第一篇：pcr实验室认证体会
PCR实验室认证体会
一、申请临床基因扩增实验实验收的目的
临床基因扩增实验室近年来在我国发展很快，基因诊断技术在疾病的预防、诊断、治疗方面起到了积极的作用。由于、基因扩增检测技术的应用对、实验室的环境条件、仪器设备、试剂耗材、人员技术能力和质量控制等方面要求严格，而一些实验人员对此不甚了解，加之利益的驱使，曾经在20世纪80年代，某些沿海省份的实验室未按要求规范设置，出现气溶胶污染，导致大规模假阳性结果报出，为临床诊断造成了极大的困难。临床基因扩增实验室为了规范实验室，保证基因扩增技术有效应用，防止假阴性、假阳性结果的报出，为临床出具合格而可靠的报告，申请临床基因扩增实验室的验收是必然而且也是必要的。
二、开展临床基因扩增实验的必备条件
根据卫生部2002年1月14日发布了卫医发[2002]10号《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(以下简称《办法》)及其附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》，及同年2月20日卫生部临床检验中心发布《临床基因扩增实验室工作规范》，明确规定临床基因扩增检验实验室开展PCR技术必需具备的条件：
(1)二级以上医院实验室，经卫生部临床检验中心验收合格; (2)从事基因扩增实验操作的人员必须经过培训并取得上岗证;
(3)使用经国家药品监督管理局批准的允许进入市场销售的商品试剂盒;
(4)开展卫生部允许开展的项目。具备了以上几条后，我们从事临床基因检测任务才是符合要求和规定并对临床出具的报告有保障的。
三、临床基因扩增实验室验收准备工作 1.硬件准备
(1)实验室整体布局：
根据《办法》要求，临床基因扩增检验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区，标本制备区，扩增产物分析区。由于我实验室使用的是罗氏公司的Lightcycler实时荧光定量扩增仪，扩赠后产物不需开盖处理直接检测，所以扩增区和扩增产物分析区合为一室，此区为负压。实验室设计时按照《办法》规定，三个区域相互独立，并有各自的缓冲区域(见图1) (2)各工作区域仪器设备
各工作区域的仪器设备及物品，包括椅子、办公用品、清洁用品等均不能拿出本区域，所有可移动物品均应有本区域的标示。
各区域应具备的设备配置为：屋顶紫外灯、近台紫外灯、一次性手套、一次性鞋套、工作服、废液缸、扫帚、拖把、废纸褛篓、微量加样器(覆盖1-1000μl)，经高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)、笔、纸等。 各工作区域的特殊配置包括：
(1)试剂贮存和准备区：2～8oC冰箱、漩涡震荡器、超净工作台。
(2)标本制备：2～8oC冰箱、-20oC冰箱、高速台式冷冻离心机、漩涡震荡器、金属加热模块、超净工作台。
(3)扩增及产物分析区：罗氏Lightcycler荧光定量核酸扩增仪、电脑、打印机。
同时：进入各工作区域必须严格按照单一流向，并用明显的箭头表示，个区域用不同的颜色以示区别。即试剂贮存和设备区(蓝色)→标本制备区(白色)→扩增及产物分析区(粉色)。 2.软件准备：
(1)临床基因扩增实验室文件编写： 本实验诊断中心正在进行ISO15189实验室的认可工作，故质量手册同中心统一，其它文件包括：程序文件、标准操作程序(SOP)、相关图表等由本实验自己制定。制定的原则根据卫生部下发的两个文件，并结合本实际情况编写适合本实验实际情况编写适合本实验室的切实可行的文件，做到“写你所做的，做你所写的，记录你已做的”。具体编写内容如下：
