的结合点,5’端至少有2个核靶点和一个巨大的编码50kd甘氨酸的拼接片段。对此重复片段(62bp)的反义磷酸化的逆过程,明显抑制了低聚核甘酸进入细胞发生作用,因此Ki67的表达成为细胞增殖所必须。Ki67蛋白与DNA结合,具有2个核内定位点及8个双向核靶信号。

2 Ki67的基础研究

2.1 Ki67与C-Myc的关系

Sollazz等报道,在Ewing’s肉瘤中,C-Myc与Ki67有关。Sauter认为,Ki67与C-Myc共同促进膀胱癌的发生发展。从各家报道看来,Ki67与C-Myc有很大关系。C-Myc为核癌基因,被认为是一个癌基因,它在静止期不表达,而在有丝分裂原作用后迅速表达,促进细胞的增殖、侵润[2],与肿瘤转移有关。其与ki67紧密相关的原因在分子水平尚需进一步研究。

2.2 Ki67与CD44的关系

Imam等发现胰腺癌中,变异形CD44的表达与Ki67表达正相关(CD44V6、V9分别P<0.001,P<0.01),在浸润、转移中高表达。编码CD44基因位于人类11号染色体短臂上,其蛋白产物主要有标准型(CD44S)和变异型(CD44V)。CD44S主要介导淋巴细胞活化分化回流粘附等。当肿瘤中出现CD44的变异表达后,某种粘附特性的丧失或改变,即可能成为诱发癌细胞脱离原发灶侵润周围的因素CD44参与淋巴细胞的激活和运动,与细胞的迁移运动有关。其变异体(CD44V)主要存在于转移性肿瘤细胞中。CD44表达与肿瘤转移能力有很大的相关性,其表达的增加往往预示着肿瘤侵袭转移能力的增加[3]。Ki67与其正相关,说明Ki67基因亦与侵袭、转移有很大关系,二者在分子水平上是如何相关联的尚未见有明确报道。

2.3 Ki67与P27基因的关系

赵献国等报道,Ki67与P27在星形细胞瘤中的表达负相关,(r=-0.458,p<0.05),可作为判断星形细胞瘤恶性程度和预后的参考指标。P27基因定位于12P13,表达产物为27KD的热稳定蛋白,通过抑制细胞周期素依赖蛋白激酶而抑制细胞周期,从而阻止肿瘤的形成[4]。作为CDK抑制剂家族的一员,P27通过直接与CDK或细胞周期某一CDK复合物结合,抑制它们的酶活性,具有阻止细胞通过G1/S期转换的“关卡”作用,从而抑制细胞的增殖,使细胞有机会修复损伤的DNA或DNA复制中产生的错误,因而P27通常被认为是一种抑癌基因[5],Ki67与其表达负相关,说明Ki67作为一种预后差的因素,促进肿瘤的发生、发展、转移,二者具体的关联机制有待进一步阐明。

2.4 Ki67与细胞周期的关系

JIA-qing Li等在研究大肠癌时发现:Ki67与Cyclin E的表达正相关(r=0.36,P<0.0001),与CDK2表达正相关(r=0.177,P=0.012)[6]。Aatomaa也认为Ki67抗原在前列腺癌中的高表达与Cyclin A和Cyclin D的表达有关(P<0.005,P<0.01)。CyclinA、CyclinD为肿瘤恶性因素[7],Cylin D是细胞周期素蛋白,Cycline D1是G1期的控制点。在正常细胞中,从G0-G1期,Cychie D1表达增加;在G1至S期,Cycline D、E降解。CychinD是G1期细胞增殖的关键信号蛋白。在癌变细胞中,CyclingD、E降解减少或不降解,其异常增多使细胞增殖失控,形成肿瘤细胞或使癌侵润增加。Ki67与这些调控因子有关说明它的高表达是恶性度的一个标志,而其本身亦为周期调控基因。其内在关系需进一步究。

2.5 Ki67与EGFR的关系

国内外有报道,EGFR与Ki67在胃癌、胸腺瘤中的表达随病变程度的增加呈正相关,在恶性度高的病例中呈高表达[8]。EGFR是原癌基因C-CrbB-1的表达产物,具有酪氨酸激酶活性,当其配体EGF、TCF-α等与EGFR结合后,激活该受体的酪氨酸激酶,导致受体本身及细胞内酪氨酸残基的磷酸化,后者给细胞提供一个进行细胞分裂的信号,从而引起细胞分裂增殖,与很多肿瘤的分化程度、侵润、淋巴结转移及组织学类型密切相关[8]。Ki67与EGFR相关联可能是EGFR作用于Ki67的某些单位,激活细胞的增殖活性。确切的机制有待学者们研究。

