论文题目：红花中羟基红花黄色素A的提取及对肝癌细胞的抑制作用
摘要：目的羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A,HSYA）是天然药物红花（Carthamus tinctorius L）药理功效中最有效的水溶性化合物。在临床研究及治疗上具有广泛的应用。对HSYA的提取研究已经很成熟,在前人的研究基础上,本文采用闪式提取技术提取HSYA,并通过单因素试验方法确定各提取因素的适宜范围,再利用正交试验最终确定闪式提取技术提取HSYA的最佳工艺条件,为后续实验提供基础。HSYA对多种肿瘤细胞的生长都有一定的抑制效果,通过HSYA对人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的作用,研究HSYA对肝癌细胞生长、侵袭、迁移、细胞周期与凋亡情况,以及其对蛋白表达的影响。方法采用闪式提取技术提取红花中的HSYA,用高效液相色谱法（HPLC）测定HSYA的含量;并以HSYA的提取含量为指标,通过单因素试验分别考察HSYA提取时最佳料液比、提取的时间和提取时电压的适宜范围,再利用正交试验确定HSYA闪式提取法的最佳提取工艺。分别用0 mg/mL（空白对照组）、0.5 mg/mL（低剂量组）、1 mg/mL（中剂量组）、1.5 mg/mL（高剂量组）的HSYA作用于人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞,采用MTT法检测HSYA对肝癌细胞增殖作用的影响;采用Transwell法检测HSYA对肝癌细胞的迁移能力及侵袭能力的影响;采用流式细胞术测定HSYA对肝癌细胞周期及细胞凋亡情况的影响;采用免疫印迹法（western blot）分析肝癌细胞中VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白经HSYA干预后的表达结果。结果（1）闪式提取法提取HSYA的最佳工艺为料液比1:40 g/mL,提取时间3 min,提取时电压80 V。（2）MTT实验结果显示,与空白剂量组比较HSYA可以抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性（P＜0.05）;（3）Transwell法实验结果显示,随着HSYA浓度的增加,细胞的侵袭和迁移能力逐渐降低,HSYA可抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）;（4）流式细胞术测定结果显示,随着HSYA浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,细胞G0/G1期比例显著增加（P＜0.05）,S期细胞比例显著降低（P＜0.05）,HSYA可以促进肝癌细胞的凋亡;（5）Western blot分析显示,HSYA还可以使VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白表达下降（P＜0.05）。结论闪式提取HSYA工艺简单,提取率高,可以用于红花中HSYA的提取。同时HSYA能抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,使其停留在G0/G1期,诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/Snail信号通路的激活有关,为HSYA治疗肝癌的临床应用提供理论依据。
关键词：肝细胞肝癌;羟基红花黄色素A;提取;生长;迁移;侵袭
学科专业：药物化学
中文摘要
Abstract
英文缩略语表
第一章 前言
一、红花的简介
二、红花中的有效成分
三、红花药理活性
第二章 红花中羟基红花黄色素A的提取
一、实验仪器和材料
二、实验方法
三、实验结果
四、讨论
第三章 羟基红花黄色素A对肝癌细胞的抑制作用
一、实验仪器和材料
二、实验方法
三、统计学分析
四、实验结果
五、讨论
第四章 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
二、致谢
三、个人简介