①程序性文件：PCR实验室管理制度，PCR实验室人员管理制度，仪器设备的管理程序，PCR实验室仪器设备操作程序，PCR实验室仪器设备校准程序，PCR检验实验操作程序，实验室消耗品购买、验收及储存程序，PCR试剂购买、验收及储存程序，PCR检测标本的管理程序，PCR实验室记录控制程序，PCR检验结果报告的控制程序，PCR实验室室内质量控制程序，抱怨处理程序，实验室生物防护错施，实验室的清洁程序，实验室废弃物处理程序等。
②标准操作程序(SOP)：试剂准备区工作制度，样本准备区工作制度，PCR扩增区工作制度，半自动型蒸汽压力灭菌器标准操作程序，高速离心机的标准操作程序，恒温金属浴使用规程，漩涡震荡器标准操作程序，洁净工作台的标准操作程序，可调式加样器标准操作程序，恒温金属浴的校准程序，标本采集、运送、接收、保存的标准操作程序试剂准备的标准操作程序，核酸提取的标准操作程序，Lightcycler使用的标准操作程序，统计学者质量控制的标准操作程序，消耗品验收质检的标准操作程序。试剂质检的标准操作程序等。
③相关图表：PCR实验室工作人员一览表，实验室主要负责人简历表，PCR实验室工作人员档案，PCR实验室人员培训计划，仪器设备一览表，仪器设备损坏、故障、修理记录，仪器设备的报表申请表，仪器维护保养记录，Lightcycler荧光定量扩增仪维护保养记录，恒温金属校准记录，采购申请单，试剂领取验收记录，试剂质检记录，消耗品质检记录，消耗性材料领取验收记录，标本接收等记表，不合格标本记录，报告单发放接收登记表，特殊报告要求登记表，抱怨情况登记表，抱怨处理登记表，PCR实验室日常工作核查表，Lightcycler仪器使用记录，试剂使用记录，PCR实验室室内质量控制失控原因及纠正错施记录，样本处理记录，冰箱温度记录-试剂准备区，冰箱温度记录-样本准备区，环境温度记录-试剂准备区，环境温湿度记录-样本准备区，环境温度记录-PCR扩增区，PCR实验室日常工作核查表，紫外灯使用登记表，温度计校准记录，PCR实验室平面图等。 (2)人员管理：
文件要在临床基因扩增实验室工作的实验人员必须经过培训并取得上岗证，所以在申请实验室验收前，要至少一名人员参加卫生部检验中心举办的临床基因扩赠实验室上岗培训班并取得上岗证。同时实验室还应该制定自己的年度培训计划，保证实验室人员能不断得到培训。 (3)实验方面：
使用经国家药品监督管理批准的允许开展的项目。
四、临床基因扩增实验室验收申请
如果以上方面准备就绪后，就可以进行临床基因扩增实验室验收申请了，但以本人的经验，建议在实验室设计好后，先请验收专家进入实地看一下，并提出他们的宝贵意见，以免在验收时因离要求有差距而成耽误了验收，同时编写好的程序性文件和SOP文件也应请才、专家过目，得到认可后再提交申请，内容包括： 1.基因扩增检验实验室基本情况：
(1)实验室所属法人单位名称、地址、电话、联系人等。 (2)实验室人呀情况和职称比例。 2.应提供的资料
(1)《医疗机构职业许可证》复印件;
(2)拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况，对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析;
(3)拟设基因扩增检验实验室的设置平面图; (4)实验室主要负责人简历表; (5)实验室工作人员一览表; (6)主要仪器设备表;
(7)拟开展的临床基因诊断项目;
(8)实验室相关程序文件和标准操作程序(SOP); (9)检验报告样单; 3.希望验收时间 4.声明
本实验室自愿申请卫生部临床检验中心组织的技术验收，并愿意承担下列义务：遵守《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因诊断实验室工作规范》及与关规定;不论能否获得通过验收，预付验收阶段的全部费用。