3 Ki67的临床研究

3.1 Ki67与原发灶大小的关系

Moretti等发现在黑色素瘤中,肿物直径为(0.75～1.49)cm、(1.5～2.9)cm、2.9cm以上时,Ki67的表达分别为12%、28%、50%、70%,即肿物大小与Ki67的表达正相关(P<0.01)。Ki67的表达与肿瘤大小的相关性已被许多学者研究证实。Charpin C D指出,Ki67的表达与乳癌原发灶的大小有关(P<0.05),Ki67的表达在胸腺瘤中与肿瘤大小关系密切。故大多数学者认为,Ki67的高表达是肿瘤预后差的关键因素之一。

3.2Ki67与肿瘤侵润的关系

有许多研究表明,Ki67的表达与肿瘤侵润关系密切。有报道Ki67的表达在膀胱癌中与肌肉侵润深度有关(P=0.026),侵犯越深者其表达率越高[9];Morrettis报道Ki67的表达与乳癌血管侵犯有关(P<0.01),有侵润者其表达高。肿瘤侵润是肿瘤转移的第一步,有侵润者其转移的发生率高,预后相对差。Ki67的表达与侵润有关,其高表达者侵润发生的可能性大,预后亦差。

3.3 Ki67与肿瘤转移的关系

Ki67与肿瘤转移的关系已引起学者广泛的注意。在肝胆管癌中Ki67的表达与淋巴结转移密切相关(P<0.001)[10];Osman在研究膀胱癌时发现Ki67的表达中在淋巴结转移组与非淋巴结转移组有明显差别(P=0.039<0.05)。除淋巴结转移外,学者们还注意到Ki67的表达与远处转移的关系。有学者发现Ki67的高表达与前列腺癌骨转移有关(P<0.05);我们在研究鼻咽癌时亦发现,有远处转移组与无远处转移组ki67的表达有显著差别且随着鼻咽N分期的增高ki67的表达有增高的趋势[11]。Ki67提供肿瘤淋巴结及远处转移的信息,说明它是一个很好的反映肿瘤恶性度和预后的指标,给临床治疗提供重要的思索。

3.4Ki67与临床分期的关系

Ki67与临床分期关系密切。刘淑培报道Ki67的表达随临床分期的增高而增高(P<0.05)。国外ZhengX等报道,在鼻咽癌中Ki67的表达在Ⅲ、Ⅳ期中明显高于Ⅰ、Ⅱ期。我们对鼻咽癌的研究亦表明Ki67的表达随临床分期的增高而增高。Ki67的表达随临床分期的增高而增高,对预测肿瘤预后有重要意义。

3.5 Ki67与肿瘤患者生存的关系

国内外都有学者报告Ki67的表达与患者的生存年限有关,生存时间越短,Ki67表达越高,反之亦然[12],Ki67与生存时间成反比,说明Ki67能很好地反映肿瘤恶性度,给医者及患者提供更多的信息以利肿瘤治疗。

3.6与肿瘤复发的关系

肿瘤复发是治疗失败的主要原因之一,其原因单用原发部位手术切除或放、化疗后有微残留难以完全解决Ki67基因过表达可能是肿瘤复发的重要原因之一。这给我们的基因靶点治疗研究提供了临床依据。

3.7 Ki67与肿瘤临床治疗的关系

放、化疗作为肿瘤内科的主要治疗手段,其敏感与否与预后关系密切。Sheridan报道,在头颈肿瘤中Ki67高表达者放射抗拒;Goff观察卵巢癌的治疗发现,化疗敏感者Ki67指数显著下降(P=0.002)。这提示:高表达Ki67的患者对放、化疗不利,这可能是Ki67高表达者预后不利的因素之一。Ki67与临床治疗的关系是所有其研究的目的所在。关于这方面文献国内文献近年来亦有报道。石左萍等[13]的研究表明顺铂可使体外宫颈癌Hela细胞Ki67的表达下调(P<0.05),抑制细胞的生长并呈实效和量效关系。杨秀静等[14]在研究前列腺癌时发现Ki67反义寡核苷酸可以通过抑制增殖蛋白Ki67的表达进而抑制PC-3细胞的增殖,且与紫杉醇连用有协同作用。

4 展望

表达特性 第5篇

1 材料与方法

1.1 实验标本及试剂

1.1.1 实验标本卵巢上皮癌细胞HO9801、大肠埃希菌DH-5α、质粒pc DNA3.1/myc-his(-)C。

1.1.2 实验试剂

TRIzol、碘化丙啶、RPMI 1640培养液、脂质体Lipofect AMINETM2000、2×Long Taq PCR Master Mix、限制性内切酶Bam HⅠ、T4 DNA连接酶、DNA片段快速纯化回收试剂盒、纤连蛋白等。

1.2 方法

1.2.1 TIZ基因全长扩增

将卵巢癌组织总核糖核酸(RNA)利用TRIzol实际一步法提取出来。严格按照操作说明反转录卵巢癌组织总RNA,反转录后,变为c DNA,之后,利用PCR法扩增获得TIZ基因的全长序列。

