灵芝 (Ganoderma lucidumLeyss ex Fr.) 是著名的食药用真菌, 以干燥子实体入药。素有“仙草”之称, 是珍贵的药材[1],
关于灵芝的栽培不同波长光照的条件的研究才刚刚起步。王德芝等认为灵芝是高温型真菌, 在培养第10d后, 用蓝光、红光、黄光及自然光处理的灵芝菌丝, 生长量由多至少的顺序为:蓝光、红光>白光、黄光处理[2];郝俊江等学者在研究光质对灵芝生长与灵芝多糖含量影响顺序为:红色>蓝色>黄色;提出灵芝子实体产孢量来说更适合红色光质[3]。
丙二醛 (MDA) 是脂质过氧化的主要代谢产物, 是细胞具有严重的损害结果的表现, 检测的方法主要有紫外-可见分光光度法、荧光光谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。在高等植物逆境时, 含量增加。但在菌类研究中还未见到报道。本文对灵芝在不同光质下的丙二醛 (MDA) 产生测定, 对选择适宜光质具有实用意义。
一、材料与设备
椴木、赤芝、紫芝菌种、白膜、黑膜、蓝膜、黄膜, 塑料薄膜由鑫农薄膜包装制品厂生产, 购自吉林市恒山东路农资商店, 厚度:0.08mm, 5%TCA和0.6%TBA。灵芝类型为赤芝和紫芝。
高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、低速台式离心机, 紫外一可见分光光度计 (721型, 上海光谱仪器有限公司) , 电热恒温水浴锅 (HW·SY2-P8, 北京东方精瑞科技发展有限公司) 、电子分析天平 (Q/OANN 10-2008, 奥豪斯仪器上海有限公司) , 电热鼓风干燥箱 (DHG-9035A, 上海源长实验仪器设备厂) 等。
二、试验方法
本试验采用椴木栽培的方式。使用紫芝、赤芝2个灵芝品种类型, 实验地点吉林农业科技学院温室大棚, 于2017年5月中下旬, 搭棚。试验区长约15m, 宽8m的试验田。将新鲜椴木切成25-30cm长的短段木, 用电钻打3个直径约2cm, 深3cm的孔, 呈品字形排列。段木装入直径20-30cm, 厚0.005cm的聚乙烯塑料袋内。每袋2-3段, 松紧适中, 袋口用绳子扎紧。用蒸汽炉通入蒸汽灭菌, 温度100℃10h, 最后用旺火1-2h收尾, 停火后再闷3-5h左右即可出锅晾袋。待料袋温度下降至30℃左右以下时即可接种。发菌阶段要保持光线阴暗, 空气湿度控制在70%左右以下[4], 温度保持在25℃范围内。每天中午开窗通风, 每周喷3%来苏水一次防止杂菌, 当形成菌被时, 微开袋口排出菌袋内多余水分, 每10d开一次。发现杂菌时及时处理以免造成更大的污染。
当菌袋内菌丝长满椴木, 呈洁白色, 选晴天将菌材栽植在土畦浅沟内, 畦宽1.5-2m, 每行4-5段, 行距8-10cm, 覆盖2cm的含腐殖质泥土。浇水使土壤保持湿润。保持温度22℃以上。半个月后原基出现时, 每个菌包保留1个菌蕾。灵芝出芝过程中, 每天浇水保持土壤湿润且疏松的状态, 定时通风以免灵芝畸形生长, 保持良好光照条件。
(一) 光质对不同品种灵芝的生长试验设计
以赤芝、紫芝作为试验材料, 采用2因素4水平完全随机试验设计方案, 见表2-1。以绿、蓝、黄、白四种膜 (A) 和赤芝和紫芝2个灵芝品种 (B) 为试验因子。
设该试验总共有8个处理, 分别为:A1B1、A1B2、A2B1、A2B2、A3B1、A3B2、A24B1、A4 B2、每个处理5株, 无重复。
(二) 灵芝丙二醛含量测定