五、现场技术验收
当提交临床基因扩增检验实验室技术验收申请表后，大约两周时间内(视具体情况而定)卫生部临床检验中心会将临床基因扩增检验实验室收通知传真或邮寄至你处，告知验收工作的具体时间、专家组成员、验收程序及验收费用等。
在验收当天，专家组成员将对实验室布局、实验室设置及仪器设备配备情况、实验室表示、程序文件标准操作文件的编写、试验记录等情况进行验收，同时还会现场让实验室技术人员进行临床标本的操作，实验结果的正确与否也是实验室验收合格的依据之一。现场提问时专家会对你所编写的文件进行提问，主要涉及实验室污染、是内质控、标本的收集及保存等。验收结束后，专家会填写临床基因扩增检验实验室技术验收报告，对验收结果进行总结，提出整改要求和意见。
六、临床基因扩增检验实验室收体会 1.认真学习和领会卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》及其附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》，及卫生部临床检验中心发布《临床基因扩增实验室工作规范》的内容，并将以上两个文件的内容落室到自己所编写的程序文件和标准操作程序中。
2.实验室布局设计好后一定要请专家实地进行一下检查，如果条件不具备，也可以将实验室设计平面图寄给专家，因为每个实验室都有自己的具体情况，如果是新建的实验室可以按照卫生部临检中心提供的标准实验设计图来设计，如果是在老的实验室基础上改造，就应该多听一些专家的意见，以免在验收的时候因实验室设计不合理而耽误验收以至延误临床工作的开展。
3.程序性文件和标准操作程序编写时，最主要的是可操作性要强，尤其是SOP文件，使用频率很高，与实验室的日常工作密切相关，写的要具体一些，格式并不是很重要，主要是让第依次接触该SOP的人也能够按其完成相关操作。同时还要集注，该文件不是用来验收的。而是给自己实验室人员用的，要认识到文件对保证检验质量的重要性，这样在编写时就能更细化，更具体，更实用。文件的编写是整个实验室验收工作任务重要的一个环节，也是验收工作时检查的重点，所以在编写文件时要让每一个实验室的人员都参与进来，对所写的内容、程序和要求都要知道，并能遵守执行。在验收的时候，专家会对你所写的文件内容进行提问，如果一个实验室操作人员对其应该遵循的管理制度和SOP一无所知之甚少，这样对日常检验的质量控制也是没有好出的。文件编写好后，建议也请专家过目，得到首背后再提交认可申请。
4.文件编写好后，应该按其执行，做到“记录你所做的”简单的说就是将常规工作中所做的记录下来，一般说，需要记录的有临床标本接收中的饿患者个人资料、标本接收日期、标本状态、唯一编号等;检测前实验室的清洁;检测中实验记录，试剂厂家、批号、检测日期、检测结果、质控记录及分析、检测人(签字)、仪器运转情况等;检测后实验台面、仪器设备等的消毒和清洁、紫外线照射等。依次两次的记录并不难，难的是持之以恒。所以许多记录我们多记录我们可以把做到成表格的形式，记录时在相应的条款上打“√”就行了。
5.实验过程严把质量关。我们编写的质量手册的木的的是规格实验操作整个过程，做到实验过程有章可循，实验记录有据可查，保证实验结果的可靠性和准则性。由于基因扩增技术特殊性，即使严格按质量手册进行操作，也难免出现错误结果，因此包括试剂空白对照，阴性标本对照、临界值阳性标本对照等，分别监测试剂配制与加样过程中是否存在污染，标本核酸模板提取过程红是否存在污染，标本检测过程中是否在假阴性结果和结果是否准确等。