1.2.2 测定转染后重组质粒DNA细胞中的TIZ mRNA表达

卵巢上皮癌细胞HO9801的TIZ mRNA表达为阴性,对其进行分组,第一组为转染组,细胞为pc DNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)-HO9801,简称pc DNA3.1/TIZ-HO9801;第二组为阴性对照组,细胞为pc DNA3.1/myc-his(-)C-HO9801,简称为pc DNA3.1/HO9801;第三组为空白对照组,采用的细胞为HO9801。

1.2.3 集落形成实验

细胞转染稳定后,对其进行消化,采用0.25%胰酶,完成后,制成单细胞悬液,在24孔板中接种细胞,每个孔中接种的密度为100个,每组设置3个复孔。24孔板按照十字方向进行晃动,晃动时动作要轻,细胞均匀的分布之后,在37℃、5%二氧化碳体积分数条件下放置细胞5~7d,进行细菌培养,培养完成后,利用PBS洗涤,随后固定,利用甲醇溶液进行Giemsa染色,采用光学显微镜观察集落情况,并计数。

1.2.4 细胞体外侵袭、转移能力测定

在Transwell小室中开展细胞体外侵袭重建基膜实验。小室中的聚碳酸滤膜利用PBS(内含5μg FN)处理,随后,利用预冷RPMI培养液(不含血清)对Matrigel胶进行稀释,稀释为1.25mg/ml,在滤膜表面中加入50μl,置入37℃条件下进行孵育,时间为4~5h,变成胶状后孵育停止。随后,在上室中加入细胞悬液,37℃、5%二氧化碳体积分数条件下将其放置在培养箱中,20~24h后培养停止。当波长为450nm时,将下室与上室的细胞D值检测出来,计算细胞侵袭率,将细胞体外侵袭能力表示出来。

测定细胞体外转移能力时,Matrigel胶并不需要加入到穿模上室中,剩余其他实验方法与体外侵袭实验方法相同,细胞的侵袭能力利用细胞迁移率来表示。

1.2.5 细胞体外黏附能力测定

培养板选择为96孔,将20mg/L FN 50μl加入到每个孔中,放置在超净工作台上,过夜,待风干之后,在4℃环境中保存备用。使用前用PBS冲洗2次,且重新进行水化。结合位点利用1%牛血清蛋白封闭,细胞悬液加入其中,37℃、5%二氧化碳体积分数条件下放置在培养箱中培养,时间为60min,之后再利用PBS冲洗2次,将未黏附的细胞充分洗掉。当波长为450nm时,将上室与下室的细胞黏附能力计算出来。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计学分析,计量资料以±s表示,采用方差分析;计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HO9801细胞转然后TIZ基因过表达

经反转录-PCR检测可知,HO9801细胞经pc DNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)转后存在TIZ mRNA表达,对照组细胞中并不存在TIZ mRNA表达。

2.2 细胞集落形成能力

集落形成实验结果显示,pc D-NA3.1/TIZ-HO9801细胞集落形成率为(55.8±4.6)%,阴性对照组细胞集落形成率为(86.9±2.5)%,空白对照组细胞集落形成率为(84.6±3.2)%。pc DNA3.1/TIZ-HO9801细胞集落形成率低于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 细胞体外迁移、侵袭和黏附能力

pc DNA3.1/TIZ-HO9801细胞的体外侵袭能力为(43.9±1.8)%、体外迁移能力为(50.9±4.7)%、体外黏附能力为(66.8±6.2)%;阴性对照组细胞的体外侵袭能力为(44.8±3.1)%、体外迁移能力为(54.2±3.3)%、体外黏附能力为(69.2±4.4)%;空白对照组细胞的体外侵袭能力为(43.3±1.5)%、体外迁移能力为(49.1±4.6)%、体外黏附能力为(64.2±2.9)%。3组细胞体外迁移、侵袭和黏附能力比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

在肿瘤生长增殖信号转导通路中,TRAF-6是一个关键性的调节点,而在TRAF-6调节基因中包含TIZ基因,因此,肿瘤生物学,尤其是恶性肿瘤组织中,TIZ基本的表达处于非常高的态势[1]。通过检测卵巢癌患者与卵巢正常女性血清中TIZ抗原阳性反应情况可知,与卵巢正常女性血清中的TIZ抗原阳性率相比,卵巢癌患者血清中TIZ抗原的阳性率升高,二者阳性率之间差异显著,这说明在卵巢上皮癌发生、病情进展过程中,TIZ基因所具备的生物学作用是非常重要的[2]。本研究中选择的卵巢上皮癌细胞TIZ基因为阴性,经过TIZ基因过表达实验,对其生物学特征变化进行仔细观察可知,TIZ基因过表达后,会明显抑制细胞的集落形成能力。TRAF-6基因与TIZ基因之间实现结合,由此出现抑制TRAF-6作用,实现抑制的方式如下,TRAF-6氨基端的RING结构与TIZ蛋白中的锌指结构结合之后,改变了TRAF-6的构型,而DNA与蛋白质之间的相互作用、蛋白质与蛋白质之间的相互作用可以受到RING的介导作用,从而将信号传递到下游,但TRAF-6构型发生变化之后,下游信号转导中TRAF-6无法再参与其中实现抑制[3,4]。

