想必大家在写论文的时候都会遇到烦恼，小编特意整理了一些《中药引发的生殖毒性研究论文(精选3篇)》，欢迎阅读，希望大家能够喜欢。摘要：为探讨中药健宫散对产后子宫炎奶牛治疗前后血清中部分白细胞介素含量的影响以及研究健宫散的抗炎作用机制，选取年龄、胎次、产奶量相近的荷斯坦奶牛18头，按照B型超声波检查结果分为正常组、治疗组和患病组，每组各6头，治疗组进行口服健宫散处理。
中药引发的生殖毒性研究论文 篇1：
模式生物果蝇在中药活性评价及其治疗功效表征中的应用与展望
[摘要]果蝇作为生命科学领域中重要的模式生物，被广泛用于人类疾病的研究，这些研究促进了对病理生理活动中相关蛋白分子表达和信号通路的理解，同时，也建立了诸多具有丰富遗传特征的果蝇品系。人们发现，这些果蝇品系作为一类新兴人类疾病模型，可以被应用于活性评价及药物筛选。中药活性评价技术与方法的匮乏是制约中医药发展的瓶颈问题之一。果蝇因其繁殖迅速、生命周期短、整体作用、品系丰富、与人类高度相关等特点，尤其适用于成分复杂的中药的活性评价与筛选。该文就近年来利用果蝇进行的衰老、神经退行性疾病、代谢紊乱及糖尿病、睡眠障碍、肠道免疫、生殖、肿瘤、心脏功能等疾病模型的研究及药物活性评价的研究进展进行了综述。
[关键词]
果蝇；模式生物；抗衰老；神经退行性疾病；代谢紊乱；睡眠障碍；肠道免疫
果蝇是生物学与基础医学研究领域中极为重要的模式生物。果蝇的全基因组测序已于21世纪初基本完成，近75%的人类疾病基因在果蝇中有相对应的直系同源物。同时，果蝇携带许多便于遗传操作的表型标记、分子标记或其他特性的特征染色体。基于清晰的遗传背景和便捷的遗传操作，果蝇在发育生物学、生物化学、分子生物学、神经科学等领域逐渐得到了广泛的应用。
果蝇具有繁殖速度快，生命周期短，生理结构简单，繁殖量大，培养费用较低等特点，且与哺乳动物在生理学、生物学和神经系统机能等方面比较相似。果蝇每12～16周完成1个世代，1对果蝇可产400～500只卵，染色体仅有4对（容易改造）。在一个较短的生命周期内（25℃左右，8～12d），果蝇的发育经历胚胎、幼虫、蛹和成蝇期4个阶段，每个阶段都可被应用于不同目的的实验研究。胚胎通常用于基础发育研究，以检测从神经元发育到整个发育模型的正确形成。幼虫通常被用于研究一些生理过程以及觅食行为。蛹可用于研究某些特定的发育过程。果蝇成虫大脑内约有10万多个神经细胞，可形成复杂的神经回路和神经纤维网，借此调节各种行为，如飞行、打斗、梳理、觅食、学习和记忆、睡觉和昼夜节律等。因此，许多作用于哺乳动物中枢神经系统的药物被证实能在果蝇的大脑内发挥同样的作用。近年来，果蝇作为新兴整体动物模型，通过转基因技术、基因定点敲除等有效的基因组操作，逐渐被应用于药物活性的评价以及先导化合物的高通量筛选，不仅缩短了研究周期，也降低了科研成本。中药，因其对人类健康的巨大贡献，日益受到国内外研究者的重视。但中药及方剂成分复杂，适宜的活性评价手段的缺乏仍是制约中医药研究的瓶颈问题。模式生物果蝇因具有上述特点，并可观察药物的整体作用，尤其适用于中药复方、单味中药及其成分的活性评价与筛选。
1果蝇在药物活性评价中的应用
1.1果蝇在抗衰老药物研究中的应用
果蝇作为一种真核多细胞生物，因其寿命短、繁殖力强，且其代谢、生理状况和生长发育等也同哺乳动物基本相似，是研究寿命及抗衰老药物的理想模型。影响衰老的因素很多，如遗传、环境、代谢等，影响衰老的信号通路如胰岛素信号通路（IIS）、雷帕霉素标靶（TOR）信号通路等也被证实在果蝇衰老中发挥重要作用。饮食限制、热量限制以及自由基清除剂均被证实具有抗衰老作用。与人工合成的抗氧化剂相比，一些中药经研究发现不仅具有较高的抗氧化活性，同时具有毒副作用较小的特点。果蝇寿命实验表明，中药复方如地黄饮子、参七片、乌杞胶囊及何首乌、当归、黄芪、丹参等7味药组成的补血复方确有延年益寿的功效。香椿子、六味地黄生物制剂正丁醇提取物、山楂醇提物通过抗氧化机制发挥延缓衰老作用。中药中的多糖类成分能不同程度延长果蝇寿命，如补益类中药党参、短柄五加、长山药、北五味子等，这一共性特征将有利于进一步探究补益类中药延缓衰老作用的物质基础。小分子多酚类物质白藜芦醇，可激活长寿基因SIRT1，进而影响下游因子及其信号通路的表达，发挥抗氧化、抗自由基、免疫调节、抗炎、神经保护等作用，多方面协同产生延缓衰老的作用。王沂等从厚朴中分离提纯厚朴酚，发现厚朴酚具有较强的过氧化物和羟基自由基清除能力，对果蝇细胞的生理及生化代谢过程起到保护作用，延缓细胞衰老，从而使果蝇寿命延长。
尽管许多中药通过果蝇寿命实验证实其抗衰老作用，但研究结果多数局限于对果蝇体内少数与自由基氧化相关的指标及给药组存活数的测定，而未能深入探讨果蝇寿命延长的分子机制。戴秋萍等利用基因芯片表达技术研究番茄红素对果蠅寿命的影响，初步发现涉及信号传递、物质代谢、转录、肿瘤抑制等过程的98个基因在加入番茄红素10d后上调。上述研究开启了一种新的研究模式，应用组学技术可高效地确定药效物质及其作用机制，便于深入细致地探讨中药的抗衰老作用。
1.2果蝇作为神经退行性疾病模型的研究及应用
人类神经退行性疾病主要是一类由神经元的退行性病变和凋亡导致个体死亡的疾病，包括阿尔茨海默病（Mzheimer’s disease，AD）、帕金森氏病（Parkinson’s disease，PD）、多聚谷酰胺疾病（polyglutamine disease）、肌萎缩性脊髓侧索硬化症（amyotro—phie lateral sclerosis）等。果蝇不仅具有与人类神经退行性疾病同源的致病基因，等基因，在发生过程等方面亦有与人类相似的表型，这使得果蝇成为研究人类神经退行性疾病极为简单、高效的工具。可用果蝇研究的神经退行性疾病模型和相应的果蝇表型见表1。各类果蝇模型的表型存在一些共性特征，如视网膜变性、运动缺陷、爬坡缺陷和寿命缩短等方面。因此，治疗神经退行性疾病的药物筛选可选取特定表型作为评价指标，如观察药物对眼部粗糙病变、运动及爬坡缺陷的改善和正常活动的恢复。
利用分子遗传学方法构建的Gal4/UAS系统可以使特定基因在果蝇的特定部位和不同的发育阶段特异性表达，目前已通过正向遗传学方法、逆向遗传学方法及转基因方法构建了包括AD，PD在内的多种神经退行性疾病的模型，这些模型的建立将有利于药物作用靶点的发现和药物进一步筛选。
目前药物筛选中观测较多的指标有视网膜的退化程度、眼部病变、寿命情况和行为学能力等。以转基因果蝇为模型，杨巧巧等发现桑杞脑康颗粒对AD有认知改善作用。地黄饮子可通过上调转Tau基因果蝇P13K，AKT，dTOR mRNA的表达，改善其学习记忆能力。进一步实验表明，地黄饮子调控的dTOR信号通路中，4E-BP和p70S6k的mRNA和蛋白表达下调。Liu等通过AD果蝇模型筛选体系，评价临床使用的23种植物药的神经保护活性，筛选出5种具有显著抗蛋白神经毒效应的提取物，包括芫荽、甘松、何首乌、地黄、花楸等。进一步实验表明，何首乌提取物分离得到的单体成分二苯乙烯苷（2，3，5，4一四羟基二苯乙烯2-0-β-D葡萄糖苷）在果蝇和人类细胞上显示出类似的抗蛋白神经毒的神经保护活性。姜黄素、藿香中提取的金合欢素、蓝光激发的TPPS（四苯基卟吩）、强力霉素、y-分泌酶抑制剂L-685458、阿片受体拮抗剂nahrindole等单一中药成分或化学物质均可调节β-淀粉样蛋白（Aβ）的过度表达，缓解Aβ过表达引起的神经损伤，改善运动障碍或其他方面的缺陷。番茄红素使Aβ果蝇脑组织病变空泡形成减少，同时使果蝇体内SOD活性增强，初步表明番茄红素的神经保护作用机制可能与其抗氧化活性有关。上述研究证明了以转基因神经退行性疾病果蝇模型筛选药物的可行性，将其应用于具有神经系统药理活性中药如芳香化湿药、安神药、平肝熄风药、补阴药等药物的筛选与研究，将有利于深入挖掘中药对神经退行性疾病的治疗作用。