6.工作量少影响质量保证系实施。严格按临床基因扩增检验实验室技术要求通过验收的实验室，存在一定运行成本，需要有一定临床标本量的支持;如果某一医院医疗资源不足，标本来源不足以支持运行成本时，就会想方设法去减少运行成本(包括试剂成本和劳务成本)，导致检验质量难以得到保证。因此建立了临床基因扩增检验实验室后，应根据本医院的情况，制定可行的试验方案(如实验周期、合理接受外来标本等)，做到既保证临床标本结果的质量又不浪费成本。 以上只是本人对临床基因扩增检验实验室技术验收及日常工作的一点体会，望和大家多多交流。 参考文献
1.申子瑜，李金明.《临床基因扩增检验技术》，人民卫生出版社。
第二篇：PCR实验室
高端PCR实验室控制设计说明
PCR实验室即分子生物学实验室，在医疗、科研、生物技术方面得到广泛的应用。因其在不同行业的应用各有区别，在具体设计时也有不同之处，就医疗机构的应用而言，主要使用三区或四区设计，即试剂准备区、样品提取区、扩增分析区;此类三区设计时候应用于类似荧光定量型或同类PCR分析设备，及扩增与分析过程在设备内一次完成。而四区设计在三区的基础上讲扩增分析区拆分为扩增区与分析区适用于其他类型的pcr设备及手工处理。
在PCR实验的设计上，经过多年的经验累积，已经在一些关键技术上达成了共识。 因为PCR实验中所产生的DNA与RNA片段过于微小，以至于可以穿透高效过滤器，所以在实验室设计上已经不在强制要求设计高效净化系统，但是为了提高实验环境水平及保护实验室内的敖贵设备方面，如果在具备条件的情况下可考虑追加高效空气净化系统;建议净化级别万级。 在PCR实验中所产生的DNA与RNA片段污染是一直以来PCR实验的重点问题。此类污染主要至上次试验中所产生的基因片段对下次试验产生的污染，而且一旦试验环境中的污染形成后很难处理。因为消毒等传统方式对于基因污染没有很良好的效果。所以在PCR实验室设计中一般将整套实验室设计为全新风型实验室，这样而已通过有效的换气次数来达到净化室内污染的作用。 而在控制方面也有很多不同之处，因为各单位对PCR实验的重视程度各有不同，所以在设计上也有不同，主要的控制设计有定送定排式压力控制系统、变送定排式压力控制系统变送变排式压力控制系统。在控制设备方面也有很多区分如压力无关型控制系统、压力有关型控制系统。
根据业主要求，本PCR实验室为三区设计，各区可独立使用，不设置高效过滤系统等相关要求，根据业主以上要求，我方给出的设计方案为压力无关型变送变排压力控制系统。 本系统的特点是，设备启动后可根据实验室内使用节点调节送风量及排风量来控制各房间状态，系统说明见下图
每个房间可分别控制，使用时通过房间开关输出启动信号，当设备接到启动信号时设备运行，运行中根据管道压力反馈决定变频器大小，房间内送排风量由压力无关型风量调节阀控制。 当有多个房间开启或关闭时，设备更加管道压力反馈，调节设备变频器增加或减少送排风量来稳定管道压力。各房间内压力又房间内的压力无关型定风量阀进行控制。
当BSC(生物安全柜，B2全排)开启时BSC专用供风机组运行，BSC-供风机-排风机连锁运转。
当BSC做变风量调节时，根据房间内压力变化，BSC专用供风机组前安装的压力无关型变风量调节阀根据压力变化增减送风量，确保房间压力执行在可控范围内。
当房间不适用时，房间与缓冲间均关闭电动密闭阀，确保房间处在密闭状态避免布朗运动造成的可能污染风险。
房间换气次数均按照一定净化标准设计，当室内污染发生时，通过一定时间的换气处理后，污染问题可以基本解决。 本系统如果业主需要，可在室内送风口末端加装高效过滤设备，房间可升级为净化型实验室。
压力无关型风阀简介：压力无关型风阀的特点是不会根据管道压力的变化而影响风阀内部的送风量，在一定管道压力区间内能够自行调节阀体阻力，来稳定送风量，是高端实验室必备的关键部件，目前此类阀体技术均有国外生产厂家控制，目前国内主用使用的产品有妥思、文丘里、西门子等品牌。
第三篇：PCR实验室装饰要求
一、实验室彩钢板壁板技术要求
1、工程材料概况