此外,本研究还发现,卵巢癌细胞的侵袭、迁移以及黏附能力并不会受到TIZ基因过表达的影响。对于细胞的侵袭、迁移以及黏附过程来说,具备的复杂性比较高,而且过程参与因素比较多,在多种因素及因子的作用下,细胞黏附在基质上[5]。卵巢癌细胞浸润、转移因子会受到TIZ下游多种信号分子的激活作用,在TIZ表达中,可拮抗其表达的TIZ下游信号分子数量比较多,在拮抗作用下,降低TIZ表达水平,但卵巢癌细胞的浸润、转移能力并不会受此影响,同时,下游信号分子会受到TIZ基因的抑制,进而无法激活卵巢癌浸润、转移分子,无法增强细胞的浸润和转移能力[6]。

卵巢癌对患者的身体健康及生活质量都有着严重影响,临床治疗卵巢癌患者时,早期诊断及治疗意义重大,可有效改善患者预后,提高患者的远期生存率[7]。但临床中发现卵巢癌时,病情多已经进展至晚期,不利于患者治疗,因而提高了病死率[8,9]。经过本研究可知,在卵巢癌的早期诊断中,可将TIZ基因表达作为诊断标志物,通过检测TIZ基因的表达水平,判断患者是否患有卵巢癌,从而依据诊断结果,尽早给予患者相应的治疗,同时,通过TIZ基因过表达,可抑制癌症细胞的生长,提高治疗效果,降低病死率,改善患者预后。除了卵巢癌患者的TIZ基因表达水平会显著升高之外,乳腺癌、宫颈癌、肺癌等癌症细胞中的TIZ基本表达水平也会有所提升,临床诊断中,通过诊断TIZ表达水平,可提升诊断准确率。

综上所述,在卵巢上皮癌细胞生物学特性中,TIZ基本过表达会在一定程度上抑制癌症细胞的生长与增殖,具有非常重要的生物学作用。临床诊断和治疗卵巢上皮癌患者时,可充分发挥TIZ基本表达的作用,实现早期诊断、早期治疗,提高治疗效果,改善患者预后,提高患者的生活质量。

摘要：目的 分析卵巢上皮癌细胞生物学特性受TIZ基因过表达的影响。方法 利用脂质体砖染法测定TIZ mRNA表达,采用集落形成实验、细胞体外侵袭重建基膜实验、Transwell小室实验、体外黏附实验检测细胞的各种能力。结果 pc DNA3.1/TIZ-HO9801细胞集落形成率低于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组细胞体外迁移、侵袭和黏附能力比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TIZ基因过表达会抑制卵巢上皮癌细胞的增殖能力。

关键词：基因,TIZ基因,细胞系,肿瘤,上皮细胞

参考文献

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表达特性 第6篇

1历史积淀与时尚风格的双重表达

西安, 举世闻名的世界四大文明古都之一, 居中国古都之首, 是中国历史上建都时间最长、建都朝代最多、影响力最大的都城, 是中华民族的摇篮、中华文明的发祥地、中华文化的代表。十三朝的辉煌历史给予这座城市太多的印记, 太多的念想。然而, 如今的她又是一座充满神奇与活力的地方:既具有厚重的历史宁静之感, 又散发着动人的时尚特质。如何恰如其分地运用地图语义学将城市地标建筑、道路不失精准和严谨, 又传神、形象、富有独特性地予以再现, 是这两幅手绘工艺地图创造性的突破之所在。

传统常规地图是基于地理坐标系, 按照一定数学法则, 运用符号系统、以图形或数字的形式表示具有空间分布特性的自然与社会现象的载体, 具有精准性和严谨性。而手绘地图《走!游西安》、《走!游世园》则更多地融入了年轻编绘者们对家乡的热爱和创作的激情, 更多地将绘画的恣意与地图的精准进行了恰如其分的结合, 使得地图在精准表现地理要素的基础上又融合进了独特的艺术美感和表现张力, 在保留地图使用价值的基础上又增加了地图的收藏和文化价值。泛黄的牛皮纸, 清秀的工笔画, 写意的景致风光, 粗犷的地域文化, 如浅吟低唱般地诉说着西安历史的积聚和现代的勃发, 怀旧中透着亲切。“畅游西安经典之行”“西安美食地图”“西安周边山水”“西安寺庙道观”“陕西皇陵·遗址”“西安疯狂扫街”“陕西八大怪”等栏目配以简洁明快又不失风趣幽默的文字诠释和简笔勾勒插图形象而生动地将西安进行了全景式立体扫描, 鲜活地展现了西安独具魅力的古城韵味, 给人以无限的遐思和耳目一新的时尚感。

