近年来, 我国蔬菜出口发展情况虽然比较平稳, 但是由于一些发达国家为了抵制外来产品, 保护本国市场, 越来越频繁的应用技术性贸易壁垒。尤其是在蔬菜水果中的腈菌唑残留检测, 已经成为北美、欧盟等发达国家进出口蔬菜和水果的必须检测项目。所以, 使用气相色谱检测法检测蔬菜水果中腈菌唑的农药残留, 一方面, 有利于保护食用者的身体健康, 另一方面, 也有利于促进产品的出口。
1 材料与方法
1.1 实验材料
研究所需试剂主要包括以下几种。腈菌唑标样:纯度超过96.0%。无水硫酸钠:550℃灼烧4 h。氯化钠:140℃烘烤4 h。农残级二氯甲烷、正乙烷、丙酮等。
研究所需仪器主要包括以下几种。气相色谱仪:带氮磷检测器。分液漏斗、电动震荡仪、旋转蒸发器等[1]。
1.2 实验操作
1.2.1 提取腈菌唑
取10 g腈菌唑, 和砂糖橘的全果、果肉、果皮搅匀, 放入100 m L的具塞量筒中, 加入20 m L的乙腈, 匀浆2 min。然后加入3 g氯化钠, 匀浆1 min。以3 500转/min的速度进行5 min的离心, 使水相和乙腈分层。
1.2.2 石墨化炭黑柱-氨基柱组合净化
在具塞量筒中吸取10 m L的乙腈相溶液, 置入150m L的烧杯中, 将烧杯放在65℃的水浴锅上加热, 对乙腈进行蒸发。用1 m L、体积比例为1∶3的乙腈-甲苯溶液, 对烧杯中的试样残渣进行溶解, 转入石墨化炭黑柱-氨基柱。再使用1 m L、体积比例为3∶1的乙腈-甲苯溶液, 对烧杯进行清洗。使用10 m L、体积比例为3∶2的乙腈-甲苯溶液, 对石墨化炭黑柱-氨基柱进行清洗, 取出洗脱液。在水浴锅中蒸发, 加入体积比例为2∶8的丙酮-正乙烷, 定容至5 m L, 进行气相色谱分析[2]。
1.2.3 气象色谱分析
升温程序:在100℃下保持1 min, 然后以每分钟20℃的速度, 升温至180℃。然后以每分钟10℃的速度, 升温至300℃, 保持6 min。
进口温度:260℃。进样量:1μL。载气:氮气 (≥99.999) , 流速1 m L/min。氢气:1.5 m L/min。空气:145 m L/min。NPD温度:300℃。进样方式:不分流进样, 0.75 min后, 打开分流阀和隔垫吹扫阀。
2 结果与分析
2.1 提取方法和净化方法的选择
在提取方法上, 乙腈是农药残留分析中最常用的提取溶剂, 可以和水互溶。加入氯化钠之后, 可以和水分层, 并且不会受到蛋白质、脂肪和糖类等杂质的干扰, 提取腈菌唑的效果较好。本次研究对乙腈和甲醇的提取腈菌唑效果进行了比较, 用甲醇萃取样品加入氯化钠水溶液。然后使用二氯甲烷萃取, 净化之后, 用丙酮定容上机。通过对不同提取方法的比较, 结果表明, 使用乙腈提取的回收率更高, 杂质干扰更小。所以本次研究采用乙腈提取法。
在净化方法上, 体积比例为3∶1的乙腈-甲苯直接洗脱的效果不理想, 体积比例为3∶2的乙腈-甲苯直接洗脱也会受到干扰。所以本次研究确定使用体积比例为3∶1的乙腈-甲苯上洋, 淋洗, 放弃淋洗液。然后使用体积比例为3∶2的乙腈-甲苯洗脱溶液, 回收效果更好。
2.2 色谱分析条件的选择
使用Ttx-1毛细管色谱柱进行分离, 效果较好。使用这种方法可以完全分离样品和腈菌唑中的杂质。根据上述实验, 腈菌唑保留时间为12.4 min, 定量指标为峰面积, 标准色谱见图1, 砂糖橘全果的空白及添加0.1 mg标样色谱见图2。
2.3 线性范围
一般情况下, 腈菌唑在蔬菜水果中的限量标准是0.2~1.0 mg/kg, 所以本次研究以0.1~1.0 mg/kg作为标准曲线的范围, 配制每升0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mg的标准工作液, 取1μL进行测量, 外标法定量。绘制工作曲线, 横坐标是腈菌唑的质量浓度, 纵坐标是相应的峰面积, 见图3。