本次工程墙面采用的彩钢板为立板铁皮板厚度0.5mm岩棉50mm手工夹芯岩棉彩钢板密度120kg/m³净化复合板，顶板铁皮版厚度0.5mm;玻镁+岩棉 50MM厚手工夹芯岩棉彩钢板 密度120kg/m³用于实验生产区域(耐火极限达2小时);用于实验区域A级防火板。
彩钢板壁板墙面表面光滑平整、无凹凸部分及划痕，且不产尘、不积灰、耐腐蚀、防潮防霉、容易清洁。洁净室的吊顶与壁板，壁板与壁板，壁板与地面链接无死角(阴角不能呈90度直角)，内壁板转角应为不小于50mm内、外圆弧铝合金型材(与壁板同色)，壁板阳角处应为不小于50mm外圆弧铝合金型材(与墙板同色)。
1.1实验室彩钢板壁板
手工彩钢板壁板的尺寸：彩钢板壁板的基本宽度为：1180mm，厚度为：50mm。壁板与壁板之间用中置铝料连接，壁板之间的理论缝隙间距为3mm，缝隙用道康宁等国内外知名品牌中性硅胶密封。壁板的双面彩钢板(面漆为烤漆)宝钢板或高于此品牌等，厚度大于等于0.5mm(不锈钢面板厚度与之相同,材质2B-304)，壁板内夹铝蜂窝。
1)质量标准
安装竣工的彩钢板壁板系统符合以下标准：
本次工程的洁净室系统符合中国制药企业GMP及欧盟药品GMP认证要求。 2)板材
本次工程壁板的双面彩钢板颜色为灰白色(不锈钢面板除外)，出厂前在其表面覆以塑料薄膜以防止运输及安装过程中损坏及划伤。
3)表面平整度
彩钢板壁板表面平整光滑、无凹凸部分及划痕。板面平整度为(2米)：<1.0mm，板四个边的直线度为(2米)：<1.5mm。
4)测量偏差标准(测量偏差标准如下)： 高度不超过 1.5mm/块; 宽度不超过 0.5mm/块; 厚度不超过 1.0mm/块。 5)隔音
房内测得的隔音值为： 完整的墙大于48dB; 带窗的墙大于40dB; 门大于32dB。 6)保温
不保温墙体的传热系数为：4W/ m2K; 7)防火性能
彩钢板夹芯板内衬铝蜂窝和玻镁板墙体的耐火极限为不小于1小时。要求提供检测报告。
1.2可上人吊顶
本次工程吊顶为可上人吊顶。顶板的上下表面均为彩钢板，两块彩钢板板之间铝蜂窝和单层玻镁板。
1)顶板
吊顶板上、下表面均为0.5mm厚武钢产或宝钢产彩钢板，颜色为灰白色。顶板生产出厂时，其表面覆盖有塑料薄膜以防止顶板在运输及安装过程中造成损坏。
2)质量标准
安装竣工的彩钢板顶板系统符合以下标准： 洁净施工及验收规范
本次工程的洁净室系统符合中国制药企业GMP及欧盟药品GMP认证要求。 3)隔音
房内测得的隔音值为： 完整的顶板大于35dB; 开过洞的顶板大于28dB。 4)抗压性能
可上人顶板可承受超过100kg/m2的负载， 压差小于100帕时，无需特别处理。 由于顶板可承受超过100 kg/m2的负载，因此在顶板的吊杆选择上采用10mm的全螺纹镀锌丝杆。丝杆的承重超过300kg。同时在全螺纹镀锌丝杆安装后必须进行承重试验抽检，确保安装后的吊杆具有完全的承载能力。 5)保温
顶板的导热系数为0.0952W/mK。 6)防火性能
顶板的耐火极限为不小于1小时，要求提供检测报告。 7)密封性能
实验室工程不同于普通厂房之处在于医药洁净厂房工程的围护结构在工况切换的进行情况下必须考虑具备良好的严密性能，特别保证建筑结构抗震的前提下还具备震后依然密封的性能，
天花龙骨。根据本次工程的特点，制药洁净厂房对细菌量和洁净度的控制要求高。因此，选用的天花板龙骨既要满足强度要求，又要能满足吊顶系统的密封要求。
为了确保房间的密封度和防止吊顶外部空间等进入实验室内，在吊顶上部的龙骨两侧再用镀锌钢板加以密封。
8)吊杆密度不低于1米间距，与顶部连接牢固，与板面连接处平整牢固。 1.3洁净密闭观察窗
洁净密闭观察窗的基本参数要求为：双层玻璃窗，玻璃为8mm厚的钢化玻璃，窗的尺寸：根据实际情况定制，主要是与壁板的规格相配套。尺寸详见施工图纸及施工说明。
