论文题目：快速性心律失常伴抑郁患者临床特征及调肝益气定悸方干预机制研究
摘要：快速性心律失常（过早搏动、心动过速、心房扑动、心房颤动等）是心血管疾病中重要的一组疾病,常伴心慌、胸闷、头晕等症状,严重影响患者生活质量,若不能及时治疗,最终可能会导致心肌病,甚至发展为心力衰竭,其中房颤还可诱发血栓栓塞,导致住院和死亡等风险升高,给患者和社会造成了重大负担。抑郁是心血管疾病患者常见的心理共病,快速性心律失常与抑郁症状的风险较高有关。抑郁还与快速性心律失常患者症状负担加重、生活质量下降、反复复发、口服抗凝剂出血风险、心血管及全因死亡率风险可能均相关,增加了快速性心律失常患者管理的复杂性和不良预后的风险。但是目前仍存在对快速性心律失常伴抑郁的认知度较低,病人不能获得及时准确的诊断、规范治疗以及治疗效果不理想等问题。因此,探索快速性心律失常伴抑郁更为有效的治疗方法,深入发掘中医药（Traditional Chinese Medicine,TCM）)的抗心律失常及抗抑郁作用,具有重要临床意义。课题组前期基于快速性心律失常伴抑郁的临床诊治经验,结合其中医病机发展规律,参考宫廷医学宋代三大官修方书（《太平圣惠方》《圣济总录》《太平惠民和剂局方》）中以“补益虚损,安神定悸”为主治疗心悸病症以及御医佟阔泉“万病由肝,治肝为先”理论,制定了“调肝益气、养心定悸”的治则,拟调肝益气定悸方（由甘松、仙鹤草等组成）治疗快速性心律失常伴抑郁。前期临床研究已发现该方能够预防房颤复发,减少发作频率及缩短持续时间,改善心率变异性（Heart rate variability,HRV）时域指标及患者临床症状,中医证候疗效显著,能够提高生活质量,安全性良好。前期临床研究中发现,该方还具有调节抑郁相关症状方面的功效。基于以上研究基础,本研究系统分析快速性心律失常患者证候分布规律和临床特征,明确调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的广泛适用性;进一步借助网络药理学方法,结合动物试验,探索该方治疗快速性心律失常伴抑郁的作用机制,以期为该方的临床应用提供实验依据。本研究包括以下部分:一、文献综述本部分分别从中西医治疗快速性心律失常伴抑郁以及快速性心律失常与抑郁共病机制的研究进展两方面进行综述。二、临床研究分为以下两部分研究。研究一:快速性心律失常患者证型分布与抑郁量表（PHQ-9）评分的关联研究目的:探索快速性心律失常患者证型分布特点及其主要证型与PHQ-9评分的关联,以期为快速性心律失常的临床治疗提供参考依据。方法:收集2021年3月至2022年2月就诊于中国中医科学院西苑医院的快速性心律失常患者302例。采集患者人口学资料、病史、症状及体征、动态心电图或心电图结果、患者健康问卷-9项（Patient health questionnaire-9,PHQ-9）评分、广泛焦虑问卷 7 项（Generalized anxiety disorder-7,GAD-7）评分等信息。标准化录入采集的病例信息,并对所收集的数据进行统计分析,探索快速性心律失常患者证型分布特点及其主要证型与PHQ-9评分的关联。结果:本研究共计纳入302例快速性心律失常患者,其中肝郁气滞合心虚胆怯证120例（39.74%）,是常见的中医证型。快速性心律失常患者PHQ-9平均 5.39±4.52 分,其中 PHQ-9≥5 分有 148 例（49.01%）,PHQ-9≥ 10 分者有 51例（16.89%）。在PHQ-9≥5分患者中肝郁气滞合心虚胆怯者87例（58.8%）,在PHQ-9≥10分患者中肝郁气滞合心虚胆怯者40例（78.4%）。调整性别、合并病、GAD-7评分等相关潜在混杂因素影响后,女性（OR=1.842;95%CI:1.054-3.218）、GAD-7≥5 分（OR=5.043;95%CI:2.774-9.168）、肝郁气滞合心虚胆怯证（OR=3.406;95%CI:1.934-5.998）与PHQ-9评分≥5分有关,P＜0.05。调整性别、合并病、GAD≥7评分等相关混杂因素影响后,GAD-7≥5分（OR=4.731;95%CI:2.249-9.954）、肝郁气滞合心虚胆怯证（OR=5.193;95%CI:2.381-11.327）与 PHQ-9评分≥ 10 分有关,P＜0.05。结论:肝郁气滞合心虚胆怯证是快速性心律失常患者临床常见证型,也是快速性心律失常伴抑郁患者的主要证型,该证型与快速性心律失常患者PHQ-9评分升高有关。研究二:快速性心律失常患者常见证型与心率变异性的相关性分析目的:采用横断面研究探索快速性心律失常患者常见证型肝郁气滞合心虚胆怯证与HRV的相关性,以期为快速性心律失常的临床诊治提供参考依据。方法:收集2021年3月至2022年2月就诊于中国中医科学院西苑医院的快速性心律失常患者105例,均于采集信息7日内行24h动态心电图检查且至少包含“正常窦性R-R间期值的标准差（Standard deviation of all normal-to-normal intervals,SDNN）”在内的HRV指标。采集患者人口学资料、病史、症状及体征、24h动态心电图结果（包括HRV指标SDNN等）、PHQ-9评分、GAD-7评分等。标准化录入采集的病例信息,并对所收集的数据进行统计分析,探索快速性心律失常患者肝郁气滞合心虚胆怯证与HRV的相关性。结果:本研究共计纳入105例患者中肝郁气滞合心虚胆怯者35例（33.33%）。肝郁气滞合心虚胆怯证和非肝郁气滞合心虚胆怯证两组间性别、年龄、体重指数（Body mass index,BMI）、合并病等基线资料分布差异均无统计学意义,P＞0.05。经Point-biserial相关性分析结果显示,快速性心律失常肝郁气滞合心虚胆怯证与SDNN相关,rbp=-0.273,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:快速性心律失常患者肝郁气滞合心虚胆怯证与HRV降低相关。