利用果蝇研究神经退行性疾病取得了极大进展，在此过程中建立了大量的相关疾病模型品系，使得该类模型成为目前可以获得的最为丰富且成熟的果蝇疾病模型。然而，这些模型也存在诸多缺点：果蝇疾病模型常在早期发育阶段（如幼虫、蛹、幼年成虫等）就可产生显著表型，而在人类相应疾病中则往往在老年阶段才表现出明显症状；果蝇眼睛和光感受器神经元对致病基因的毒性效应较为敏感，多数果蝇疾病模型选择眼部粗糙病变等表型作为研究指标，然而，其眼部结构无法模拟人类大脑的复杂回路和病理生理学特征，故果蝇模型不能完全模拟人类疾病特点；果蝇的免疫系统相比哺乳动物更简单，无法通过果蝇模型深入研究神经炎症在退行性疾病中发挥的作用；果蝇和人类大脑在解剖学上也存在显著不同，例如，果蝇大腦没有黑质，利用果蝇研究黑质在多巴胺能神经元丧失的帕金森病中发挥的调节机制将受到限制；⑤果蝇和人类的细胞和分子渊控过程也有差异，一些参与调节特定疾病信号通路的关键分子，在果蝇中可能缺失，如a-synuclein，行且，从果蝇实验中取得的研究成果可能与人类疾病通路不具有生物学相关性。
1.3果蝇作为代谢紊乱及糖尿病模型的研究与应用
果蝇的代谢过程、葡萄糖稳态和内分泌调节与人类具有高度的相关性，果蝇也被证实是研究代谢紊乱和糖尿病等疾病治疗方法的有效模型。尽管果蝇没有分泌胰岛素的胰腺，也没有肝脏，但果蝇大脑脑间部存在能够分泌与代谢相关的胰岛素的神经分泌细胞，其他的分泌细胞能分泌胰高血糖素样的物质，它们在生理和基因上都表现出与脊椎动物内分泌相似的表征。去除果蝇胰岛素分泌细胞，可导致其血淋巴内葡萄糖水平升高、脂肪循环加强和饥饿抵抗。果蝇体内的脂肪细胞和脂肪体与哺乳动物肝脏中的脂肪细胞具有相似的功能，参与脂代谢及糖原储存，开通过与哺乳动物类似的胰岛素机制进行调节。
果蝇模型近年来逐渐被用于糖尿病等代谢疾病治疗药物的筛选。果蝇可表达与人类磺酰脲类药物受体及内向整流钾通道同类蛋白，并形成ATP敏感钾通道来调节某些果蝇激素（如脂动激素）的释放。已在临床使用的糖尿病治疗药物优降糖和甲糖宁，即可通过与果蝇神经分泌细胞上ATP敏感钾通道的相互作用，调节其体内的葡萄糖水平。近年研究证实，通过给予高糖、高脂膳食可导致果蝇产生与人类疾病相似的糖代谢异常。研究表明，丹参一三七复方、鬼箭羽配伍荔枝核醇提物、CoA前体一维生素B5可有效改善高糖模型果蝇的脂质代谢、糖代谢。植物雌激素樱黄素、茶多盼类物质表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）分别通过上调长寿基因sirtuin 1（Sir2）、下调胰岛素样肽5和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶以及Upd2蛋白的表达，降低果蝇体内葡萄糖水平，改善果蝇健康并延长其寿命。本课题组采用高糖成功诱导了果蝇代谢紊乱模型，并发现丹参茎叶提取物具有一定降糖作用，证实该模型具有经济、简便、周期短、与人类高度相关等优点，值得进一步探索及应用。
另外，果蝇胰岛素的缺乏使其生长迟缓，体长变小，这在幼虫和成虫上都能体现。体长作为一个极易观察的表型，有利于通过高通量筛选、发现促进胰岛素分泌缺乏突变果蝇的生长的小分子化合物，其在药物发现、筛选和验证等阶段均有较好的应用前景。Brookhean等还利用果蝇模型研究产妇肥胖对子代产生影响的作用机制，这也为研究肥胖的遗传效应提供了新方法。
尽管果蝇代谢过程的分子机制在一定程度上与人类相似，但其调节代谢过程的结构基础与人类也存在差别，因此在临床有效的药物在果蝇上未必能够表现出作用。例如磺酰脲类药物能有效作用于胰岛素缺乏的果蝇，而二甲双胍的有效性则无法通过果蝇的上述表型证实。
1.4果蝇作为睡眠模型的研究及应刚近几年来，果蝇逐渐成为睡眠行为研究的新型模式生物。它与哺乳动物在睡眠医学方面，有以下相似之处：①果蝇的睡眠具有持续性静止和增高的激醒反应阈，且当果蝇被剥夺一个晚上的睡眠时，在第2天会表现出明显的代偿式休息延长，年幼果蝇比成熟果蝇睡得更多，年龄越大的果蝇有更多的片段式睡眠，这些行为与人类睡眠类似；②果蝇有睡眠压力现象，即保持清醒状态时间越长，睡眠时间越长，深睡期越长；③果蝇的睡眠受到昼夜节律和内环境的调节；④失眠的果蝇免疫系统会受到影响从而更易被感染，这与人类睡眠和免疫系统问的关联性一致。通过监测果蝇的活动节律，研究人员已通过果蝇鉴定出多个包括period（per），timeless（tim），clock（elk），cycle（eye）在内的时钟基因。影响哺乳动物睡眠和觉醒的某些分子标记物在果蝇中也发挥类似的作用。如Fmrl基因影响与睡眠相关的突触的重整化过程，使突触强度增加、果蝇睡眠延长。
近年来，应用果蝇模型筛选治疗睡眠疾病药物、探索药物作用机制的实验相继展开。采用光照等方法可建立果蝇睡眠剥夺模型。由此发现，四逆散冻干粉具有促进睡眠的作用，其作用机制是提高果蝇头部5-HT的含量、上调果蝇脑内5-H。受体表达。刺五加不仅能够促进睡眠，其作用机制涉及的基因已通过基因技术初步发现，它还对睡眠节律有调节作用，可减少24h持续黑暗环境下果蝇的片段化睡眠。酸枣仁皂苷A，B分别通过影响果蝇夜晚活动及白天睡眠共同改善果蝇睡眠。咖啡因通过作用于多巴胺信号通路引发觉醒。
随着研究深入，研究者发现睡眠不仅受年龄、昼夜节律、免疫反应、神经递质、基因调控等因素影响，亦与代谢、学习记忆、应激反应、细胞膜兴奋性等因素关系密切。采用果蝇作为模式生物研究睡眠仍存在一些瓶颈问题。以往多数研究中，研究者给予休息状态的果蝇机械刺激，虽然可在行为水平证实果蝇休息状态类似于哺乳动物睡眠状态，但对于果蝇休息与睡眠状态的界定仍不明确。虽然在果蝇群体监控器中监测果蝇运动或休息时间段的方法简易可行，但是睡眠行为的特征及相关监测指标还有待进一步发掘和完善。
1.5果蝇在肠道免疫实验中的应用果蝇没有B和T淋巴细胞，它主要依赖于抗菌肽介导的体液免疫和血细胞介导的细胞免疫。表皮及肠道等组织由于更容易接触大量微生物，构成了抵抗微生物入侵的第一道防线。在果蝇体内，双重氧化酶（DUOX）产生的活性氧（ROS）与核转录因子NF-KB信号通路产生的抗菌肽为肠道提供了广谱抗菌作用。同时，肠道上皮细胞通过多种负调控机制来调节DUOX-ROS与NF-KB-AMP免疫系统，由此对共生菌群产生免疫耐受。
有研究者建立果蝇肠道氧化应激损伤模型，以果蝇生存率反映药物对氧化应激损伤的作用，再从中分析果蝇寿命、肠道干细胞和成肠细胞数量的变化等来探讨中药的免疫调节机制。其中，红景天可有效减少果蝇肠道上皮细胞的死亡并降低肠道上皮细胞内的ROS水平，保护行维持肠道形态。瓜蒌、红花、川芎和菊花提取物可提高果蝇的肠道免疫功能。刺五加提取物对肠道免疫功能的改善作用与缓解肠壁细胞凋亡有关，行使体内部分抗菌肽表达增多。植物雌激素樱黄素虽然能够改善肠上皮细胞屏障功能，提高正常果蝇存活率和健康状况，但其对于过氧化损伤的肠道并没有保护作用，因此樱黄素作为预防药物使用可能优于治疗药物。因此，除了应用果蝇模型进行改善肠道免疫功能药物的筛选，肠完整性对药物改善作用的影响也值得深入探索。
1.6果蝇在生殖系统功能评价中的应用
