论文题目：DIAPH3在肺腺癌中的表达及促进肺腺癌增殖迁移的机制
摘要：研究背景和目的肺癌是世界上主要的与癌症相关的死亡疾病,是导致患者高病死率的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康和生命,肺癌可分为两种类型:小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中80%～85%的肺癌属于非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。肺腺癌是非小细胞肺癌中的常见亚型,约占肺癌的40%。因其发病早期多无明显症状,70%～80%的肺癌患者在确诊时已为中晚期,5年生存率低于20%。随着临床医学不断地发展和进步,针对肺腺癌的治疗除常规的手术、化疗和化疗外,靶向治疗、免疫治疗及其他新型广谱抗癌药物的开发也取得了巨大进展。靶向治疗自诞生后发展迅速,极大地改善了驱动基因阳性NSCLC患者的预后,即便如此,耐药和高转移率是导致治疗失败和死亡的主要原因。因此寻找更多可能参与肺腺癌发生发展的驱动基因和研究开发高效低毒的靶向药物是肺癌基础及临床研究的当务之急。DIAPH3基因位于人类13号常染色体长臂2区1带,其产物属于Formin蛋白家族。该蛋白可参与肌动蛋白的重塑、细胞形态的变化、运动和黏附的调节等生理活动。多项研究表明DIAPH3基因的表达量与听神经系统疾病和硅肺相关,与乳腺癌、肝细胞癌、前列腺癌、胰腺癌等肿瘤的发生与转移有关。Guo等发现DIAPH3是肺腺癌中的上调基因并促进肺腺癌细胞的生长。DIAPH3在肺腺癌中的发生发展机制研究较少,通过对DIAPH3在癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库的表达、免疫组化对肺腺癌患者的临床信息及生存信息的分析,研究DIAPH3基因与肺腺癌患者预后之间的关系,并通过体外细胞实验研究DIAPH3对肺腺癌细胞增殖、迁移的影响及可能促进肺腺癌发展的机制,以期对肿瘤预后的判断及临床治疗方案的制定起到一定的参考作用。方法1.通过GEPIA数据库获得不同DIAPH3 mRNA表达量对肺腺癌、肺鳞癌生存的影响。2.通过癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库获取DIAPH3 mRNA在肺腺癌的表达数据及相关病理参数,将全部数据纳入研究分析其表达水平与肺腺癌患者临床病理特征的关系。将获得生存数据的数据纳入研究分析DIAPH3 mRNA表达量、临床病理特征和总生存期（overall survival,OS）的关系。3.收集郑州大学第一附属医院胸外科2015年01月至12月通过术后病理确诊的共计55例肺腺癌患者的癌组织,其中26例收集到相应的癌旁组织标本。应用免疫组化检测DIAPH3蛋白的表达情况,分析其与肺腺癌患者肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、OS的关系。4.通过免疫印迹法（Western Blot,WB）法筛选敲减效率最佳的si-RNA用于后续的实验。5.通过质粒转染过表达、敲减肺腺癌细胞系A549和HCC827中DIAPH3基因的表达,使用实时荧光定量PCR和WB方法验证过表达及敲减效率。6.CCK-8和平板克隆实验检测DIAPH3对细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测DIAPH3对细胞迁移的影响,7.使用流式细胞术检测DIAPH3表达量对凋亡及细胞周期的影响。8.使用WB检测DIAPH3表达量对上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的标志物 E-cadherin、vimentin 蛋白表达的影响。9.划痕、Transwell实验检测加入Wnt/β--catenin信号通路抑制剂XAV939对细胞迁移的影响。10.高表达DIAPH3的肺腺癌细胞系加入Wet/β--catenin信号通路的抑制剂XAV939,WB检测抑制剂对EMT的标志物E-cadherin、vimentin蛋白表达的影响。结果1.GEPIA数据库分析显示,DIAPH3 mRNA高表达是肺腺癌患者预后不良因素,DIAPH3 mRNA表达量与肺鳞癌患者生存无关。2.DIAPH3 mRNA在肺腺癌中高表达,并与肿瘤患者的淋巴结转移、TNM分期及生存有关（均为p＜0.05）。多因素分析显示,DIAPH3 mRNA高表达、N1～3期和临床分期Ⅲ～Ⅳ期是患者OS的影响因素（P＜0.05）。3.DIAPH3蛋白表达水平在癌组织中较癌旁组织显著升高（P＜0.05）,与患者的淋巴结转移、总生存期显著相关（P＜0.05）。COX分析结果显示DIAPH3蛋白表达量和淋巴结转移是影响患者OS的危险因素（P＜0.05）。4.细胞实验表明过表达DIAPH3可促进细胞增殖、迁移和向EMT转化;降低DIAPH3表达可抑制细胞增殖、迁移及EMT转化,使细胞周期阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡（P＜0.05）。5.加入抑制剂XAV939后,抑制肺腺癌细胞迁移。6.E-cadherin蛋白的表达量增加,随着XAV939的浓度增加E-cadherin蛋白表达增多。vimentin蛋白的表达量下降,随着XAV939的浓度增加vimentin蛋白表达下降。DIAPH3可能通过Wnt/β-catenin促进肿瘤细胞的向EMT转化。结论DIAPH3在肺腺癌中高表达,可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进肺腺癌的增殖和迁移。
关键词：肺腺癌;DIAPH3;总生存期;上皮细胞-间充质转化;Wnt/β-catenin信号通路
学科专业：内科学（呼吸病学）（专业学位）
摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 引言
2 材料与方法
3 结果
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 肺癌靶向治疗的研究进展与DIAPH3基因的研究进展
参考文献
致谢