笔者根据国家药品西药标准[2]测定复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙的含量测定, 依据相关技术规范标准[3,4]及中国实验室国家认可委员会 (CNAL) 认可准则对实验室的要求[6～7], 通过对测量过程及所得实验数据的分析处理, 对不确定度来源进行分析, 探索影响不确定度的因素, 为评价测量结果的准确提供可信性依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
BP210S电子天平:北京赛多利斯;WFX120A原子吸收分光光度计:北京瑞利分析仪器公司。
1.2 试药
复方赖氨酸颗粒:由广西梧州三箭制药有限公司提供, 批号:091126;钙标准溶液: (1000±4) mg/L, 由国家标准物质研究中心提供;优级纯硝酸:由广州化学试剂厂生产, 批号:2009C101-1;水为超纯水。
2 实验方法
按照国家药品西药标准 (化学药品地标升国标第十六册) 的样品处理方法。具体步骤为:取复方赖氨酸颗粒10包, 研细, 精密称取细粉0.25g (约相当于葡萄糖酸钙12.5mg) , 置25mL锥形瓶中, 加水5mL, 硝酸1mL, 加热使全部溶解, 放冷至室温, 用水转移至250mL量瓶中并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。照标准曲线制备项下的方法测定样品的吸光度, 根据标准溶液回归曲线、所称取复方赖氨酸颗粒样品的质量及样品的稀释体积计算出样品中的钙含量。
3 不确定度的评定
3.1 数学模型
式中:W为样品中钙的质量分数 (mg/g)
C为样品制备液定容后溶液中钙元素的质量浓度 (ug/mL)
V为样品制备后的定容体积 (mL)
m为称取样品的质量 (g)
葡萄糖酸钙分子量为448
钙分子量为40
葡萄糖酸钙标示量为150mg
复方赖氨酸颗粒标示装量3g
3.2 复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量测量不确定度的来源分析
由数学模型中影响复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量的3个分量 (C, V, m) 来求出葡萄糖酸钙含量的合成相对不确定度。
式中:urel (Ca) 为复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量的合成相对不确定度
urel (C) 为复方赖氨酸颗粒制备定容后溶液中钙元素的质量浓度引入的相对不确定度
urel (V) 为复方赖氨酸颗粒制备后的定容体积引入的相对不确定度
urel (m) 为称取复方赖氨酸颗粒质量引入的相对不确定度
3.2.1 复方赖氨酸颗粒制备液定容后溶液中钙元素的质量浓度引入的相对不确定度分量
式中为钙元素标准溶液配置引入的相对不确定度
为回归曲线引入的相对不确定度
urel (c3) 为仪器精度引入的相对不确定度
为为重复测量引入的相对不确定度
(1) 由标准储备液配制溶液引入的相对不确定度:取质量浓度为 (1000±4) mg/L的钙元素标准溶液 (国家标准物质研究中心) 1mL, 直接用移液管从中移取标液配置。各不确定度分量计算:
质量浓度为 (1000±4) mg/L的钙元素标准溶液的不确定度
分别对1mL分度吸管和100mL容量瓶的不确定度进行评估, 玻璃容器的容量允差视为均匀分布, 因此包含因子
1mL分度吸管的不确定度
100mL容量瓶的不确定度:
(2) 由回归曲线引入的相对不确定度:配置5种标准溶液, 质量浓度分别为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ug/mL用原子吸收光谱法测量上述标准溶液的吸光度, 标准曲线A=aC+b=0.0322C+0.0024相光系数为0.9998, 根据标准溶液的质量浓度利用标准曲线求得吸光度的理论值, 计算实际吸光度Ai与理论值的残差iu=Ai- (aCi+b) , 标准曲线测量5个点 (含空白) , 即n=5时按贝塞尔公式计算求得残差iu的标准偏差:
样品质量m=0.2514g, 定溶体积250mL
根据测得的复方赖氨酸颗粒中钙含量吸光度平均值, 利用标准曲线求得的C0=4.4410ug/mL, 则标准曲线拟合引入的相对不确定度为:
式中:S为实际吸光度Ai与理论值的残差ui的标准偏差
a为线性方程的斜率
C0为元素系列标准溶液质量浓度
为元素系列标准溶液质量浓度的平均值
P为复方赖氨酸颗粒样品溶液的测定次数
N为标准溶液的测量个数
(3) 由仪器精度引入的相对不确定度:实验的数据是WFX-120A型原子吸收测定的, 仪器的精密度u=0.7%, 包含因子k=2, 则:
(4) 由样品重复测量引入的相对不确定度:
式中:n为样品溶液的测定次数;Pj为第j次测试的结果。
复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙浓度引入的相对不确定度分量
3.2.2 复方赖氨酸颗粒制备后的定容体积引入的相对不确定度分量
将制备后的复方赖氨酸颗粒定容到250mL过程中的不确定度是由容量瓶的定容体积产生的, 玻璃容器的, 容量允差视为均匀分布, 因此
由于实验控制温度接近20℃, 故温度对体积的影响可以忽略。
3.2.3 称取复方赖氨酸颗粒样品质量引入的相对不确定度分量
(1) 天平称量的不确定度u1 (m) :根据仪器检定证书, 天平称量的扩展不确定度为0.0002g, 按均匀分布进行B类评定, 包含因子k=2, 则
(2) 重复称量产生的标准不确定度u2 (m) 。按A类评定, 应用极差法计算天平称量重复性引入的标准不确定度u2 (m) :
用天平称量标准砝码9次 (=9) , 到极差R=0.0003g, 称量数据呈正态分布, 查表得包含因子k=2.97, 那么u (m) =3.4×10-5g。
将1u (m) 和u2 (m) 个分量合成, 得:
4 合成相对标准不确定度
5 扩展标准不确定度
取包含因子k=2, 得到复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量的扩展不确定度为:
式中:Q为复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量
6 复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量的不确定度报告
7 结语
(1) 按照国家药品西药标准 (化学药品地标升国标第十六册) 及中国药典2005年版附录火焰原子吸收分光光度法测定复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙百分含量的扩展不确定度为 (U=1.8%) , 即按以上操作, 其同类药品测定结果的不确定度就可以给出。
(2) 通过计算和分析可看出, 用火焰原子吸收分光光度法测定复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量时, 在测定次数有限的情况下标准溶液配置和回归曲线引入的不确定度是最大的;其次是重复测量和仪器精度引入的不确定度;而由样品消解定容和样品称量引入的不确定度可以忽略。
摘要：目的 分析火焰原子吸收分光光度法测定[1]复方赖氨酸颗粒中葡萄糖酸钙含量的不确定度来源及影响不确定度的因素。方法 通过对所得实验数据的分析和处理, 确定并简化不确定度来源, 量化不确定度分量, 计算合成不确定度和扩展不确定度。结果 计算出扩展不确定度U=1.8% (k=2) 。结论 影响其测量不确定度的主要因素是标准溶液配制和回归曲线引入的不确定度。
关键词：FAAS,复方赖氨酸颗粒,葡萄糖酸钙,不确定度
参考文献
[1] 中国药典2005年版 (二部) [S].2005:附录24.
[2] 国家药品西药标准 (化学药品地标升国标第十六册) .
[3] JJF1059-1999测量不确定度评定与表示[S].北京:中国计量出版社, 1999.
[4] 李慎安.化学实验室测量不确定度[M].北京:化学工业出版社, 2006.