鉴于果蝇繁殖力强、繁殖周期短的显著特点，果蠅常被应用于影响繁殖力药物的筛选。通过果蝇繁殖力实验，发现北五味子、短柄五加果可增强果蝇繁殖力。厚朴中的厚朴酚对果蝇的繁殖力及其产卵、蛹和幼虫发育过程均有促进作用。甜叶菊糖苷对雄性果蝇生殖能力的损伤程度高于其对雌性果蝇的损伤，但215%的甜叶菊糖苷对果蝇行无明显遗传毒性。上述研究为筛选影响生殖力的药物提供了更多途径。果蝇模型也可用于研究药物的遗传毒性，可以显著缩短药物毒理实验的研究周期。
1.7果蝇作为其他疾病模型的研究进展
果蝇作为模式生物在肿瘤学研究中获得了较好的应用。果蝇在肿瘤学研究中具有如下优势：①在信号传导通路方面，果蝇和人类有高度的保守性，因此以果蝇为模型的原癌基因研究也为人类癌症研究做出了重大贡献，如Patched作为肿瘤抑制基因的确定，源于对果蝇patched/hedgehog信号通路上Patched突变的深入研究，该信号通路上的其他基因也逐渐被发现与肿瘤形成有关；②果蝇基因的可操作性使果蝇易于研究基因的异常表达，这一特点极其适合正常致癌基因的异常活化或过度表达的研究；⑧与哺乳动物相比，果蝇相对缺乏基因冗余，这使得果蝇作为模型研究时更易检测出相关的表型。果蝇也因具有开放的循环系统、不具有获得性免疫功能等特点，而行非适合肿瘤发生的所有方面的研究，但这些利用果蝇进行的肿瘤方面的研究已取得丰硕成果，这必将推动其进一步在抗肿瘤药物筛选中的应用。
果蝇在心脏功能研究中也得以应用。果蝇是具有心脏的无脊椎动物，且心脏组织分化精细，可用于研究心脏遗传与发育基因调控。张艳阳等通过果蝇心力衰竭模型从164个果蝇第2号染色体缺失系中获得33个表现心力衰竭频率高的候选品系，为进一步完善果蝇心脏衰老模型奠定基础。近年来，果蝇逐渐被用于研究胰岛素信号通路、饮食限制、钾离子通道等因素对心脏衰老的影响及作用机制。果蝇还可用于研究更高种属心脏调节、心脏节律、心肌收缩的非自律结构。筛选发现抗氧化酶sod2果蝇突变体心脏功能衰退与正常果蝇生命后期心脏功能衰退具有相似特征，这些成果促进了人们对果蝇心脏功能模型的进一步研究。根据果蝇逆重力爬行的生理特性，郑澜等采用果蝇平台运动，研究5种不同持续时间的运动方案对果蝇运动能力、生命周期及心脏功能的影响，研究初步表明坚持连续3周以上、每天适量运动2.5h，不仅可改善增龄衰退的运动能力，延长平均寿命，还能减少心脏衰竭的发生，起到保护心脏的功能。这一优化的运动方案可辅助临床药物的治疗作用。
2果蝇在中药功效表征中的应用与展望
目前，果蝇在中药功效表征中已经获得较好的应用。果蝇模型尤其在补益类药物功效的活性评价中应用较多。大量的实验已经证实，此类药物能够延长寿命，行具有抗氧化，增强生殖能力，提高肠道免疫功能等作用。活血化瘀药物及含有植物雌激素类药物，可表现出抗氧化，改善代谢紊乱等活性，使用果蝇衰老模型及高糖高脂负荷诱导的果蝇代谢紊乱模型或糖尿病模型可很好的验证此类药物的作用。滋阴类药物常具对神经系统的保护作用，可用神经退行性疾病果蝇模型进行评价，如阿尔兹海默疾病模型、帕金森模型、亨廷顿疾病模型等，有较多的模型可供选择，尤其是AD模型应用较多，许多中药或植物提取物在此类模型上已被证实具有显著的神经保护作用。厚朴、藿香等芳香化湿药物具有抗痴呆作用，在果蝇的神经退行性疾病模型中也得以证实。安神类药物的功效，可采用睡眠模型进行研究，如酸枣仁已被证实具有显著的改善睡眠作用。上述模型能够较好的体现中药的活性及作用特点，在中药的活性评价及筛选中具有广阔的应用前景。
近一个世纪以来，果蝇在生物学研究的舞台上占有举足轻重的地位。由于其自身的诸多特点，随着果蝇病理模型和转基因果蝇品系的不断丰富，果蝇模型在对生殖、免疫、神经、心血管等系统以及神经退行性疾病、代谢综合征、睡眠等疾病机制的研究中发挥日趋重要的作用。另一方面，果蝇作为肿瘤、心脏衰老等模型的研究还有待深入。在中医药发展的新机遇下，中药药理研究面临众多新的考验，而疾病动物模型的缺乏是制约其发展的关键科学问题。以中医药理论为指导，利用众多符合中药作用特点的果蝇病理模型，对中药进行多指标活性评价及筛选，这不仅符合中药药理作用的多靶性、多重调节等特点，也体现了中医的整体观，可大大提高中药活性筛选的效率，有利于进一步阐释中药及其复方的作用机制，推动中药的产业化和国际化。
作者：华永庆 朱悦 江帆 俞辰亚代 丁岩 段金廒
中药引发的生殖毒性研究论文 篇2：
健宫散治疗奶牛产后子宫炎对血清白介素含量的影响
摘要：为探讨中药健宫散对产后子宫炎奶牛治疗前后血清中部分白细胞介素含量的影响以及研究健宫散的抗炎作用机制，选取年龄、胎次、产奶量相近的荷斯坦奶牛18头，按照B型超声波检查结果分为正常组、治疗组和患病组，每组各6头，治疗组进行口服健宫散处理。利用酶联免疫吸附法分别检测各组奶牛用药前、用药中和用药后1、4、7、11、15、20 d血清中白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素2（IL-2）和白细胞介素8（IL-8）的含量。结果表明，中药健宫散能显著降低产后子宫炎奶牛血清中IL-1、IL-2和IL-8的含量。说明中药健宫散能够调节部分白细胞介素的表达，提高机体免疫抗炎能力，可作为奶牛产后保健药，用于子宫炎的防治。
关键词：健宫散;奶牛;子宫炎;血清;白细胞介素
收稿日期：2019-01-02
基金项目：国家重点研发计划（编号：2017YFD0502200）。
作者简介：张保军（1992—），男，甘肃天水人，硕士研究生，研究方向为动物疾病诊断与防治。E-mail：1058915714@qq.com。
通信作者：谷新利，博士，教授，博士生导师，研究方向为中药制剂开发与应用。E-mail：xlgu@shzu.Edu.cn。
奶牛由于分娩、泌乳等应激因素的影响，容易引起产后虚弱、免疫机能下降，引發子宫内膜炎[1]。子宫内膜炎是子宫内膜层受到细菌或病毒的感染，引起子宫内膜组织发生炎症的过程[2]。白细胞介素（IL）是介导白细胞间相互作用的细胞因子，在子宫炎症中发挥着重要的免疫调节作用，其水平的高低反映了子宫的免疫状态。研究发现，IL能调节生殖活动并与子宫内膜表面受体结合，调节免疫炎症反应[3]。IL-1浓度高低是判定炎性反应和炎症损伤程度的重要标志[4];IL-2是一种免疫增强剂，参与细胞介导的免疫，与炎症反应有关;IL-8是一种重要的促炎细胞因子，可使中性粒细胞向炎症部位聚集，研究发现，IL-8与子宫炎的发生有关[5]。有学者推测，IL-8的表达水平可能对奶牛子宫内膜炎有预测和监测的效果[6]。
中药健宫散由益母草、当归、川芎、五灵脂、桃仁、甘草等药材配伍而成，其组分均有活血祛瘀、抑菌消炎的功效，但抗炎作用目前尚不明确。本试验在前人研究的基础上，对产后子宫炎奶牛进行口服纯中药健宫散处理，检测治疗前后外周血清中IL-1、IL-2、IL-8含量的变化规律，旨在探讨健宫散对子宫炎奶牛的抗炎作用机制，为进一步了解健宫散的临床治疗机制，深入开发利用健宫散提供基础参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验对象
在新疆维吾尔自治区石河子市西部牧业优良种畜繁育中心奶牛场选择年龄、胎次、产奶量相近，无传染病及寄生虫病的中国荷斯坦奶牛18头，根据B型超声波检查结果，共诊断出健康奶牛6头，子宫炎奶牛12头，记录每头牛的耳号及产犊日期。
1.1.2 药品与试剂
健宫散（散剂，400 g/袋），由石河子大学动物科技学院中兽医学研究室研制而成，由益母草、当归、川芎、五灵脂、桃仁、甘草等中药组成，方中各药材均购自当地药店。
