0 引言
蒲公英为菊科多年生草本植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.及其多种同属植物的干燥全草, 全国大部分地区均有分布, 作为我国传统中药, 具有清热解毒、消痈散结、利尿通淋等功效, 临床多用于治疗乳痈、疔疮肿毒、咽痛、目赤、湿热黄疸、热淋涩痛等症。蒲公英含有多种活性成分, 如有机酸类、黄酮类、皂苷类、多糖等, 其中咖啡酸含量较高, 是蒲公英的主要有效成分[1]。本实验采用正交设计试验法, 以咖啡酸的含量、出膏率为考察指标, 对蒲公英的醇提工艺进行优选, 为生产提供一定的实验依据。
1 仪器与试剂
Thermo U3000高效液相色谱仪, 紫外检测器;FA2204B万分之一电子天平。
蒲公英药材 (购于本地药店) ;咖啡酸对照品 (批号:100081-200907, 购于中国药品生物制品检定所) ;甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水, 磷酸、甲酸、乙醇均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 考察指标的测定
吴晓春等[2]认为蒲公英主要含有机酸, 将咖啡酸含量作为提取工艺考察的主要指标;为了考察蒲公英中某些尚未清楚的有效成分, 选择出膏率作为控制指标。
出膏率的测定及供试品溶液的制备:取蒲公英粗粉1g, 精密称定, 按表1加乙醇回流提取, 滤过, 滤液水浴蒸干, 干燥, 精密称定, 计算出膏率。残渣精密加5%甲酸的甲醇溶液10ml溶解, 滤过, 滤液置棕色量瓶中, 即得。
咖啡酸含量的HPLC测定方法[3]:按《中华人民共和国药典》2010版一部蒲公英含量测定项下方法测定咖啡酸含量。
色谱条件:色谱柱为Dionex-C18柱 (4.6×250mm, 5μm) ;流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液溶液 (23∶77) ;流速为1.0ml/min;检测波长为323nm;柱温40℃;理论塔板数按咖啡酸对照品峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的咖啡酸对照品7.2mg至50ml棕色量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 再精密量取此溶液2ml置10ml量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得浓度为0.0288mg/ml的对照品溶液。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl, 注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件测定咖啡酸的含量。
2.2 正交试验设计及结果
选择乙醇为提取溶剂, 以影响醇提效果的主要因素 (乙醇浓度、溶剂量、回流时间、提取次数) 作为正交试验的考察因素, 采用L9 (34) 正交表试验设计对提取工艺进行优选, 因素水平表见表1, 以咖啡酸含量和出膏率为考察指标确定最佳提取工艺条件, 试验安排及结果见表2, 方差分析见表3。综合评分= (出膏率/最大出膏率) ×0.4+ (咖啡酸含量/最大咖啡酸含量) ×0.6
由直观分析可知, 对提取效果影响因素最大的为乙醇浓度, 其次为提取次数、溶剂量, 最小为回流时间, 即A>D>B>C, 经方差分析可知, 乙醇浓度、提取次数、溶剂量对提取效果有显著影响, 最佳提取条件为A2B3C3D3。综合考虑工业化生产的实际情况以及成本, 我们优化选择的工艺条件是用25倍量80%乙醇, 回流2次, 每次1.5h。
2.3 验证试验
为进一步考察上述工艺的稳定可行性, 取同批蒲公英药材三份, 每份1g, 按优选工艺重复试验3次, 计算出膏率及咖啡酸含量, 3次试验测得出膏率平均值为13.28%, 咖啡酸平均含量为0.5479mg/g, 结果表明, 按优选的最佳提取工艺提取, 出膏率较高、咖啡酸提取效果好, 表明该工艺合理稳定可行。
3 结语
(1) 正交试验结果表明, 乙醇提取蒲公英的最佳工艺方案为A2B3C3D3, 为了节约能源和溶剂, 减少加热对有效成分的破坏, 考虑到工时效率, 最终确定方案为A2B3C1D2。
(2) 本实验以蒲公英的主要有效成分咖啡酸的含量和出膏率为指标研究最佳提取工艺, 同时根据各指标的作用确定不同的权重系数进行综合评分, 避免了对多指标单独评价时相互间的冲突。
摘要：目的 :优选蒲公英的最佳乙醇提取工艺。方法 :以咖啡酸的含量、出膏率为测定指标, 用正交设计试验法对蒲公英的乙醇提取工艺进行优选。结果 :最佳提取工艺为用25倍量80%乙醇, 回流2次, 每次1.5h。结论 :优选出的最佳提取工艺条件合理、稳定可行、重复性好。
关键词：蒲公英,咖啡酸,提取工艺,正交试验
参考文献
[1] 杜军英, 姜东伯, 狄柯坪, 等.蒲公英抑菌抗炎作用的研究进展[J].白求恩军医学院学报, 2012, 10 (2) :128-130.
[2] 吴晓春, 杜胜利, 陈海生.蒲公英的研究与应用[J].药学实践杂志, 2002, 20 (4) :246-248.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 (第一部) [S].北京:中国医药科技出版社, 2010:331.