2科技精准与人性写意的双重表达

数字化技术的新成果为以准确为生命的地理制图业带来了新的跃进;同时, 地图日益走进了手机、电脑, 走进了私家车的GPS, 地图的数据输入、地图设计、地图编辑、版画设计、组版、胶片分色加网输出或直接制版、数字印刷的各工艺过程均可以与数据通信网络连在一起, 地图数字出版技术成为了地图行业出版工艺的主流, 于是飞入寻常百姓家的地图不再那么艰涩、生硬, 它也期待与人共舞, 期待着被制图者用新思维、新创意和新手段提供更多辅助阅读的附加值, 而非简单的“数字平移”。在地图客观性的另一面, 人们的回忆、寻觅和追求, 人们的喜怒哀乐——人的感情, 丝丝入扣地融入于地图的线条、色彩、文字、数字及符号中。地图由此焕发出新的蓬勃的生命力导引着人们的方向和情绪, 科学技术的进步为以人为本地开掘地图提供了更大的可能性。

《走!游世园》手绘地图在航拍世园的地理数据基础上, 通过大胆创新和形象思维, 充分撷取园区最具特色的景观、道路、展园进行艺术夸张加工, 信笔拈来的写意, 虚实相间地幻化着世园会柔美而娇艳的魅力, 化去刚性、生硬的线条, 取其圆润、通畅之韵律, 并藉着绢绸的轻柔和飘逸, 将繁花似锦、五彩缤纷的世园会以其活泼、俏皮、灵秀、生动的手绘形式展现给世人, 完美地切合了西安世园会特有的崇尚自然、和谐共生的园艺风格。这别样的手绘地图不仅忠实地聚焦了西安历史上辉煌的一刻, 而且透过艺术的再现将世人的印记牢牢地珍藏起来。

3实用与创意的双重表达

创造往往来自于传统的积累, 最美的创意之花只能在坚实基础上绽放。游走于城市大街小巷、穿行于世园角角落落, 一点一滴获取第一手基础资料, 呵护值得挖掘的细节, 才能一笔一划地描绘着心中的城市、心中的田园。要寻找工艺地图与常规地图表现的最佳结合点, 以此为支撑, 多维度地展开, 特别是要满足作为差异化精神体验的市场需求, 凸显艺术性与实用性、规范性的完美结合。在满足地图这一客体基本需求的同时, 充分调动和发挥编绘者的主观能动性、灵秀的创造力、天马行空的想象力, 将计算机生涩、硬直的刚性需求与艺术表现夸张、柔美、抽象再现完美地结合在一起, 也只有这样设计才能给读者视觉上的感动和精神上的震撼、享受。

另辟蹊径绘古城, 巧手着色添神韵。走!游西安;走!游世园。这两声陕西腔地道的吆喝, 将陕西人特有的热情好客、侠骨柔情传播远方;这两张手绘地图为古城西安增添了异彩, 带给游历者和读者别样的感悟;也为地图工作者们更好地开发利用测绘地理信息数据, 服务社会、服务民生给予了突破思维定势的启迪;为地图表现手法、形式、内容、技术能力的提升进行了有益的探索。

参考文献

表达特性 第7篇

关键词：家禽H7N9,人感染H7N9,血凝素,氨基酸变化,病毒分化,地域特征

2013年3月份,我国上海、安徽等地陆续出现人感染H7N9禽流感病例,这是全球首次出现的一种基因重配H7N9新亚型禽流感病毒[1],此后人感染H7N9病毒在全国多个省市发生。截止到2015年3月21日,全国已发生646例人感染H7N9流感病毒,死亡248人。研究发现,此次人感染H7N9新亚型重配病毒的8个基因片段中血凝素(hemagglutinin,HA)基因可能来自感染鸭的H7N3禽流感病毒,神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因可能来自感染野鸟的H7N9禽流感病毒,而其余6个内部基因可能来源于感染鸡的H9N2禽流感病毒[2]。HA基因编码的血凝素蛋白是禽流感病毒重要的表面抗原性蛋白,在病毒感染宿主、穿膜及决定病毒致病力等方面起着重要作用[3]。HA基因变异频繁,其某些变异和表达的相关性状能使禽流感病毒具有高致病性和对人类产生感染性,对公共卫生安全造成严重威胁。本研究以家禽分离H7N9毒株作为参照,对人感染H7N9禽流感病毒HA基因及其表达相关特性的渐进演化进行分析,为我国防控禽流感疫情提供依据。