窗框
窗框选用铝合金框体喷塑，颜色与壁板相同。窗和墙面成为一个平面。 玻璃
为8mm厚的钢化玻璃。玻璃的防火性能大于90分钟。要求提供检测报告。 玻璃的安全性
玻璃彼此是独立的，若有一块损坏实验室的生产不会因此受到干扰。 测量偏差标准 高度约 1.0mm; 宽度约 1.0mm; 厚度约 0.5mm。 1.4洁净密闭门
本次工程的洁净密闭门为钢制洁净密闭门，带自动下门封，门上设观察双层玻璃窗，窗玻璃采用5mm厚钢化玻璃，双层玻璃中间有吸湿剂。
洁净密闭门、安全门的尺寸：按图纸要求，根据业主的要求进行加工生产。 1.5实验室C栋1层高度要求达到2.8米，实验室C栋二层高度要求达到2.6米，实验室C栋3层高度要求达到2.6米。
第四篇：PCR实验室审核表
临床基因扩增检验实验室技术审核申请表
□初次验收 □换证验收
一、基因扩增检验实验室基本情况
(一)实验室所属法人单位名称: 地址: 邮编: 法定代表人: 实验室负责人: 联系人： email: 电话: 传真:
(二)实验室总人数: 名
( 其中初级职称人员 名，占 %;中级职称人员 名，占 %;副高级职称人员 名，占 %;高级职称人员 名，占 %。)
二、提供资料状况
1.医疗机构相关资料
(1)《医疗机构执业许可证》复印件;
(2)拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析;
2.实验室检查申报表
附表1 临床PCR实验室基本情况登记表 附表2 临床PCR实验室检验项目登记表 附表3 临床PCR实验室负责人登记表 附表4 临床PCR实验室工作人员一览表 附表5 临床PCR仪器设备登记表
3.实验室现行有效的程序文件、标准操作规程、规章制度、记录 附表6 程序性文件登记表 附表7 SOP文件登记表 附表8 管理制度登记表 附表9 记录登记表
4.组织机构框图(附件1) 5.实验室平面图(附件2); 6.检验报告样单样张; 7.其它有关质量文件名称或证明材料。
三.希望验收时间为 年 月 日至 年 月 日 四.声明
本实验室自愿申请进行临床基因扩增检验技术验收，并愿承担下列义务：
遵守《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》和《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》及有关规定;无论审核是否通过，将承担由此产生的相关费用。
申请单位法定代表人(签名)：
申请单位(盖章)
年 月 日
第五篇：PCR实验室工作制度
1. 实验室内必须保持安静、整洁，不得大声喧哗，不得在室内从事与实验无关的事宜。 2. 禁止与实验无关人员出入，实验室主要通道入口及功能区域应有特殊的标志。 3. 实验室各区域有各自专用的实验设备和器材，包括工作服、拖鞋、洁净鞋，一次性消耗品、办公用品等，各有明显的标志，绝对不能混用。 4. 严格遵守人员及物品按单向流动，不得交叉混流。
5. 严格按照基因检测操作规程进行实验和使用仪器设备，定期检测、校准并做好记录工作。 6. 每次基因检测中应设立阴阳对照。
7. 实验室工作人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，实验开始前必须做好室内及工作台的清洁消毒，离心管、吸头等一次性用品需高压灭菌处理。
8. 工作结束后必须立即应用10%次氯酸钠溶液消毒实验室台面，并用紫外灯照射实验室。试验中使用过的吸头，离心管等应送到指定的地点进行处理。
9. 每日工作开始前需开启风机及空调系统，在运行30分钟后，记录各压差表数，如压差低于设定值的20%需及时清洗过滤系统，并填写相关记录表。如风机系统出现故障时，该实验室应停止使用。
北京海乐思医学检验所