1 盐酸克伦特罗的性质
盐酸克伦特罗 (Clenbuterol, CLB) 俗称瘦肉精, 又名氨哮素、克喘素, 化学名为“4氨基-α-[ (叔丁基氨基) 甲基]-3, 5-二氯苄醇盐酸盐”, 常温下为白色或微黄粉末状固体, 熔点为170℃~176℃, 极易溶于水、甲醇和乙醇, 微溶于氯仿, 不溶于苯, 是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末, 美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代, 由于盐酸克伦特罗能促进猪生长, 提高瘦肉率, 而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来, 因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生, 且后果极其严重, 引起了世界各国的高度重视, 为了保证猪肉产品质量安全, 保护人类健康, 许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性
2.1 对猪的影响
在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足, 导致猪肉品质下降, 同时容易发生蹄损伤和跛行, 大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响
人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用, 出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状, 特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大, 严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定
由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解, 促进蛋白质合成, 实现动物营养再分配, 提高胴体瘦肉率, 加快猪的生长等作用, 盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广, 从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生, 严重的甚至导致了死亡。就国内而言, 自1998年以来, 每年都有数起类似中毒事件发生。今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。从1986年开始, 欧美等发达国家已严禁畜牧生产中应用盐酸克伦特罗, 我国农业部在1997年3月以[农牧发 (1997) 3号文]严令禁止β一肾上腺素类激动剂在动物生产中的应用。美国食品药物管理局 (FDA) 和世界卫生组织 (WHO) 建议CLB在动物组织中最高残留限量 (MRL) 分别为肉0.2μg/kg, 肝0.6μg/kg, 肾0.6μg/kg, 脂肪0.2μg/kg, 奶0.05μg/kg。
4 残留检测方法
4.1 感官辨别
屠宰前, 凡呼吸急促, 皮毛异常光亮, 后臀部外形饱满且突出, 四肢严重颤抖或非外因而卧地不起的猪, 基本上可以做出初步判断。屠宰后, 可以从肉的品质和颜色上来判断。含有盐酸克伦特罗的猪肉肉色较深, 鲜艳, 脂肪层非常薄, 在胴体两侧腹股沟的脂肪层内毛细血管分布较密, 甚至呈充血状态。内脏实质器官 (心、肝、肾) 充血肿胀, 用手指触之酥软呈脂肪变性, 间质器官如肺、气管切面见泡沫、气肿等病变特征, 而一般健康肉呈淡红色, 肉质弹性好。感官检验法可用于对含有盐酸克伦特罗动物性产品的粗略判断, 主观性较强[2]。
4.2 实验室检测
目前对猪体内盐酸克伦特罗残留的检测方法主要有胶体金法、酶联免疫法、气相色谱法及液相色谱-质谱联用法。
4.2.1 胶体金法
胶体金法是通过盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗-血清白蛋白偶联物竞争结合抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物, 使试纸上反应线颜色发生变化, 以判定样品中盐酸克伦特罗的含量。当检样中盐酸克伦特罗浓度低于最低检测水平时, 胶体金中的抗盐酸克伦特罗单抗-胶体金复合物与T线上的偶联物结合, T线呈色与C线相近;当检样中盐酸克伦特罗浓度>0.5ng/m L时, T线显色比C线浅或完全看不到线, 且盐酸克伦特罗浓度越高T线显色越浅, 从而作出判定[3]。在筛查饲养场、生猪中转站、屠宰场时可采用胶体金法进行快速检测, 不须添置任何设备, 不须掌握更多专业技能, 在十多分钟内即可得到检测结果, 适用于大量样品的测定, 缺点是假阳性率较高。
4.2.2 酶联免疫法
酶联免疫法是微孔板加入盐酸克伦特罗抗体, 经过孵育及洗涤步骤后, 加入盐酸克伦特罗酶标记物、标准和样品溶液。盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗酶标记物竞争, 盐酸克伦特罗抗结合的盐酸克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入终止液后由蓝色转化为黄色, 在450nm处测量吸光强度, 吸光值与样品中盐酸克伦特罗浓度呈反比[4]。目前, 国内用于盐酸克伦特罗残留检测的试剂盒已经商品化, 具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点, 适于批量样品的快速分析测定.检测精度可达ng/m L级, 此法假阳性率较少, 因此国内外大都将胶体金法作为筛选法。
4.2.3 气相色谱法[5]
气相色谱法是将样品经固相萃取、衍生化后用ECD检测器检测, 以外标法多点校准定量, 测得动物组织中盐酸克伦特罗的峰面积与样品浓度在0.005~1.0μg/ml范围内呈良好的线性关系, 相关系数大于0.999, 肉样的加标回收率在70%~80%, 最低检出限为1μg/kg。气相色谱法具有检测精密度高的优点, 但同时也具有检测过程烦琐, 耗时长、不能定性等缺点。
4.2.4 液相色谱-质谱联用法
液相色谱-质谱联用法是猪尿及猪肉组织中B-兴奋剂残留量的液相色谱-串联质谱联用测定法, 检测的定量限在0.15~0.6ng/g, 线性范围均大于10, 线性方程的相关系数大于0.999, 猪肉样品和猪尿的回收率大于70%。该法具有灵敏度高、专属性强、定性准确的优点。由于此方法不需要对样品进行衍生化就可直接分析, 操作步骤相对简单、灵敏度高、专属性强、定性准确的优点, 所以也在盐酸克伦特罗残留的测定中逐步得到应用[6]。
综上所述, 在各种检测方法中, 胶体金法不需要添置任何设备, 不需掌握更多专业技能, 短时间内即可得到检测结果, 但假阳性率较高, 可作为现场速测使用。酶联免疫法作为一种最常用的免疫分析法, 具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等特点, 适合于大批量样品的快速分析, 但不能作为确证方法。而气相色谱法和液相色谱-质谱联用法虽然提高了分析的灵敏性、准确性和有效性, 降低了检测限, 但均需要昂贵的仪器、复杂的样品处理程序以及专门的操作技能, 且比较费时, 成本高, 不适合用于大批量样品的检测。因此灵敏, 快速、方便的检测方法是今后研究和开发检测盐酸克伦特罗残留物的重要方向。
摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗 (瘦肉精) 的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词：盐酸克伦特罗,残留,检测方法
参考文献
[1] 刘国艳, 柴春彦.如何全面认识“瘦肉精”[J].动物科学与动物医学, 2002, 19 (6) :1～3.
[2] 李慧, 刘士杰, 苏晓鸥.盐酸克伦特罗在猪尿液中消长动态研究[J].中国畜牧兽医, 2005, 32 (9) :35～36.
[3] 杨新刚.猪尿液中盐酸克伦特罗检测方法比较[J].当代畜牧, 2006, 7:45～46.
[4] 雷红涛, 高秀洁, 潘科.盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立[J].中国食品学报, 2006, 6 (1) :6～10.
[5] 谢维平, 黄盈煜, 胡桂莲.气相色谱法直接测定动物组织中盐酸克伦特罗的残留量[J].色谱, 2003, 21 (2) :l92.
[6] GB/T 22286-2008 (中华人民共和国国家标准) .动物源性食品中多种8-受体激动剂残留的测定液相色谱-质谱/质谱法.