MDA作为脂质过氧化代谢产物, 在95℃高温和低pH等条件下能与硫代巴比妥酸 (TBA) 反应, 生成较稳定的粉红色至红色复合物, 在波长532nm处有最大吸收峰, 因此可用紫外分光光度法测定[5]。取灵芝粉末1g加10ml5%TCA研磨, 匀浆在4000r/min, 取上清液。吸取上清液2ml (对照加2ml蒸馏水) , 加2ml0.6%TBA溶液摇匀放入沸水中煮沸10min取出试管冷却, 3000r/min离心15min, 取上清液以对照为空白测定532nm的吸光度值。
三、结果与分析
(一) 出芝期不同光质对灵芝MDA含量的影响
5月23日, 灵芝椴木种植。6月8日刚刚出现子实体原基, 采样测定。结果见图1。
不同颜色的膜处理赤芝和紫质, 出芝时丙二醛含量测定结果显示, 都显示出覆盖白膜时, 丙二醛含量最高, 黄膜次之。覆盖绿膜时含量最低。将上述数据进行方差分析, 处理间存在显著差异, F=64.307。F0.05A (3, 3) =9.78FB0.05 (1, 3) =10.13。
不同颜色的膜处理紫芝, 存在极显著差异, F=98.733。F0.01A (3, 3) =12.662, FB0.01 (1, 3) =28.428。
(二) 不同光质灵芝孢子MDA含量
8月21日, 产孢盛期。采集子完整子实体, 干燥, 粉碎, 过60目筛。用TCA提取, 用分光光度法测定MDA, 结果见图2。
不同颜色的膜处理赤芝和紫质, 产孢期丙二醛含量测定结果显示, 都显示出覆盖白膜时, 丙二醛含量最高, 黄膜次之。覆盖绿膜时含量最低。将上述数据进行方差分析, 处理间存在显著差异, F=114.884。FA0.01 (3, 3) =29.46, FA0.01 (1, 3) =34.12。
不同颜色的膜处理紫芝, 存在极显著差异, F=88.356。F0.01A (3, 3) =34.189, FB0.01 (1, 3) =38.51。
四、结论与讨论
本试验在对灵芝进行常规管理的基础上, 研究光质对灵芝丙二醛含量的影响, 最终得出结论。
(1) 出芝时, 不同种薄膜对灵芝丙二醛含量差异不同, 覆盖白膜时灵芝丙二醛含较高, 黄膜次之, 蓝膜最少。处理间灵芝丙二醛含量差异显著。
(2) 产孢期, 不同薄膜对灵芝MDA含量不同。绿膜下灵芝丙二醛含量最低, 白膜下灵芝丙二醛含量最高, 光质对灵芝丙二醛含量差异影响极显著。
(3) 灵芝品种间, 紫芝比赤芝在同等膜色下, MDA含量高, 说明耐受不同光质的能力弱。
本试验在前人研究光质对灵芝生长的试验结果基础上, 进一步来研究不同颜色的薄膜对灵芝MDA含量影响。试验运用的品种较少, 没有进行连续多年观测, 需要进一验证, 进而对针于吉林地区选用合适的薄膜颜色提供相应的理论依据。
摘要：本试验以灵芝菌株为试验材料, 以白膜、黄膜、蓝膜、绿膜四种光质来观测不同光质对灵芝丙二醛含量的影响。研究结果表明:白膜下灵芝丙二醛含量最高, 达到0.05水平, 丙二醛是绿膜的3倍, 次之为黄膜, 蓝膜与绿膜间无显著性差异, 在绿膜下丙二醛含量最低。从品种来看紫芝丙二醛含量高于赤芝。总体比较, 白膜最优。
关键词：光质,灵芝,丙二醛含量
参考文献
[1] 钱先来.不同条件下灵芝培养研究及相关检测[J].河北大学报, 2010, 4-12.
[2] 胡惠萍, 周洁莹, 夏凤娜, 梁慧敏, 刘克林, 杨小兵.不同原料栽培的灵芝孢子粉质量比较试验[J].食用菌, 2008 (4) .
[3] 张炯炯.灵芝孢子的开发和应用[J].湖南中医药导报, 2000, 21 (8) :5.
[4] 池小妹.我国灵芝人工栽培技术研究现状[J].时珍国医国药, 2005, 18 (8) :791-792.
[5] 夏子贤.植物丙二醛含量测定[J].农家科技, 2011, 21 (1) :41-43.