徐长卿为我国的传统中药, 始载于《神农本草经》, 为摩萝科植物徐长卿的干燥根及根茎[1]。丹皮酚[2]又名牡丹酚, 化学名为2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮, 易挥发, 易溶于多种有机溶剂。目前对于牡丹皮中丹皮酚的研究较多[3], 其药理作用已较为明确, 具有镇静镇痛、抗菌消炎的功效[4]。本文建立了一种简便、经济的HPLC法测定药材及其注射液中丹皮酚的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
FL2000液相色谱仪;FL9500工作站 (温岭福立分析仪器有限公司) ;Venusil XBP-C18色谱柱。
1.2 试药
丹皮酚对照品 (中国药品生物制品检定所, 110708-200505) ;丹皮酚注射液 (市售) ;徐长卿药材 (市售) ;甲醇为色谱纯;水为超纯水;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Venusil XBP-C18 (200mm×4.6mm, 5μm) ;流动相甲醇—水 (70∶30, v/v) ;流速:1.0mL·min-1;检测波长:274nm;AUFS:0.6;柱温:室温 (30℃) ;进样量:20μL。
2.2 标准曲线的绘制
2.2.1 丹皮酚系列对照品溶液制备
精密称取丹皮酚对照品12.9mg, 置于100mL量瓶中, 用甲醇定容成129.0μg·mL-1储备液。精密量取储备液适量, 甲醇定容成丹皮酚系列对照品溶液, 浓度为0.03225、0.0645、0.3225、1.29、3.225、6.45、12.9μg·mL-1。
2.2.2 标准曲线的绘制
取上述系列溶液20μL进样, 以峰面积为纵坐标, 浓度为横坐标进行回归分析, 得到线性方程:A=114896X-2172.31, r=0.9999, 线性范围为0.03225～12.9μg·m L-1。
2.3 分析方法的确证
2.3.1 供试品溶液的制备
精密称取药材粗粉0.5g。置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇30mL, 称定重量。超声处理30min后, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足重量, 摇匀, 取续滤液将残渣洗涤数次, 合并续滤液。精密量取1mL, 置100mL量瓶中, 用甲醇定容至刻度, 即得。取丹皮酚注射液 (10mg∶2mL) 0.5mL, 置10mL量瓶中, 用甲醇定容后, 再取0.5mL至50mL量瓶中, 用甲醇定容至刻度, 即得。
2.3.2 精密度试验
取药材与注射液供试品溶液20μL, 按色谱条件重复进样6次, RSD分别为1.0%和0.85%, 表明精密度良好。
2.3.3 稳定性试验
分别于0, 1, 4, 12, 24, 48h时间点, 取同一供试品溶液20μL进样测定, RSD分别为1.1%和1.6%, 表明药材的甲醇提取液与注射液的甲醇液在48h内稳定。
2.2.4 回收率试验
精密称取药材粗粉50mg, 共9份, 分3组, 置10m L量瓶中, 各组分别精密加入丹皮酚对照品溶液 (34.6μg·mL-1) 0.5, 1.0, 1.5mL和甲醇3mL, 超声处理30min后, 过滤。另将丹皮酚注射液稀释成2.34μg·mL-1供试品溶液, 各取1mL置10mL量瓶中, 共9份, 分3组, 各组分别精密加入丹皮酚对照品溶液 (2.84μg·mL-1) 1, 2, 3mL, 用甲醇定容。取20μL按色谱条件进样, 测得平均回收率。结果见表1、2。
2.4 样品测定
用本法对3个产地徐长卿药材及同一厂家3个批号的丹皮酚注射液中丹皮酚进行含量测定, 结果见表3、4。
3 讨论
实验中考察了0.02、0.2、0.6、0.8AUFS时丹皮酚标准曲线的线性范围, 结果以0.6AUFS时丹皮酚有较宽的线性范围, 为进一步建立体内丹皮酚的含量分析方法奠定基础。测定结果表明, 不同产地的徐长卿和不同批号的丹皮酚注射液中丹皮酚含量均有一定差异。提示在选择药材进行加工时, 应注意药材与制剂质量的密切关系。
目前, 有关丹皮酚的含量测定方法有许多, 但大多是对药材牡丹皮及其复方制剂中的丹皮酚而言。本文建立了徐长卿药材中的丹皮酚的提取优化和HPLC测定, 为中药复方中含徐长卿的制剂提供了一种可行的定性定量方法。
摘要：目的 建立徐长卿药材和丹皮酚注射液中丹皮酚的含量测定方法。方法 色谱柱:Venusil XBP-C18 (200mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:甲醇—水 (70∶30, v/v) ;流速:1.0mL.min-1;检测波长:274nm。结果 丹皮酚在0.03225～12.9μg.mL-1范围内线性关系良好 (r=0.9999) , 药材和丹皮酚注射液样品的平均回收率分别为97.8%和98.6%, RSD分别为1.2%和1.3%。结论 本法快速、准确, 可有效控制徐长卿药材和丹皮酚注射液的内在质量。
关键词：徐长卿,丹皮酚注射液,HPLC
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 (2005) 一部[M].北京:化学工业出版社, 2005:200～201.
[2] 孙文基, 谢世昌.天然药物成分定量分析[M].北京:中国医药科技出版社, 2003:345.
[3] 吴波.中药牡丹皮的研究-牡丹皮中丹皮酚的含量测定[M].北京:药学学报, 1966, 13 (2) :145.
[4] 吕成明, 刘海燕.丹皮酚的药理作用研究进展[J].医药导报, 2005, 2 (24) :142～143.