1 材料与方法

1.1 数据来源

本研究所用序列数据来自于全球禽流感基因共享数据库(GISAID)和美国国家生物技术信息中心(Gen Bank)。为比较家禽和人感染H7N9病毒的演化趋势,经BLAST在线比较,选取各年份不同地区人感染H7N9病毒HA基因样本,以及2013年、2014年禽感染H7N9病毒HA基因样本。以上各毒株HA基因序列登录号如下:EPI447599、EPI447617、EPI447620、EPI447618、EPI447622、EPI460535、EPI476480、EPI531769、EPI439507、KC994453、EPI509669、EPI528298、EPI566068、EPI566116、EPI566076、EPI566084、EPI566131、EPI531468、EPI578158、EPI577994、EPI476697、EPI503499、EPI510157、EPI566036、EPI566044、EPI566672、KF542876、EPI447600、EPI499887、KP417521、EPI580275、EPI528338、KP417446、KP414835、EPI515788、KM374042。

1.2 序列比对与进化树构建

利用生物信息学软件Clustalx 2.0对所选样本HA核酸序列进行排列并转换成FASTA格式;用Mega 6.0软件对所选样本HA核酸和氨基酸进行比对、分析,选用Neighbor-Joining建树法构建系统进化树,Bootstrap test验证系统进化树是否可靠,重复次数为1 000次,同时经BLAST在线比对,分析家禽毒株和人毒株的关系,以及人感染H7N9毒株HA基因和其表达相关特性的渐进演化。

2 结果与分析

2.1 特征位点氨基酸的变化

禽流感病毒HA蛋白裂解为HA1和HA2后才具有感染宿主的能力,HA蛋白裂解位点氨基酸性质和序列是影响病毒致病力的关键,本研究家禽和人样本的裂解位点均存在2个碱性氨基酸,氨基酸序列为IPKGR↓GLF或者IPRGR↓GLF。HA蛋白糖基化位点丢失能提高HA对蛋白酶的敏感性,H7N9流感病毒糖基化位点分布在HA蛋白30位(NGT)、46位(NAT)、249位(NDT)、421位(NWT)和493位(NNT),家禽和人感染样本的糖基化位点均未发生糖基化位点缺失。各年家禽和人感染病毒样本在HA蛋白受体结合位点上均发生Q226L替换。

2.2 其他位点氨基酸的变化

以A/Chicken/Nanjing/761/2013(H7N9)毒株HA蛋白作为参照,除上述特征位点外,在2014年样本中,A/Shantou/1001/2014发生I50X,A/xinjiang/98692/2014有S143P、E279、E387A,A/Jiangsu/06306/2014有E387A,Shenzhen/sp58/2014和Shenzhen/sp60/2014有T131A,其余2014年人样本均无氨基酸替换;2015年人样本则发生了较多位点的氨基酸替换,见表1。

注:-表示2015年样本的该位点氨基酸与A/Ck/Nanjing/761/2013的相同;字母表示各位点上对应的氨基酸。

2.3 H7N9新亚型禽流感病毒的渐进演化

对选取的家禽和人感染H7N9流感病毒HA样本构建系统进化树,图1中HK代表中国香港。构建的系统进化树见图1。

3 讨论

高致病性禽流感病毒在HA蛋白裂解位点有4个或4个以上连续的碱性氨基酸[4,5],家禽和人样本裂解位点均存在2个碱性氨基酸,为低致病性;HA蛋白糖基化位点缺失或除去覆盖糖链后,可提高HA对蛋白酶的敏感性[6],本研究样本糖基化位点未发生丢失,上述两个特征性位点在病毒对人致病力上未发挥作用。HA蛋白的其他位点氨基酸替换:2015年人样本发生替换数目多于2014年,替换位点也多于2014年人样本,结合2015年人感染H7N9病例高于2014年同期发生量,病毒均为高致病性,提示HA蛋白的其他位点氨基酸替换增强了病毒对人的致病力。

禽流感病毒HA蛋白受体结合位点226位(H3编号)是谷氨酰胺(Gln)时,病毒识别禽宿主细胞受体唾液酸α-2,3半乳糖;226位是亮氨酸(Leu)时,病毒识别人宿主细胞受体唾液酸α-2,6半乳糖[7]。受体结合位点Q226L的变异首次在重组H7N9新亚型流感病毒中发现,这使得H7N9病毒更容易与人α-2,6唾液酸受体结合,导致人感染概率大大增加[1,8]。2013年至今的人样本HA蛋白受体结合区均为Q226L,说明重配H7N9病毒仍保持直接感染人的能力。如果某些突变病毒位点变异丧失强结合禽源受体能力,而继续保留人源受体结合能力,有可能引发流感大流行[9]。

