清远笔架茶 (Camellia sinensis (L.) O.Kuntze) 山茶属 (Camellia) 山茶科 (Theaceae) , 是清远市笔架山农场种植的特有地方品种, 叶椭形, 芽叶黄绿色, 叶质硬, 适合制作为绿茶, 茶汤香气清长持久, 滋味爽口而滑, 带甜甘味, 有解暑、化痰、生津之功效。目前主要通过有性形式进行繁殖, 但利用种子繁殖萌发率很低。实验通过用笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣作为外植体, 探索通过植物组织培养技术来解决笔架茶的繁殖问题。实验发现, 笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣均可以诱导出愈伤组织, 其中以嫩叶作为外植体时最佳, 其诱导出来的愈伤组织生长良好, 诱导率为86%, 较用嫩茎作为外植体高出58%, 比花瓣作为外植体高出9%。这一结果, 为今后继续研究笔架茶再生植株提供了实验基础。
1 材料与方法
1.1 材料
笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣, 均取自清远市笔架山农场。
1.2 方法
(1) 培养基的制备:1/2MS+6-BA2.0mg/l+NAA1.0mg/l, 121℃, 灭菌20分钟, 冷却待用。
(2) 外植体的消毒处理。
取笔架茶刚展开的嫩叶、嫩茎和花蕾用软毛笔蘸取洗洁精稀释液小心清洗, 流水冲洗1h～1.5h后, 用洁净纱布吸干;于超净工作台上经70%酒精处理20s、无菌水漂洗两次后, 置于0.1%HgCl2溶液中浸泡10min～20min;无菌水漂洗4～5次后, 用无菌滤纸吸干表面水分待用。
(3) 接种。
(1) 以嫩叶为外植体:把经上述消毒处理的嫩叶切成1cm2左右具叶脉的小叶块上表面朝上接种于上述制备好的培养基中, 每瓶接种5～6个小叶块, 共接种十瓶重复三次。
(2) 以嫩茎为外植体:把经上述消毒处理的嫩茎节间切成0.5cm长左右的茎段外植体, 接种于上述制备好的培养基中, 每瓶接种5～6段, 共接种十瓶, 重复三次。
(3) 以花瓣为外植体:把经上述消毒处理的花蕾, 剥去外苞片, 取出里面的花瓣, 接种于上述制备好的培养基中, 每瓶接种5～6个花瓣, 共接种十瓶, 重复三次。
(4) 培养。
接种后的外植体均放在25℃下进行两周时间的暗培养后, 转为每天14h散射光下继续培养。
2 结果与分析
培养30d后统计出愈情况, 结果如图1所示。
从图中可以看出, 笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣均可以诱导出愈伤组织, 但愈伤组织的出愈率和愈伤组织的生长状况均以嫩叶为外植体时最佳。用嫩叶作为外植体的出愈率为86%, 用花瓣作为外植体的出愈率为67%, 而用嫩茎作为外植体的出愈率则是最不理想的, 出愈率只有28%。在诱导愈伤组织的过程中还发现, 用嫩叶作为外植体诱导出的愈伤明显且健壮, 用嫩茎和花瓣诱导的愈伤组织不发达, 且用嫩茎诱导时极易发生褐变。
3 结语
不同器官, 其离体反应能力也不相同。中村顺行[1]报道, 茎段、叶片、子叶、根和花药的愈伤组织启动时间不同。杨国伟[2]报道, 叶和茎能产生愈伤组织, 但诱导的时间不一样, 叶为23d, 茎为11d, 而种子则不能诱导出愈伤组织。袁地顺[3]报道, 叶片愈伤组织诱导率为80%, 高于嫩茎愈伤组织诱导率53%, 嫩茎愈伤组织诱导率又明显高于根尖36%。本实验通过用笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣作为外植体, 同样发现采用不同的外植体对笔架茶愈伤组织的诱导影响很大, 笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣均可以诱导出愈伤组织, 其中以嫩叶作为外植体时最佳, 其诱导出来的愈伤组织生长良好, 诱导率为86%, 较嫩茎作为外植体高出58%, 较花瓣作为外植体高出9%。这一结果, 为今后继续研究笔架茶再生植株提供了实验基础。
摘要：实验通过用清远笔架茶的嫩叶、嫩茎和花瓣作为外植体, 研究笔架茶不同器官在诱导愈伤组织中的情况。实验发现:用嫩叶作为外植体, 愈伤组织的诱导率达86%, 而且愈伤组织发达, 其诱导率较嫩茎作为外植体高出58%, 比花瓣作为外植体高出9%。
关键词：清远笔架茶,器官,外植体,愈伤组织
参考文献
[1] 中村顺行.Cultivation and character-istics of tea callus[J].茶叶研究报告, 1984, 60:7～14.
[2] 杨国伟, 兰蓉, 王晓杰, 等.茶树愈伤组织诱导和组织培养[J].江苏农业科学, 2006 (4) :122～124.
[3] 袁地顺, 倪元栋.茶细胞培养法生产茶氨酸的技术研究——茶愈伤组织的诱导体系建立[J].福建茶叶, 2003, 23 (3) :27～28.