IL-1（货号：E11I0032）、IL-2（货号：E11I0308）和IL-8（货号：E11I0056）检测试剂盒均购自上海Blue Gene生物技术有限公司。
1.1.3 主要仪器
荷兰Piemed ICAL公司生产的50S型Tringa Vet便携式兽用B型超声波扫描仪，配备3.5/5.0 MHz变频扇扫凸阵探头或线阵探头;Power Wave XS2 Bio Tek酶标仪（型号ELx800，Made in USA）;超低温冰箱（型号FORMA 995），购自Thermo美国赛默飞世尔科技有限公司;微量快速振荡仪（型号QB-9002 Kylin-Bell），购自Lab Instruments公司;离心机（型号H1850R），购自长沙湘仪离心机仪器有限公司;恒温培养箱（型号DHP-9082），购自上海浦东荣丰科学仪器有限公司;数显恒温水浴锅（型号HH-4），购自江苏省金坛市友联仪器研究所;微孔板脱水仪（型号BIOS-401），购自BIOSCIENCE梅奥赛斯（天津）生物科技有限公司;洗板机（型号Wellwash 4 MK2），购自Thermo美国赛默飞世尔科技有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 试验动物的分组与处理
健康奶牛6头作为正常组（A组）;子宫炎奶牛12头，其中6头进行中药治疗作为治疗组（B组），另外6头不进行治疗，作为患病组（C组）。治疗组奶牛每头每天灌服健宫散400 g，每天1次，连续灌服1个疗程（7 d），正常组和患病组不进行任何处理。
1.2.2 样品的采集
治疗组奶牛灌服健宫散前采血1次，用药中期（即用药3 d时）采血1次，灌药结束后1、4、7、11、1、20 d各采血1次，共采血8次。采血时间为14：00—16：00，正常组、患病组在同一时间采血，采血次数同治疗组。所有供试牛均空腹经尾静脉采取血液5 mL，室温静置自然析出血清，装于1.5 mL离心管中，置于-80 ℃冰箱中待检。
1.2.3 检测指标的测定
IL-1、IL-2和IL-8含量均采用反向竞争酶联免疫吸附（ELISA）法测定，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.4 数据的统计分析
应用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析，试验数据均以“平均数±标准差”表示。
2 结果与分析
分别检测A、B、C组奶牛血清中IL-1、IL-2、IL-8的含量，制作相应标准曲线，得出相关系数：IL-1，r2=0.997 29;IL-2，r2=0.999 16;IL-8，r2=0.997 90。血清中IL-1、IL-2、IL-8含量测定结果见表1。
从表1可以看出，用药前、用药中和用药后1 d，患病组血清IL-1含量均高于正常组;相比于治疗组差异不显著（P>0.05）;用药后4 d，治疗组IL-1含量与正常组、患病组差异均不显著，用药4 d以后，治疗组IL-1含量显著低于患病组，相比正常组差异不显著。
用药前、用药中和用药后1 d，治疗组和患病组血清的IL-2含量均显著高于正常组;用药后4、7、15 d，治疗组1 d以后显著低于患病组;用药后20 d，治疗组与患病组差异不显著;用药1 d以后，治疗组IL-2含量达到正常水平，相比正常组差异不显著（表1）。
用药前，患病组IL-8含量显著高于正常组;用药中，相比于正常组和治疗组差异均不显著;用药后，治疗组IL-8含量总体上不断下降，与患病组相比差异显著，治疗组IL-8含量在用药后相比正常组差异不显著（表1）。
3 讨论
3.1 健宫散治疗前后奶牛血清中IL-1和IL-8含量的变化
白细胞介素是一种在淋巴细胞和白细胞之间传递信息的细胞因子，主要由T淋巴细胞、单核巨噬细胞、肥大细胞、血管上皮细胞等多种细胞产生，通过与细胞膜表面的受体蛋白结合，介导机体的细胞免疫和体液免疫。IL-1和IL-8属于促炎细胞因子，参与机体的体液免疫。研究发现，IL-1 可以影响子宫的生理功能，适量的IL-1可促进子宫内膜蜕膜化[7]和炎性分泌物的排出[8]。IL-1是炎症免疫反应的主要诱导剂，感染炎症时，其值有不同程度的增高[9]。IL-8是一种中性粒细胞趋化因子，在炎症反应中起重要作用。胡路锋针对产后1～35 d 子宫炎奶牛血清中的IL-8浓度检测发现，子宫炎组奶牛和正常组奶牛IL-8含量均呈波动式增加，无明显规律[10]。本试验中，子宫炎组奶牛IL-8 含量前半段时间持续上升，而后半段时间呈现波动式增加，这与胡路锋的研究结果[10]略有不同，可能是试验方法的不同和供试牛个体之间的差异所造成的。Fischer等的研究表明，亚临床或临床子宫内膜炎奶牛子宫上皮细胞IL-1β和IL-8 mRNA的表达显著高于健康奶牛，IL-1β和IL-8可用于监测和诊断亚临床子宫内膜炎[11]。张冬波等研究发现，患子宫内膜炎奶牛子宫中IL-8含量均高于正常奶牛[12]。李德军的研究表明，产后49 d内患临床和隐性子宫内膜炎奶牛血清中IL-1和IL-8的含量均升高[13]。Galvo等报道称，子宫内膜炎奶牛IL-1β含量表达在产后1周下降，产后5周和7周有上升趋势，IL-8基因表达在产后7周显著高于健康对照组[14]。本试验表明，用药前患病组、治疗组IL-1和IL-8含量均高于正常组，停药1 d以后患病组IL-1和IL-8含量均显著高于正常组，治疗组和正常组IL-1和IL-8含量分别在停药4 d以后显著低于患病组，本研究结果IL-1和IL-8含量变化规律与李德军的研究[13]一致。
陈晓燕等研究发现，益母草浸膏可显著降低产后子宫内膜炎模型大鼠血清中IL-1β的含量[15]。佟建敏等研究了益母草颗粒对人工流产患者炎性因子水平的影响，发现加服益母草颗粒组术后1 d及7 d宫颈黏液中IL-1含量水平显著低于对照组[16]。奚瑾磊等研究发现，当归醇沉物可增强小鼠腹腔巨噬细胞IL-1的分泌[17]。沈维增等研究发现，当归拈痛汤能降低急性痛风性关节炎患者血IL-1、IL-8含量[18]。付彦君等的研究表明，不同剂量天麻川芎可降低自发高血压大鼠血浆心肌炎症因子IL-1β mRNA的表达水平[19]。王桂华等研究发现，桃仁提取物能显著降低急性胰腺炎大鼠血清中IL-8的含量[20]。赵蓓蕾等研究发现，甘草能降低吸烟大鼠血清IL-8的含量[21]。本试验中，停药后7、11、15、20 d治疗组IL-1含量显著低于患病组，治疗组IL-8含量结束用药后显著低于患病组，说明健宫散降低了促炎因子IL-1和IL-8的表达水平，提高了机体的抗炎能力，原因可能是健宫散组方中益母草、当归、川芎、桃仁、甘草等成分发挥了抗炎功效，使得血清IL-1和IL-8含量降低。
3.2 健宫散治疗前后奶牛血清中IL-2含量的变化
IL-2属于Th1型细胞因子，可诱导T细胞增殖，诱导NK细胞和LAK细胞产生IFN-γ和TNF-α，活化Th细胞、细胞毒性T细胞和单核巨噬细胞[22]，介导细胞免疫。IL-2被认为是一种不利于动物生殖的细胞因子，有报道显示，奶牛在产后早期，体内编码IL-2的基因没有明显表达[8]。张冬波等研究发现患子宫内膜炎奶牛子宫中IL-2含量均高于正常奶牛[12]。韩莉莉等研究发现，宫颈病变患者血清中IL-2的含量水平均随着宫颈病变严重程度的增加而减少[23]。引起子宫内膜炎主要原因之一的胎衣不下属于一种免疫功能性疾病，马清河等研究发现，胎衣不下组奶牛胎盘组织中IL-2的含量极显著高于健康组，IL-2的含量可能与子宫炎症有关[24]。本试验表明，用药前、用药中及用药后1d患病组、治疗组的IL-2含量高于正常组，停药1 d以后患病组IL-2含量显著高于正常组，停药后4、7、11、15 d正常组显著低于患病组，此研究结果与上述研究结果一致。
