刺槐花具有一定药用价值和食用价值, 经过多年来的分析和研究, 发现刺槐花的药理和化学成分, 其中存在一定量的黄酮类化合。在分析刺槐花中存在的实际黄酮类成分的时候合理利用高效液相色谱-质谱联用技术, 分析和研究11中刺槐花黄酮类成分, 这种方式可靠、方便、简单、具有一定应用价值。
1 仪器和试药
安捷伦1100型液相色谱仪, 主要构成就是高性能自动进样器、二元泵、G1315B二极管检测器、在线脱气机, 并且还需要配备一定的Qualitativenalysis质谱分析软件、Mass Hunter色谱工作站、电喷雾离子源等设备, 采集某区域内部的刺槐花, 使用的试药是通过某医院提供的刺槐苷, 水是纯净水、乙腈是色谱纯, 其他试剂都属于分析纯[1]。
2 方法
2.1 供试品溶液制备
精密称定20g刺槐花鲜品, 放置在带塞子的锥形瓶中, 精密加入250ml70%的乙醇, 进行一定密塞, 并且三十分钟超声提取三次, 过滤以后合理合并滤液, 利用石油醚进行脱脂, 适量水热容, 提出正丁醇, 回收提取液直到干, 利用50m L甲醇来溶解提取物。
2.2 色谱及质谱条件
2.2.1 液相色谱条件
流动相是0.1%的醋酸和乙腈, (250mm×4.6mm, 5μm) 色谱柱Agilent Zorbax SBAq C18, B相是0.1醋酸, A相是乙腈, 通过梯度洗脱。基本过程是:5%-20%A、0-30min, 20%-45%A、30-6min, 45%-60%A、60-80min, 10μL进样量。25℃柱温、1.0 m L/min流速。
2.2.2 ESI质谱条件
ESI质谱条件是利用ESI离子源, 在具备正离子的基础上, 3:1的柱后分流比, 基本参数是:40psi雾化气压力、350℃干燥气温度、10m L/min干燥气流速、4000V毛细管电压, 选择200V和120V的碎片电压, 扫描质量的范围m/z是100-1000, 参比离子m/z是922.0097和121.0508.
3 结果和讨论
3.1 实验条件优化
刺槐花中最基本的成分是黄酮类, 为确保具备比较良好的峰形, 流动相中适当加入冰醋酸, 为具有较好重现性的总离子流图, 在配置流动相时, 需控制冰醋酸质量分为0.1%, 同时, 利用正离子来扫描质谱检测进行实验。
3.2 刺槐花中化学成分的鉴别
刺槐花中提取的黄酮类成分典型液相图如图所示:发现当检测具有多于23个峰的时候, 合理鉴别11个峰, 对比分析物质的质谱图和保留时间, 发现4峰是属于刺槐苷, 峰3-7、1出现类似的紫外光谱, 有机结合相同的 (m/z=287, [苷元+H]+) 苷元离子峰和质谱二级裂解, 其中都具备山奈酚的糖苷。1峰适当脱去相应的质量分数为146的鼠李糖结构碎片, 经鉴定, 这种化合物中具备山奈酚-3-0-α-L-鼠李糖苷, 经分析峰4以及6的分子离子峰发现都属于三糖苷, 其中4峰是属于刺槐苷, 也就是说刺槐花中具备黄酮苷含量最高, 主要就是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷;峰5具有类似于峰4的解列碎片和相对分子质量, 反向可能存在不一样的糖基, 峰6包含的是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。在反相柱上, 相比较于葡糖糖基糖苷, 半乳糖基的糖苷会先出峰, 通过分析, 峰7、5、3, 都属于二糖苷, 但是峰3和峰7具有不相同的裂解形式, 峰3以及峰5会先脱掉质量分数为162的六碳糖结构碎片。但是峰7会先脱掉146质量分数的鼠李糖结构碎片。在山奈酚的3, 7-二氧糖苷的前提下, 峰5和峰3属于奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷以及山奈酚-3-O-β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷, 峰7就不相同, 属于山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-葡萄糖。此外, 峰8-峰11也会形成一定的紫外光谱, 经过质谱二级解列, 可以得到具备相同m/z=285的苷元离子峰, 因此, 都属于刺槐素的糖苷, 合理分析山奈酚糖苷, 可以发现实际包括刺槐素-7-O-β-D-木糖基 (1→2) -[α-L-鼠李糖基 (1→6) ]-β-D-葡萄糖苷和刺槐素-7-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-β-D-葡萄糖基 (1→2) -[α-L-鼠李糖基 (1→6) ]-β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-半乳糖苷;另外峰2具有m/z=303的苷元离子峰, 有机结合质谱数据以及紫外数据, 经鉴定, 属于槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基 (1→6) -β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。
4 结语
综上, 依据HPLC-DAD-ESI-MS/MS技术, 有机集合碎片离子子技技术术术和和和紫紫紫外外外线线线数数数据据据分分分析析析, , , 鉴鉴鉴别别别和和和分分分析析析黄黄黄酮酮酮苷苷苷类类类化化化学学学成成成分分分, , , 可可可确定出11种成分, 此检测方式, 十分灵敏、快速、准确、高精度, 是是一一种种有有效效控控制制刺刺槐槐花花成成分分的的方方式式。。
摘要：本文主要分析刺槐花中黄酮类成分的高效液相色谱-质谱联用技术, 利用乙腈-水和安捷伦Zorbax SB柱作为基本流动相, 以此来合理分离刺槐花中存在成分。
参考文献
[1] 王岚, 王雪芹, 仲浩等.刺槐花中黄酮类成分的高效液相色谱-质谱联用技术分析[J].食品与药品, 2013 (4) :240-241, 242.