卵磷脂是一种具有独特生理活性的天然物质, 广泛存在于动植物组织中如大豆, 动物肝脏及蛋黄, 具有独特的生理活性。卵磷脂可以延缓衰老, 增强大脑记忆力, 缓解心脑血管疾病, 预防脂肪肝等生理功能[1,2], 已经广泛应用于食品, 医药, 饲料, 化妆品, 保健等工业。其中, 蛋黄卵磷脂易于被机体吸收利用, 且富含饱和脂肪酸, 具有更好的抗氧化稳定性等优点, 逐渐受到人们的越来越多的关注, 且蛋黄具有廉价, 作为日常生活的主要营养物质, 来源广。目前, 蛋黄卵磷脂的主要提取方法有有机溶剂萃取法[4], 柱层析法[6], 复合盐沉淀法[3], 超临界CO2萃取法等方法。本实验通过对蛋黄卵磷脂的乙醇提取工艺进行研究, 以期建立一套完整的实验室提取蛋黄卵磷脂的工艺路线, 对有机溶剂萃提蛋黄卵磷脂的传统工艺进行简化, 使其简单易操作。
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 提取工艺
鸡蛋→预处理→称取1g蛋黄→加8m乙醇溶液→充分摇匀浸泡2h (8000rpm离心10min, 取上清) →脱色处理→蒸干 (85℃水浴旋转蒸发) →乙醇溶解→脱色处理 (8000rpm离心10分钟, 取上清) →蒸干 (85℃水浴旋转蒸发) →卵磷脂成品。
(1) 浸提时间的选择。
称取1g蛋黄, 加8ml乙醇浸泡, 选择浸提时间为1h, 2h, 3h, 4h, 离心取上清, 测定卵磷脂含量, 计算得率。
(2) 乙醇用量的选择。
选择乙醇/蛋黄 (v/w) 为6∶1, 8∶1, 10∶112∶1, 即称取1g蛋黄干粉, 分别用6ml, 8ml10ml, 12ml浸提2h, 检测和计算卵磷脂得率。
(3) 提取温度的选择。
称取1g蛋黄干粉, 加8ml乙醇, 分别考察在温度为25℃, 35℃, 45℃, 55℃条件下浸提2h, 根据卵磷脂的得率变化, 确定提取温度。
(4) 脱色剂的选择。
分别用活性炭, 硅藻土, 氧化铝处理提取液2h, 通过比较脱色率选择合适的脱色剂, 并对其用量进行选择及脱色时间进行选择。
1.3 检测方法
(1) 卵磷脂含量的测定方法[5]。
本实验以卵磷脂的得率为主要参考指标。得率的计算为, 提取的卵磷脂的量与初始蛋黄的质量的比值。
(2) 脱色率的测定。
分别检测使用脱色剂处理的提取液前后的在600nm处的吸光值。
脱色率 (%) =OD1-OD2/OD1
其中:OD1为脱色前提取液在600nm处的吸光值;
OD2为脱色后样液在600nm处的吸光值。
2 实验结果与讨论
2.1 卵磷脂标准曲线制备
回归方程y=3.6798x+0.0094 (公式1) R2值为0.9991, 具有较好的线性相关性, 可以作为测定卵磷脂含量的标准曲线, 用于后续实验中卵磷脂含量的测定。
2.2 提取条件的确定
(1) 乙醇用量的选择。
图1所示随着乙醇浓度的增加, 得率随之增大, 在达到乙醇用量达到8∶1时其得率为8.3%, 之后随着乙醇用量的增大, 提取率变化不明显, 考虑提取成本的高低, 我们选乙醇用量为8∶1。
(2) 浸提时间的选择。
浸提时间对卵磷脂提取得率的影响的实验结果, 图2表明随着浸提时间的增加卵磷脂得率呈现上升的趋势, 当时间增加至2h时, 卵磷脂得率为8.9%, 此后随着时间的增加, 得率变化不大, 考虑到试验的成本, 效率等因素, 选择浸提2h作为后续工作浸提时间。
(3) 提取温度的选择。
图3研究结果表明, 随着温度的升高提取率呈现先升高后降低的趋势, 表明温度对提取率的影响不是越高越好, 在35℃时, 得率最大为9.4%, 所以我们选择35℃作为后续研究的提取温度。
(4) 脱色剂的选择。
通过对脱色剂活性炭, 硅藻土, 氧化铝处理提取液2h, 不同脱色剂的脱色效果的结果显示, 由表1可知, 脱色前后, ABS600n m会出现较大的变化, 可说明吸附剂有较明显的脱色效果, 其中5%的活性碳能产生的脱色效果较好且用量少, 价格便宜成本低所以选择5%活性炭作为脱色剂。
图4为活性炭脱色时间的对脱色率的影响, 分别考察了脱色1h, 2h, 3h, 4h。随着脱色时间的延长, 脱色率增加, 在2h达到45.78%, 之后脱色率变化不大, 即选择2h为最佳的脱色时间。
3 结语
通过对乙醇提取蛋黄卵磷脂方法的研究, 发现通过乙醇/蛋黄 (v/w) 为8∶1, 35℃浸提2h, 用5%活性炭脱色2h, 蒸干, 进行二次浸提脱色, 所得的卵磷脂得率为9.7%, 纯度高达90%以上。作为实验室乙醇浸提卵磷脂的研究, 该提取方法简单, 易操作, 且得率较高, 使用试剂少, 为后续研究工作提供数据支持。
摘要：通过对卵磷脂的乙醇提取研究, 本文建立了一套完整二次浸提, 二次脱色蛋黄卵磷脂的提取工艺。该工艺简单, 易操作, 通过最佳提取条件提取的卵磷脂得率为9.7%, 其纯度达90%。
关键词：卵磷脂,乙醇,提取
参考文献
[1] 施邑屏, 黎燕斌, 孙玲玲, 等.核磁共振光谱及薄层色谱分析针剂大豆卵磷脂[J].分析化学, 1991, 19 (7) :733～736.
[2] 迟玉杰, 林淑英.卵黄卵磷脂提取与应用的研究进展[J].食品与发酵工业, 2002 (5) :50～53.
[3] 吴汉东, 佟伟.高纯度蛋黄卵磷脂的提取工艺研究[J].Journal of Anhui Agri.Sci.2010, 38 (14) :7537～7538.
[4] 陈艳辉, 韦月园, 玉现新, 等.乙醇提取鸭蛋黄卵磷脂的工艺研究[J].广州化工, 2011, 39 (9) :75～77.
[5] 黄岛平, 莫建光, 劳燕文, 等.紫外分光光度法测定脑维营养麦片中的卵磷脂[J].光谱实验室, 2001, 18 (3) :298～300.
[6] 赵彬侠, 许晓慧, 张小里, 等.用柱层析法分离纯化蛋黄卵磷脂[J].西北大学学报 (自然科学版) , 2003, 3:33 (2) :171～173.