佟建敏等报道称，益母草颗粒能显著提高人工流产后患者宫颈黏液中IL-2的含量[16]。朱邵晴等研究发现，药物中加入当归能够加速IL-2的产生，促进淋巴细胞的增殖，加强免疫[25]。冯永生等研究发现，川芎可显著提高小鼠血清IL-2的含量[26]。吕跃山等研究发现，桃仁总蛋白能提高荷瘤小鼠血清中IL-2的含量[27]。王志国研究了由当归、白芍、川芎等药材组成的当归芍药散对慢性盆腔炎模型大鼠IL-2的影响，发现当归芍药散能增加慢性盆腔炎模型大鼠血清中IL-2的含量[28]。賈书红等研究发现，宫炎净（由益母草、当归、川芎、桃仁、五灵脂、甘草等组成）提取物中生物碱可显著降低子宫内膜炎家兔血清中IL-2的含量[29]。本研究显示，用药后4、7、11、15 d治疗组IL-2含量显著低于患病组，说明健宫散降低了IL-2的含量，此结果与贾书红等的研究结果[29]一致，与佟建敏等的研究结果[16，25-28]不一致，原因可能是健宫散组分的甘草中主要解毒成分甘草甜素的肾上腺皮质激素样作用，降低了机体对各种有毒物质的反应，从而增强肝脏的解毒功能[30]，促使IL-2含量降低。
综上所述，中药复方健宫散能够显著降低产后子宫炎奶牛血清中IL-1、IL-2和IL-8的含量，通过调节IL-1、IL-2和IL-8的表达水平，提高机体的免疫抗炎能力，对奶牛产后子宫炎有明显的防治效果。
参考文献：
[1]王国卿，王洪海，张乃生，等. 产后子宫内膜炎患牛子宫内膜肥大细胞的研究[J]. 中国兽医学报，2011，31（3）：416-419.
[2]林 羲. 家畜病理學[M]. 3版.北京：中国农业出版社，2001.
[3]王 玮，沈鸿敏. 白细胞介素1β、6、8与生殖调节的研究进展[J]. 国外医学（计划生育分册），2001，20（2）：71-75.
[4]彭津津，母治平，雍 康，等. 复宫散对子宫内膜炎模型家兔血液细胞因子TNF-α、IL-1α的影响[J]. 家畜生态学报，2016，37（8）：67-69.
[5]Hoch R C，Schraufsttter I U，Cochrane C G. In vivo，in vitro，and molecular aspects of interleukin-8 and the interleukin-8 receptors[J]. Journal of Laboratory & Clinical Medicine，1996，128（2）：134.
[6]Ghasemi F，Gonzalez-Cano P，Griebel P J，et al. Proinflammatory cytokine gene expression in endometrial cytobrush samples harvested from cows with and without subclinical endometritis[J]. Theriogenology，2012，78（7）：1538-1547.
[7]马 毅，曹斌云. 白细胞介素-1及其对动物繁殖的影响[J]. 黑龙江动物繁殖，2000，8（4）：40-42.
[8]胡广胜，王旭荣，杨 峰，等. 奶牛子宫内膜炎免疫调控研究进展[J]. 动物医学进展，2013，34（11）：92-96.
[9]郭甫坤，吴曙光. 白介素1信号转导研究进展[J]. 国外医学（分子生物学分册），2001（1）：13-15.
[10]胡路锋. 奶牛产后不同阶段子宫炎监测及其诊断方法的研究[D]. 石河子：石河子大学，2014.
[11]Fischer C，Drillich M，Odau S，et al. Selected proinflammatory factor transcripts in bovine endometrial epithelial cells are regulated during the oestrous cycle and elevated in case of subclinical or clinical endometritis[J]. Reproduction Fertility and Development，2010，22（5）：818.
[12]张冬波，侯振中. 子宫内膜炎母牛子宫匀浆IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α水平[J]. 吉林畜牧兽医，2005（8）：12-13.
[13]李德军. 奶牛隐性和临床型子宫内膜炎病理机制研究[D]. 武汉：华中农业大学，2010.
[14]Galvo K N，Santos N R，Galvao J S，et al. Association between endometritis and endometrial cytokine expression in postpartum Holstein cows[J]. Theriogenology，2011，76（2）：290-299.
[15]陈晓燕，冉华阳，张锦安. 益母草浸膏对产后子宫内膜炎作用功效的实验研究[J]. 中国中医急症，2017，26（1）：50-52，64.
[16]佟建敏，雷桂英. 益母草颗粒对人工流产后患者炎性因子水平及微循环的影响[J]. 河南中医，2017，37（3）：513-515.
[17]奚瑾磊，彭仁琇，王智勇. 当归醇沉物及其中性组分体外对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响[J]. 中草药，2002，33（5）：437-439.
[18]沈维增，吕红梅，谢峥伟，等. 当归拈痛汤对急性痛风性关节炎患者血IL-1、IL-8和TNF-α的影响[J]. 中国中医急症，2011，20（3）：353-354，365.
[19]付彦君，陈 靖，陈 莹. 天麻川芎对自发高血压大鼠炎症因子水平的影响[J]. 中华中医药学刊，2016，34（8）：2029-2031.
[20]王桂华，兰 涛，吴向军，等. 桃仁提取物对急性胰腺炎大鼠肠道屏障功能及炎性反应的影响[J]. 中药材，2014，37（12）：2267-2270.
[21]赵蓓蕾，熊 华，齐 名，等. 甘草和糖皮质激素对吸烟大鼠血清IL-8的影响[J]. 医学研究生学报，2006，19（3）：232-234.
[22]金伯泉. 细胞和分子免疫学[M]. 西安：世界图书出版西安公司，1995.
[23]韩莉莉，苏莱娅·胡赛音，昆多孜·乌赛那洪. IL-2及IL-6、IL-10、IFN-γ和新疆维吾尔族、汉族妇女宫颈病变相关性研究[J]. 中国妇幼健康研究，2017，28（增刊2）：164-165.
[24]马清河，刘荣欣，陈 斌，等. 胎衣不下奶牛胎儿胎盘中IL-2含量的测定[J]. 动物医学进展，2010，31（8）：41-44.
[25]朱邵晴，郭 盛，钱大玮，等. 基于多元功效成分的当归药材产地现代干燥加工方法研究[J]. 中国中药杂志，2017，42（2）：264-273.
[26]冯永生，杜根安，吴南屏. 中药扶正方对小鼠免疫调节作用的研究[J]. 浙江中西医结合杂志，2000，10（3）：140-141.
[27]吕跃山，王雅贤，运晨霞，等. 桃仁总蛋白对荷瘤鼠IL-2、IL-4水平的影响[J]. 中医药信息，2004，21（4）：60-61.