2.4 回收率及方法的精密度
在不同量的标准溶液中加入10 g砂糖橘果皮、果肉、全果, 进行添加回收实验, 每个添加浓度重复5次, 结果见表1。
从表1中可以看出, 在全果、果肉、果皮中添加0.1 0、0.5 0、1.0 0 m g/k g时, 回收率分别为89.5%~98.1%、90.0%~108.3%、94.1%~101.1%, 相对标准偏差分别为9.66%~14.97%、1.11%~13.79%、6.28%~16.16%。
2.5 方法检出限和样品测定
当称样量是10 g, 定容体积为5 m L, 进样量为1μL时, 以3倍信噪比计算检出限, 为0.008 mg/kg。对砂糖橘试验样品的全果使用气象色谱检测法, 进行腈菌唑残留检测, 典型色谱见图4。
使用外标法检测目标化合物的含量, 结果见表2。
3 结论
使用气相色谱法检测蔬菜水果中腈菌唑残留量的目的在于保证食品安全, 所以针对腈菌唑残留量过高可能造成的危害, 我国政府也要有明确的规定, 相关部门应该加强宣传, 让所有人都能清醒地认识到腈菌唑残留量过高对人体、地下水造成的危害, 在使用时也要遵照科学的方法, 不能滥用。一般情况下, 一茬植物从苗期、花期, 最后到果实膨大期, 只能使用3~4次。对于连续结果的农作物, 如黄瓜等, 第三次用药和第四次用药之间应该间隔1个月。并且番茄类作物尽量在上午用药, 确保叶片当天就可以吸收药物, 以免药剂集中在叶边缘, 发生不良反应。腈菌唑的用药时间应该是在当地农业科技人员建议时间、病害发生之前、农作物生长旺盛时期给药, 为了避免病菌产生抗药性, 一个生长季节使用腈菌唑的次数不能超过4次。为了得到最佳抗菌效果, 建议在病害发生之前或者发生初期进行施药, 可以有效抑制菌丝和病菌孢子的生成和萌发。但是在施药腈菌唑的同时, 尽量避免和乳油类农药混合使用。本次研究使用的气相色谱检测法, 以砂糖橘为例, 检测蔬菜水果中腈菌唑的农药残留, 实验不需要对样品进行净化, 操作简单, 准确性、精密度和灵敏度都比较好, 结果可靠, 符合农药残留分析实验的要求, 成本也比较低, 检测限低于国外残留限量标准, 所以适用于蔬菜水果中腈菌唑农药残留量的检测。
摘要：腈菌唑作为一种麦角甾醇生物合成抑制剂, 具有持效期长、对农作物安全、药效好、强内吸性等特点, 可以有效预防和治疗很多蔬菜水果生长过程中的常见疾病, 如梨、苹果的黑星病、锈病和白粉病;烟草的白粉病;麦类的网斑病、大麦条纹病、小麦茎枯病、网腥黑穗病、坚黑穗病和散黑穗病;葡萄的白粉病和黑腐病;核果的腐烂病、污点病、褐锈病和白粉病等。腈菌唑作为农药, 在农作物上使用之后, 虽然多数会发生转化, 但是农作物中仍然会残留一些农药, 如果长时间摄入食物中残留的农药, 会对人体的健康造成很大的威胁, 所以必须重视农药的残留量。在20世纪60年代, 就已经有人开始应用薄层色谱酶抑制法检测有机磷农药在食物中的残留量, 发展到20世纪80年代, 开始使用酶抑制和免疫检测技术来对农药残留量进行检测。近年来, 我国也开始充分应用气相色谱法对食物中农药残留量进行检测, 具有误差小、操作简单、处理速度快等诸多优势。以砂糖橘为例, 使用气相色谱检测法检测蔬菜水果中腈菌唑的农药残留。
关键词：气相色谱检测法,腈菌唑,蔬菜水果,农药残留
参考文献
[1] 谢建军, 陈捷, 李菊, 等.改良Qu ECh ERS法结合气相色谱串联质谱测定果蔬中20种杀菌剂[J].食品安全质量检测学报, 2013 (1) :82-88.
[2] 黄金萍, 郭顺云, 魏萍芳, 等.气相色谱法在疏菜农药残留检测中的研究应用进展[J].中国农业信息, 2013 (9) :130-133.