三、网络药理学研究:基于网络药理学探讨调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的作用机制研究目的:基于网络药理学探讨调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的物质基础及作用机制,为进一步实验研究提供方向。方法:通过BATMAN-TCM平台检索甘松、仙鹤草等药物的活性成分,预测调肝益气定悸方活性成分作用靶点,并根据已发表文献报道补充未预测到的活性成分及其靶点。挖掘 GeneCard（https://www.genecards.org/）、DRUGBANK（https://go.drugbank.com/）数据库,寻找治疗快速性心律失常（包括早搏、心动过速、房扑、房颤）及抑郁的潜在靶点。筛选出药物、疾病的共同靶点,利用 STRING 11.0 数据库（https://string-db.org/）构建蛋白互作（Protein-protein interaction,PPI）网络图。将结果导入CytoScape3.8进行可视化显示,并运用其Molecular Complex Detection（MCODE）插件对相互作用关系进行分析,得到 module,获取潜在核心靶点。利用 Metascape 平台（https://metascape.org/）对潜在核心靶点进行基因本体（Gene ontology,GO）富集分析与京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集分析。借助微生信（http://www.bioinformatics.com.cn）在线数据分析可视化平台对结果可视化。利用Cytoscape3.8软件,构建调肝益气定悸方活性成分-潜在核心靶点-主要信号通路网络。结果:钠通道蛋白 5 亚基（Sodium channel protein type 5 subunit alpha,SCN5A）、微囊蛋白-3（Caveolin-3,CAV3）、钠通道亚基 β-1（Sodium channel subunit beta-1,SCN1B）、电压相关的L型钙通道亚单元α-1D（Voltage-dependent L-type calcium channel subunit alpha-1D,CACNA1D）、白细胞介素-10（Interleukin-10,IL10）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、内皮素-1（Endothelin-1,EDN1）、血管紧张肽原（Angiotensinogen,AGT）、雷诺定受体 2（Ryanodine receptor 2,RYR2）等可能为调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的核心作用靶点。调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的潜在核心靶点主要富集于心肌细胞肾上腺素能信号（Adrenergic signaling in cardiomyocytes）、高级糖基化终末产物（Advanced glycation end products,AGE）-高级糖基化终末产物受体（Receptor for advanced glycation end products,RAGE）信号通路、恰加斯病（美洲锥虫病）[Chagas disease（American trypanosomiasis）]、肾素分泌（Renin secretion）、流体剪切应力和动脉粥样硬化（Fluid shear stress and atherosclerosis）、低氧诱导因子-1（Hypoxia-inducible factor 1,HIF-1）信号通路、补体和凝血级联（Complement and coagulation cascades）等 7 条相关信号通路。结论:调肝益气定悸方可能通过调节离子紊乱、抗炎症、抗氧化应激、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统等发挥抗快速性心律失常及抗抑郁作用。肾上腺素能下游信号通路CaMKⅡ/RYR2信号通路可能与调肝益气定悸方的抗心律失常及抗抑郁作用有关。四、实验研究:基于CaMKⅡ/RYR2信号通路探讨调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的干预机制研究目的:探索调肝益气定悸方对快速性心律失常伴抑郁的干预效应及作用机制,为其临床应用奠定实验基础。方法:建立慢性不可预见性温和应激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）复合乌头碱诱导快速性心律失常伴抑郁大鼠模型,将60只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法随机分成空白对照组、乌头碱对照组、模型组、西药对照组、中药低、高剂量6组,每组10只。空白对照组、乌头碱对照组每天给予纯净水10ml·kg-1·d-1灌胃,模型组、西药对照组、中药低、高剂量组每天采用1种CUMS刺激,并分别给予纯净水10ml·kg-1·d-1、美托洛尔5.2mg·kg-1·d-1、调肝益气定悸方16.46g·kg-1·d-1、调肝益气定悸方32.92g·kg-1·d-1灌胃,连续21天,每日1次。末次给药1h后予以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,除空白对照组外,余组舌下静脉注射0.002%乌头碱1mL·kg-1。