[28]王志国. 当归芍药散对慢性盆腔炎模型大鼠的TNF-α、IL-2影响[J]. 中医药学报，2005，33（5）：35-36.
[29]贾书红，李效振，张东升，等. 宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔的抗炎作用机理[J]. 江苏农业科学，2015，43（1）：209-211.
[30]董 婉，李超英，杨 萌，等. 有毒中药配伍甘草增毒与减毒作用研究进展[J]. 通化师范学院学报，2018，39（2）：12-17.
作者：张保军 乔彦杰 刘贤侠 梁小瑞 王丹阳 谷新利
中药引发的生殖毒性研究论文 篇3：
补骨脂主要不良反应的研究与思考
摘要 本文对补骨脂的历史沿革及其主要成分做了回顾；对现代研究中补骨脂的肝、肾以及其生殖毒性进行了综述，并将其和其他中药配伍后毒性的改变进行了总结；最后由对补骨脂的认识引发对中草药及其复方用药的安全思索，以期中医药能够更加规范化、安全化的应用。
关键词 补骨脂；主要成分；肝毒性；肾毒性；生殖毒性；综述；中草药；中药复方
近年来，随着国家对中医药事业的大力支持和人们对中医药的逐渐深入了解和认识，中医药在治疗疾病中所起的作用越来越受到重视，与此同时，部分中药的不良反应也被推到了风口浪尖，引起了国外医学界的强烈反响，甚至一部分医学者认为应该抵制有毒中草药在临床中的应用。补骨脂作为一味在临床中常用的药物，我们对其主要成分及其不良反应的认识也由来已久。补骨脂在临床的辨证用药中也遭到一部分医师的抵制。我们将补骨脂的历史沿革、主要成分及不良反应的研究概述如下。
1 补骨脂历史沿革、主要功用及主要成分
1.1 历史沿革 补骨脂始记于《雷公炮制论》。补骨脂是豆科植物补骨脂干燥成熟的果实，《开宝本草》中有云：“生广南诸州及波斯国”。补骨脂，乃梵语“Vakuci”的音译名。
1.2 主要功用 本草有曰：“补骨脂，有名破故纸，补骨脂言其功也。其性味辛，大温，主治五劳七伤，风虚冷，骨髓伤败，肾冷精流，及妇人血气堕胎”。其炮制法也始载于《雷公炮制论》，曰：“凡使，性本大燥毒，用酒浸一宿，漉出，却用东流水浸三日夜，却蒸从巳至申出，日干用”。补骨脂药性：苦、辛，温。归肾、脾经。功效：补肾壮阳，固精缩尿，温脾止泻，纳气平喘[1]。临床应用注意事项：《本草经疏》曰：“凡病阴虚火动，梦遗，尿血，小便短涩及目亦口苦舌干，大便燥结，内热作渴，火升目赤，易饥嘈杂，湿热成痿，以致骨乏无力者，皆不宜服”。《得配本草》曰：“阴虚下陷，内热烦渴，眩晕气虚，怀孕心胞热，二便结者禁用”。现代药理学研究发现，补骨脂的主要活性成分具有显著的抑制细菌生长、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗炎性反应，甚至可以抗丝虫活性，抗抑郁，抗真菌以及皮肤真菌活性，抗糖尿病活性等[2]。不同的提纯法提取的补骨脂的有效成分，其功用也不尽相同[3]，在普遍采用的醇提法对补骨脂的有效成分进行提纯的研究中发现，用75%乙醇提取物和95%乙醇提取物具有明显雌激素样作用，而水提物雌激素样作用不明显。
1.3 补骨脂主要成分 人们对补骨脂成分的研究由来已久。补骨脂的成分包括黄酮类、苯并呋喃类、香豆素类、单萜类、部分微量元素以及其他有机化合物。呋喃香豆素类、二氢黄酮类、异黄酮类补骨脂酚等是补骨脂的主要成分。其他有机化合物包括：豆甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖苷、三十烷、葡萄糖、棉子糖等。其中补骨脂还包含大量人体所需要的微量元素如Zn、Mg，Fe、Ca等[4]。
2 补骨脂肾毒性的研究概述
其不良反应可追溯至《雷公炮灸论》一书，书中曾这样记载：“此药辛温，大燥，毒性骏猛，需用酒浸泡一夜后再用潺潺流水浸泡三日，随后置于干出晾晒，晾晒的时间尾巳时至申时，待药物干燥后便可使用”。现代研究也证实，长期服用含有补骨脂的药物，有可能引起肾脏的毒性。
2.1 补骨脂酚对肾脏作用的研究 张玉顺等[5]从补骨脂中提取出补骨脂酚，并对该药物的毒性进行了分析试验，结果证实该成分有明确的肾毒性。实验动物选用昆明种小鼠，分4个剂量组灌胃给药，给药一周之后，所有剂量组（包括最低剂量组，每千克体重0.125 mL）的小鼠肾脏均出现轻度的病理改变，且停药28 d后小鼠的肾脏病变并未出现好转。也有研究指出肾小球毛细血管中的间质细胞核及内皮细胞的增大与补骨脂生品以及补骨脂炮制品有关，其中毒性最弱的是酒制品。另外，补骨脂酚对早孕小鼠的肾脏亦可造成损伤[6]。单味补骨脂对肾脏的毒性已非常明确，此外在临床中对怀孕女性的中药应用中也该避免。
2.2 与甘草配伍及炮制后对肾脏不良反应研究 补骨脂在与甘草配伍后，并没能够有效的减少其对肾脏的损害[7]。研究表明，N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）是一种酸性水解酶，其中尿NAG的活性会因肾脏近曲小管的受损而明显增高，与其他脲酶比较，尿NAG会提前出现变化。研究人员将小鼠分为2组，一组灌服补骨脂-甘草配伍，另一组灌服补骨脂，实验发现NAG明显提高，大鼠肾小管因补骨脂剂量的提高产生一定的毒性，对2组实驗结果进行比较分析发现，补骨脂-甘草配伍组小鼠增加的NAG更多，但差异无统计学意义。经分析发现，可能与大鼠体内产生的毒代动力学的变化有关，对补骨脂酚能够有更好的吸收，同时对补骨脂酚的代谢有抑制作用，因此大鼠体内的补骨脂酚量增大。研究还发现，补骨脂酚的代谢与大鼠的性别也有关系。补骨脂重复连续给药28 d可引起大鼠肝、肾功能损伤，停药后可恢复至正常水平。补骨脂-甘草配伍并未增强或减弱补骨脂酚所引起的肝、肾毒性[8]。
另外，食用盐腌制过后可以使补骨脂的肾脏毒性作用变强[9]，怀疑可能与食用盐和其某些相关活性物质发生作用，或者渗透性增高后，增加了胃肠道对补骨脂某些成分的吸收功能，补骨脂味辛、苦，性温，归肾、脾经，而盐又入肾，可能改变了小鼠肾脏的功能，使其代谢出现紊乱等原因有关。
3 补骨脂肝脏毒性的研究概述
3.1 补骨脂素对肾脏的影响研究 补骨脂具有很好的抗肿瘤作用[10-13]，尤其是其有效活性成分补骨脂素，研究证实，补骨脂素具有很好的抗肿瘤作用，补骨脂素能够上调乳腺癌干细胞拓扑异构酶基因和蛋白的表达，增加药物的作用靶点，逆转乳腺癌干细胞对阿霉素的耐药[14]。但与此同时，补骨脂素对肝脏的功能也会产生一定的影响，且对雌性大鼠的肝脏损伤更加明显[15]。根据有关报道，1978—2005年，中国大陆地区有11例白癜风患者在服食含补骨脂的白蚀丸后，出现不同程度的肝脏病理性损伤。Bjellerup等[16]对补骨脂素对生化水平的影响进行了研究，数据表明用补骨脂素加紫外线照射法治疗3次后可以影响肝脏功能，提高丙氨酸转氨酶（ALT）、门冬氨酸转氨酶（AST）水平，其中肝细胞受损与损伤类型密切相关，损伤的发生不可预见。这种不良反应目前还仅限于试验中，在临床上还没有详细的统计。研究证实，补骨脂中的有效活性成分香豆素可以通过影响肝微粒体，从而影响肝细胞的正常功能，引起机体内转氨酶的升高[17]。
3.2 补骨脂水提物对肝脏的影响
补骨脂水提物可以影响胆汁酸的代谢和转运。连续给予大鼠补骨水提物，可以使大鼠肝脏造成病理性损伤[18]。