系统进化树结果显示,大部分2013年样本聚在一个分支上,BLAST对比显示样本间高度相似,说明2013年样本HA基因未发生多位点变异。2014年的样本有的分布在2013年分支上,有的与相同或相近地域同年样本在同一分支上,有的处于2015年样本中,如A/Jiangsu/06306/2014和A/Chicken/Jiangxi/13538/2014在2015年新疆、福建、贵州样本分支上。2014年各毒株与所处分支内其他样本高度相似,说明2014年毒株基因具有多层次遗传进化趋势,病毒逐渐开始地域分化,2015年样本组成的两个分支具有更明显的地域性。提示研发疫苗需注意病毒地域演化特点。

A/silkie chicken/Jiangxi/9469/2014和2014年浙江、吉林、杭州等人样本同处在一个分支上,A/chicken/Jiangxi/13538/2014与2015年贵州、福建、新疆等人样本同处在一个分支上,两个分支内样本间的相似性均为99%,提示2014年江西家禽毒株可能存在更有利于病毒感染人的基因变异,并通过家禽交易、野鸟过往等将病毒带到多个地区,江西家禽中病毒演化应引起足够重视。

参考文献

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表达特性 第8篇

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

PT、SLA、AD处理的钛片(TA2级商业圆形纯钛片),直径14.75 mm、厚1 mm,表面粗糙度分别为(0.18±0.01)、(2.04±0.06)、(0.18±0.02)μm(成都海利华生物科技有限公司);MC3T3(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库);胎牛血清、α-MEM培养基(美国Hyclone);MTT(美国Sigma);RNAiso Plus、Prime ScriptTMRT reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqTM(日本Takara);SEM(EVO LS15,德国Zeiss);接触角测量仪(SL600,上海梭伦);酶标仪(Spectra Max M2,美国Molecular Devices);荧光实时定量PCR仪(Rotor-Gene 3000,澳大利亚Corbett)。

1.2 钛片存储与灭菌

钛片制备完成后存储于无水乙醇中,紫外线照射12 h灭菌,用前取出自然风干,所用容器已预先分别于丙酮、无水乙醇、超纯水中超声清洗并高压湿热灭菌。

1.3 表面微观形貌观察及表面元素分析

采用SEM在20 k V、放大3 000倍条件下观察各组钛片表面微观形貌,并用EDS分析各组钛片表面主要元素构成。

1.4 静态水接触角测试

在室温、常压下,用悬滴法将去离子水6μl随机滴在各组钛片上5个位置进行测试,取其平均值作为该样品的静态水接触角。

1.5 MTT法检测成骨细胞在不同钛片表面的增殖

将3组钛片置于24孔细胞培养板孔内,无钛片放置的孔为对照组,每组设3个复孔。取对数生长期的MC3T3细胞悬液以5×104个/ml的密度接种于各组孔内(每孔1 ml),在37℃、50 ml/L CO2培养箱中培养1、3、5、7 d后,每孔加入5 mg/ml的MTT 100μl,培养4 h后弃上清液,加入DMSO 750μl,室温避光低速摇床震荡10 min,从每孔中分别吸取200μl溶液3份转移至96孔板,酶标仪测定490 nm处的吸光度值(A值)。

1.6 荧光实时定量PCR(RT-q PCR)检测IL-6、Cbfα1mRNA的表达

分组及细胞接种同1.5,在37℃、50 ml/L CO2培养箱中培养6、12、24 h后,RNAiso Plus提取总RNA,合成c DNA。内参引物GAPDH与目的引物IL-6、Cbfα1由大连Takara公司合成:GAPDH上游:5'-GGT-GAAGGTCGGTGTGAACG-3',下游:5'-CTCGCTCCTG-GA-AGATGGTG-3';IL-6上游:5'-TCTTCTGGAGTAC-CATAGCTACCTG-3',下游:5'-CTGAAGGACTCTGGCT TTGTCT-3';Cbfα1上游:5'-AACTTCCTGTGCTCCGT-GCTG-3';下游:5'-TCGTTGAACCTGGCTACTTGG-3'。反应程序为95℃预变性10 s,1次循环;PCR扩增:95℃5 s,60℃20 s,45次循环。将对照组基因表达量定义为1,计算每组的相对表达量。

1.7 统计学分析

实验数据均以±s表示,采用SPSS 17.0对各组数据行单因素方差分析,组内两两比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 表面微观形貌观察及表面元素分析

PT组表面相对光滑,可见较一致的砂纸打磨划痕,偶见点状凹陷;SLA组表面可见大小结合的排列、深浅不一致的窝洞、凹陷、沟嵴,各窝洞凹陷直径约为1~8μm,边缘较锐利;AD组表面可见较均匀分布的大小不一的圆孔状结构,孔径约为100~500 nm,孔径较大者突出于表面。EDS分析得PT组、SLA组、AD组表面主要元素主要分别为Ti;Ti、Al;Ti、O(图1)。

