论文题目：云南家鼠鼠疫疫源地边境地区小型兽类及其土拉菌感染状况初步调查
摘要：目的:本研究旨在调查研究云南家鼠鼠疫自然疫源地边境地区小型兽类在室内外、不同纬度、不同海拔梯度以及境内外的种类分布、优势及常见种类、多样性格局;并且通过分子流行病学检验检测方法,调查其土拉弗朗西斯菌感染状况,以寻找该菌在云南的存在和分布状况。方法:在云南省家鼠鼠疫自然疫源地边境地区以及缅甸联邦共和国克钦邦八莫市的莫西镇,共选取了9个样区的36个采样点,开展小型兽类采样调查。根据纬度、地形、海拔等环境条件,划分为高低纬度地区,室内外地区,境内外地区以及4个海拔带,运用群落生态学指标,对其群落结构、多样性等指标进行分析。对采集到的小型兽类脏器标本在P2+生物安全实验室内,严格无菌的实验条件下,进行DNA提取,先运用巢式PCR技术,对土拉弗朗西斯菌Fop A基因进行扩增,阳性材料对Tul-4基因及16S r RNA基因进行再次验证,阳性材料送公司测序,并对测序结果建树分析。结果:1.在云南省家鼠鼠疫自然疫源地的5个州（市）、8个县（市）、16个乡（镇）的37个境内采样点和缅甸联邦共和国克钦邦八莫市曼西镇的9个境外采样点,共计布放工具16753个次,捕获小型兽类标本1139只,隶属于3目4科11属20种（亚种）,笼夹综合总捕获率达到5.99%。黄胸鼠是该块地区的优势鼠种,构成占比高达77.44%,处于绝对优势地位。2.室内共计布放鼠笼9672个次,捕获小型兽类标本332只,隶属于3目3科7属8种（亚种）,总捕获率4.76%,其中,黄胸鼠捕获率最高,达到3.87%,占比81.33%;室外共计布放鼠夹9781个次,捕获小型兽类标本807只,隶属于3目4科11属20种（亚种）,总捕获率6.87%,其中,黄胸鼠捕获率最高,达到4.11%,占比65.80%。群落生态指标对比上,均以室外较高,说明室外的物种丰富度、多样性、均衡度、生态优势度均大于室内。其主要原因同人类活动影响息息相关,环境较为单一、只有少数种类能够适应与人类共处;而室外自然环境多变,气候、植被、食物来源等因素丰富,从而有着更加丰富的物种分布。3.高纬度地区共计布放笼夹12393个次,捕获小型兽类标本899只,隶属于3目4科11属18种（亚种）,总捕获率6.16%,其中,黄胸鼠捕获率最高,达到4.27%,占比73.19%;低纬度地区共计布放笼夹4360个次,捕获小型兽类标本240只,隶属于2目2科8属13种（亚种）,总捕获率5.50%;其中,黄胸鼠捕获率最高,达到3.28%,占比59.58%。高、低纬度两块区域群落生态指标对比上,高纬度地区的物种丰富度大于低纬度地区,但多样性、均衡度和生态优势度上,低纬度地区高于高纬度地区。4.高纬度地区的不同海拔带来看,从低到高的四个海拔带I、II、III、IV,分别捕获小型兽类1科2属2种（亚种）、2目2科4属5种（亚种）、3目4科10属16种（亚种）和3目4科8属9种（亚种）,黄胸鼠在四个海拔带均处于绝对优势地位,捕获率分别为1.75%、2.93%、5.88%和4.87%,构成比分别为61.90%、74.78%、73.86%和74.22%。低纬度地区的不同海拔带来看,从低到高的四个海拔带I、II、III、IV,前三个海拔带均仅捕获1个鼠种;大于1300米海拔带捕获2目2科8属13种（亚种）,黄胸鼠占据绝对优势地位,笼夹综合捕获率5.98%、占比36.6%。高纬度地区的不同海拔带物种丰富度差异明显,随着海拔的升高基本呈现先稍有降低再生高后又降低的“Z”字型特征,丰富度最高的是1000到1300米海拔带。物种丰富度同生态优势度间有显著的负相关关系（r=-0.8947,p=0.0403）,而多样性指数与生态优势度间有着十分显著的正相关关系（r=1,p＜0.01）。低纬度地区的海拔带IV,从物种丰富度上看,其高于高纬度地区的海拔带IV低于高纬度地区的海拔带III,但多样性指数、均衡度指数以及优势度均明显高于高纬度地区的四个海拔带。5.境内布放工具370个次,捕获小型兽类标本19只,隶属于2目2科3属3种（亚种）,总捕获率5.14%。其中,黄胸鼠捕获率最高,为4.32%,占比72.92%;境外布放工具370个次,捕获小型兽类标本19只,隶属于2目2科3属4种（亚种）,总捕获率3.75%。其中,黄胸鼠捕获率最高,为2.72%,占比84.21%。生态指标对比上,两样区较为接近,境外稍高于境内,说明总体来看,两样区物种丰富区别不大,海拔、纬度、植被种类等自然环境因素均差别不大,表现的少量差异,可能主要和两地的经济发展水平等人类活动有关,境外经济较为落后、自然环境受到人类活动影响较小,从而保留了较多的物种多样性。6.本次研究对我省靠近边境的8个县（市）及一个境外地区（缅甸克钦邦八莫市莫西镇）的997份小型兽类脏器标本（脾脏968份、肝脏29份）,针对土拉弗朗西斯菌三种不同的基因片段（Fop A基因、Tul-4基因和16S r RNA基因）,使用巢式PCR方法进行筛检,最终均未能检测到阳性样本。结论:1.该块区域,无论室内外、纬度高低、海拔高低、境内外,黄胸鼠均表现为全区域的绝对优势地位,这表明该块区域,黄胸鼠仍然是该区域的优势鼠种。2.次要优势鼠种和常见鼠种的分布,室内外、纬度高低、海拔高低、境内外存在一定差异,特别是纬度、海拔差异明显。3.调查区域的小型兽类物种丰富度、多样性等指标,受生态地理景观、人类活动的影响,丰富度和多样性总体表现为室外高于室内、境外稍高于境内、高纬度地区的1000到1300米海拔带和低纬度地区的大于1300米海拔带最高。4.通过本次调查研究,暂未在调查区域发现土拉弗朗西斯菌相关线索,其主要原因可能该块区域本身不存在土拉弗朗西斯菌,也有可能存在但未能发现,这有待于进一步的扩大调查范围以及扩大调查标本物种（如增加蜱、蚤等医学节肢动物昆虫）,通过系统全面的研究来深入明晰该菌在云南是否存在以及其分布情况。5.通过本次研究,在云南建立了土拉弗朗西斯菌的细菌学分离、培养、鉴定技术以及分子生物学检验检测技术,为今后对该菌的更进一步研究、调查、甚至突发应急公共卫生事件检验检测处置,进行了有效的技术储备。
关键词：家鼠鼠疫疫源地;小型兽类;多样性;土拉弗朗西斯菌;感染调查
学科专业：流行病与卫生统计学
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 研究方法
第一节 调查采样
第二节 实验室检测
第三节 技术路线
第三章 结果
第一节 小型兽类多样性分布
第二节 土拉弗朗西斯菌实验室检测情况
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附录二 综述 土拉弗朗西斯菌的研究现况
参考文献
致谢