实验表明，大剂量，多次使用补骨脂水提物可以影响小鼠体重，造成小鼠体重下降。小鼠肝脏中的NTCP和BSEP蛋白水平会在补骨脂水提物的作用下明显下降，从而导致肝细胞吸收和排泄胆汁酸的能力下降，由此可见，肝细胞排出胆汁酸的能力降低是胆汁酸转运体受补骨脂水提物影响的主要原因，由于胆汁酸排出功能紊乱可能会导致肝细胞中胆汁酸的浓度提升[19]。肝细胞中的胆汁酸浓度过高会引起细胞损伤，因此肝损伤可在补骨脂水提物的作用下形成[20]。此外，给予正常大鼠补骨脂水提物也可以引起大鼠肝脏的脂肪变性，从而对肝细胞造成损害[21]。补骨脂水提物亦可以导致大鼠肝损害，补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素有肝毒性[22]。
3.3 不同剂量对肝脏毒性作用的影响
补骨脂的毒性作用与剂量及具有一定相关性，试验中补骨脂剂量越大，肝损伤程度越明显[23-25]。在研究补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚对小鼠肝脏损害的实验中，补骨脂素可使小鼠肝脏出现散在局灶性坏死，而异补骨脂素仅出现部分肝脏细胞变性，补骨脂酚对小鼠肝脏的影响较前2组较轻[26]。此实验证实，在补骨脂的单个提取物中，补骨脂酚的毒性作用相对较低，补骨脂素与异补骨脂素有可能是补骨脂导致肝脏损伤的主要活性成分。
补骨脂中的香豆素类是促进骨骼发育的主要活性成分[27]，补骨脂水煎液（WD）和醇提物（EE）有显著促进骨骼发育的效果，但其毒性也非常大，提示补骨脂起效或致毒的关键成分有可能是其脂溶性特征性成分[28]。
3.4 补骨脂对肝脏线粒体的影响 实验研究发现，补骨脂对小鼠肝细胞形态及线粒体膜电位也有影响。选用昆明种小鼠，实验结果表明对小鼠连续28 d补骨脂灌胃后，小鼠肝细胞出现肿胀和坏死的症状，且血清中的IL-6、AST、ALT、TNF-α的活性变高；随着给药剂量的增加肝细胞线粒体膜的明显降低[29]。因此小鼠肝脏出现的损伤与连续服用补骨脂密切相关。
3.5 补骨脂对肝脏损害的相关报道 据相关病例报道显示，2005年发生过一起因泡茶饮用补骨脂导致急性肝损害的案例，经临床分析发现患者的胆汁浓度与ALP明显上升[30]，对补骨脂的作用成分分析发现，多种成分具有雌激素一样的效用[31-32]，而肝脏损害与雌激素过量也有关系[33-34]，因此在补骨脂的作用下对肝脏中代谢酶水平具有显著影响[35]。补骨脂注射液可以出现起皮疹、水疱等过敏反应，这些症状怀疑和补骨脂中具有扩血管作用的活性成分黄酮有关[36]。
4 补骨脂生殖毒性分析
通过对小鼠进行补骨脂素服用试验中，用治疗剂量的补骨脂素给雌性小鼠长期服用后，小鼠出现卵巢功能低下、排卵数变少、雌激素水平下降、子宫质量下降的症状[37]。此外，在补骨脂提取物的作用下，大鼠的雄性激素分泌被抑制，导致大鼠睾丸和附睾出现质量下降的症状[38]。
5 不同炮制法、配伍及新旧品毒性的比较
实验研究证实，补骨脂经盐炙法炮制后（LD50）有所下降，说明其毒性有所下降。根据不同补骨脂制品对肾小球毛线血管丛产生的毒性作用研究发现，酒制的补骨脂毒性作用最弱，且对肾曲管上皮的毒性作用也是所有制品中最弱的，但作用差异不大。另外，补骨脂對雄性小鼠生殖器的影响：生品>清炒品>雷公法品>盐蒸品，其中生品和清炒品组的小鼠睾丸重量显著降低[39]。在对生品、老品、新品的半数致死量（LD50）比较的实验中提示，在3种试品中，新品的毒性最小，老品次之，生品的毒性最大[40]。不同炮制后的补骨脂不良反应随着补骨脂素与异补骨脂素含量的增多而增大，补骨脂的毒性与其含量呈正相关。补骨脂有效活性单体种类繁多，确定其毒性物质基础还需要做很多的工作。
经过炮制后的补骨脂或者与其他中药配伍后再一定程度上可以降低其对肝脏的损害。应用不同炮制法炮制后的补骨脂，其疗效均有不同程度的增加，在临床治疗中，选择不同方法炮制过补骨脂可能增强其对不同疾病的治疗效果[41-42]。补骨脂盐炙后可缓解药物对肾阳虚大鼠肝肾功能的不良反应；同时缓解生品的燥性，盐炙对药物燥性有缓解作用[43-44]。
补骨脂配伍不同性味的中药可以达到减毒或者增效的目的，而配伍不当也可能会增强补骨脂的毒性作用。从中药性味的角度配伍，可以在补骨脂的配伍用药方面寻找一定的规律，如减毒配伍包括寒-温并用、辛-酸相制。增效配伍有温-热通用、辛-温配合、甘-温合用等。目前补骨脂相关不良反应的研究仅限于对其主要活性成分的单体部分，忽略了补骨脂不同成分之间是否存在相互的影响，具有一定的片面性[45]。补骨脂在人体内的吸收及转换和其安全性和有效性密切相关，也是药理作用研究的基础，在以后的研究中，可以结合其在机体内的药代动力学进行研究，可能会有更多的不同的发现。
6 对补骨脂的认识和思索
随着中医药的不断发展和科学技术的不断进步，人们对中药的机理机制研究也日渐地深入和完善。补骨脂作为一味临床的常用药物，其临床的治疗范围和治疗功效均日渐突出，尤其在治疗不孕不育、女性雌激素水平下降以及抗肿瘤等方面的相关疾病中，补骨脂有着不可替代的重要位置。但是，随着人们对其认识的深入，补骨脂的一些弊端，即目前基于实验研究方面的补骨脂的毒性，也时刻困扰着医师和患者，至于补骨脂在其治疗疾病的同时，到底会不会给人体带来不可逆转的伤害，到底是其功大于过，还是过大于功，有待于进一步的研究和探讨。
补骨脂单味药的不良反应研究到目前为止已经非常明了。不过，中医药临床辨证用药中很少有用單味的补骨脂来治疗疾病，很多时候都是用补骨脂复方来治疗临床上的一些疾病。中药中有许多有毒的药物，但是在其合理的用药范围内是安全的，相关规定补骨脂的临床用量范围是6～9 g不会出现不良反应。中药毒性在中医中分为广义和狭义2种解释，广义毒性是指药物具备的特性和功能，狭义上指的是药物的不良反应。
中医临床用组方讲究的是君、臣、佐、使相辅相成。其中佐药中又有佐制药，即消除或减轻君、臣的的毒性或制约其峻烈之性的药物。所以，许多药物的毒性在复方中药中得到了抑制甚至消除。目前没有足够的实验或临床研究表明复方补骨脂的毒性是否依然影响其临床中的使用。另外，中药之间亦有有相须、相使、相杀、相畏等，两味中药之间的相互毒性可以得到消除或抑制，实验研究表明，补骨脂和甘草配伍，并没有增强或减弱其不良反应，但是和其他药物的配伍呢？有没有可以增强或者降低甚至消除补骨脂的毒性的中药呢？
根据中医理论，中药毒性是在临床辨证用药的过程中，通过其临床的治疗功效研究发现和认知的。中药的功效、不良反应以及证候3者之间密切相关，不可单独地割裂开来。对其毒性的研究应置于适应证、证候之中，综合、科学地评判整体治疗效果，而不能独立地认为其有毒性就不加以应用而“就毒性论毒性”，因噎废食，当然，也不可以无视单味中药本身的毒性而盲目的使用。
目前我们对中药的研究还比较倾向于对单味中药的成分及药理作用的机制研究，而对中药复方的研究尚且缺乏，因此对多味中药配伍的开发及研究，科学地阐明更多中药之间的相互影响，对中医药事业的进步发展、对人类的健康及幸福都是必不可少的。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：174.