2.2 静态水接触角

测得3组钛片表面静态水接触角分别为PT:54.47°±3.33°,SLA:75.42°±8.32°,AD:38.91°±4.00°,两两比较差异有统计学意义。

2.3 成骨细胞在不同钛片表面增殖情况

见图2。

2.4 不同钛片表面对成骨细胞IL-6、Cbfα1 mRNA表达的影响

见图3。

3 讨论

种植体表面特性是影响口腔种植修复成功率的关键因素之一[6],SLA组表面的微米级凹陷结构可提供更多的细胞黏附面积,沟嵴可为成骨细胞提供更多的黏附点以利于早期黏附及增殖、分化,而MTT结果显示MC3T3在SLA组增殖率低于PT、AD两组,与Wall等[7]比较骨髓基质干细胞在SLA与PT处理的钛表面的增殖率实验结果一致,Wall等认为SLA表面可促进细胞早期分化,而已向成骨细胞分化的细胞与未分化细胞在有限的空间内相竞争使得一部分细胞凋亡所致,MC3T3为前成骨细胞,出现本结果的原因可能与之类似。研究表明AD处理较PT处理的钛合金表面提高了表面能,利于成骨细胞早期附着[8];MTT结果显示MC3T3增殖率在AD组优于PT组,可能是AD组表面具有更好的润湿性及微孔结构利于细胞早期黏附生长。

A、D:PT组;B、E:SLA组;C、F:AD组A,D:PT group;B,E:SLA group;C,F:AD group

图1 各组钛片表面微形貌(SEM)及表面元素组成分析(EDS)(A~C:SEM,×3 000)Fig 1 Surface topography(SEM)and elemental composition analysis(EDS)of the samples of the 3 groups(A-C:SEM,×3 000)

(1):与同时间点对照组相比,P<0.05;(2):与同时间点PT组相比,P<0.05;(3):与同时间点SLA相比,P<0.05(1):vs control group at the same time point,P<0.05;(2):vs PTgroup at the same time point,P<0.05;(3):vs SLA group at the same time point,P<0.05

图2 不同表面钛片对成骨细胞增殖的影响Fig 2 Cell proliferation on the titanium surface in the 4 groups

IL-6等炎性因子在骨组织改建中起重要作用[3],IL-6可促进炎症发生并协同IL-Iβ和TNF-α刺激破骨细胞分化、促进破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化,在适宜的浓度下可打破骨形成与骨吸收的平衡从而促进骨吸收[9]。Cbfα1高表达于成骨细胞系,可在上游调控骨钙素、骨形成蛋白等成骨特异性基因表达水平,同时某些炎性因子如肿瘤坏死因子可能降低Cbfα1在成骨细胞的表达[5],亦有研究表明IL-6可间接降低Cbfα1 mRNA在MC3T3的表达[10]。Hyzy等[4]通过比较TCPS及PT、SLA钛片表面对接种4 d后的人成骨肉瘤样细胞(MG63)IL-6等一系列炎性因子的mRNA表达的影响,得出SLA表面相对TCPS可显著下调IL-6等炎性因子mRNA的表达,上调Cbfα1 mRNA的表达,并认为与钛表面粗糙度与润湿性的改变有关。本实验结果与之较一致,但本实验中PT组相对于TCPS组亦显示可下调IL-6 mRNA的表达并上调Cbfα1 mR-NA的表达,由于骨结合早期的急性炎症阶段发生于种植体植入后的数分钟至开始几天内[3],4 d后该趋势可能已不显著。SLA与AD组尤其是AD组相对于PT组表面对于调控此二基因的作用更加显著,AD处理使钛表面获得了更好的润湿性,同时其表面纳米级结构相对于SLA处理得到的微米级表面结构,因其更接近于天然骨组织形貌及化学特性,可能为促进成骨细胞生物学功能和骨组织再生提供更好的仿生环境[11,12]。

(1):与同时间点对照组相比,P<0.05;(2):与同时间点PT组相比,P<0.05;(3):与同时间点SLA相比,P<0.05(1):vs control group at the same time point,P<0.05;(2):vs PTgroup at the same time point,P<0.05;(3):vs SLA group at the same time point,P<0.05

图3 各组MC3T3细胞IL-6(A)和Cbfα1 mRNA(B)的表达Fig 3 The mRNA expression of IL-6(part A)and Cbfα1(part B)in MC3T3 cells in the 4 groups

本研究结果提示采用AD表面处理的种植体在种植早期可获得更好更快的骨结合。这些差异可能由于材料表面的润湿差异、表面微观结构的差异对成骨细胞生物适合性不同所致。但此几种表面处理方法对成骨细胞其他炎性因子、成骨特异性因子表达的影响趋势是否一致在本实验中未予证实,其中涉及到的相应分子信号通路亦仍需进一步研究。

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