检测大鼠体重、糖水消耗率、心电图、心系数,Elisa法检测大鼠血清促肾上腺皮质激素（Adrenocorticotropic hormone,ACTH）、皮质酮（Corticosterone,CORT）,Western blot 法检测大鼠心肌组织Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Calcium/calmodulin-dependent protein kinase,CaMKⅡ）、RYR2、p-RYR2（ser2814）蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组体重下降、糖水消耗率降低、心律失常评分增加、室性早搏数增加、心系数增加,ACTH、CORT水平升高,CaMKⅡ蛋白表达水平升高,p-RYR2（ser2814）/RYR2水平升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与乌头碱对照组比较,模型组体重下降、糖水消耗率降低、心系数增加、室性早搏数增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,中药低、高剂量组糖水消耗率升高,心律失常评分降低,室性早搏数减少,CaMKⅡ蛋白表达水平降低,中药高剂量组p-RYR2（ser2814）/RYR2水平降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:CUMS可能增加大鼠快速性心律失常易感性。调肝益气定悸方可发挥抗心律失常及抗抑郁双重作用,其机制可能与调节CaMKⅡ/RYR2信号通路有关。
关键词：快速性心律失常;抑郁;调肝益气定悸方;肝郁气滞;心虚胆怯;CaMKⅡ;RYR2
学科专业：中西医结合临床
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文献综述
综述一: 快速性心律失常伴抑郁的中西医研究进展
1 中医对快速性心律失常伴抑郁的认识
2 快速性心律失常伴抑郁的西医治疗
3 快速性心律失常伴抑郁的中医药治疗
3.1 中药复方
3.2 中成药
4 小结与展望
参考文献
综述二: 快速性心律失常与抑郁共病机制的研究进展
1 快速性心律失常与抑郁的关系
1.1 抑郁与快速性心律失常的因果关系
1.2 抑郁对快速性心律失常预后的影响
2 快速性心律失常与抑郁的共病机制
2.1 炎症
2.2 氧化应激
2.3 细胞凋亡
2.4 离子通道紊乱
2.5 自主神经功能紊乱
2.6 HPA轴异常
3 小结与展望
参考文献
第二部分 临床研究
研究一: 快速性心律失常患者证型分布与抑郁量表(PHQ-9)评分的关联研究
前言
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.2 诊断标准
1.3 纳入标准
1.4 排除标准
1.5 数据采集及处理
1.6 质量控制
1.7 统计学方法
2 结果
2.1 快速性心律失常患者一般资料
2.2 快速性心律失常患者合并病情况
2.3 快速性心律失常患者PHQ-9及GAD-7评分情况
2.4 快速性心律失常患者证型分布情况
2.5 快速性心律失常伴PHQ-9评分升高患者证型分布情况
2.6 快速性心律失常患者常见证型与PHQ-9评分的关系
3 讨论
4 小结
参考文献
研究二: 快速性心律失常患者常见证型与心率变异性的相关性分析
1 前言
2 资料与方法
2.1 研究对象
2.2 诊断标准
2.3 纳入标准
2.4 排除标准
2.5 数据采集及处理
2.6 质量控制
2.7 统计学方法
3 研究结果
3.1 快速性心律失常患者一般资料
3.2 中医证候分布情况及基线比较
3.3 中医证候分布与PHQ-9评分、GAD-7评分情况
3.4 快速性心率失常患者常见证型与心率变异性的相关性
4 讨论
5 小结
参考文献
第三部分 网络药理学研究 基于网络药理学探讨调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的作用机制研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 调肝益气定悸方活性成分及靶点筛选
2.2 快速性心律失常及抑郁相关靶点筛选
2.3 调肝益气定悸方活性成分潜在作用靶点蛋白互作(Protein-proteininteraction,PPI)分析
2.4 基因本体(Gene ontology,GO)富集分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析
2.5 调肝益气定悸方活性成分-潜在核心靶点-主要信号通路
3 结果
3.1 调肝益气定悸方活性成分及靶点
3.2 快速性心律失常伴抑郁疾病靶点
3.3 调肝益气定悸方活性成分潜在作用靶点PPI分析
3.4 GO与KEGG通路富集分析
3.5 调肝益气定悸方活性成分-潜在核心靶点-主要信号通路网络
4 讨论
4.1 调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的物质基础
4.2 调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的分子机制
5 结论
参考文献
第四部分 实验研究 基于CaMKⅡ/RYR2信号通路探讨调肝益气定悸方治疗快速性心律失常伴抑郁的干预机制研究
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 实验药物
2.3 主要试剂
2.4 主要实验仪器
3 实验方法
3.1 CUMS复合乌头碱诱导快速性心律失常伴抑郁模型的建立
3.2 实验动物分组
3.3 指标检测
3.4 统计方法
4 结果
4.1 一般情况
4.2 糖水消耗率
4.3 心电图变化
4.4 心系数
4.5 调肝益气定悸方对下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响
4.6 调肝益气定悸方对CaMKⅡ/RYR2信号通路的影响
5 讨论
6 小结
参考文献
论文小结
创新点
致谢
中医药科技查新报告书