[2]林桂涛，李荣伟，耿子凯，等.补骨脂水及乙醇提取物雌激素样作用的比较[J].中成药，2016，38（12）：2688-2691.
[3]陈莹，吴玥，宋金春.补骨脂化学成分及生物活性研究进展[J].实用药物与临床，2016，19（9）：1184-1188.
[4]颜冬梅，高秀梅.补骨脂化学成分研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2012，14（9）：96-99.
[5]张玉顺，刘玉琦，吴子伦，等.补骨脂酚对小鼠肾脏毒害作用的研究[J].中药通报，1981，6（3）：30-32.
[6]赵庆华，孙蓉.基于功效和物质基础的补骨脂毒性研究进展[J].中国药物警戒，2014，11（8）：482-484.
[7]赵子婧，巩政，史少泽，等.补骨脂及其与甘草配伍单次给药大鼠的毒代动力学及肝肾毒性初探[J].中国中药杂志，2015，40（11）：2221-2226.
[8]赵子婧，巩政，史少泽，等.补骨脂及其与甘草配伍单次给药大鼠的毒代动力学及肝肾毒性初探[J].中国中药杂志，2015，40（11）：2221-2226.
[9]蔡涛涛，黄娜娜，王亮，等.补骨脂不同炮制方式对正常小鼠急性毒性实验比较研究[J].中国药物警戒，2017，14（12）：730-736.
[10]张郴，张小东，赵佳.补骨脂抗肿瘤作用的研究现状[J].中外医疗，2017，36（7）：193-195.
[11]祝天慧，李裕鑫，游松.铂类抗肿瘤药物的研究进展[J].沈阳药科大学学报，2016，33（6）：512-518.
[12]孙阳，周钱梅，苏式兵.中药配伍对癌症治疗的研究进展[J].世界中西医结合杂志，2015，10（10）：1476-1480.
[13]狄文，宋柯琦.化疗对年轻恶性肿瘤患者卵巢功能的影响[J].中国实用妇科与产科杂志，2016，32（9）：908-910.
[14]许乘凤，王晓红，花义同，等.补骨脂素对乳腺癌干细胞拓扑异构酶Ⅱα表达的影响[J].西安交通大学学报：医学版，2017，38（5）：744-748.
[15]Wang J，Jiang Z，Ji J，et al.Evaluation of hepatotoxicity and cholestasis in rats treated with EtOH extract of Fructus Psoraleae[J].J Ethnopharmacol，2012，144（1）：73-81.
[16]Bjellerup M，Bruze M，Hansson A，et al.Liver injury following administration of 8-methoxypsoralen during PUVA therapy[J].Acta Derm Venereol，1979，59（4）：371-2.
[17]Wang XX，Lv X，Li SY，et al.Identification and characterization of naturally occurring inhibitors against UDP-glucuronosyltransferase 1A1 in Fructus Psoraleae（Bu-gu-zhi）[J].Toxicol Appl Pharmacol，2015，289（1）：70-8.
[18]田文杨，兰姗，张力，等.补骨脂的安全性评价与风险控制措施探讨[J].中国中药杂志，2017，42（21）：4059-4066.
[19]毕亚男，李震，卢国彦，等.补骨脂水提物对小鼠的肝毒性及胆汁酸转运的影响[J].药物评价研究，2015，38（3）：267-270.
[20]Palmeira CM，Rolo AP.Mitochondrially-mediated toxicity of bile acids[J].Toxicology，2004，203（1-3）：1-15.
[21]Wang X，Lou YJ，Wang MX，et al.Furocoumarins affect hepatic cytochrome P450 and renal organic ion transporters in mice[J].Toxicol Lett，2012，209（1）：67-77.
[22]周昆，代志，柳占彪，等.補骨脂水提物引起的大鼠肝损害[J].天津中医药大学学报，2013，32（4）：221-224.
[23]Gao Q，Xu Z，Zhao G，et al.Simultaneous quantification of 5 main components of Psoralea corylifolia L.in rats′ plasma by utilizing ultra high pressure liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2016，1011：128-35.
[24]尤力都孜·买买提，艾西木江·热甫卡提，阿布都吉力力·阿布都艾尼，等.补骨脂水提取物小鼠灌胃急性毒性及亚急性毒性试验研究[J].中国药理学通报，2017，33（1）：147-148.
[25]阿卜杜米吉提·阿卜力孜，阿布都吉力力·阿布都艾尼，艾西木江·热甫卡提，等.补骨脂乙醇提取物小鼠灌胃急性及亚急性毒性试验研究[J].中国医药导报，2016，13（31）：20-24.
[26]周昆，王安红，柴丽娟，等.补骨脂酚对HepG2的细胞毒性及BSEP、NTCP、FXR、CYP7A1的影响[J].毒理学杂志，2015，29（3）：193-196.
[27]Zhang X，Zhao W，Wang Y，et al.The Chemical Constituents and Bioactivities of Psoralea corylifolia Linn.：A Review[J].Am J Chin Med，2016，44（1）：35-60.
[28]陈颖，王茉，宋捷，等.补骨脂水煎液和醇提物对斑马鱼骨骼发育的影响及其毒性作用[J].中国药理学与毒理学杂志，2017，31（6）：661-669.
[29]张秀娟，曹慧琪，邢志华，等.补骨脂对小鼠肝细胞形态、肝功能及线粒体膜电位的影响[J].中成药，2014，36（1）：160-162.
[30]Nam SW，Baek JT，Lee DS，et al.A case of acute cholestatic hepatitis associated with the seeds of Psoralea corylifolia（Boh-Gol-Zhee）[J].Clin Toxicol（Phila），2005，43（6）：589-591.
[31]Xin D，Wang H，Yang J，et al.Phytoestrogens from Psoralea corylifolia reveal estrogen receptor-subtype selectivity[J].Phytomedicine，2010，17（2）：126-131.
[32]寿清耀，杨荣平，王宾豪，等.补骨脂雌激素样作用的有效成分研究[J].中药新药与临床药理，2007，18（6）：425-427.
[33]田小芸，孙敬方，潘震寰，等.雌激素和胆酸对大鼠肝胆功能影响的实验研究[J].江苏医药，2001，27（6）：420-422.
[34]Hart J.Hepatotoxicity of the synthetic oestrogen hexoestrol in the female rat[J].Arch Toxicol，1986，59（4）：216-220.
[35]宓穗卿，黄天来，欧卫平，等.补骨脂和补骨脂内酯对NADPH-细胞色素C还原酶及血清肌酐的影响[J].中药新药与临床药理，1998，9（3）：19-22，62.
[36]Quayson E，Berman AJ，Regina AC，et al.Hepatotoxicity Associated with the Use of Psoralea corylifolia Used to Treat Vitiligo[J].Clin Toxicol，2015，53（7）：741-741.
[37]Diawara MM，Chavez KJ，Hoyer PB，et al.A novel group of ovarian toxicants：the psoralens[J].J Biochem Mol Toxicol，1999，13（3-4）：195-203.
[38]Takizawa T，Mitsumori K，Takagi H，et al.Sequential analysis of testicular lesions and serum hormone levels in rats treated with a Psoralea corylifolia extract[J].Food Chem Toxicol，2004，42（1）：1-7.
[39]姚祥珍，沈鸿，富杭育，等，补骨脂主要炮制品的毒性比较[J].中药材，1997，20（4）：182-184.
[40]姚祥珍，吴子伦，回连强.补骨脂生品、老品及新品的药效和毒性比较[J].中国中药杂志，1997，22（6）：21-23，63.
[41]李颖君，黄吟月.补骨脂致药物性肝损伤一例[J].上海医药，2016，37（24）：41-42.
[42]田文杨，兰姗，张力，等.补骨脂的安全性评价与风险控制措施探讨[J].中国中药杂志，2017，42（21）：4059-4066.
[43]梁灿璨，吴诗华，魏羽，等.补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及水通道蛋白表达的影响[J].中草药，2017，48（22）：4713-4718.
[44]夏亚楠，余凌英，王德键，等.补骨脂不同炮制品对肾阳虚、脾虚大鼠的影响研究[J].亚太传统医药，2016，12（9）：5-7.
[45]郭文鹤，李晓宇，黄娜娜，等.基于中药性味理论的补骨脂配伍规律研究进展[J].中国药物警戒，2017，14（12）：737-741.
作者：穆国华 石玥 申萌萌 吴丽婷 赵青竹 刘雁峰